Name: Fare Dalak Değişmeyen Doğal Öldürücü T Hücreleri İzolasyon ve Yaygınlaştırılması için optimize Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Öğrenin fare dalak değişmeyen doğal öldürücü T hücrelerini izole etme ve yaygınlaştırma yöntemini. Manyetik hücre ayırma ve akış sitometrisi kullanarak iNKT hücre verimini artırın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

D.E. ve M.B.D., Ghent Üniversitesi'nin multidisipliner bir araştırma platformunun (MRP) ve Ghent İnflamatuar Hastalıkta Katlanmamış Proteinler Üzerine Araştırmacılar (GROUP-ID) konsorsiyumunun üyesidir.

Bu çalışmada, yetişkin (6-8 haftalık) dişi C57BL / 6 fareleri kullanılmıştır. Fareler Gent Üniversitesi vivaryum kurallarına göre muhafaza ve yetiştirilen. Tüm hayvan prosedürleri Kurumsal Hayvan Bakım ve Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Fare Dalak Mononükleer Hücreleri (MNC) hazırlanması 1. <ol><li> Servikal dislokasyon ile fare Kurban. </li><li> Geri aşağı diseksiyon gemide fare yerleştirin ve pimleri, arka ve ön ayaklarını düzeltmek. </li><li> % 70 ile deri yüzeyi sterilize (hacim / hacim) etanol / H2O </li><li> Toraks karın orta hat boyunca cildi kesin ve steril cerrahi aletler kullanılarak dalak maruz. </li><li> Çevresindeki yağ dokuları kırpma sonra, oda sıcaklığında 1 mi 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ihtiva eden bir 24 yuvalı plaka içine dalak yerleştirin. </li><li> Steril bir neşter kullanılarak dalak incelemek ve 50 ml&#39;lik küvet içine yerleştirilen 70 mikron naylon filtre içine parçaları aktarmake. </li><li> 2 ml şırınga pistonu kullanarak, yavaşça hücre süzgecinden dalak parçaları püre ve PBS 1x 5 ml ile yıkayın. </li><li> 15 ml&#39;lik bir tüpe Ficoll-Paque 3 ml ilave edilir ve 5 ml hücre süspansiyonu ile yoğunluk gradyan orta kaplar. </li><li> Fren RT&#39;de 20 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Taze bir 15 ml&#39;lik bir tüpe transfer interfaz 4 ° C &#39;de 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de 10 ml soğuk 1 x PBS ve santrifüj ekleyin. </li><li> % 0.5 sığır serum albümini (BSA) ve 1 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA) (FACS tamponu) içeren PBS 1x 2 ml tekrar süspansiyon hücreleri. Aktarım, küçük hücre süspansiyonunun tüpe 10 ul,% 0.4 10 ul ile karıştırın </li></ol> 2. Zenginleştirme, Algılama ve Fare iNKT Hücreleri saflaştırılması <ol><li> Fare dalak CD5positive (CD5 +) lenfositlerin zenginleştirilmesi. <ol><li> (İsteğe bağlı) Leke 10 5 hücreleri FITC ile konjuge anti-CD5 (4 ul 1:30 seyreltme / 10 6 hücre)Karanlıkta 4 ° C&#39;da 30 dakika için, 200 ul FACS tamponu ve 500 tekrar süspansiyon FACS tamponu ul ile yıkayın. 1x PBS içinde 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) içindeki bir 20 uM çalışma çözeltisi hazırlayın, FACS tampon maddesi içinde ul bunun için 10 5 hücre 1 ekleyin ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir. Akış sitometresinde 10 4 önceden zenginleştirilmiş hücreleri edinin. <ol><li> FCS-H ve FCS-W, hücre çiftleri ve agrega (Şekil 1A) dışlamak için FSC-W lo hücreleri üzerinde elektronik kapıyı kullanma. Ardından elektronik kapı dışarı DAPI + (ölü) FSC-W lo nüfus (Şekil 1B) içinde hücreleri ve elektronik boyut (Şekil 1C) tarafından lenfosit nüfus seçmek için SSC-A ve FCS-A kullanın. </li><li> Lenfosit kapısı içinde hücreleri kullanarak, CD5 karşı SSC-A arsa ve Şekil 1D gösterildiği gibi elektronik kapı CD5 + lenfositlerin. Akış sitometresinde öncesi zenginleştirilmiş numunenin kalanını edinin. </li&gt; </ol></li><li> FACS tampon 90 ul başına 10 7 hücreleri hücre sayımı ayarlayın ve 10 ul anti-CD5 mikroboncukları ekleyin. </li><li> 4 ml FACS soğuk FACS tampon tampon ve tekrar süspansiyon 500 ul ile bir kez yıkanır, 15 dakika boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edin. Manyetik hücre ayrıştırma (MACS) kullanarak CD5 + lenfositlerin üreticinin önerilerine göre sütunlar için zenginleştirin. </li><li> FITC ile konjuge anti-CD5 opsiyonel) Leke 10 5 hücreleri (2.1.1 olarak 1:30 seyreltme / 10 6 hücre) ve DAPI 4 ul. Akış 10 4 zenginleştirilmiş lenfositlerin sitometresinde Edinme ve elektronik kapıları 2.1.1 oluşturulan doğrulayın. zenginleştirilmiş hücresel fraksiyonu CD5 + lenfositleri seçin. Akış sitometresinde 10 5 hücreleri Edinme ve Şekil 1E gösterildiği gibi zenginleştirilmiş fraksiyonu CD5 + lenfositlerin mevcut yüzdesini analiz - H. </li></ol></li><li> Algılama ve fare iNKT ce izolasyonuFACS ile lls. <ol><li> Anti-CD16 / CD32 içeren FACS tamponda yaklaşık 10 6 hücre başına 20 ul ve PE-konjuge αGalCer (1:50 seyreltme / 10 6 hücre 4 ul) içindeki bir konsantrasyonda zenginleştirilmiş CD5 + lenfositleri yeniden süspanse / CD1d tetramer (1 ug / 10 6 hücre). </li><li> Karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika süreyle inkübe edilir. </li><li> Fare antikorları (mAb &#39;ler), anti-CD3ε V500 (1:20 seyreltme 4 ul / 10 6 hücreleri), anti-CD 19 e450 (1:50 seyreltme 4 ul / 10 6 hücre) ve anti-CD8α e450 (4 ul seyreltik FACS tamponu içinde 1:50 seyreltme / 10 6 hücre), CD5 + lenfosit ekle ve karanlıkta 4 ° C&#39;de 30 dakika inkübe edilir. </li><li> 10 7 hücre / ml &#39;lik bir son konsantrasyonda 4 ml FACS tampon, 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüj ile tekrar süspansiyon 1 ml&#39;lik FACS tamponu ile hücrelerin yıkayın. </li><li> 30 mikron hücre süzgecinden hücreleri Filtre ve buz üzerinde hücreleri koyun. </li><li> Üretici tavsiyelerine göre 14,15 sıralama hücre sitometresinin akış kalibre. Not: hücre sıralama için bir akış sitometresinin Kalibrasyon eğitim gerektirir ve deneyimli bir operatör veya eğitimli bir