Name: Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: Keşfedin, şırınga infiltrasyonu yöntemiyle Arabidopsis thaliana bitki bağışıklık yanıtlarını niceliksel olarak karakterize etme tekniğini. Pseudomonas syringae patojen büyümesini ölçerek savunma mekanizmalarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

El yazmasını eleştirdiği için Dr. Shahid Mukhtar'a ve örnek veri analiz dosyası için Dr. Xinnian Dong'a teşekkür ederiz. Bu çalışma, KPM ve UAB Biyoloji Bölümü'ne bir NSF-KARİYER ödülü (IOS-1350244) ile desteklenmektedir.

Aşağıdaki metni Arabidopsis&#39;de Psm ES4326 şırınga sızma deneyi optimize gerçekleştirmek için adım adım bir protokol açıklar. Bu deneyde başlıca işlemleri basitleştirilmiş bir akış şeması (Figür 1) yer almaktadır. 1. Bitki Büyüme Koşullar <ol><li> Sow tohumlar <ol><li> Gevşek alt O onları iliklerine toprak ve su kapları ile doldurulmuş 2 tencere (çapı 4, uzun boylu 3.75) hazırlayın / N fazla suyu boşaltmadan önce. </li><li> Levha ya da diğer kağıt ağırlığında katlanmış 70 mm, her saksı, 50-100 Arabidopsis tohumu, yabani-tür Col-0 veya npr1-1 mutant ekmek. </li><li> % 80-90 (Şekil 2A) için bağıl nemi arttırmak için su püskürtülür şeffaf bir kubbe ile tencerenin kapağını kapatın. </li></ol></li><li> Tam tabakalaşma ve senkron filizlenmesi için izin vermek için 72 saat boyunca 4 ° C&#39;de pot inkübe. </li><li> Standart büyüme koşulları pot aktarın (12 saat ışık/ 12 saat karanlık, 21 ° C, ışık yoğunluğu 100 mol / m 2 / sn, bağıl nem% 40) tohum çimlenme için izin vermek. Su yoğunlaşmasını önlemeye yardımcı olacaktır büyüme odası, transferinden sonra hemen açılması bir 2-3 oluşturmak için kubbeyi Crack. </li><li> Ilk gerçek yaprak uzunluğu 2-3 mm boyuta ulaştığında, düz toprak ile doldurulmuş 72 kuyu pot fidan nakli. <ol><li> Düz toprak yüzeyinin ortasında 1-derin depresyon oluşturmak için parmağınızı veya 1 ml pipet kullanın. </li><li> Yavaşça mümkün olduğunca az kök hasarı ile bireysel fidan ayırın. Dikkatle forseps ile sağlam köklere sahip fide pick up. </li><li> Depresyon içine nakli şok aza indirmek ve yavaşça depresyon doldurmak için çevredeki toprağı aşağı pat yapışan toprak simler ile birlikte tek ayrılmış fide yerleştirin. Biyolojik tehlikeli atık kabına ilave fide ve toprak atın ve uygun imhaYerel biyolojik tehlike atık kurallarına. </li><li> Su üstten fide aktarılır ve tamamen% 80-90 nem korumak için su püskürtülür şeffaf bir kubbe ile düz kapak. Daha sonra 4 gün sabahı kubbesi çatlak ve tamamen o günün sonunda çıkarın, 3 gün boyunca kubbeyi tutun. Not: Ekim tohumlar alternatif düz toprakla dolu bir 72-kuyu üzerine bir cam pipet ile 2-3 tohum aktarılması, ardından 4 ° C&#39;de 48 saat boyunca 1 mi,% 0.1 agar ihtiva eden 1.5 ml santrifüj tüplerine katmanlaştırıcı tohumları ile gerçekleştirilebilir. Yassı çimlenme sonrası bir hafta çıkarılabilir şeffaf bir kubbe ile kaplı olması gerekir. İlave fideler oyuk başına sadece bir fide bırakmak için çıkarılabilir. </li></ol></li><li> 20 dakika için 1-su içinde daire ıslatılmasıyla Su bitkileri her iki günde bir, daha sonra fazla suyu tahliye. Not: sulama tesisleri için zaman aralığı büyüme odası nem bağlıdır ve kararlı taban olması gerekirKullanıcının bitki büyüme tesisinin sürekli gözlem d. Onlar iyi sulanan emin olmak için her gün bitkileri kontrol edin. Sadece birkaç noktalar, su fışkırtma bir şişe üst gelenler bitkilerin kurutulması durumunda. </li><li> Ya