Name: Akciğer tümör hücre işe alım tahlil (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Öğrenin, akciğerde tümör hücre birikimini hayvan modellerinde nicelendirmek için bu yöntemi. Lewis akciğer karsinomu hücrelerini GFP ile izleyerek metastaz mekanizmalarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Fare ile gerçekleştirilen tüm yordamları hayvan Araştırma Komitesi, Tokyo kadın Tıp Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. kuyruk ven enjeksiyon Lewis akciğer Karsinomu (LLC) hücre
<ol><li>Bir oksijen % %5 10 FCS ile takıma DMEM LLC hücreleri korumak CO2 kuluçka 37 ° C'de Hücreleri bir floresan protein ifade sistemi (Örneğin, GFP) içermelidir.</li>
	<li>Hücre kültür yemek bir enzimatik olmayan hücre ayrılma reaktif kullanarak kaldırın. Üreticinin iletişim kuralı izleyin.</li>
	<li>3 dk. 5 mL PBS de hücrelerde pipetting tarafından Resuspend ve tüp (400 x g, 3 dk) santrifüj kapasitesi 15 mL tüp ve santrifüj 400 x g de hücreleri toplamak. Ardından süpernatant kaldırın.<ol>
<li>Bir kez daha bu çamaşır tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>İkinci yıkama sonra hücreleri hücre süzgeç (40 µm gözenek boyutu) aracılığıyla geçmek ve 1 x 106 hücre/mL son hücre yoğunluğu vermek için PBS içinde resuspend.</li>
	<li>Hücre süspansiyon (1 x 105 hücreleri, 29 G iğne) 0.1 mL kuyruk ven yoluyla her C57BL/6 fare (8-10 hafta eski erkek) içine enjekte.</li>
</ol>2. izolasyon akciğerler ve floresan Stereomicroscope altında Hücre sayımı
<ol><li>Fareler CO2 inhalasyon tarafından ötenazi.</li>
	<li>Göğüs ventral yüzeyinde deri makasla kaldırmak. Sonra kaburga ve göğüs boşluğuna ortaya çıkarmak için diyafram kesti. PBS (100 cmH2O, toplam 15 mL) ile sağ ventrikül kanatlı infüzyon 25 G iğne ve boru ile yıkayın.</li>
	<li>Kalp ve timus kesip. Trakea Forseps ile kavrama ve kaldırın, Trakea etrafında bağ dokusu makasla anatomi. Ciğerlerini teşrih ve PBS içinde yıkayın.</li>
	<li>Her LOB bağlantısını kesin ve floresan stereomicroscope altında gözlemlemek.</li>
</ol>3. akciğer sindirim
<ol><li>Collagenase, dispase 10 mg ve Dnaz 10 µg serum-Alerjik DMEM 10 ml 10 mg geçiyoruz. Enzimatik sindirim çözüm hazırlamak için 0,22 µm şırınga filtre ile filtre.</li>
	<li>İzole Kaudal LOB makasla zar. Dalgıç tarafından takip bir 10 mL şırınga akciğer alin.</li>
	<li>Sindirim çözüm (5 mL) şırınga üzerinde pistonu geri çekerek Aspire edin. Akciğer çözüm içine batar kadar pistonu yukarı ve aşağı çalışır. Sonra akciğer ve sindirim arabellek bir 50 mL tüp içinde yer.</li>
	<li>Karşılıklı shaker (150 devir/dakika) olarak 37 ° C'de 15 dakika tüp sallamak. Akciğerler bu kuluçka sırasında parçalanmış olabilir.</li>
	<li>Yukarı ve aşağı pipet kadar akciğer hücreleri tamamen dağılmış. Karşılıklı shaker (150 devir/dakika) olarak 37 ° C'de ek 30 dk için tüp sallamak.</li>
	<li>Akciğer hücreleri 40 µm hücre süzgeç aracılığıyla geçmek. Spin aşağı 3 dk 400 x g de hücreleri.</li>
</ol>4. Akış Sitometresi akciğer hücre
<ol><li>BSA 100 mg 10 ml PBS ve filtre PBS - %1 BSA hazırlamak için bir 0,22 µm şırınga filtreden geçiyoruz.</li>
	<li>Bir pipet kullanarak 3.6 adımda elde edilen örnek süpernatant kaldırın ve 2 mL kırmızı kan hücre lizis çözeltisi ekleyin. Sonra 400 x g 3 dakika süreyle de hücreleri aşağı spin süpernatant atmak.</li>
	<li>Pipetting tarafından 5 mL de PBS - %1 BSA hücrelerde resuspend ve tüp (400 x g, 3 dk) santrifüj kapasitesi. Süpernatant atmak.<ol>
<li>Bir kez daha bu çamaşır tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PBS - %1 BSA 1 mL hücrelerde askıya alma ve yeni bir 40 µm hücre süzgeç aracılığıyla geçmek.</li>
	<li>(Filtre kurulumu FL1 GFP-LLC için kullanarak) tümör hücreleri saymak için bir Akış Sitometresi hücrelerle analiz.</li>
</ol>

