Name: Hücre Etiketleme ve Süperparamanyetik Demir Oksit Nanopartiküller ile Hedefleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Öğrenin süperparamanyetik demir oksit nanopartikül sentezi ve PLGA kaplama ile hücre etiketleme yöntemini. Bu teknik manyetik hedefleme ve hücre ayırma uygulamaları için biyomedikal araştırmalarda kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Avrupa Bölgesel Kalkınma Fonu – FNUSA-ICRC'den (no. CZ.1.05/ 1.1.00/ 02.0123), Amerikan Kalp Derneği Bilim İnsanı Geliştirme Hibesi (AHA # 06-35185N) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH #T32HL007111).

Manyetit Gel 1. Sentezi <ol><li> Etil alkol ve ardından deiyonize su, ardından konsantre edilmiş hidroklorik asit kullanarak, tüm cam yıkayın. Tercihen bir kurutma fırınında, O / N kurumaya bırakın. DİKKAT! hidroklorik asit zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve iş giyim; Etil alkol zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin. </li><li> De gaz kadar deiyonize H2O 500 ml yavaşça 30 dakika boyunca N2 gazı geçirilmesi yolu ile, bir Dreschel şişe kullanın. </li><li> Set-up Kimyasal bir davlumbaz içinde manyetit sentez cihazı. <ol><li> Bir isomantle ısıtıcı içinde 500 ml&#39;lik bir üç boyunlu yuvarlak tabanlı bir şişeye yerleştirilir ve bir kelepçe ile merkezi boyun güvence altına almak ve dur. </li><li> Yuvarlak dipli bir reaksiyon yan boyunlarının birinin içine bir kauçuk septum ve diğer yan boyun bir lastik septum ile bir geri akış kondansatörü takın. Sürekli reflü Kondansatörden soğuk su çalıştırın. </li><li> Delinme incie yuvarlak tabanlı bir şişe lastik bir N2 gaz hattına bağlı olan bir iğne ile septum ve kabarcık çalışan bir gaz hattına bağlı bir iğne ile geri akış kondenseri lastik septum, delinme (yani, su ile bir şişeye), gaz çıkışı görselleştirmek için. </li><li> Bir yandan çarklı adaptör aracılığıyla yuvarlak dipli merkezi boynuna bıçak raket yükleyin. Bir stand üzerine monte edilen bir havai karıştırıcı bıçak pedini mili takın. </li></ol></li><li> N 2 gazı ile yuvarlak dipli temizleyin ve düşük ama algılanabilir hızda akan N2 gazı bırakın. </li><li> Yuvarlak dipli bir şişede ila geri akış kondansatörü çıkarın ve demir (III) klorür, demir 0,6125 g (II) klorid tetrahidrat 1.000 g ekleyin ve gazı alınmış H2O 50 mi DİKKAT! demir (III) klorür ve demir (II) klorür tetrahydrate zararlı - kişisel koruyucu ekipman giyin. </li><li> 50 ısıtılırken, geri akış kondansatörü yerine yerleştirin ve 1000 rpm&#39;de karıştırma° C. Bu koşullar altında karıştırılarak 10 nm çapında manyetit nanopartıküllerin üretir. </li><li> Bir kez 50 ° C &#39;de, yine karıştırılırken yuvarlak dipli bir şişede lastik septum ile enjekte edilerek% 28 amonyum hidroksit çözeltisi 10 ml. DİKKAT! amonyum hidroksit zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin. Not: amonyum hidroksit çözeltisi manyetit çökeltilmesi için kullanılır ve çözelti, siyah dönmelidir. </li><li> Hala karıştırılarak amonyak gazı kaynatmak 90 ° C&#39;ye yuvarlak dipli bir şişeye ve ısı kauçuk septum ve N2 gazı hattı çıkarın. Not: Bu, geri akış kondenseri lastik septum batırılarak yuvarlak tabanlı bir şişeye N2 akışı sağlamak için isteğe bağlı olarak, ancak, maghemit için manyetit oksidasyonu Bu adım sırasında ihmal edilebilir düzeydedir. </li><li> Karıştırmaya devam ederken bir kez 90 ° C &#39;de, yuvarlak dipli bir şişeye oleik asit 1 ml. Oleik asit Na kaplamak için manyetit kullanılannoparticles manyetit jel oluşturmak için. DİKKAT! oleik asit zararlıdır - kişisel koruyucu ekipman giyin. </li><li> Yuvarlak dipli bir reaksiyon üzerine kauçuk septum ve N2 gazı hattı değiştirin ve geri akış kondansatörü çıkarın. </li><li> 2 saat boyunca 500 rpm&#39;de ısı ve karıştırın kapatın. </li><li> Isomantle ısıtıcı yuvarlak dipli çıkarın ve manyetit jel korumak için şişenin dibine düzenlenen güçlü bir mıknatıs kullanırken kalan herhangi bir sıvı süzün. DİKKAT! hasar veya yaralanmayı önlemek için son derece dikkatli güçlü bir mıknatıs anlaştım. </li><li> (Isteğe bağlı) / N hava kuru O kadar manyetit jel izin verin. </li></ol> Manyetit Gel 2. saflaştırılması <ol><li> Manyetit jel erimesi için yuvarlak dipli bir şişeye heksan 40 ml ilave edilir DİKKAT! hekzan zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve çalışmalarını giyerler. </li><li> Kalıntı H2O ileri geri çıkarmak için gazı alınmış, H2O, 40 ml ile bir ayırma hunisi kullanarakmanyetit çözümü m. <ol><li> Yavaşça bir ayırma hunisine olan H üzerine manyetit çözeltisi 2 O dökün ve yavaşça 5 dakika için iki fazlı sıvı girdap. </li><li> Dışarı boşaltın ve alt sulu kısmını atın. </li><li> Yavaş yavaş