Su Yoksunluk, Sakarin Fading veya Genişletilmiş Erişim Eğitim olmadan Sıçanlarda Etanol Güçlendirme Özelliklerinin Değerlendirilmesi Bir Yöntem

Bu protokolün genel amacı, deneyciler için uygun olan ve standart yöntemlerin aksine, su yoksunluğu veya sakarin sükroz solması gerektirmeyen bir yöntemle sıçanlarda alkole karşı edimsel yanıtı hızlı bir şekilde başlatmaktır. Dolayısıyla bu yöntem, sıçanlarda alkol arayışında alkol ödülünün nörobiyolojisi ve nörofarmakolojisi ile ilgili temel soruları yanıtlamak için çok yararlı bir araçtır. Bu tekniğin temel avantajı, sıçanlarda alkol tepkisini başlatmak için sakarin sükroz solmasını gerektirmemesidir.

İlk olarak, etanol kendi kendine uygulama prosedüründe tatlandırıcıların kullanılmasının potansiyel olarak dezavantajını ortadan kaldırmak. Bu deney için 200 ila 225 gram ağırlığında fareler elde edin. Wistar erkekleri burada kullanılır.

Deneyin mantığına bağlı olarak onları çiftler halinde veya tek tek barındırın. Koloniyi kontrollü sıcaklık ve nem ile ters 12-12 aydınlık-karanlık döngüsünde tutun ve deneyleri karanlık fazda gerçekleştirin. Hayvanları haftalık olarak tartın ve deneye başlamadan önce en az bir hafta alışmalarına izin verin.

Farenin yiyecek ve suya erişimini sınırlamayın. Şartlandırma için gerekli değildir. Tüm davranış eğitimini, bir taşkın ızgarası ve atık tavası ile aynı büyüklükteki ameliyathane odasında gerçekleştirin.

Oda, havalandırmalı, ses azaltıcı bir kabine takılmalıdır. Her bölmede uyarı ışıkları, şırınga pompaları ve iki geri çekilebilir kol bulunmalıdır. Seviyeler, bir sıvı kabı kabına yanal olarak yerleştirilmelidir.

Her oda bir bilgisayar arayüzü ile otomatik kontrol altında olmalıdır. Edimsel koşullandırma programını gerektiği gibi hazırlamak için bu yazılımı kullanın. Örneğin, aşağıdaki komutları yürütün.

Seansın başlangıcını işaretlemek ve alkolün mevcut olduğunu belirtmek için iki kolu uzatın. Etanol koluna, basıldığında, bitişik içme kuyusuna 100 mikrolitre% 20 etanol vermesini ve beş saniye zaman aşımına uğramasını sağlayın. Kolun üzerindeki işaret ışığını yakarak zaman aşımını işaret edin.

Diğer kol, basıldığında programlanmış bir sonucu yoktur ve spesifik olmayan davranışlar için bir kontrol görevi görür. Zaman aşımları sırasında bile, sıçanların kolları nasıl kullandığını kaydedin, ancak sıçan için bir sonuç yoktur. 30 dakika sonra, oturumun sona erdiğini belirtmek için iki kolu geri çekin.

%95 etanol ve musluk suyundan yapılmış bir etanol çözeltisini bir şırıngaya yükleyin. Musluk hatlarına hava kabarcıkları sokmadan çözeltiyi çıkarın. Çözümün akışını el ile onaylayın.

Cihazları her zaman manuel olarak test edin. Ayrıca, herhangi bir seansa başlamadan önce daima solüsyon kabını kurulayın. Bir oturuma başlamadan önce, yazılım kontrollerini yükleyin ve her şeyin çalışır durumda olduğundan emin olun.

Sıçanları bir taşıma kafesinde test odasına taşıyın ve her odaya bir sıçan atayın. Sınav odasını vivaryum ile aynı sıcaklık ve nemde tutun. Fareleri tutarlı bir şekilde ve her seans için günün aynı saatinde odalarına yükleyin.

Ardından oturumu başlatmak için yazılımı başlatın. Seans sona erdikten sonra, fareleri vivaryuma geri koyun ve operant koşullandırma kafeslerini temizlemek için bir dezenfektan kullanın. Seansları her gün, haftada beş ila altı kez yapın.