<ol><li>Valastyan, S., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+molecular+insights+and+evolving+paradigms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms.</a> Cell. 147 (2), 275-292 (2011).</li>
<li>Kaplan, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGFR1-positive+haematopoietic+bone+marrow+progenitors+initiate+the+pre-metastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche.</a> Nature. 438 (7069), 820-827 (2005).</li>
<li>Hiratsuka, S., Watanabe, A., Aburatani, H., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-mediated+upregulation+of+chemoattractants+and+recruitment+of+myeloid+cells+predetermines+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Tumour-mediated upregulation of chemoattractants and recruitment of myeloid cells predetermines lung metastasis.</a> Nature Cell Biology. 8 (12), 1369-1375 (2006).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+S100A8-serum+amyloid+A3-TLR4+paracrine+cascade+establishes+a+pre-metastatic+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">The S100A8-serum amyloid A3-TLR4 paracrine cascade establishes a pre-metastatic phase.</a> Nature Cell Biology. 10 (11), 1349-1355 (2008).</li>
<li>Tomita, T., Sakurai, Y., Ishibashi, S., Maru, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imbalance+of+Clara+cell-mediated+homeostatic+inflammation+is+involved+in+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Imbalance of Clara cell-mediated homeostatic inflammation is involved in lung metastasis.</a> Oncogene. 30 (31), 3429-3439 (2011).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+amyloid+A3+binds+MD-2+to+activate+p38+and+NF-%CE%BAB+pathways+in+a+MyD88-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Serum amyloid A3 binds MD-2 to activate p38 and NF-κB pathways in a MyD88-dependent manner.</a> Journal of Immunology. 191 (4), 1856-1864 (2013).</li>
<li>Erler, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-induced+lysyl+oxidase+is+a+critical+mediator+of+bone+marrow+cell+recruitment+to+form+the+premetastatic+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-induced lysyl oxidase is a critical mediator of bone marrow cell recruitment to form the premetastatic niche.</a> Cancer Cell. 15, 35-44 (2009).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+destabilization+in+the+premetastatic+phase+facilitates+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular destabilization in the premetastatic phase facilitates lung metastasis.</a> Cancer Research. 69 (19), 7292-7237 (2009).</li>
<li>Sceneay, J., Smyth, M. J., Möller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pre-metastatic+niche%3A+finding+common+ground%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">The pre-metastatic niche: finding common ground.</a> Cancer Metastasis Reviews. 32 (3-4), 449-464 (2013).</li>
<li>Castle, J., Shaker, H., Morris, K., Tugwood, J. D., Kirwan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+circulating+tumor+cells+in+breast+cancer%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">The significance of circulating tumor cells in breast cancer: A review.</a> The Breast. 23, 552-560 (2014).</li>
<li>Wolf, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+CCR2+signaling+induced+by+colon+carcinoma+cells+enables+extravasation+via+the+JAK2-Stat5+and+p38MAPK+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Endothelial CCR2 signaling induced by colon carcinoma cells enables extravasation via the JAK2-Stat5 and p38MAPK pathway.</a> Cancer Cell. 22 (1), 91-105 (2012).</li>
<li>Hiratsuka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+tumours+modulate+innate+immune+signalling+to+create+pre-metastatic+vascular+hyperpermeability+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Primary tumours modulate innate immune signalling to create pre-metastatic vascular hyperpermeability foci.</a> Nature Communications. 4, 1853(2013).</li>
<li>Deguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eritoran+inhibits+S100A8-mediated+TLR4%2FMD-2+activation+and+tumor+growth+by+changing+the+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Eritoran inhibits S100A8-mediated TLR4/MD-2 activation and tumor growth by changing the immune microenvironment.</a> Oncogene. 35 (19), 1445-1456 (2016).</li>
<li>Ieguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAM12-cleaved+ephrin-A1+contributes+to+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">ADAM12-cleaved ephrin-A1 contributes to lung metastasis.</a> Oncogene. 33 (17), 2179-2190 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Ön arıtma farelerin antikorlar, uyuşturucu, yüksek yağlı diyet ya da tümör şartına orta önce tümör hücre enjeksiyon ile mümkündür. En zor bu tahlil kuyruk ven enjeksiyon adımdır. Eksik enjeksiyon sonuçsuz verilerde sonuçlanır. Kuyruk ven C57BL/6 başarısız enjeksiyonları sonucu tespit etmek, özellikle zordur. Enjeksiyon daha kolay olur, böylece bir Isıtma yastığı (37 ° C) fareyi yerleştirerek yardımcı olur kuyruk ven genişletmek.
Bu tahlil çok hasta kan içinde gözlenen daha büyük büyük bir sayı...