teknisyen tarafından yapılabilir. </li><li> 10 6 hücre başına DAPI 20 uM çalışma çözeltisinin 10 ul ilave edin ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilir. Akış sitometresinde yaklaşık 10 4 zenginleştirilmiş CD5 + lenfositleri edinin. FSC-W lo hücreleri üzerinde elektronik kapı hücre çiftleri ve agrega (Şekil 2A) dışlamak için. Ardından elektronik kapı dışarı DAPI + CD8 + FSC-W lo nüfus (Şekil 2B) içinde CD19 + hücreler (döküm kanalı) ve 2.1.1.1 de anlatıldığı gibi elektronik lenfositler (Şekil 2C) seçmek için SSC-A ve FCS-A kullanın . <ol><li> CD3ε ve elektronik kapı αGalCer / CD1d tarafından arsa αGalCer / CD1d tetrameriŞekil 2D&#39;de gösterildiği gibi, tetramer + CD3ε + iNKT hücreleri. Zenginleştirilmiş hücresel fraksiyonunda mevcut yüzde αGalCer belirlemek için en fazla 5 10 x 2 den CD5 + zenginleştirilmiş lenfositleri Edinme / CD1d tetrameri + CD3ε + iNKT hücreleri. </li></ol></li><li> 2.2.7 oluşturulan elektronik kapıları kullanma. &#39;1.5&#39; bir akış hızında 70 mikron meme kullanılarak sitometresinde 70 psi akışı üzerinde, FACS sıralama αGalCer / CD1d tetrameri + CD3ε + iNKT hücreleri. 1 ml% 100 FCS ihtiva eden bir FACS tüpü içinde sıralanmış iNKT hücreler toplanır. Daha sonra 10 mi RMPI 1640 ortamında ve santrifüj 4 ° C &#39;de 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de hücreler, FACS tüpü yanından kriteri iNKT hücreleri yıkayın. </li><li> Yeniden süspanse 1640 ortamı RPMI 1 ml iNKT hücreleri kriteri ve sıralanmış iNKT hücrelerinin saflığı analiz etmek üzere bir akış sitometresi üzerinde ul bunların 40 kazanır. Lenfosit - FSC-W lo DAPI seçins 2.2.7 tarif edildiği gibi. Elektronik ve kapı αGalCer / Şekil 2H gösterildiği gibi CD1d tetrameri + CD3ε + iNKT hücreleri - (G Şekil 2E). </li></ol></li></ol> 3. Kültür ve Fare iNKT Hücrelerinin Genişleme Gün 0 <ol><li> Kaplama oda sıcaklığında 1 saat boyunca hazne başına saflaştırılmış anti-CD3ε (3 ug / ml) ile, dibi düz 96 oyuklu plaka. 200 ul PBS ve bir kez 1 x 200 ul tam RPMI 1640 ortamında (% 10 hacim / hacim FCS, 100 U / ml penisilin-streptomisin, 5.5 uM β-merkaptoetanol) ile iki kez yıkanır. </li><li> 1.11 olarak% 0.4, bir hemositometre kullanılarak uygulanabilir kriteri iNKT hücreleri (aşama 2.2.8) sayısı., Tam RPMI 1640 ortamında 5 x 10 5 hücre / ml&#39;de, 4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüje tabi tutulur ve tekrar süspansiyon Rekombinant fare IL-2 (10 ng / ml), rekombinant fare IL-12 (1 ng / ml) ve çözünür anti-fare CD28 (5 ug / ml) ihtiva eden. Plaka sAnti-CD3ε kaplı plakalar iyi 10 5 hücre / iNKT hücreleri orted ve 2 gün bir CO2 inkübatöründe 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol> Gün 2 <ol start="3"><li> 2 gün bir CO2 inkübatöründe 37 ° C&#39;de komple RPMI 1640 ortamı taze bir kaplanmamış düz dipli 96 oyuklu bir plaka ve kültür dinlenme koşulları altında, hücreler aktarın. </li></ol> 4. Gün <ol start="4"><li> Nazik pipetleme plaka hücreleri çıkarmak ve taze bir 15 ml tüp hücreleri aktarmak. Bir düz-10 5 hücre / göz, 4 ° C, rekombine IL-7 (5 ng / ml) ihtiva eden komple RPMI 1640 ortamında 5 x 10 5 hücre / ml&#39;de tekrar süspansiyon ve plaka 10 dakika boyunca 300 x g&#39;de santrifüjleyin Bir CO2 kuluçka makinesi içinde 37 ° C &#39;de 4 gün boyunca 96 plaka altlı. </li></ol> 8. Gün <ol start="5"><li> 300 x taze tüp hücreleri toplayın, santrifüjçözünür anti-CD28 (5 ug / ml) içeren tam RPMI 1640 ortamı içinde 5 x 10 5 hücre / ml&#39;de 10 4 ° C&#39;de dakika ve tekrar süspansiyon g. </li><li> Kaplama oyuk başına saflaştırılmış anti-CD3ε (3 ug / ml) ile, dibi düz 96 kuyucuklu bir plaka ve 3.1 gibi yıkayın. Levha 10 5 hücre / göz Anti-CD3ε kaplı plakalar ve gün 11 kadar bir CO2 inkübatör içinde 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol> Gün 11-18 <ol start="7"><li> Tekrarlayın 3.6 3.4 adımları tekrarlayın. </li></ol> Gün 19-20 <ol start="8"><li> Tam RPMI 1640 ortamında 5 x 10 5 hücre / ml&#39;de 300 x g&#39;de tekrar süspansiyon taze bir 15 ml tüp, santrifüj hücreleri aktarın. </li><li> Levha 10 5 hücre hücre / kuyuda bir düz tabanlı 96 oyuklu bir plaka ve izin hücreler bir deney içinde kullanılmadan önce bir CO2 inkübatör içinde 37 ° C&#39;de 2 gün süreyle dinlenmeye. </li></ol> 4. Sitokin üretimi CD1d Plat Kullanarak Fare iNKT Hücreleri tarafındane bağlı Deneyi <ol><li> Coat düz dipli 96 gözlü oyuk başına rekombinan sıçangil CD1d 100 ul (1 x PBS içinde 10 ug / ml) ile plaka ve 37 ° C&#39;de 1 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> PBS 1x 200 ul ile dört kez yıkayın oyuk başına 1 x PBS (bloke çözeltisi) içinde% 2 FCS, 200 ul ekleyin ve 37 ° C&#39;de 2 saat inkübe edilir. </li><li> Blokaj çözeltisi kaldır, göz başına αGalCer 200 ul (5 ng / ml) ekleyin ve 16 st için 37 ° C &#39;de plaka inkübe edin. [ΑGalCer çözeltinin hazırlanması için, bir araç 96 mg / ml sakroz, 10 mg / ml sodyum deoksikolat ve 5 mg / ml Tween 20 ihtiva eden içinde çözülmüş αGalCer 55 ug 1085 μ 1x PBS ekleyin]. </li><li> Kuluçkadan sonra, αGalCer çözeltisi atılır ve 200 ul tam RPMI 1640 ortamı, ardından PBS 1x 200 ul de iki kez yıkayın. </li><li> Tam R santrifüj hücreler 300 x g&#39;de 10 dakika boyunca 4 ° C &#39;de ve tekrar süspansiyon, 21. günde, in vitro genişletilmiş iNKT hücreleri toplamak0.5 x 10 6 hücre / ml&#39;lik bir konsantrasyonda PMI 1640 ortamı. </li><li> Oyuk başına iNKT hücre yeniden süspansiyon 200 ul ilave edin ve bir CO2 inkübatör içinde 37 ° C&#39;de 72 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> Üreticinin protokolüne göre, enzim bağlantılı immüno emici bir testle (ELISA) ile, ilgilenilen süpernatan ve ölçü sitokinler toplayın. </li></ol>