magnetit çözeltisi altına, yerleşir, böylece, ayrı bir huniye gazı alınmış H2O 40 ml ekleyin ve yavaşça girdap ve daha önce olduğu gibi süzün. </li><li> Üçüncü kez yıkamak için tekrarlayın. </li></ol></li><li> Bir Erlenmeyer şişesine manyetit çözeltisini susuz sodyum sülfat değer birkaç spatula ekleyin ve girdaplı magnetit çözeltisinden kalan herhangi bir kalıntı H2O çıkarmak için kullanılır. </li><li> Sodyum sülfat ve kalan H2O çıkarmak için bir filtre hunisi içinde 1 um&#39;lik filtre kağıdı içinden manyetit çözüm Filtre NOT: Vakum yardımı tavsiye edilir. </li><li> 50 ml&#39;lik bir buharlaştırıcı balon manyetit çözeltisini ve için heksan buharlaştırılması için bir buharlaştırıcı kullanımı, dönerAşağıdaki koşullar ile 2 h: orta derecede dönüş hızı, vakum, 50 ° C su banyosu içinde balon buharlaştırılması, uygulamalı ve 24 ° C su yoğunlaştırıcı içinde dolaşan. Not: İsteğe bağlı olarak, PLGA ile kaplandıktan önce manyetit jel saklayın. </li></ol> PLGA Shell ile Manyetit Nanopartiküller 3. Kaplama <ol><li> % 1.5 (kütle / hacim) çözelti oluşturmak için etil asetat 240 ml PLGA, 3.60 g (75/25 karışım) içinde çözülür. DİKKAT: etil asetat zararlı - Davlumbaz kişisel koruyucu donanım ve çalışmalarını giyerler. </li><li> Bir% 5.0 (kütle / hacim) çözelti oluşturmak için, bir manyetik karıştırıcı kullanılarak gazı alınmış, H 2 O 500 ml, Pluronic F-127 25,00 g çözündürülür. Not: Pluronic F-127, bir biyo-uyumlu yüzey aktif madde olarak hareket eden bir non-iyonik amfifilik blok kopolimerdir. Bu aşama 3.3.2 yağ içinde su emülsiyonu stabilize etmek yardımcı olur. </li><li> Bir microspatula kullanarak, ağırlık, cam şişeler içinde altı 0.040 g alikotları manyetit jel toplandı. PerfHer bir kısım için, aşağıdaki kaplama ve yıkama işlemi kapatýnýz. NOT: tümbölenler 4. adımda bozulma önce dondurarak kurutma en aza indirirken saflık ve verim maksimize edecek etkin kullanım ve manyetik dekantasyon sağlamak için gereklidir. <ol><li> 10 dakika boyunca ultrasonik temizleyici bir 0.040 g magnetit jel kısım ve bir plastik kapta sonikasyon PLGA solüsyonu 40 ml ekleyin. </li><li> Plastik behere Pluronic çözeltisi 80 ml ilave edilir ve 7 dakika bir yağ-içinde-su emülsiyonu olarak manyetit nano partiküller PLGA kaplama oluşturmak için hemen en yüksek ayarda laboratuar mikseri ile emülsifiye. </li><li> Hemen etil asetat buharlaştırılması için kimyasal bir çeker ocak içinde 1 saat süre ile deiyonize H2O ve sonikasyon 1 L spion seyreltilir. </li><li> Spion çözüm yanındaki güçlü bir mıknatıs yerleştirin ve yavaşça mıknatıs kahverengi SPIONs toplamak için karıştırın. Not: Bu, aralıklı birçok saat için karışmaya gerekebilirçözelti önce s SPIONs çoğu tahsil edildiğini belirten beyazımsı döner. </li><li> Mıknatıslı beherde SPIONs koruyarak sulu bir çözelti boşaltacaktır. </li><li> Şöyle SPIONs üç kez yıkayın. <ol><li> Deiyonize H2O 1 L SPIONs Askıya </li><li> 20 dakika spion çözeltisi sonikasyon. </li><li> Spion çözüm yanındaki güçlü bir mıknatıs yerleştirin ve yavaşça mıknatıs kahverengi SPIONs toplamak için karıştırın. Bu çözelti, SPIONs en toplanmıştır belirten açık döner önce aralıklı birkaç saat karışmaya gerekli olabilir. </li><li> Mıknatıslı beherde SPIONs koruyarak sulu bir çözelti boşaltacaktır. </li></ol></li></ol></li><li> Bir sulu süspansiyon halinde tek bir ağırlıklı bir cam şişe içinde, altı magnetit jel tümbölenini sentezlenebilir SPIONs toplayın. Gerektiği gibi, isteğe bağlı olarak manyetik aşırı su süzün. </li></ol> 4. FreezeSPIONs arasında KURUTMA FIRINI <ol><li> Spion çözeltisi dondurun. </li><li> -Freeze kurutmak bir liyofilizerde spion çözüm O / N. </li><li> Dondurularak kurutulmuş SPIONs tartılır. Hücre etiketlenmesi için kullanılana kadar dondurularak kurutulmuş SPIONs -20 ° C&#39;de saklanabilir. NOT: -20 ° C&#39;yi dramatik Depolama bozulması kinetik azaltır ve raf ömrünü uzatır. </li></ol> SPIONs sahip Hücreleri 5. Etiketleme <ol><li> 40 mg / ml arasında bir konsantrasyonda, fosfat tamponlu salin (PBS) içinde SPIONs bir kısım askıya alma ve 30 dakika boyunca ultrasonik titremeye maruz bırakılır. </li><li> Hücre kültürü ortamı, 5 ul / ml arasında bir konsantrasyonda bir hücre, yaklaşık konfluent şişeye spion solüsyonu ekleyin. Yavaşça şişeyi sallanan hatta dağılımını sağlamak. </li><li> 37 ° C&#39;de 16 saat boyunca inkübe hücreleri. </li><li> Yavaşça kültür ortamı aspire ve PBS ile iki kez hücreleri yıkayın. </li><li> Manyetik etiketli hücreleri toplayın ve deneyler için kullanın. </li><li> Kullanılmayan spion Çözelti 4 ° C&#39;de saklanabilir ve bize olmalıdırBir kaç ay içinde ed. Her kullanımdan önce 30 dakika sonikasyon. </li></ol>