Tümör metastazı kanserle ilgili hastalıklarda yüksek ölüm oranı hesaplar. Moleküler seviyede araştırmalar bakış açısıyla, metastaz birden çok adımı ayrılabilir: tümör başlangıcında birincil tümör sitesi, birincil tümör büyüme ve çevreleyen dokular, intravasation, kan dolaşımı kan damarları aracılığıyla içine işgali , uzak organlara ve tümör yeniden büyüme ekstravazasyonu. Her adım molekülleri/sinyalleri1farklı grupları içerir.
Çalışmalar bugüne tümör hücreleri olarak da bilinen önceden metastatik faz2,3,4,5olan kanda dolaşan başlamadan önce uzak organlarda meydana gelen olaylarla ilgili, 6. Fare modeli çalışmalarımız önceden metastatik faz akciğerlerde uzun ömürlü ve düşük seviyeli inflamatuar yanıt oluşturarak akciğer metastazı kolaylaştırır saptandı. Önceden metastatik faz ile karakterize themicrovasculature hyperpermeability, kemik iliği türetilmiş hücre (BMDC) alımı ve upregulation3,4 S100A8 ve SAA3 de dahil olmak üzere sitokin/Kemokin-gibi moleküllerin tarafından . Bu o lysyl oksidaz BMDCs7askere akciğerlerde hücre dışı matriks değiştirir bildirilmiştir. Başka bir rapor önceden metastatik faz8' Angpt2, MMP3 ve MMP10 önemini ortaya koymuştur. Başka bir deyişle, birincil tümörler, kemik iliği ve uzak organlara arasındaki karmaşık etkileşimler anlaşılır olması ve düzgün (örneğin, proteinler bu etkileşimlerde yer hedef uyuşturucu kullanarak) modülasyonlu gerek gelecekteki metastaz9 önlemek için . Önceden metastatik faz düzenlemek için olmalı ilk görüntülenir ve tanı veya tedavi müdahaleler için değerlendirilir. Burada, önceden metastatik akciğer aşamasında çalışma sağlar bir akciğer tümör hücre işe alım tahlil raporu.
Tümör hücreleri doğrudan fareyi damar enjekte olabilir her ne kadar kültürlü hücreleri arasındaki farklar tümör hücreleri kanser hastalarında dolaşan ve tümör hücreleri dolaşan benzer. Dolaşım birincil tümöründen girdiğinizde tümör hücreleri dolaşan kendilerini bazı karakteristik değişiklikleri meydana. Yine de, onlar kuyruk damarda enjekte edildiğinde kültürlü hücreleri immünyetmezligi farelerde tümör oluşabilir. Ayrıca, fare modeli sistemi tümör hücreleri etiketli Floresans izleme bu hücreler vücuttaki izin