<ol><li>Bendelac, A., Rivera, M. N., Park, S. H., Roark, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+CD1-specific+NK1+T+cells%3A+development%2C+specificity%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mouse CD1-specific NK1 T cells: development, specificity, and function.</a> Annu Rev Immunol. 15, 535-562 (1997).</li>
<li>Kronenberg, M., Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unconventional+lifestyle+of+NKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immuno%22%5BJournal%5D)">The unconventional lifestyle of NKT cells.</a> Nat Rev Immuno. 2, 557-568 (2002).</li>
<li>Park, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+CD1d-restricted+repertoire+is+dominated+by+a+few+autoreactive+T+cell+receptor+families%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The mouse CD1d-restricted repertoire is dominated by a few autoreactive T cell receptor families.</a> J Exp Med. 193, 893-904 (2001).</li>
<li>Zhou, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosomal+glycosphingolipid+recognition+by+NKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosomal glycosphingolipid recognition by NKT cells.</a> Science. 306, 1786-1789 (2004).</li>
<li>Cardell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD1-restricted+CD4%2B+T+cells+in+major+histocompatibility+complex+class+II-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD1-restricted CD4+ T cells in major histocompatibility complex class II-deficient mice.</a> J Exp Med. 182, 993-1004 (1995).</li>
<li>Kawano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD1d-restricted+and+TCR-mediated+activation+of+valpha14+NKT+cells+by+glycosylceramides%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CD1d-restricted and TCR-mediated activation of valpha14 NKT cells by glycosylceramides.</a> Science. 278, 1626-1629 (1997).</li>
<li>Drennan, M. B., Aspeslagh, S., Elewaut, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cells+in+rheumatic+disease%3A+a+joint+dilemma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cells in rheumatic disease: a joint dilemma.</a> Nat Rev Rheumatol. 6, 90-98 (2010).</li>
<li>Terabe, M., Berzofsky, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKT+cells+in+immunoregulation+of+tumor+immunity%3A+a+new+immunoregulatory+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">NKT cells in immunoregulation of tumor immunity: a new immunoregulatory axis.</a> Trends Immunol. 28, 491-496 (2007).</li>
<li>Molling, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+sustained+expansion+of+mouse+spleen+invariant+NKT+cell+lines+with+preserved+cytokine+releasing+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation and sustained expansion of mouse spleen invariant NKT cell lines with preserved cytokine releasing capacity.</a> J Immunol Methods. 322, 70-81 (2007).</li>
<li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+reliable+generation+of+invariant+natural+killer+T-cell+lines+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Rapid and reliable generation of invariant natural killer T-cell lines in vitro.</a> Immunology. 128, 324-333 (2009).</li>
<li>Gumperz, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+CD1d-restricted+T+cell+recognition+of+cellular+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Murine CD1d-restricted T cell recognition of cellular lipids.</a> Immunity. 12, 211-221 (2000).</li>
<li>Behar, S. M., Podrebarac, T. A., Roy, C. J., Wang, C. R., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+TCRs+recognize+murine+CD1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diverse TCRs recognize murine CD1.</a> J Immunol. 162, 161-167 (1999).</li>
<li>Watarai, H., Nakagawa, R., Omori-Miyake, M., Dashtsoodol, N., Taniguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+detection%2C+isolation+and+culture+of+mouse+and+human+invariant+NKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Methods for detection, isolation and culture of mouse and human invariant NKT cells.</a> Nature protocols. 3, 70-78 (2008).</li>
<li>Houtz, B., Trotter, J., Sasaki, D. BD FACService TECHNOTES. 9 (4), (2004).</li>
<li>Osborne, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+of+quantifying+cell+sorting+yield+in+%27real+time%27%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry.+Part+A+%3A+the+journal+of+the+International+Society+for+Analytical+Cytology%22%5BJournal%5D)">A method of quantifying cell sorting yield in 'real time'.</a> Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology. 77, 983-989 (2010).</li>
<li>Drennan, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thymic+microenvironment+differentially+regulates+development+and+trafficking+of+invariant+NKT+cell+sublineages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The thymic microenvironment differentially regulates development and trafficking of invariant NKT cell sublineages.</a> J Immunol. 193, 5960-5972 (2014).</li>
</ol>