<ol><li>Burgess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+neural+stem+cells+to+the+brain+using+MRI-guided+focused+ultrasound+to+disrupt+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of neural stem cells to the brain using MRI-guided focused ultrasound to disrupt the blood-brain barrier.</a> PLoS One. 6 (11), e27877(2011).</li>
<li>Nguyen, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stem+Cells+as+Targeted+Cell+Vehicles+to+Deliver+Drug-loaded+Nanoparticles+for+Cancer+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanomed+Nanotechol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stem Cells as Targeted Cell Vehicles to Deliver Drug-loaded Nanoparticles for Cancer Therapy.</a> J Nanomed Nanotechol. 4 (1), e128(2013).</li>
<li>Kean, T. J., Lin, P., Caplan, A. I., Dennis, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MSCs%3A+Delivery+Routes+and+Engraftment%2C+Cell-Targeting+Strategies%2C+and+Immune+Modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">MSCs: Delivery Routes and Engraftment, Cell-Targeting Strategies, and Immune Modulation.</a> Stem Cells Int. , 732742(2013).</li>
<li>Suzuki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+cell+delivery+into+infarcted+rat+hearts+by+retrograde+intracoronary+infusion%3A+distribution%2C+dynamics%2C+and+influence+on+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Targeted cell delivery into infarcted rat hearts by retrograde intracoronary infusion: distribution, dynamics, and influence on cardiac function.</a> Circulation. 110 (11 Suppl 1), II225-II230 (2004).</li>
<li>Garbern, J. C., Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+stem+cell+therapy+and+the+promise+of+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration.</a> Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).</li>
<li>Duckers, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+vascular+repair+following+percutaneous+coronary+intervention+by+capture+of+endothelial+progenitor+cells+promotes+regression+of+neointimal+growth+at+long+term+follow-up%3A+final+results+of+the+Healing+II+trial+using+an+endothelial+progenitor+cell+capturing+stent+%28Genous+R+stent%29%5BTitle%5D)+AND+%22EuroIntervention%22%5BJournal%5D)">Accelerated vascular repair following percutaneous coronary intervention by capture of endothelial progenitor cells promotes regression of neointimal growth at long term follow-up: final results of the Healing II trial using an endothelial progenitor cell capturing stent (Genous R stent).</a> EuroIntervention. 3 (3), 350-358 (2007).</li>
<li>Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+nanoparticles+for+the+manipulation+of+proteins+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells.</a> Chem Soc Rev. 41 (7), 2912-2942 (2012).</li>
<li>Huang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+magnetic+capture+of+magnetically+loaded+cells+for+spatially+targeted+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Deep magnetic capture of magnetically loaded cells for spatially targeted therapeutics.</a> Biomaterials. 31 (8), 2130-2140 (2010).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Magnetic+Intensities+for+Mesenchymal+Stem+Cell+Targeting+Therapy+on+Ischemic+Myocardial+Repair%3A+High+Magnetic+Intensity+Improves+Cell+Retention+but+Has+No+Additional+Functional+Benefit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Comparison of Magnetic Intensities for Mesenchymal Stem Cell Targeting Therapy on Ischemic Myocardial Repair: High Magnetic Intensity Improves Cell Retention but Has No Additional Functional Benefit.</a> Cell Transplant. , (2014).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+antibody-linked+nanomatchmakers+for+therapeutic+cell+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Magnetic antibody-linked nanomatchmakers for therapeutic cell targeting.</a> Nat Commun. 5, 4880(2014).</li>
<li>Vandergriff, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+of+cardiosphere-derived+stem+cells+with+ferumoxytol+nanoparticles+for+treating+rats+with+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting of cardiosphere-derived stem cells with ferumoxytol nanoparticles for treating rats with myocardial infarction.</a> Biomaterials. 35 (30), 8528-8539 (2014).</li>
<li>Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+enhances+retrograde+cell+retention+in+a+rat+model+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting enhances retrograde cell retention in a rat model of myocardial infarction.</a> Stem Cell Res Ther. 4 (6), 149(2013).</li>
<li>Chaudeurge, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+magnetic+targeting+of+magnetically+labeled+circulating+cells+optimize+intramyocardial+cell+retention%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Can magnetic targeting of magnetically labeled circulating cells optimize intramyocardial cell retention.</a> Cell Transplant. 21 (4), 679-691 (2012).</li>
<li>Cheng, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+enhances+engraftment+and+functional+benefit+of+iron-labeled+cardiosphere-derived+cells+in+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting enhances engraftment and functional benefit of iron-labeled cardiosphere-derived cells in myocardial infarction.</a> Circ Res. 106 (10), 1570-1581 (2010).</li>
<li>Yanai, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+magnetic+stem+cell+targeting+to+the+retina+using+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Focused magnetic stem cell targeting to the retina using superparamagnetic iron oxide nanoparticles.</a> Cell Transplant. 21 (6), 1137-1148 (2012).</li>
<li>Ordidge, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupled+cellular+therapy+and+magnetic+targeting+for+airway+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Coupled cellular therapy and magnetic targeting for airway regeneration.</a> Biochem Soc Trans. 42 (3), 657-661 (2014).</li>
<li>El Haj, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+mesenchymal+stem+cell+targeting+using+magnetic+particle+labelling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of mesenchymal stem cell targeting using magnetic particle labelling.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2012).</li>
<li>Vanecek, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+magnetic+targeting+of+mesenchymal+stem+cells+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Highly efficient magnetic targeting of mesenchymal stem cells in spinal cord injury.</a> Int J Nanomedicine. 7, 3719-3730 (2012).</li>
<li>Sasaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+with+magnetic+targeting+of+bone+marrow+stromal+cells+in+a+rat+spinal+cord+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+%28Phila+Pa+1976%29%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects with magnetic targeting of bone marrow stromal cells in a rat spinal cord injury model.</a> Spine (Phila Pa 1976). 36 (12), 933-938 (2011).</li>
<li>Oshima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+bone+formation+in+an+experimental+bony+defect+using+ferumoxide-labelled+mesenchymal+stromal+cells+and+a+magnetic+targeting+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Br%22%5BJournal%5D)">Enhancement of bone formation in an experimental bony defect using ferumoxide-labelled mesenchymal stromal cells and a magnetic targeting system.</a> J Bone Joint Surg Br. 92 (11), 1606-1613 (2010).</li>