kullanılabilir. Onlar kanser hastaları10nihai sonuçları belirlemek gibi kritik tümör hücreleri dolaşan davranıştır. Kan tümör hücreleri2hayatta kalmak için iyi bir yer değil. Ana bilgisayar bağışıklık sistemi tarafından saldırısından kaçıp apoptosis fiziksel destek eksikliği nedeniyle önlemek için anti-apoptotik sinyal gerekir ihtiyaçları var. Tümör hücrelerinin tümör başlama metastatik sitelerde daha yüksek yetenekleri ile daha fazla tümör nodüller oluşturur. Tümör hücreleri belirli organ tropism gösterirsen, metastaz belirli organları dikkat edilmelidir. Bu tahlil, metastatik cascade (birincil tümör büyüme ve işgali) ilk adımlar dahil değildir de odak dolaşan tümör hücreleri ve stromal hücreler (endotel hücreleri, epitel hücreleri ve kan hücreleri) arasındaki etkileşimi öyle. Geleneksel tümör hücre enjeksiyon deneyleri araştırmacılar tümör nodüller metastaz algılamak için somut bir boyuta büyümek kadar beklemek zorunda. Bu durumda, tümör hücreleri kan damarı içinde tam sayısını sayısal olamaz. Ayrıca bu işlem tümör hücreleri diğer faktörler sonucu etkileyebilir gösteren bir tümör büyütme aşama içerir.
Sayma tümör hücreleri floresan stereomicroscope altında etiketli basit bir işlemdir. Böylece bütün akciğer taranabilir stereomicroscope geniş görüş alanı sağlar. Akış Sitometresi da tümör hücreleri doku doğru sayıda anında veren yararlı bir araçtır. Floresan confocal mikroskop altında doku hücrelerinde sayma olanağı da sağlar ve metastatik tümör hücreleri en doğru resimlerini görüntüler, ama zaman alıcı ve seçili bir alanın sayılır Eğer sadece önyargılı sonuçlar verebilir. Bu tahlil, nihai hedefi ne kadar kolay Akciğerlerde tümör hücreleri birikir gözlemlemektir. Akciğerleri inflamatuar birincil tümöründen sinyal nedeniyle önceden metastatik aşamasında ise3,4, daha önce bildirildiği gibi enjekte tümör hücreleri böylece daha yüksek akciğer metastazı olasılığı ima akciğerlerde biriken yatkındır. Diğer koşullar (romatoid artrit, astım, vb) ve anti-enflamatuar ajanlar (gibi anti-TNFα) ile tedavi akciğer metastazı azaltmak. Böylece, bu tahlil akciğer metastazı olasılığı değerlendirmek için güçlü bir araç olduğu sonucuna varıldı.