Yazarların ifşa edecek herhangi bir rakip çıkarı yoktur.

Geçerli protokol kritik adımlar izolasyon ve CD5 + lenfositlerin (Bölüm 1 ve 2) sonraki zenginleştirme, FACS sıralama (Bölüm 3) ve iNKT hücrelerinin ilk kaplama (Bölüm 4) yer alıyor. Bölüm 1&#39;de gerçekleştirilen adımların dikkatle ayrı bir hücresel interfaz santrifüj takip üretildiği şekilde yoğunluk gradyan ortamı üzerinden dalak hücresel süspansiyon katman unutmayın. Manyetik hücre ayırma (Bölüm 2) tarafından CD5 + lenfositlerin müteakip zenginleştirme leke için gerekli reaktifleri ve zamanı e...

Mürin değişmeyen doğal öldürücü T (iNKT) hücreleri CD1d-ifade kortikal timositleri 1,2 ile timus seçilen doğuştan T lenfositlerinin farklı bir nüfus vardır. iNKT hücreleri Vβ8, Vβ7 ya CD1d bağlamında endojen yanı sıra dış lipid antijenlerini tanıma yeteneğine sahip olan Vβ2 TCRler 3 ya ile eşleştirilmiş değişmeyen bir Vα14-Jα18 TCR zinciri içeren bir T hücre reseptörü (TCR) ifade etmektedir. Örneğin, kemirgen iNKT hücreleri tanıyan ve endojen yağ antijen olarak adlandırılan isoglobotrihexosylceramide (iGb3) 4, hem de α-galaktozilseramid (αGalCer) 5,6, deniz süngerlerinden izole edilen bir glikolipid ile aktive edilir. TCR bağımlı &lt;iNKT hücrelerinin aktivasyonu adaptif bağışıklık tepkilerinin teşvik hazırlanmasını, ve bunun sonucu olarak, iNKT hücreleri romatizmal hastalık 7 ve kanser dahil patolojilerin bir dizi iyileştirilmesi ya da geliştirme işlevsel olarak ilgili olduğu gösterilmiştirsup&gt; 8. Şu anda, sentetik iNKT hücre ligandlar immünopatolojik koşulları bir dizi düzenleme yeteneğine sahip olabilir umut vadeden yeni bir aşı yardımcı maddeleri oluşturmaktadır. Bu, daha önce iNKT hücreleri, ancak fare dokusundan izole aşağıdaki in vitro üretilebilir olduğu ortaya konmuştur; Bu çalışmaların bir çoğunda primer antijen sunan hücreler (APC&#39;ler) ve / veya hücre çizgileri 9 kullanımından yararlanmakta, Vα14 TCR transjenik (Tg) iNKT-hücresinden alınan hibridomadan 11,12 üretimi için farenin 10 veya timomalar. Bundan başka, farelerin çok sayıda, örneğin αGalCer yüklü CD1d dimerler ve uzun kültür zamanlarında gibi reaktiflerin yüksek hacimli bir yayınlanmış protokoller az etik ve ekonomik 9,13 çekici hale. Bu yazıda izolasyon ve fare dalak iNKT hücrelerin in vitro genişlemesi uyarlanmış bir yöntem tarif eder. Daha özel olarak ise, Protokol bir yöntem tarifFACS hücre sıralama için gerekli fareler, reaktifler ve süresini azaltır, ve in vitro sıralanan dalak iNKT hücrelerini genişletilmesi için optimize edilmiş bir yaklaşım önermektedir fare dalak iNKT hücrelerini zenginleştirmek için.