<li>Luciani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+of+iron-oxide-labeled+fluorescent+hepatoma+cells+to+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Radiol%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting of iron-oxide-labeled fluorescent hepatoma cells to the liver.</a> Eur Radiol. 19 (5), 1087-1096 (2009).</li>
<li>Oshima, S., Kamei, N., Nakasa, T., Yasunaga, Y., Ochi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+muscle+repair+using+human+mesenchymal+stem+cells+with+a+magnetic+targeting+system+in+a+subchronic+muscle+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Sci%22%5BJournal%5D)">Enhancement of muscle repair using human mesenchymal stem cells with a magnetic targeting system in a subchronic muscle injury model.</a> J Orthop Sci. 19 (3), 478-488 (2014).</li>
<li>Ohkawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+of+human+peripheral+blood+CD133%2B+cells+for+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting of human peripheral blood CD133+ cells for skeletal muscle regeneration.</a> Tissue Eng Part C Methods. 19 (8), 631-641 (2013).</li>
<li>Tefft, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetizable+Duplex+Steel+Stents+Enable+Endothelial+Cell+Capture%5BTitle%5D)+AND+%22Ieee+T+Magn%22%5BJournal%5D)">Magnetizable Duplex Steel Stents Enable Endothelial Cell Capture.</a> Ieee T Magn. 49 (1), 463-466 (2013).</li>
<li>Uthamaraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+validation+of+a+novel+ferromagnetic+bare+metal+stent+capable+of+capturing+and+retaining+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ABME%22%5BJournal%5D)">Design and validation of a novel ferromagnetic bare metal stent capable of capturing and retaining endothelial cells.</a> ABME. 42 (12), 2416-2424 (2014).</li>
<li>Polyak, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+field+gradient+targeting+of+magnetic+nanoparticle-loaded+endothelial+cells+to+the+surfaces+of+steel+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">High field gradient targeting of magnetic nanoparticle-loaded endothelial cells to the surfaces of steel stents.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 105 (2), 698-703 (2008).</li>
<li>Pislaru, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetically+targeted+endothelial+cell+localization+in+stented+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Magnetically targeted endothelial cell localization in stented vessels.</a> J Am Coll Cardiol. 48 (9), 1839-1845 (2006).</li>
<li>Pislaru, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+forces+enable+rapid+endothelialization+of+synthetic+vascular+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Magnetic forces enable rapid endothelialization of synthetic vascular grafts.</a> Circulation. 114 (1 Suppl), 314-318 (2006).</li>
<li>Wang, Y. X., Xuan, S., Port, M., Idee, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles+for+cellular+imaging+and+targeted+therapy+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Recent advances in superparamagnetic iron oxide nanoparticles for cellular imaging and targeted therapy research.</a> Curr Pharm Des. 19 (37), 6575-6593 (2013).</li>
<li>Yellen, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+drug+delivery+to+magnetic+implants+for+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Magn+Magn+Mater%22%5BJournal%5D)">Targeted drug delivery to magnetic implants for therapeutic applications.</a> J Magn Magn Mater. 293 (1), 647-654 (2005).</li>
<li>Granot, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+viable+magnetic+poly%28lactide-co-glycolide%29+particles+for+MRI-based+cell+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">Clinically viable magnetic poly(lactide-co-glycolide) particles for MRI-based cell tracking.</a> Magn Reson Med. , (2013).</li>
<li>Levy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+in+vivo+biotransformation+of+iron+oxide+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Long term in vivo biotransformation of iron oxide nanoparticles.</a> Biomaterials. 32 (16), 3988-3999 (2011).</li>
<li>Mirshafiee, V., Mahmoudi, M., Lou, K., Cheng, J., Kraft, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+corona+significantly+reduces+active+targeting+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Protein corona significantly reduces active targeting yield.</a> Chem Commun (Camb). 49 (25), 2557-2559 (2013).</li>
<li>Salvati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin-functionalized+nanoparticles+lose+their+targeting+capabilities+when+a+biomolecule+corona+adsorbs+on+the+surface%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Transferrin-functionalized nanoparticles lose their targeting capabilities when a biomolecule corona adsorbs on the surface.</a> Nat Nanotechnol. 8 (2), 137-143 (2013).</li>
<li>Landazuri, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+targeting+of+human+mesenchymal+stem+cells+with+internalized+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Magnetic targeting of human mesenchymal stem cells with internalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles.</a> Small. 9 (23), 4017-4026 (2013).</li>
<li>Sun, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+labeling+of+endothelial+progenitor+cells+isolated+from+peripheral+blood+with+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">In vitro labeling of endothelial progenitor cells isolated from peripheral blood with superparamagnetic iron oxide nanoparticles.</a> Mol Med Rep. 6 (2), 282-286 (2012).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+viability+of+transplanted+beta+cells+labeled+with+a+novel+contrast+agent+-+polyvinylpyrrolidone-coated+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles+by+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Detection of viability of transplanted beta cells labeled with a novel contrast agent - polyvinylpyrrolidone-coated superparamagnetic iron oxide nanoparticles by magnetic resonance imaging.</a> Contrast Media Mol Imaging. 7 (1), 35-44 (2012).</li>
<li>Song, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+efficacy+of+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles+to+human+neural+stem+cells%3A+comparison+of+ferumoxides%2C+monocrystalline+iron+oxide%2C+cross-linked+iron+oxide+%28CLIO%29-NH2+and+tat-CLIO%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Radiol%22%5BJournal%5D)">Labeling efficacy of superparamagnetic iron oxide nanoparticles to human neural stem cells: comparison of ferumoxides, monocrystalline iron oxide, cross-linked iron oxide (CLIO)-NH2 and tat-CLIO.</a> Korean J Radiol. 8 (5), 365-371 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Herhangi bir nanoparçacık sentezi protokolü gibi, reaktif kimyasal saflığı en az bir sitotoksik etkiye sahip olacaktır, yüksek kaliteli SPIONs elde edilmesi için çok önemlidir. Oleik asit (% ≥99), demir (II) klorid tetrahidrat (≥99.99%), demir (III) klorür (≥99.99%), etil asetat da dahil olmak üzere oldukça saf reaktifler satın almak için önemlidir (HPLC derece,% ≥99.9 ), heksan (HPLC derece, ≥97.0%), amonyum hidroksit (% ≥99.99) ve sodyum sülfat (≥99.0%). Nispeten pahalı olabilir çok saf ve yüksek kaliteli PLGA satın a...

