Name: C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Öğrenin, C57BL/6 farelerinde SLE bm12 modelinde T foliküler yardımcı hücreler, germinal merkez B hücreleri ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile karakterizasyonunu. Bu yöntem, otoimmün hastalık mekanizmalarını anlamak için değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen Lupus Araştırma Enstitüsü, NCI hibe CA138617, NIDDK hibe DK090978, Charlotte Schmidlapp Ödülü (E.M.J.'ye) ve Albert J. Ryan Bursu (J.K.'ye) tarafından desteklenmiştir. Cincinnati Çocuk Hastanesi Tıp Merkezi Romatoloji Bölümü'ndeki Araştırma Akışı Sitometri Çekirdeği tarafından sağlanan ve kısmen NIH AR-47363, NIH DK78392 ve NIH DK90971 tarafından desteklenen destek ve enstrümantasyon için minnettarız.

<ol><li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Part+I.+Arthritis+Rheum%5BTitle%5D)+AND+%22Estimates+of+the+prevalence+of+arthritis+and+other+rheumatic+conditions+in+the+United+States%22%5BJournal%5D)">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li>
<li>Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus">http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus</a> (2015).</li>
<li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus%3A+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li>
<li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694(2011).</li>
<li>Lindholm, L., Rydberg, L., Strannegård, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li>
<li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li>
<li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li>
<li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899(1976).</li>
<li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li>
<li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Host+%28Endogenous%29+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li>
<li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li>
<li>Petri, M., Orbai, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246(2007).</li>
<li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+Chain+Reaction%3A+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998(2012).</li>
<li>Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012).</li>
<li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265(2007).</li>
<li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+mapping+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li>
<li>Covelli, V. Chapter 3, Internal examination. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCovelli%2C+V+%22Guide+to+the+necroscopy+of+the+mouse%22">Guide to the necroscopy of the mouse</a>. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html">http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html</a> (2009).</li>
<li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+%28CFSE%29+to+monitor+lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259(2010).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD4%2B+T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319(2007).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771(2012).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Unfixed%2C+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928(2012).</li>
<li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+SLE%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol.%22%5BJournal%5D)">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20(2003).</li>
<li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeavey%2C+MM+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 5, Unit 5(2011).</li>
<li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+caveat+for+T+cell+transfer+studies%3A+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2%2B+tumors+or+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y.%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y.</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li>
<li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815(2003).</li>
<li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li>
<li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li>
<li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+require+%E2%80%9Cnurturing%E2%80%9D+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells require “nurturing” by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li>
<li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bm12 indüklenebilir modeli SLE hücresel ve moleküler süreçler incelemek için nispeten kolay ve etkili bir yoldur. Çok kendi antigenine karşı yönlendirilen adoptively transfer CD4 T hücrelerinin aktivasyonu kronik, burada açıklandığı gibi, akış sitometresi ile ölçülebilir TFH GC B hücreleri ve plazma hücrelerinin birikmesine yol açar. Hızla ve kolayca SLE hastalarında meydana benzeyen ve sonuçta otoantikorların patolojik birikimini yöneten otoimmün germinal merkez süreçlerinde aday genler ve yeni tedavilerin rolü sorguya...