<table><tbody><tr><td>Malzeme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rekombinant murin IL-2</td><td>eBiosciences</td><td>14-8021</td><td></td></tr><tr><td>rekombinant murin IL-12</td><td>eBiosciences</td><td>39-8122-65</td><td></td></tr><tr><td>rekombinant murin IL-7</td><td>eBiosciences</td><td>14-8071</td><td></td></tr><tr><td>saflaştırılmış anti-fare CD3e (145-2C11)</td><td>eBiosciences</td><td>16-0032-86</td><td></td></tr><tr><td>saflaştırılmış anti-fare CD28 (37.51)</td><td>eBiosciences</td><td>16-0281-85</td><td></td></tr><tr><td>e450-konjuge anti-fare CD19 (eBio1D3)</td><td>eBiosciences</td><td>48-0193-82</td><td></td></tr><tr><td>e450-konjuge anti-fare CD8 & alpha; (53-6.7)</td><td>eBiosciences</td><td>48-0081-82</td><td></td></tr><tr><td>FITC konjuge anti-fare CD5 (53-7.3)</td> <td>eBiosciences</td><td>11-0051-81</td><td></td></tr><tr><td>V500-konjuge anti-fare CD3 ve epsilon; (500A2)</td><td>BD biosciences</td><td>560771</td><td></td></tr><tr><td>anti-fare CD5 (Ly-1) mikro boncuklar</td><td>Mac'ler Miltenyi Biotec</td><td>130-049-301</td><td></td></tr><tr><td>saflaştırılmış anti-fare CD16/32 (2.4G2)</td><td>Mac'ler Miltenyi Biotec</td><td>130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS</td><td>Sütunları Mac'ler Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavisi, %0,4 (ağırlık/hacim)</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta</td><td>Gibco</td><td>12633-020</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-056</td> <td>[Ca2 + / Mg + - ücretsiz]</td></tr> <tr><td>Fetal buzağı serumu</td><td>Gibco</td><td>10270</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco</td><td>25030-123</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4458-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906-100MG</td><td></td></tr> <tr><td>ve beta; -Merkaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque plus</td><td>GE Healthcare</td><td>71-7167-00 AF</td><td></td></tr><tr><td>Ekipmanı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu plaka F-tabanlı</td><td>Greiner-bio one</td><td>657-160</td><td></td></tr><tr><td>24 oyuklu plaka</td><td>Greiner-bio one</td><td>665-180</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plaka</td><td>Greiner-bio one</td><td>655-180</td><td></td></tr><tr><td>15 ml şahin tüp</td><td>Greiner-bio bir</td><td>188-271</td><td></td></tr><tr><td>50 ml şahin tüpü</td><td>Greiner-bio bir</td><td>227-261</td><td></td></tr><tr><td>70 & mikro; m filtre</td><td>Greiner-bio one</td><td>542-070</td><td></td></tr><tr><td>30 & mikro; m filtre</td><td>Millipore SVGP01050</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS ayırıcı</td><td>Macs Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MS Sütunları</td><td>Macs Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Su ceketli CO2 inkübatörü</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Kiti</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSAria III</td><td>BD Biyolojik Bilimler</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare dalak değişmeyen doğal Öldürücü t hücreleri İzolasyon ve yaygınlaştırılması için optimize yöntemi

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Hızla stimülasyon üzerine sitokinleri yeteneği değişmeyen doğal öldürücü T (iNKT) hücre soyunun işlevsel bir özelliğidir. iNKT hücreler bu bağışıklık yanıtlarını aktive ve direksiyon adaptif yeteneğine sahip doğuştan gelen bir T hücresi popülasyonu olarak karakterize edilir. Murin iNKT hücrelerin kültürü ve genişleme için geliştirilmiş tekniklerin geliştirilmesi, in vitro ve in vivo model sistemlerinde de iNKT hücre biyolojisi üzerinde çalışmayı kolaylaştırmaktadır. Burada, izolasyon ve murin splenik iNKT hücrelerinin genişlemesi için optimize edilmiş bir prosedürü açıklar. C57BL / 6 farelerinden alınan dalak çıkarılır, parçalara ayrılır ve süzülmüş ve elde edilen hücresel süspansiyon yoğunluk gradyan ortam üzerine yayıldı edilir. Santrifüj sonrasında, dalak mononükleer hücreler (MNC) toplanır ve CD5-pozitif (CD5 +) lenfositler manyetik boncuklar kullanılarak zenginleştirilmiştir. CD5 + fraksiyonu içinde iNKT hücreler daha sonra ^ ile boyanır5; CD1d tetramer GalCer yüklenmiş ve flöresanla aktive edilen hücre tasnif (FACS) ile saflaştırılmıştır. FACS murin yeniden birleştirici IL-7 varlığında genişletilmiş önce rekombinan sıçangil sitokin ve plaka bağlı T hücresi reseptörü (TCR) uyaran bir kombinasyonu kullanılarak iNKT hücreleri başlangıçta daha sonra in vitro olarak kültürlenir kriteri. Yaklaşık 10 8 iNKT hücreleri in vitro fonksiyonel deneyleri için ya da farelerde in vivo transfer deneyleri için de kullanılabilir ve bundan sonra kültür 18-20 gün içinde elde edilebilir Bu tekniği kullanarak.