<table><tbody><tr><td>Kollajenaz</td><td>Sigma</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>kalsiyum yok, magnezyum yok</td></tr><tr><td>Deoksiribonükleaz I</td><td>Sigma</td><td>DN-25</td><td>eser miktarda</td></tr><tr><td>RBC lizis tamponu</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci</td><td>BD</td><td>352340</td><td>40 mikrometre ağ</td></tr><tr><td>Floresan etiketleme kiti</td><td>Sigma</td><td>MIN26-KIT</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>0.22 & mu; M Şırınga Filtresi</td><td>Sartorius</td><td>17597K</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. bileşiği</td><td>Sakura Finetek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>%4 Paraformaldehit Fosfat Tampon Çözeltisi</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr></tbody></table>

akciğer tümör hücre işe alım tahlil

Lung Tumor Cell Recruitment Assay

Tümör metastazı yöneten moleküler mekanizmaları araştırmak için çeşitli deneyleri fareyi kullanarak bir modeli hayvan olarak önerilmiştir. Burada, tümör hücre ekstravazasyonu veya micrometastasis değerlendirmek için basit bir tahlil göstermektedir. Bu tahlil, tümör hücreleri kuyruk ven enjekte edildi ve kısa bir süre sonra akciğerleri disseke ve birikmiş etiketli tümör hücreleri saymak için sindirilmiş. Bu tahlil birincil tümör işgalinin ilk adımı damar atlar ve tümör metastazı oluştuğu uzak organ etkinlikte çalışma kolaylaştırır. Damar enjekte hücre sayısı Metastazlari sınırlı sayıda gözlemlemek için optimize edilmiş olması. Stromal hücreler uzak organ metastazı için katkıda rapor edildi. Böylece, bu tahlil potansiyel terapötik uyuşturucu ya da tümör metastazı önlenmesi için aygıt keşfetmek için yararlı bir araç olabilir.

Akciğerler birçok GFP-LLC hücreleri 2 h sonra enjeksiyon (şekil 1A) mevcut. Bu da kırmızı filtrede tespit floresan noktalar dan hücre sayı say silinmemesi gerektiğini belirtmek gerekir. LLC hücreler büyük çoğunluğu akciğerlerden 24 h enjeksiyon (şekil 1 c) sonra kaybolur.
Akciğerlerde GFP LLC sayısını doğrulamak için bir LOB akış sitometrik analizi (<strong class="xfig"...

Bu el yazması tümör hücresi birikimi Akciğerlerde tümör metastazı, bir hayvan modeli ölçmek için bir yöntem açıklanır.

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

To investigate the molecular mechanisms governing tumor metastasis, various assays using the mouse as a model animal have been proposed. Here, we ...