Hücrelerin vücuttaki belirli bölgelere hedefli olarak verilmesi ve yakalanması, çeşitli biyomedikal uygulamalar için arzu edilir. Nöral kök hücrelerin MRG kılavuzluğunda odaklanmış ultrason ile beyne verilmesi, nörodejeneratif hastalık, travmatik beyin hasarı ve inme için olası bir tedavi seçeneği olarak önerilmiştir1. Mezenkimal kök hücreler, doğal tümör-tropik özellikleri nedeniyle tümörlere anti-kanser ilaçları verme yetenekleri açısından incelenmektedir2,3. Kardiyak kök hücreler, miyokard enfarktüsü için olası bir tedavi olarak kalbe verilmiştir4,5. Vasküler stentler, dolaşımdaki progenitör hücreleri yakalamak için CD34 antikorları ile geliştirilmiştir6. Umut verici olsa da, bu hücre hedefleme yaklaşımları, hücre özgüllüğü eksikliği, tutarsız hücre tutulması ve hedef dışı hücre iletimi gibi dezavantajlar sunar.
Mevcut yöntemin genel amacı, çeşitli hücre iletimi ve sıralama uygulamaları için hücrelerin manyetik olarak yönlendirilmiş hedeflemesini sağlamaktır. Manyetik hedefleme, belirli hücrelerin minimum hedef dışı etki ile belirli bir hedef bölgeye kontrollü bir şekilde verilmesine izin verir7. Manyetik alanlar, manyetik olarak etiketlenmiş hücrelerin vücut içindeki hareketini güvenli bir şekilde yönlendirmek için implante edilmiş veya harici cihazlar tarafından üretilebilir8. Çok sayıda araştırma çabası, rejenerasyon sonuçlarını iyileştirmek için kök hücrelerin kalp9-14, retina15, akciğer16, cilt17, omurilik18,19, kemik20, karaciğer21 ve kas22,23 gibi yaralı dokulara manyetik olarak yönlendirilmiş hedeflemesine odaklanmıştır.
Hücrelerin manyetik hedeflemesi, implante edilebilir kardiyovasküler cihazları endotelize etmenin bir yolu olarak da kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. Düzgün ve eksiksiz bir endotel, tromboz ve iltihabı azaltmak için cihaz ile dolaşımdaki kan elemanları arasında bir bariyer sağlar. Endotel hücreleri, implantasyondan önce veya implantasyondan sonra vasküler sistem yoluyla cihaza iletilebilir. Her iki durumda da, manyetik alanlar, hücreleri cihazın yüzeyine yakalamak ve dolaşımdaki kan tarafından üretilen kesme gerilimine maruz kaldıklarında hücreleri tutmak için kullanılır. Manyetik vasküler stentler24-27 ve vasküler greftler28 bu amaç için üretilmiş ve test edilmiştir.
Manyetik hücre hedefleme, hücreleri manyetik taşıyıcı parçacıklarla etiketlemek için bir strateji gerektirir. Bu parçacıklar, antikorlar veya ligand/reseptör çiftleri aracılığıyla hücrelerin yüzeyine bağlanabilir veya hücrelere endositoz edilebilir. Süperparamanyetik demir oksit nanopartikülleri (SPION) biyolojik olarak parçalanabilir, biyouyumludur ve çeşitli hücre tipleri tarafından kolayca endositoz edilir29. Bu parçacıklar, bir hücreyi manyetik alanlara etkili bir şekilde duyarlı hale getirir ve zamanla doğal olarak bozulur. SPION'lar, çeşitli manyetik hedefleme ve sıralama uygulamaları için kültürdeki hücreleri manyetik olarak etiketlemek için basit ve güvenli bir yol sağlar. SPION'ların bir manyetit (Fe3O4) çekirdeği ve poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) kabuğu ile sentezlenmesi için bir yöntem sağlanmıştır. Ek olarak, SPION'larla kültürdeki hücreleri etiketlemek için bir yöntem sağlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Amonyum Hidroksit çözeltisi, H2O, &ge içinde% 28 NH3; % 99,99 eser metal bazlı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>338818-100ML & nbsp;</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin</td></tr><tr><td>Dreschel şişesi, 500 ml</td><td>Ace Glass</td><td>5516-16</td><td></td></tr><tr><td>Etil Asetat, CHROMASOLVR Plus, HPLC için, %99,9&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>650528-1L</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın</td></tr><tr><td>Etil alkol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın</td></tr><tr><td>Buharlaşma şişesi, 50 ml, 24/40 eklemli</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z515558</td><td>Rotoevaporatör ile kullanım için</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı, 3 cm çap, grade 1</td><td>Fisher</td><td>09-805P</td><td>Cam filtre hunisi ile kullanım için</td></tr><tr><td>Cam beherler, 1 L</td><td>Fisher</td><td>FB-101-1000</td><td>SPION'ları yıkamak için</td></tr><tr><td>Cam filtre hunisi, vakum hortumu adaptörü, 24/40, 30 mL</td><td>Fisher</td><td>K954100-0344&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cam şişe kapakları</td><td>Fisher</td><td>03-391-46</td><td>Cam şişelerle kullanım için</td></tr><tr><td>Cam şişeler, 2 ml</td><td>Fisher</td><td>03-391-44</td><td>Manyetit jel toplamak için & SPION'lar</td></tr><tr><td>Hexane, CHROMASOLVR, HPLC, & ge için; 97.0% (GC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34859-1L&nbsp;</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman giyin ve çeker ocakta çalışın</td></tr><tr><td>Demir (II) klorür tetrahidrat, vb; %99,99 eser metal bazında&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>380024-5G</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın</td></tr><tr><td>Demir(III) klorür susuz, toz vb.; % 99,99 eser metal bazlı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>451649-1G</td><td>Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın</td></tr><tr><td>Isomantle ısıtıcı, 500 mL</td><td>Voight Global</td><td>EM0500/CEX1</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar karıştırıcı</td><td>Silverson</td><td>L5M-A</td><td></td></tr><tr><td>Liyofilizatör</td><td>Labconco</td><td>7670520</td><td></td></tr><tr><td>Microspatulas</td><td>Fisher</td><td>21-401-25A</td><td>Manyetit transferi için jel</td></tr><tr><td>NdFeB mıknatıs, 1 inç x 1 inç x 1 inç İnanılmaz</td><td>Mıknatıslar</td><td>C1000H-M</td><td>Çok güçlü mıknatıs, dikkatli tutun</td></tr><tr><td>Oleik asit, & ge; %99 (GC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1008-5G&nbsp;</td><td>Dondurucuda saklayın; Zararlı reaktif - kişisel koruyucu ekipman kullanın</td></tr><tr><td>Üstten karıştırıcı</td><td>IKA</td><td>2572201</td><td></td></tr><tr><td>Üstten karıştırıcı kelepçesi</td><td>IKA</td><td>2664000</td><td>Üstten karıştırıcı ile kullanım için</td></tr><tr><td>Üstten karıştırıcı H-standı</td><td>IKA</td><td>1412000</td><td>Üstten karıştırıcı ile kullanım için</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su Life</td><td>Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Plastik beherler, 250 ml</td><td>Fisher</td><td>02-591-28</td><td></td></tr><tr><td>PLGA PURASORB PDLG (75/25 karışımı)</td><td>Purac</td><td>PDLG 7502</td><td>PDLG 7502A da kullanılabilir; Dondurucuda saklayın</td></tr><tr><td>Pluronic F-127 tozu, BioReagent, hücre kültürü için uygun</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443-250G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PTFE genişletilebilir bıçak küreği, 8 mm çap</td><td>SciQuip</td><td>SP4018</td><td></td></tr><tr><td>PTFE kap adaptörü, 24/40, 8 mm çap kürek uyar</td><td>Monmouth Scientific</td><td>PTFE Gemi Adaptörü A480</td><td>PTFE genişletilebilir bıçak küreği ile kullanım için</td></tr><tr><td>Devridaim soğutucusu</td><td>Clarkson</td><td>696613</td><td>Rotoevaporatör ile kullanım için</td></tr><tr><td>Reflü kondansatörü, 24/40, 250 mm</td><td>Ace Glass</td><td>5997-133'e</td> <td>uyar</td></tr><tr><td>Rotoevaporatör</td><td>Clarkson</td><td>216949</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk septa, 24/40</td><td>Ace Glass</td><td>9096-56</td><td></td></tr><tr><td>Tıpalı ayırıcı huni, 250 ml</td><td>Fisher</td><td>10-438E</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sülfat ACS reaktifi, > %99,0, susuz, granül</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239313-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Üç boyunlu yuvarlak tabanlı şişe, açılı, 24/40 eklemli, 500 ml</td><td>Ace Glass</td><td>6948-16</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici delikli tava</td><td>Fisher</td><td>15-335-20A</td><td>Ultrasonik temizleyici ile kullanım için</td></tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici, 2,8 L</td><td>Fisher</td><td>15-335-20</td><td></td></tr><tr><td>Vakum kontrolörü</td><td>Clarkson</td><td>216639</td><td>Rotoevaporatör ile kullanım için (isteğe bağlı)</td></tr><tr><td>Vakum pompa</td><td>Clarkson</td><td>219959</td><td>Rotoevaporatör ile kullanım için</td></tr></tbody></table>