Yoğunluk gradyanı kullanılarak dalak mononükleer hücrelerinin izolasyonu, yaklaşık 1 saat sürer ve kırmızı kan hücrelerinin (RBC) lize için gerekli reaktiflerin kullanımını ortadan kaldırır. Canlı hücreler yüksek verim alınır organın süzme sırasında üretilen bu yöntem ve tortuyu kullanılarak elde edilir. Tipik olarak, dalak lenfosit havuzu içinde iNKT hücrelerin frekansı, bu kullanılan hayvanların yaş, cinsiyet, sağlık durumuna bağlı olarak değişebilir, ancak toplam T lenfositlerin% 1 ila 5 arasında değişmektedir. Yakla...

Burada, fare dalağından çok sayıda murin değişmez doğal öldürücü T hücresi oluşturmak için kullanılabilecek uyarlanmış bir protokol sunuyoruz. Protokol, splenik iNKT hücrelerinin sınırlı sayıda hayvan ve reaktif kullanılarak in vitro olarak zenginleştirilebileceği, izole edilebileceği ve genişletilebileceği bir yaklaşımı özetlemektedir.

Fare Dalak Değişmeyen Doğal Öldürücü T Hücreleri İzolasyon ve Yaygınlaştırılması için optimize Yöntemi

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Bu prosedürün genel amacı, fare dalağından elde edilen invariant doğal katil T veya INKT hücrelerini genişletmektir. Bu işlem, öncelikle splenik mononükleer hücrelerin izole edilmesi ve ardından manyetik hücre ayırımı ile CD5 pozitif lenfosit popülasyonunun zenginleştirilmesiyle gerçekleştirilir. Splenik INKT hücre fraksiyonu daha sonra floresanla aktive edilmiş hücre ayıklama yöntemiyle izole edilir.Son adımda, ayrıştırılmış iNKT hücreleri in vitro ekspansiyon için hazırlanır. Nihayetinde, ekspande edilen iNKT hücrelerinin sitokin profili ELISA ile değerlendirilebilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan bireyler zorluk yaşayabilirler çünkü iNKT hücrelerinin saflaştırılması ve ekspansiyonu, farklı tekniklerin kombinasyonunun uygulanmasını gerektirir.Bu prosedür, laboratuvarımdan bir lisansüstü öğrencisi tarafından gerçekleştirilecektir. Dalak toplandıktan sonra, dokuyu 70 mikronluk bir naylon filtreye aktarın, ardından iki mililitrelik bir şırınga pistonu kullanarak dalağı süzgeçtenle birlikte 50 mililitrelik konik bir tüpe nazikçe ezin ve filtreyi beş mililitre PBS ile yıkayın. Daha sonra, 15 mililitrelik bir tüpe üç mililitre yoğunluk gradyanı solüsyonu ekleyin ve hücre süspansiyonunun beş mililitresini yoğunluk gradyanının üzerine yerleştirin.Hücreleri santrifüj ile ayırın ve ara yüzeyi yeni bir 15 mililitrelik tüpe aktarın. Ardından, CD5 pozitif splenik lenfositleri zenginleştirmek için hücreleri 10 mililitre soğuk PBS ile yıkayın ve pelletini iki mililitre fax tamponunda yeniden süspande edin. Hücre seyreltmesini daha fazla fax tamponu ile 90 mikrolitrede 1 × 10⁷ hücre olacak şekilde ayarlayın ve hücrelere 10 mikrolitre anti-CD5 mikroboncuk ekleyin.Dört derece santigrat sıcaklıkta 15 dakika bekledikten sonra, hücreleri dört mililitre fax tamponu ile yıkayın ve pelletini 500 mikrolitre taze fax tamponunda yeniden süspande edin. Üreticinin önerisine göre manyetik hücre ayırımı ile CD5 pozitif hücreleri izole edin. Ardından, zenginleştirilmiş CD5 pozitif lenfositleri, anti CD16, CD32 ve PE konjuge alpha gals air CD1D tetramer içeren fax tamponunda 1x10⁶ hücre/20 mikrolitre olacak şekilde oda sıcaklığında ve karanlıkta seyreltin; 30 dakika sonra hücreleri ilgili antikorlarla dört derece santigrat sıcaklıkta ve karanlıkta 30 dakika daha inkübe edin.Ardından hücreleri taze fax tamponu ile yıkayın ve 10⁶ hücre başına 20 µM'lık bir DPI çalışma çözeltisinden 10 µL kullanarak beş dakika boyunca boyayın. Oda sıcaklığında, hücre dubletlerini ve agregatlarını elektronik olarak dışlamak için forward scatter (ileri saçılım) ile low cells (düşük hücreli) üzerinden elektronik kapılamayla flow sitometrede yaklaşık 10⁴ zenginleştirilmiş CD5 pozitif lenfosit olayını edinin. Forward scatter ile low cells popülasyonu içerisinde DAPI pozitif, CD8 pozitif ve CD19 pozitif hücreleri kapı dışı bırakın ve side scatter (yan saçılım) ile forward scatter alan grafiklerini kullanın.Lenfositleri elektronik olarak seçmek için, CD three epsilon'a karşı alpha gal SER CD 1D tetramerlerini grafiğe dökün ve belirtildiği üzere alpha gal ser CD 1D tetramer pozitif CD three epsilon pozitif iNKT hücrelerini elektronik olarak kapılayın. Ardından, 2 × 10⁵'ten fazla olmayacak şekilde CD five pozitif zenginleştirilmiş lenfositleri elde ederek, zenginleştirilmiş hücresel fraksiyonda bulunan alpha gal SER CD 1D tetramer pozitif CD three epsilon pozitif iNKT hücrelerinin yüzdesini belirleyin. Bu kapıyı kullanarak, alpha alser CD 1D tetramer pozitif CD three epsilon pozitif iNKT hücrelerini, ayıklamanın sonunda bir mililitre fetal sığır serumu içeren bir FACS tüpüne ayıklayın.