Bu yöntem, tümör biyolojisi alanında metastazın moleküler mekanizmaları ile ilgili anahtar soruların cevaplatını yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, uzak bir organ içinde tümör hücrelerinin işe quantitate olabilir. Floresan protein ifade Lewis akciğer karsinomu kaldırmak için bir enzimatik olmayan hücre dissosiasyon reaktifi kullanarak başlayın, veya LLC, standart protokollere göre kendi kültür konteyner hücreleri.Ortaya çıkan hücre çözeltisini santrifüjden önce 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın ve santrifüj peletleri yıkama başına beş mililitre PBS'de iki kez yıkayın. İkinci yıkamadan sonra hücreleri 40 mikrometrelik gözenek hücresi süzgecinden geçirin ve süspansiyonu mililitre konsantrasyonu başına altı hücreye kadar bir kez 10'a kadar seyreltin. Sonra hücreleri 29 kalibrelik bir iğneyle donatılmış bir mililitrelik şırıngaya yükleyin ve her sekiz ila 10 haftalık C57-Black-6 erkek farenin kuyruk damarına 100 mikrolitre hücre enjekte edin.Uygun deneysel uç noktada, her farenin ventral yüzeyinden deri kaldırmak için makas kullanın ve göğüs boşluğu ortaya çıkarmak için kaburga ve diyafram kesti. Sağ ventrikül aracılığıyla PBS 15 mililitre floş ve kalp ve timus kaldırmak için 25-gauge kanatlı infüzyon iğne ve tüp kullanın. Nefes borusunu forceplarla tutarak, yukarı çekin, trakeanın etrafındaki bağ dokularını parçalayarak akciğerleri hasat edin.Sonra PBS akciğerleri yıkayın, ve floresan mikroskop altında yerinde floresan hücrelerin görselleştirilmesi için bir lob ayırmak. Akciğer dokusunu sindirmek için, önce makasla kaudal loba zar atve akciğer parçalarını 10 mililitrelik şırıngaya yerleştirin. Şırıngayı pistonla kapatın ve beş mililitre sindirim çözeltisini şırınganın içine aspire edin, akciğer dokusu çözelti boyunca yayılana kadar şırınga şaftına girip çıkar.Akciğer bulamacını 50 mililitrelik bir tüpe dağıtın ve 37 santigrat derece ve 150 rpm'de 15 dakika boyunca karşılıklı bir çalkalayıcıda dokuyu sindirin. Kuluçka sonunda, akciğer hücreleri tamamen dağılına kadar kalan doku triturate, ve ek bir 30 dakika için shaker tüp dönmek. Daha sonra hücreleri 40 mikrometrelik gözenek süzgecinden geçirin ve santrifüj ile hücreleri toplayın.Akış sitometri ile izole akciğer hücrelerini analiz etmek için, oda sıcaklığında bir dakika için kırmızı kan hücre lisis tampon iki mililitre pelet resuspend, ve santrifüj ile hücreleri toplamak. Sonra taze PBS beş mililitre pelet iki kez santrifüj yıkama başına% 1 sığır serum albumin ile takviye. İkinci santrifüjden sonra, taze PBS artı BSA bir mililitre pelet resuspend, ve akış sitometri ile tümör hücrelerinin sayısallaştırılması için yeni bir 40 mikrometre gözenek süzgeci ile hücreleri filtre.Akciğerler enjeksiyondan iki saat sonra birçok GFP-LLC hücresi sunar, hücrelerin büyük çoğunluğu 24 saat içinde akciğerlerden kaybolur. Kırmızı filtre içinde algılanan floresan lekelerin hücre sayısından çıkarılması gerektiğini unutmayın. Akciğerlerdeki GFP-LLC sayısını doğrulamak için loblardan biri gösterildiği gibi akış sitometrik analizi için kullanılabilir.Bu prosedürü çalışırken, dondurulmuş bir kesit prosedürü tümör hücrelerinin tam yerini gözlemlemek için daha doğru bir yöntem olduğunu hatırlamak önemlidir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, ilgilenilen ilacın kemotaksis migrasyon plakası kullanarak canlı beyin tümörü kök hücrelerinin migrasyonu üzerindeki etkisini analiz etmek için beyin tümörü kök hücre migrasyon testi yapıyoruz. Canlı hücre görüntüleme, tahlil sırasında hücre göçünün görselleştirilmesini ve ölçülmesini kolaylaştırır.

İlaç Tedavisi Çalışmaları için Beyin Tümörü Kök Hücre (BTSC) Migrasyon Testi: İlaç Tedavisinin BTSC'lerin Migrasyonu Üzerindeki Etkisini Analiz Etmek İçin İn Vitro Canlı Hücre Görüntüleme Tekniği

Bir hücre sedimantasyon manifoldu/slayt aparatı kullanarak yapışık olmayan bağışıklık hücrelerinin radyal hareketliliğini in vitro olarak izlemek için bir protokol açıklıyoruz. Hücre göçü, tümör hücrelerinin tek katmanlarında veya hücre dışı matriks proteinlerinde izlenir. Işık ve floresan mikroskobu ile inceleme, hücre hareketliliğinin ve sitotoksik işlevselliğin gözlemlenmesine izin verir.