Sistemik lupus erythematosus (SLE), anti-nükleer antikor (ANA) üretim ve glomerulonefrit prototip, özelliği kompleks otoimmün bir hastalıktır. Çok sayıda diğer deri dahil olmak üzere, sekeller, kardiyo-pulmoner ve hepatik lezyon bazı kişilerde hastalığı ile ilişkilidir. ABD&#39;de yaygınlık tahminleri kadınların ve azınlıkların 3 özellikle yüksek insidans ile, 150,000-1,500,000 1,2 dan, büyük ölçüde değişmektedir. SLE etyolojisi ayırt etmek zor olsa da, sistemik otoimmünite sonuçlanan çeşitli genetik ve çevresel faktörlerin etkileşimi kaynaklandığı düşünülmektedir. Çeşitli hayvan modelleri hastalığın başlangıcı ve ilerlemesinde yol açan faktörleri incelemek için istihdam edilmiştir. SLE Klasik fare modelleri p gibi NZW F1 modeli ve NZM türevleri, MLR / lpr zorlanma ve BXSB / Yaa zorlanma ve indüklenebilir sistemleri NZB x dahil genetik yatkın fare suşları arasında,ristane ve kronik Graft Versus Host Hastalığı (GVHH) &#39;nın modelleri 4. GVHD modellerinde otoantikor üretiminin ilk raporlar F1 transferleri 5 içine ebeveyn için çeşitli fare suşları veya hamster suşu kullanılmıştır - 8; lupus benzeri hastalığı incelemek için kullanılan daha yaygın yöntemler şu DBA / 2 üst → (C57BL / 6 x DBA / 2) F1 ve burada açıklanan bm12 transferi modeli bulunmaktadır. Her model kendi uyarılar vardır, ama bunlar genellikle insan hastalığın klinik özellikleri ile ilişkili özellikler ortak bir dizi paylaşır. Fare modellerinde en sık bildirilen parametreler, splenomegali lenfadenopati, nefrit, ANA üretimini içerir ve hücresel düzeyde, T foliküler yardımcı hücrelerin (TFH), germinal merkez (GC) B hücreleri ve plazma hücrelerinin genişlemesi. - H2 - Ab 1 bm12 / KhEgJ (bm12) fareler, bir gerilme i uyanlabilir bm12 modeli IA bm12 B6 (C) lenfositlerin adoptif nakli ile elde edilirMHC sınıf II üzerinde 3 amino asit ikameleri haricinde C57BL / 6&#39;ya Dentical, IA içine C57BL / 6 (B6) fareler, b. Alıcı APCler tarafından verici CD4 T hücrelerinin Alloactivation belirtileri yakın SLE benzeyen GVHH yol açar. Spesifik olarak, bu verici türetilmiş TFH genişlemesi, alıcının türetilmiş GC B hücreleri ve plazma hücrelerinin genişlemesini ve anti-dsDNA, anti-ssDNA, anti-kromatin ve anti-RBC antikorlar da dahil olmak üzere 9 Anas üretimini içerir. Zamanla, alıcı fareler glomerüler, interstisyel IgG mevduat ve böbrekler 10 damar bölgeleri ile ilişkili glomerülonefrit gelişebilir. Son zamanlarda insan hastalığına benzer, bu modelde 11 IFN tipi için kritik bir rol da vardır, göstermiştir. Özellikle, insan SLE ​​için belirleyici kriter, anti-dsDNA varlığında SLE uyumlu nefritin gelişmesini, bu fare modelinde belirgin özellikleri olan, her ikisi de 12 antikorları içerir. Var sespontan modeller üzerinde bm12 modelinin veral avantajları. Kendiliğinden SLE benzeri belirtiler geliştirmek Classic modelleri nakavt ya da başka genetiği değiştirilmiş fareler zor ve zaman alıcı kapısı yapmak melez fare suşları değil, B6 zemin üzerine B6 arka plan, ya da büyük genetik lokusların üzerinde kendilenmiş fare suşlarının ya güvenmek. Bm12 uyarılabilir model, genetik olarak tadil edilmiş farenin özel genler hastalık için önemli olabilir hücresel bölmesinin daha hızlı biçimde teşhisine izin veren, donör veya alıcı olarak görev yapabilir. Ayrıca, bm12 modelinde hastalık gelişimi en spontan modelleri için birkaç ay ile karşılaştırıldığında, Anas görünümünü kadar sadece 2 hafta gerektiren, çok daha hızlıdır. Ayrıca, farklı zaman noktalarında hastalığı geliştirmek kendiliğinden model aksine, bm12 → B6 modelde hastalığın başlangıcı ve işleyişi yüksek senkronize edilir. Bu olabilir b uygun boyutta kohortların üretimi sağlare hastalık gelişiminin her aşamasında girişimsel ya da terapötik stratejiler için kullanılır. Aşağıda B6 arka plan üzerinde, C57BL / 6 farelerine bm12 lenfositler adoptif nakli, ya da genetik türevleri tarafından SLE-benzeri otoimmünite başlatılması için ayrıntılı bir protokoldür. Buna ek olarak, TFH GC B hücreleri numaralandırma için bir akış sitometri boyama protokolü tarif eder ve plazma hücrelerinin hücre türleri, insan hastalığı ile ilişkilidir. Daha da önemlisi, bu protokoller SLE Birçok fare modellerinde hastalığa karakterize ve diğer hastalık modellerinde TFH GC B hücreleri ve plazma hücreleri tanımlamak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ fare suşu</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001162</td><td>Bm12 fare suşu</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Genotipleme için kısıtlama sindirim enzimi</td></tr><tr><td>1X RBC Lizis Tamponu</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Sağlık</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Plazma Ayırma Tüpü (PST)</td> <td>BD</td><td>365974</td><td>Dipotasyumlu kan alma tüpü EDTA</td></tr><tr><td>Serum Ayırma Tüpü (SST)</td> <td>BD</td><td>365967</td><td>Pıhtı aktivatörü ile kan alma tüpü / SST Jel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>Yüksek yoğunluklu hücre ayırma çözümü</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Yüksek yoğunluklu hücre ayırma çözeltisi</td></tr><tr><td>GL-7-biotin</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR ve beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Sabitlenebilir Canlılık Boyası ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1.2 ml FACS tüp ekleri, raflı</td><td>ABD Bilimsel</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon & trade; Yuvarlak Tabanlı Borular</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