hücre etiketleme ve süperparamanyetik demir oksit nanopartiküller ile hedefleme

Cell Labeling and Targeting with Superparamagnetic Iron Oxide Nanoparticles

Hücre ve terapötik maddelerin hedefli verilmesi hedef dışı sitelerine zararlı etkilerini en aza indirirken hedef yerde tedavi edici etkiyi konsantre biyomedikal uygulamalarda geniş bir fayda sağlayacaktır. Manyetik hücre hedefleme, verimli, güvenli ve basit dağıtım tekniğidir. Süperparamanyetik demir oksit nanopartiküller (spion) biyolojik olarak uyumlu, biyolojik olarak parçalanabilir ve manyetik alanlara duyarlı hale getirmek için hücrelere endocytosed edilebilir. Sentez işlemi manyetit (Fe 3 O 4) oluşturulmasını içerir bir poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) bir kaplama oluşturmak üzere yüksek hızlı bir emülsiyon ardından nanopartiküller. PLGA-manyetit SPIONs yaklaşık 10 nm çapında manyetit çekirdek içerir, çapı yaklaşık 120 nm olan. Kültür ortamı içinde yerleştirildiğinde, SPIONs doğal hücreler tarafından endositoze ve sitoplazmik endozomlara içindeki küçük kümeler olarak depolanır. Bu parçacıklar, hücreler yeterli manyetik kütle vermekManyetik alanlar içinde hedefleme için izin vermek. Sayısız hücre sıralama ve hedefleme uygulamaları manyetik alanlara duyarlı çeşitli hücre tiplerini render tarafından etkindir. SPIONs da tümör tedavisi veya doku lehimleme yerel hipertermi bir tıbbi görüntüleme kontrast maddesi olarak kullanılmak hedeflenen ilaç ya da gen iletimi, teşhis deneyleri, kuşağın dahil olmak üzere diğer biyomedikal uygulama çeşitliliği bulunmaktadır.

Manyetit nanopartiküller 50 ° C ve 1000 rpm&#39;de (Şekil 1) demir (III) klorür ve demir (II) klorid tetrahidrat bir sulu çözelti karıştırıldıktan bir sonucu olarak çap olarak yaklaşık 10 nm. Bu sonuçlar, magnetit nanopartiküllerinin başarılı bir sentez göstermektedir. İlk kez sentezi çalışırken toplu küçük bir örnek alınır manyetit nanopartiküllerin büyüklüğü ve şekli kontrol etmek önemlidir. Transmisyon elektron mikroskopi (TEM) bu parçacıkların görselleştirmek için tercih edilen bir yöntemdir. Toplu ...

Hedeflenen hücre iletimi, çeşitli biyomedikal uygulamalarda yararlıdır. Bu protokolün amacı, hücreleri etiketlemek için süperparamanyetik demir oksit nanopartikülleri (SPION) kullanmak ve böylece hücre iletimi ve lokalizasyonu üzerinde yüksek derecede kontrol için manyetik hücre hedefleme yaklaşımlarını mümkün kılmaktır.

Hücre Etiketleme ve Süperparamanyetik Demir Oksit Nanopartiküller ile Hedefleme

Targeted delivery of cells and therapeutic agents would benefit a wide range of biomedical applications by concentrating the therapeutic effect at the ...