Radyal Hareket ve retroviral replike olan bir vektör transduse, Yapışmayan Alloresponsive T lenfositlerinin sitotoksik işlev

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Nötrofiller sadece istilacı mikroorganizmalara karşı konak savunmasında değil, aynı zamanda tümör hücrelerinin immün sürveyansında da önemli bir rol oynarlar. Burada, anti-tümör özelliklere sahip nötrofillerin izolasyonu ile ilgili teknikleri ve in vitro ve in vivo olarak anti-tümör nötrofil fonksiyonunu izleme yöntemlerini açıklıyoruz.

Anti-tümör özelliklere sahip izole edilmesi ve nötrofil Karakterizasyonu

Bu yöntem, kanser hücresinin sferoidlerden çevredeki bir 3B matrise invazyonunu değerlendirir.  Sferoidler, asılı damla kültürü yöntemi ile üretilir ve daha sonra bazal membran malzemeleri ve tip I kollajenden oluşan bir matrise gömülür.  Spheroidlerin istilası daha sonra izlenir.

Bir Kanseri Hücre Sfero Testi 3D ortamda Invasion Değerlendirmek için

Bir hayvan modeli tümör hücreleri (CTCs) kanseri metastaz sırasında akciğer kolonizasyon teşvik dolaşan rolü deşifre için gereklidir. Burada kurduk ve başarıyla gerçekleştirilen bir vivo içinde tahlil özel olarak test etmek için gereksinimin akciğer kolonizasyon için CTCs polimer fibronektin (polyFN) Meclisi.

Tümör hücre görselleştirme akciğer dokusu içinde dolaşan bir akciğer kolonizasyon tahlil kurulması

Burada, kantitatif geçiş ve zamanla ve birden fazla tedavi koşullar altında işgal glioblastoma Beyin tümör kök hücrelerin ölçmek için canlı hücre görüntüleme teknikleri açıklar.

Canlı hücre görüntüleme deneyleri için çalışma Glioblastoma Beyin tümör kök hücre göç ve işgali

Burada, lenf nodu (LN) kriyokesilere yapışkan tümör hücrelerinin sayısallaştırılmasını sağlayan basit ve ucuz bir yöntemi tanımlıyoruz. LN-yapışık tümör hücreleri ışık mikroskobu ile kolayca tanımlanır ve floresan tabanlı bir yöntemle doğrulanır, tümör hücre bağlayıcılığını LN parenkime bağlayan bir adezyon indeksi verir.

Lenf Nodu Kriyosiyonlarında Tümör Hücre Adezyonunun Ölçülmesi

Sunulan yaklaşım aynı anda 3D spheroid tahliller ve T-hücre sitotoksisite kanser hücresi invazyonu değerlendirir. Spheroids bir iskele-free agarose multi-microwell döküm oluşturulur. Eş-kültür ve tip I kollajen matris gömme kanser hücresi invazyonu ve T-hücre aracılı sitotoksisite izlemek için izin veren aynı cihaz içinde gerçekleştirilir.

3D Kültürde Kanser Hücre İstilası ve T-Hücre Sitotoksisitesi İzleme

Kült WC'ler, belirli belirteç ifadesini test ederek ve ilaç direncini ve karaciğeri diğer olasılıklar arasında kolonileştirme yeteneğini değerlendirerek kanserin daha derin bir fonksiyonel karakterizasyonuna izin verir. Genel olarak, CTC kültürü hasta sonucunu iyileştirmek için kişiselleştirilmiş tıp için umut verici bir klinik araç olabilir.

Dolaşımdaki Tümör Hücre Hatları: Temel ve Çevirisel Araştırmalar için Yenilikçi Bir Araç

Öğrenin, akciğerde tümör hücre birikimini hayvan modellerinde nicelendirmek için bu yöntemi. Lewis akciğer karsinomu hücrelerini GFP ile izleyerek metastaz mekanizmalarını inceleyin.

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

Daha fazla video keşfet