c57bl / 6 farelerde sle bm12 İndüklenebilir modeli (sle)

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Sistemik lupus eritematozus (SLE) çeşitli klinik ve immünolojik bulguları olan otoimmün bir hastalıktır. Birkaç spontan ve indüklenebilir hayvan modeli, bm12 transfer modeli de dahil olmak üzere insan hastalığının ortak bileşenlerini yansıtır. Bm12 splenositlerinin veya saflaştırılmış CD4 T hücrelerinin transferi üzerine, C57BL / 6 fareleri hızla büyük frekanslarda T foliküler yardımcı hücreler (Tfh), germinal merkez (GC) B hücreleri ve plazma hücreleri geliştirir ve bunu takiben yüksek seviyelerde dolaşımdaki anti-nükleer antikorlar izler. Bu model, saf bir C57BL / 6 arka planında fareler kullandığından, araştırmacılar nispeten kısa bir süre içinde transgenik veya nakavt fare suşlarında hastalık ilerlemesini hızlı ve kolay bir şekilde inceleyebilirler. Burada, çok renkli akış sitometrisi ile modelin indüksiyonu ve Tfh, GC B hücreleri ve plazma hücrelerinin kantitasyonu için protokolleri açıklıyoruz. Daha da önemlisi, bu protokoller SLE'nin çoğu fare modelinde hastalığı karakterize etmek ve diğer hastalık modellerinde Tfh, GC B hücrelerini ve plazma hücrelerini tanımlamak için de kullanılabilir.

Hastalıklı farelerin kütle ve hücreselliği (Şekil 2) olarak dalak 2-3 kez, sağlıklı farelerin büyüklüğü sergileyen az 14 gün gibi splenomegali gelişir. Splenositler sırayla ışık dağılım (SSC-A tarafından FSC-A) kapılı, çift (FSC-A tarafından FSC-W veya H), canlı hücreleri (canlılık boya düşük boyama), ve CD4 + TCRβ + (Şekil ortadan kaldırılması Şekil 3A). Donör hücreleri CD45.1 ve CD45.2 (Şekil 3B, sol ...