Bu prosedürün genel amacı, süperparamanyetik demir oksit nanoparçacıklar sentezlemek ve bu parçacıkları manyetik hedefleme ve ayıklama uygulamaları için hücreleri etiketlemek amacıyla kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle 10 nanometre çapında manyetit nanoparçacıklar sentezlenerek gerçekleştirilir. İkinci adım, manyetit nanoparçacıkların 50 nanometre kalınlığında bir polilaktik ko-glikolik asit veya PLGA kabuğu ile kaplanmasıdır.Ardından, manyetik nanopartiküller yıkanır ve dondurularak kurutulur. Son adım, hücre hedefleme ve ayıklama uygulamaları için hücrelerin manyetik nanopartiküllerle işaretlenmesidir. Nihayetinde, manyetik alanlar içindeki manyetik nanopartikül işaretli hücrelerin hedeflemesini göstermek için floresan mikroskopi kullanılır.Bu tekniğin, antikor aracılı hücre hedefleme gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, manyetik hücre hedeflemenin oldukça spesifik ve kontrol edilebilir olmasıdır. Terapötik hücrelerin hedef bölgeye iletilebilmesi ve hedef dışı bölgelerin korunabilmesi nedeniyle, bu tekniğin etkileri çeşitli tıbbi durumların tedavisine kadar uzanmaktadır. Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, saf ve yüksek kaliteli nanoparçacıklar elde etmek için ayrıntılara dikkatli bir şekilde odaklanmak gerektiğinden zorluk yaşayacaklardır.Vücut içindeki canlı hücrelerin hedeflenmesini ve lokalizasyonunu iyileştirmek istedik. 500 mililitre deiyonize suyu, 30 dakika boyunca yavaşça azot gazı kabarcıkları göndererek bir dressel şişesi yardımıyla gazdan arındırarak başlayın. Reaksiyon düzeneğini kurmak için, 500 mililitrelik üç boyunlu yuvarlak tabanlı bir balonu bir ISO ısıtıcı mantonun içine yerleştirin.Ardından, boyunların bir tarafını kauçuk bir septumla kapatın ve diğerine bir geri soğutucu yerleştirin. Reaksiyon için inert bir atmosfer oluşturmak amacıyla soğutucudan sürekli soğuk su geçirin. İlk olarak, azot gaz hattına bağlı bir iğne ile balonun kauçuk septumunu delin.Ardından, gaz çıkışını gözlemlemek için kondenser septumu, bir fıskiye sistemine (bubbler) bağlı bir iğne ile delin. Sonra, bir palet adaptörü kullanarak orta boyuna bir bıçak pedal yerleştirin. Reaksiyon karışımının sürekli karıştırılmasını sağlamak için, bıçak şaftını bir standa monte edilmiş üstten karıştırıcıya bağlayın.Balonu azot gazı ile süpürün ve azotun balona düşük ancak saptanabilir bir hızda akmaya devam etmesini sağlayın. Ardından geri soğutucuyu çıkarın ve bir gram demir (III) klorür, 612,5 miligram demir (II) klorür tetrahidrat ve 50 mililitre gazı alınmış su ekleyin. Soğutucuyu tekrar yerleştirin ve 50 °C'ye ısıtırken reaksiyonu 1000 RPM hızında karıştırın.Bu işlem, 10 nanometre çapında manyetit partikülleri üretecektir. Reaksiyon 50 santigrat dereceye ulaştığında, bir şırınga kullanarak balon flask septumu üzerinden 10 mililitre %28 amonyum hidroksit enjekte edin. Manyetit çöktükçe solüsyon siyah renge dönmelidir.Kauçuk septumu ve gaz hattını çıkarın ve reaksiyonu 90 °C'ye kadar ısıtın. Ardından, nanopartikülleri kaplamak ve manyetit jelini oluşturmak için balona bir mililitre oleik asit ekleyin. Sonra, septumu ve gaz hattını balona geri takın ve kondanseri çıkarın.Isıtıcıyı kapatın ve reaksiyonu 500 RPM hızında iki saat boyunca karıştırın. Karıştırma işleminden sonra, güçlü bir mıknatısla nanoparçacıkları balon jojonun dibinde tutarak fazla sıvıyı süzün. Saflaştırma işlemine başlamak için önce manyetit jeli 40 mililitre heksan içerisinde çözün.Bu çözeltiyi, içinde 40 milliliters Degas suyu bulunan bir ayırma hunisine yavaşça boşaltın ve huniyi beş dakika boyunca nazikçe çalkalayın. Çalkalama işleminden sonra alttaki sulu fazı süzün ve manyetit çözeltisini benzer şekilde Degas suyu ile iki kez daha yıkayın. Ardından, manyetit çözeltisini bir erlenmayer flaskına aktarın.Karışıma birkaç spatul dolusu sodyum sülfat ekleyip karışımı çalkalayarak çözeltiyi kurutun. Ardından vakum uygulayın. Karışımı bir mikrometrelik filtre kağıdından süzün.Bir döner evaporatörün su banyosu sıcaklığını 50 °C'ye ayarlayın ve kondanserden 24 °C sıcaklıkta su sirkülasyonu sağlayın. Ardından filtratı 50 mL'lik bir evaporasyon balonuna aktarın ve hekzanları orta rotasyon hızında vakum altında iki saat boyunca evaporat edin. Manyetit jeli cam viallerde altı adet 40 mg'lık alikota ayırın; kaplama ve yıkama işlemleri her alikota ayrı ayrı uygulanacaktır, plastik bir behere bir alikot jel ile birlikte etil asetat içinde 40 mL PLGA ekleyin ve karışımı 10 dakika boyunca sonikasyon işlemine tabi tutun.Ardından, behere 80 milliliters onic F1 27 ekleyin ve derhal yüksek ayardaki bir karıştırıcı ile yedi dakika boyunca emülsifiye edin. Bu nanoparçacıklar artık süperparamanyetik demir oksit nanoparçacıkları veya spy on'dur. Çözeltiyi bir litre deiyonize su ile seyreltin ve bir çeker ocak içerisinde bir saat boyunca sonikasyona tabi tutun. Daha sonra, çözeltinin yanına güçlü bir mıknatıs yerleştirin ve spy on'ları mıknatısta toplamak için çözeltiyi hafifçe karıştırın.S aşılarının beherde kalmasını sağlayarak sulu çözeltiyi dökün. S aşılarını her seferinde tazeleyerek üç kez suyla yıkayın. Altı alikotun tamamı kaplandıktan ve yıkandıktan sonra.S aşılarını tek bir cam şişede toplayın. Hücre etiketleme hazırlığı için spyon çözeltisini bir liyofilizatörde gece boyunca dondurarak kurutun. İlk olarak, pyon'u 40 mg/mL konsantrasyonda PBS içinde süspande edin ve 30 dakika boyunca sonikasyona tabi tutun.Ardından, çözeltiyi yaklaşık olarak konfluens aşamasına gelmiş hücrelerin bulunduğu bir balona, hücre kültür ortamının mililitresi başına beş mikrolitre konsantrasyonda ekleyin. Çözeltinin eşit şekilde dağılması için balonu sallayın. Hücreleri 16 saat boyunca inkübe edin.37 °C'de. Kültür ortamını yavaşça aspire edin ve ardından hücreleri iki kez yıkayın. PBS ile, manyetik olarak işaretlenmiş hücreler artık deneyler için kullanılabilir.10 nanometre çapındaki manyetit nanoparçacıklar, demir(III) klorür ve demir(II) klorür tetrahidratın sulu çözeltisi 50 °C ve 1000 RPM'de karıştırılarak tutarlı bir şekilde üretilebilir; parçacık boyutunu belirlemek için tercih edilen yöntem transmisyon elektron mikroskopisi (TEM) yöntemidir. Manyetit nanoparçacıkların yüksek hızlı bir emülsifikasyon yöntemiyle PLGA ile kaplanması, tekrarlanabilir şekilde 120 nanometre çapında PLGA-manyetit sferonlar ile sonuçlanır; bu parçacıkların görüntülenmesi için taramalı elektron mikroskopisi (SEM) kullanılır. Kan çıkış endotel hücrelerinin 16 saat boyunca pyon ile inkübe edilmesi, TEM kullanılarak gözlemlendiğinde nanoparçacıkların endositozu ile sonuçlanır. PLGA-manyetit nanoparçacıklar hücre içinde veya sitoplazmik endozomlar içerisinde depolanmış halde görüntülenebilir.Hücrelere yapılan demir yüklemesi, canlı hücrelerin ferromanyetik implantlanabilir tıbbi cihazlara manyetik olarak yakalanmasını sağlayacak kadar yüksektir. Manyetik olarak işaretlenmiş endotel hücreleri, ferromanyetik bir stente, manyetik olmayan bir stente göre daha yüksek bir oranda çekilir. Bu prosedür uygulanırken, prosedür sonrası nanoparçacıkların saflığını ve güvenliğini maksimize etmek için tüm cam malzemelerin ve ekipmanların iyice yıkanması gerektiğini hatırlamak önemlidir.Hangi tıbbi tedavilerin hücrelerin spesifik ve kontrollü iletiminden faydalanabileceği gibi ek soruları yanıtlamak için manyetik hücre hedeflemesi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu manyetik hedefleme teknolojisi, çeşitli biyomedikal uygulamalar için odaklanmış hücre iletiminin geliştirilmesine olanak sağlayacaktır. Bu videoyu izledikten sonra, süper paramanyetik demir oksit nanoparçacıkların nasıl sentezleneceği ve bu parçacıkların manyetik hedefleme uygulamaları için hücreleri etiketlemek amacıyla nasıl kullanılacağı konusunda kapsamlı bir bilgi edinmiş olacaksınız.