İzole edilen NKT hücrelerini faks tüpünün kenarından 10 milliliters RPMI 1640 medyumu ile durulayın. Ardından hücreleri santrifüjleyin, peleti bir milliliter RPMI 1640 içinde yeniden süspanse edin ve ayrıştırılmış hücrelerin saflığını değerlendirmek için hücrelerden 40 microliter'lik bir alikot kullanın. Aynı kapılama (gating) stratejisini kullanın.INKT hücrelerini genişletmek için sıralama parametrelerini ayarlamaya gelince, hücreleri santrifüjleyin ve izole edilen hücreleri IL-2, IL-12 ve anti-CD28 ile desteklenmiş tam RPMI 1640 besiyerinde 5 × 10⁵ hücre/mL konsantrasyonunda yeniden süspande edin. Ardından hücreleri, kuyuk başına 1 × 10⁵ INKT hücresi olacak şekilde anti-CD3ε kaplı 96 kuyucuklu düz tabanlı bir plakaya ekleyin ve bir hücre kültürü inkübatöründe 37 °C'de inkübe edin. İki gün sonra, hücreleri tam RPMI 1640 içerisinde dinlenme koşullarında kültürlemek üzere kaplanmamış yeni bir düz tabanlı 96 kuyucuklu plakaya aktarın.İki günlük daha inkübasyon için besiyeri ekleyin. Ayıklamadan sonraki dördüncü günde, hücreleri yerinden çıkarmak için her kuyuctaki süpernatantı nazikçe pipetleyin ve bunları 15 mililitrelik konik bir tüpte toplayın. Santrifüjden sonra, peleti mililitre başına 5 × 10⁵ hücre olacak şekilde yeniden süspanse edin.IL-7 takviyeli tam RPMI 1640 ortamında, yeni bir düz dipli 96 kuyucuklu plakaya kuyucuk başına 1x10⁵ hücre olacak şekilde ekim yapın. Hücreleri inkübatöre geri koyun ve dört gün sonra santrifüj için taze 15 mL'lik konik tüplere aktarın. Pelleti çözünür anti-CD28 içeren tam RPMI 1640 ortamında yeniden süspande edin ve hücreleri, anti-CD3ε ile kaplanmış 96 kuyucuklu düz dipli bir plakaya kuyucuk başına 1x10⁵ hücre olacak şekilde ekleyip hücreleri üç gün daha inkübatöre geri koyun, günler 11 ila 18.19. günde az önce gösterildiği gibi IL-7, anti-CD28 ve anti-CD3 epsilon işlemini tekrarlayın. Hücreleri yeni bir 15 mL'lik konik tüpe aktarın. Santrifüjle çöktürün ve peleti komple RPMI 1640 ortamında 5 × 10⁵ hücre/mL olacak şekilde yeniden süspande edin.Ardından hücreleri, düz dipli 96 kuyucuklu bir plakaya kuyucuk başına 1x10⁵ hücre olacak şekilde ekin ve hücrelerin hücre kültürü inkübatöründe iki gün boyunca dinlenmesine izin verin. Sıralanmış iNKT hücrelerinin, IL-2, IL-12 ve çözünür anti-CD28 varlığında, plakaya bağlanmış anti-CD3ε ile stimüle edilmesi, iki günlük kültürün ardından iNKT sayılarında yaklaşık üç katlık bir genişleme ile sonuçlanır. iNKT hücrelerinin ardından IL-7 varlığında genişletilmesi, kültürün dördüncü gününde mevcut olan iNKT hücre sayısında üç ila dört katlık bir artış sağlar.Dikkat çekici şekilde, bu kültür koşullarının tekrarlanması, farklı günlerdeki kültür ortamı değişimleri arasında herhangi bir görünür hücre kaybı olmaksızın, iki genişletme döngüsünden sonra ortalama 7 x 10⁷ iNKT hücresi sağlayabilir ve bu da 18 günde en az 70 katlık bir genişleme ile sonuçlanır. Plaka ile bağlanmış, alfa-galaktosamin yüklü rekombinant fare CD1d ile aktive edilen daha fazla genişletilmiş iNKT hücreleri, stimülasyondan 48 saat sonra IL-2, IL-4, IFN-gamma, TNF-alpha ve IL-6 üretir; bu durum, iNKT hücrelerinin genişletme sonrası Th1 ve Th2 sitokinleri üretme yeteneklerini koruduklarını göstermektedir.Bu prosedürü uygularken, akış sitometrisi sırasında iNKT hücrelerini tanımlayabilmek için iNKT hücrelerinin alfa seramid yüklü cdre ile uygun şekilde boyanmasının esas olduğunu unutmamak önemlidir.

an-optimized-method-for-isolating-expanding-invariant-natural-killer

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, manyetik ayırıcı kullanılarak negatif seçilimle farenin dalağından T hücrelerinin zenginleştirilmesi anlatılmaktadır. Teknik, spesifik hücre yüzeyi antijenlerine karşı yönlendirilmiş antikorlar veya ligandlar kullanılarak numunedeki diğer hücrelerin tükenme için hedeflenmesini içerir.