BM12 lenfositlerinin bir C57BL/6 alıcısına transferi, sistemik lupus eritematozusun yerleşik bir modelidir. Burada, bu modeli kullanarak hastalığın nasıl başlatılacağını ve T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkez B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile nasıl karakterize edileceğini açıklıyoruz.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Bu prosedürün genel amacı, sistemik lupus eritemoz pozisyonu veya SLE'nin BM 12 modelinde T foliküler yardımcı hücrelerin, germinal merkezlerin, B hücrelerinin ve plazma hücrelerinin ekspansiyonunu akış sitometrisi ile karakterize etmektir. Bu yöntem, terapötikler ile belirli moleküler yolakları hedeflemenin hastalık ilerlemesini durdurup durduramayacağı veya yavaşlatıp yavaşlatamayacağı gibi lupus alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu SLE modelinin temel avantajı, saf CPD seven black six arka planlı fareler kullanmasıdır; böylece araştırmacılar, transgenik veya knockout fare soylarındaki hastalık ilerlemesini nispeten kısa bir sürede hızlı ve kolay bir şekilde inceleyebilirler.BM 12 donör hücrelerini izole edip farelere enjekte ettikten, greftleme verimliliğini belirledikten ve fareleri metin protokolüne uygun olarak ötanize ettikten sonra, cerrahi makasla farenin karnını ıslatmak için üzerine hafifçe %70 ethanol püskürtün. Genital bölgenin yaklaşık bir santimetre üzerine küçük ve yüzeysel bir insizyon yapın, peritonal fasyayıle bütünlüğünü koruyarak karın derisini sternuma doğru çekin. 18 gauge bir iğne takılmış beş mililitrelik bir şırıngayı, iğne hayva

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Video, miyelin oligodendrosit glikoproteinleri ve inaktive edilmiş Mycobacterium tuberculosis'in bir kombinasyonunu enjekte ederek bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelit indüksiyonunu göstermektedir. Model, araştırmacıların hastalık mekanizmalarını incelemelerine ve terapötik müdahaleleri test etmelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır.

Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Bu protokol, deneysel otoimmün ensefalomiyelit için farmakolojik tedavilerin, immün hücre infiltrasyonunun baskılanmasının bir sonucu olarak CNS koruması gösterip göstermediğinin veya immün hücre infiltrasyonunun saldırısı sırasında nöroprotektif olup olmadığının nasıl belirleneceğini açıklar.

Otoimmün demiyelinizasyonun Farmakolojik Müdahaleler için CNS Koruma karşı Belirlenmesi Bağışıklık Sistemi Bastırma

Burada, C57BL yılında bleomisin endotrakeal enjeksiyonu ile akciğer yaralanması indüksiyonu sonrasında tüm göbek kordonundan elde edilen intravenöz infeksiyon insan mezenkimal stromal hücrelerin Antifibrotik aktivitesini araştırmak için etkili bir yöntem sunuyoruz. /6 fare. Bu protokol, diğer terapinin preklinik testine kolayca uzatılabilir.

Bleomisin endotrakeal enjeksiyon tarafından fare akciğer hasarı indüksiyon

Mevcut protokol, farelerde lupus ilerlemesini izlemek için bir yöntem açıklamaktadır. Böbreklerde hücre infiltrasyonu ve protein birikimine bağlı lupus nefritini karakterize etmek için iki ek prosedür sunulmuştur.

Lupus Eğilimli MRL/lpr Farelerde Proteinüri, Lökositlerin Renal İnfiltrasyonu ve Proteinlerin Renal Birikimi Analizleri

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.

İki Cinsiyette Multipl Sklerozun Modellenmesi: MOG35-55 ile İndüklenen Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit

Burada, SKG farelerinden CD4 + T hücrelerinin evlat edinilmiş transferi yoluyla bir romatoid artrit (RA) fare modeli oluşturan, immünolojik mekanizmaları, patolojik ilerlemeyi ve RA için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için hızlı ve güvenilir bir deneysel araç sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Romatoid Artritin Evlat Edinen Bir Transfer Modeli

Öğrenin, C57BL/6 farelerinde SLE bm12 modelinde T foliküler yardımcı hücreler, germinal merkez B hücreleri ve plazma hücrelerinin akış sitometrisi ile karakterizasyonunu. Bu yöntem, otoimmün hastalık mekanizmalarını anlamak için değerli bilgiler sunar.

C57BL / 6 FARELERDE SLE bm12 İndüklenebilir Modeli (SLE)

Daha fazla video keşfet