cell-labeling-targeting-with-superparamagnetic-iron-oxide

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Nanoparçacıkların hücre biodistribution değerlendirmek için kullanılan bio-görüntüleme yöntemleri, nanoformulated bileşikler tedavi ve teşhis izleme için geçerlidir. Burada açıklanan yöntemler, histolojik coregistration tarafından değerlendirilir, hassas ve özeldir. Metodolojileri kemirgen insan uygulamaları bir translasyonel yol sağlar.

Teşhis ve Tedavi İzleme Nanomalzemelerin Kayıtlı bio

Biz, FDA onaylı, süperparamanyetik demir oksit (SPIO), ferumoxytol (Feraheme) ile kök hücre etiketleme ve izleme için kullanılan bir tekniktir açıklar. Hücresel görüntüleme tekniği, manyetik rezonans görüntüleme (MR) görüntüleme için kullanır Bu, başarılı ya da başarısız hastalarda kök hücre engraftments uzun vadeli izleme ve teşhis için kolay erişilebilir.

Kök Hücreler Ferumoxytol, FDA Onaylı Demir Oksit Nanopartikül Etiketleme

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

Burada, biz güçlü bir manyetik an ve güçlü yakın kızılötesi (NIR) absorbanslı manyeto-plasmonik nanopartiküllerin sentezi için bir protokol açıklar. Protokol moleküler özgü hedeflenmesini gerektiren çeşitli biyomedikal uygulamalar için Fc kısmının yoluyla nanopartiküllere antikor konjugasyonu içerir.

Immunotargeted sentezi Magneto-plasmonik nanoklastırlar

Kobalt katkılı manyetoferritinin sentezi ve katyizasyonu için bir protokolün yanı sıra kök hücreleri katyonlaştırılmış manyetoferritin ile hızlı bir şekilde manyetize etmek için bir yöntem sunulmaktadır.

Hücrelerin ultra hızlı Mıknatıslanma için katyonize Magnetoferritin sentezi

Bu yazıda bir PEI / MNP vektörü ve mıknatıslanarak endotel hücrelerine miR verimli, viral olmayan iletimi açıklanır. Bu nedenle, genetik modifikasyon ek olarak, bu yaklaşım, manyetik hücre rehberlik ve MR taranabilirlik sağlar. teknik terapötik hücre ürünleri özelliklerini geliştirmek için de kullanılabilir.

Hazırlık ve<em&gt; İn Vitro</em&gt; Mıknatıslanmış karakterizasyonu Endotel Hücreleri miR-modifiye

Mycobacterium tuberculosis antijenleri için serolojik tanı testlerini geliştirmek için ekstrapulmoner tüberkülozu tespit etmek için süperparamanyetik demir oksit nanoprobları geliştirdik.

Ekstrapulmoner Tüberküloz Tespiti için Süperparamanyetik Demir Oksit Nanoprobukların Sentezi, Karakterizasyonu ve Uygulanması

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Bu çalışmada, manyetik nanomalzemeleri spesifik hücre hedeflemesi için antikorlarla biyofonksiyonelleştirmek için bir protokol sunuyoruz. Örnek olarak, kanser hücrelerini hedeflemek için demir nanoteller kullanıyoruz.

Manyetik Nanomalzemelerin Biyofonksiyonelleştirilmesi

Kan-beyin bariyeri, tedavisi olmayan bir hastalık olan glioblastoma için tedavilerin uygulanmasında önemli bir engeldir. Burada, boyut nedeniyle bu fizyolojik bariyeri atlayabilen ve tümör içinde birikebilen in vivo görüntü kılavuzluğunda demir oksit terapötik nano bir platform sunuyoruz.

Bir Glioblastoma Multiforme Hayvan Modelinde Bir Oligonükleotid Yükünün Nanopartikül Teslimi

Öğrenin süperparamanyetik demir oksit nanopartikül sentezi ve PLGA kaplama ile hücre etiketleme yöntemini. Bu teknik manyetik hedefleme ve hücre ayırma uygulamaları için biyomedikal araştırmalarda kullanılır.

Hücre Etiketleme ve Süperparamanyetik Demir Oksit Nanopartiküller ile Hedefleme

Daha fazla video keşfet