T-Hücresi Zenginleştirme: Manyetik Ayırma ile Karışık Hücre Popülasyonundan T-Hücrelerini İzole Etme Tekniği

Bu video, seçici genişleme için insan karaciğer dokusundan doğal öldürücü hücreler veya NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfositlerin izolasyonunu göstermektedir. Enzimatik ve mekanik sindirim, ardından yoğunluk gradyan ayrımı, NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfosit izolasyonunu destekler. Toplanan lenfositler, NK hücrelerinin seçici genişlemesi için daha fazla kullanılabilir.

Seçici Genişleme için Karaciğer Dokusundan Doğal Öldürücü Hücre İzolasyonu

Bu videoda, antijenik peptit yüklü MHC-Ig'ler ve anti-CD28 antikorları ile işlevselleştirilmiş manyetik nanopartikül bazlı yapay antijen sunan hücreler (aAPC'ler) kullanılarak nadir antijene özgü CD8+ T hücrelerinin izole edilmesi için bir protokol açıklanmaktadır. aAPC'lerin, antijenik peptit hedefli T hücresi reseptörlerini spesifik olarak eksprese eden CD8 + T hücreleri ile etkileşimi ve ardından in vitro genişlemeleri, bu CD8 + T hücresi popülasyonunun zenginleşmesi ve genişlemesi ile...

Antijene Özgü CD8+ T Hücrelerinin Nanopartikül Bazlı Zenginleştirilmesi ve Genişletilmesi

Bu video, allojenik hematopoietik kök hücreler ve GvHD'yi indükleyen splenik alloreaktif T lenfositleri kullanılarak letoral ışınlanmış bir alıcı farede bağırsak greftine karşı konak hastalığının (GvHD) indüksiyonunu göstermektedir. Bu protokol, hastalığın mekanizmasını anlamak ve yenilikçi terapötik seçenekler geliştirmek için ciddi bir akut intestinal GvHD modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Allojenik Kemik İliği ve Splenik Hücre Nakli ile Fare Modellerinde Graft Versus Host Hastalığının İndüksiyonu

Bu videoda, iNKT hücreleri olarak da bilinen değişmez doğal öldürücü T hücrelerinin izole edilmesi için bir yöntem gösterilmektedir. Prosedür, dalaktaki iNKT hücrelerinin aktivasyonunu ve çoğalmasını uyarmak için bir fareye sentetik bir glikolipid enjekte edilmesiyle başlar. Daha sonra, dalaktan tek hücreli süspansiyonlar hazırlanır ve floroforlarla etiketlenmiş iNKT hücre tanıyan komplekslerle inkübe edilir, ardından iNKT hücrelerini izole etmek için manyetik boncuk bazlı ayırma yapılır.

Bir Fare Modelinden Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin İzole Edilmesi

Naif CD4+ T hücreleri, aktivasyon sırasındaki ortama bağlı olarak çeşitli alt kümelere polarize olur.  Naif CD4 + T hücrelerinin çeşitli efektör alt kümelerine farklılaşması, T hücresi reseptör uyaranlarının ve spesifik sitokin sinyallerinin eklenmesiyle in vitro olarak elde edilebilir.

Fare Naif CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Hücre İzolasyonu ve<em&gt; In vitro</em&gt; T hücre alt içine Farklılaşma

Farklı dendritik hücre alt kümeleri, lenfoid organlarda nadir popülasyonlar olarak bulunur ve bu nedenle immünolojik deneyler için yeterli sayıda ve saflıkta izole edilmesi zordur. Burada, fare splenik dendritik hücrelerinin şu anda bilinen tüm ana alt kümelerinin izolasyonu için yüksek verimli, yüksek verimli bir yöntem açıklıyoruz.

Fare Dendritik Hücre Alt Grupları İzolasyonunda bir Verimli ve Yüksek Verim Yöntem

Burada, Allojeneik Hematopoietik kök hücre transplantasyonu açıklar ve distal kolonun tekrarlayan mini-endoskopik değerlendirme yerinde varlığı, özellikleri ve canlı içinde kolon iltihabı şiddeti için izin veren bir protokol mevcut bağırsak graft - versus - host hastalığı fareler.

İndüksiyon bağırsak Graft - versus - host hastalığı ve canlı fareler, Mini-endoskopik değerlendirme

Değişmez doğal öldürücü T (iNKT) hücrelerini fare dalağını zenginleştirmek ve in vitro ve in vivo çalışmalar için uygun sayılara genişletmek için hızlı ve sağlam bir protokol açıklıyoruz.

In vitro ve in vivo Çalışmalar için Fare Değişmez Doğal Öldürücü T Hücrelerinin Saflaştırılması ve Genişlemesi

Burada, periferik kan doğal öldürücü (PBNK), karaciğer dokularından NK hücreleri ve periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) veya kordon kanından (CB) türetilen kimerik antijen reseptörü (CAR)-NK hücrelerini genişletmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu protokol, genişlemiş NK hücrelerinin optimize edilmiş saflığına ek olarak, 221-mIL-21 besleyici hücreler kullanılarak NK ve CAR-NK hücrelerinin genişlemesini göstermektedir.

Doğal Öldürücü (NK) ve Membran Bound-IL-21-Modifiye B Hücre Hattı Kullanarak CAR-NK Hücre Genleşme Yöntemi

Öğrenin fare dalak değişmeyen doğal öldürücü T hücrelerini izole etme ve yaygınlaştırma yöntemini. Manyetik hücre ayırma ve akış sitometrisi kullanarak iNKT hücre verimini artırın.

Fare Dalak Değişmeyen Doğal Öldürücü T Hücreleri İzolasyon ve Yaygınlaştırılması için optimize Yöntemi

Daha fazla video keşfet