Her seanstan sonra, aktif kol preslerinin, aktif olmayan kol preslerinin ve alkol ödüllerinin ortalama sayısını hesaplayın. Art arda üç seansta ödüller %15'ten fazla değişmediğinde performans stabilize olacaktır. Stabilize edilmiş taban çizgisindeki sıçanlar için olası bir manipülasyon, etanol ödülleri için motivasyonlarını değerlendirmektir.

Bunu yapmak için, onları aşamalı bir oran programına tabi tutun. Odaları, başlangıçta bir kol presiyle tek bir hacimde alkol verecek şekilde programlayın, ancak her bir alkol takviyesinden sonra gereken kol pres sayısını artırın. Her hayvan, kazanılan son pekiştirici için yapılan pres sayısına karşılık gelen bir kırılma noktasına ulaşacaktır.

Bu model, onaylanmış alkolik ilaç naltrekson kullanılarak öngörücü geçerliliği açısından değerlendirilmiştir. Gerçekten de, öngörücü geçerlilik kurulmuştur ve bu nedenle model yeni ilaç adaylarını değerlendirmek için kullanılabilir. İlk olarak, sıçanlara enjeksiyona alışmaları için her seanstan 30 dakika önce salin enjekte edin.

Oturumların sonuçlarını analiz edin ve son iki oturum arasındaki ödül sayısı %15 veya daha az değiştiğinde devam edin. Ardından, naltreksonu, pH'ı nötre ayarlanmış tuzlu su içinde verin. Farklı tedavi grupları ve tedavi edilmemiş kontroller arasındaki test sırasını randomize edin.

İlaç uygulamaları arasında, her sıçanın tedavi edilmeden iki normal seanstan geçmesine izin verin, sadece tuzlu suya maruz bırakın. Bu, yıkama süresi olarak işlev görür ve fareyi sıfırlar. Sonuçta her şartlandırılmış sıçan her tedavi seviyesini bir kez ve kontrol tedavisini bir kez alana kadar testleri tekrarlayın.

Verileri analiz ettikten sonra, ilerleyici oran testi sırasında hayvanlar üzerinde kullanılmak üzere en etkili doz seçilebilir. Tarif edilen protokolü kullanarak, sekiz farklı kohorttan 239 sıçan, su yoksunluğu veya sakarin sükrozu solması olmadan alkol ödülünü kendi kendine uygulamak için eğitildi. Sıçanlar hızlı bir şekilde kola basmaya başladı ve ilk seansta 10'dan fazla ödül aldı.

Sonunda, sıçanlar istikrarlı yanıt oranları elde etti ve her yarım saatlik oturumda yaklaşık 24 ödül kazandı. FDA onaylı bir ilaç olan naltrekson, üç konsantrasyonda test edildi. Beklendiği gibi, naltrekson tedavisi, alkolün kendi kendine uygulanmasında doza bağlı bir azalma sağladı ve bu protokol için önemli bir farmakolojik doğrulama sağladı.

Ayrıca beklendiği gibi, naltrekson, kırılma noktası ölçümündeki düşüşün gösterdiği gibi, sıçanın alkol motivasyonunu aşamalı bir oran programı altında azalttı. Bu videoyu izledikten sonra, su yoksunluğu veya sakarin sükroz solma prosedürü kullanmadan sıçanlarda etanol edimsel yanıtın nasıl hızlı bir şekilde başlatılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu protokolle, sıçanlar yaklaşık iki hafta içinde stabil kendi kendine uygulama oranları elde eder ve bu da farmakolojik olarak anlamlı kan alkol konsantrasyonları ile sonuçlanır.

Bu prosedürü denerken, günlük durumu mümkün olduğunca tutarlı tutmak önemlidir. Etanolün ilk güçlendirilmiş yanıttan itibaren hazneye doğru bir şekilde verilmesi de çok önemlidir, çünkü herhangi bir arıza etanolün kendi kendine uygulanmasının elde edilmesini değiştirebilir veya geciktirebilir. Bu prosedürü takiben, alkol arama ve almanın sinirsel temelini incelemek için başka deneyler de yapılabilir.