da büyüme koşulları (photoperiod, sıcaklık) bağlı olarak 3-5 haftalık karşılık gelişim aşaması # 3.50 (rozet boyutu% 50 bitmiş boyut), yakın bitkiler üzerinde patojen enfeksiyonu tahlilleri (Adım 3-5) gerçekleştirin. Çiçeklenme ortaya çıkması (evre # 5) yaşa bağlı direnç 38,39 başlangıcından sonra bitkiler bulaştırmak etmeyin. </li></ol> Kültür Medya ve Tabaklar 2. Hazırlık <ol><li> Kral&#39;ın B (KB) sıvı ortam 1 L olun. Yavaşça 1000 ml görünür pelet yoktur 2 O kadar deiyonize H ile bir manyetik karıştırma çubuğu kullanılarak 20 g proteoz pepton ve 2 g potasyum fosfat dibazik trihidrat karıştırın. 20 dakika bir sıvı döngüsü 150 ml&#39;lik bir cam şişe içine kısım 100 ml otoklav. </li><li> HazırlamakKB katı ortam ile kültür plakaları. <ol><li> Yavaşça 20 gr Proteoz peptonlu, 2 gr Potasyum Fosfat Dibazik Trihidrat ve 1000 ml 15 gr Agar deiyonize H 2 O karıştırın Otoklav. </li><li> Gelecekteki yoğunlaşmayı en aza indirmek ve antibiyotik bozulmasını önlemek için dokunmak serin kadar bir manyetik karıştırıcı plaka üzerinde orta soğutun. Ortam 1 ​​M MgSO 4 steril 18 ml steril% 80 Gliserol ve 5 ml. Psm ES4326 50 ug ml bir son konsantrasyona kadar soğutuldu ortamı içine streptomisin ekleyin streptomisin karşı direnç taşıdığı göz önünde - 1. </li><li> Plakaları dökün. 100 mm x 15 mm ve 150 mm x 15 mm Petri kapları: KB medya plakaları iki farklı boyutta hazırlayın. Daha küçük Petri içeren ortam birincil bakteri kültürü plakası olarak hizmet verir ve bakteri plaka sayma gibi büyük Petri kabı vermektedir. Not: plakaları sayma bakteriler için, dikdörtgen şekilli plakalar azaltmak için kullanılabiliriki katı kadar tedaviler geleneksel yuvarlak plakalara göre plaka başına çizilebilir beri sarf maliyet. <ol><li> Enfeksiyon deney öncesinde plakaları dökün. Streptomisin sülfat yana kadar 3/2 ay 4 ° C&#39;de saklayın KB aracı madde içinde plakaları kademeli antibiyotik aktiviteye 40 kaybeder. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Gelişmiş Hastalık Duyarlılık (EDS) <ol><li> 1. Gün - plaka üzerinde Streak bakteri <ol><li> İki gün EDS analizden önce, çizgi Psm ES4326 den -80 ° C gliserol stoğundan ° BB-Strep bakteriyel kültür levhası ve 24-48 saat süre ile 28 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol></li><li> 2. Gün - sıvı kültür ve su bitkileri başlatmak <ol><li> , 28 ° CO / N 1 streptomisin ve 250 rpm&#39;de sallamak - 50 ug ml içeren 4 ml sıvı KB ortamı ile steril bir test tüpünde, sıvı kültürü başlatmak. Not: EDS enfeksiyonu testi için, genotip tavsiye edilir başına 6 bitkileri kullanaraked. STI ve MTI testlerde, tedavi başına genotip başına 6 bitki tavsiye edilmektedir. Bakteri inokulum için, 0.3 ve 0.6 arasında λ 600Nm optik yoğunluk ile taze sıvı bir kültürün kullanımı tavsiye edilir. </li><li> Mark örnekleme enfekte doku kolay tanımlama için bir künt uçlu su geçirmez işaretleyici ile yaprakları sayısı 5 ve 6 sapı (Şekil 1). Stoma açılmasını geliştirmek ve yaprak haline patojen çözümün girişini kolaylaştırmak, 20 dakika boyunca alttan düz iliklerine iyi bitkileri sulamak için, daha sonra aşırı suyu boşaltın. Not: Alternatif olarak, şeffaf bir kubbe ile düz kapak ve stoma açıklığı arttırmak için 2-4 saat boyunca suya daldırın. </li><li> 3. Gün - Patojen seyreltme ve şırınga infiltrasyonu Not: Sabah saatlerinde Patojen enfeksiyon duyarlı genotiplerin en belirgin hastalık belirtilerinin patojen çoğalması ve gelişmesi için en uygunudur. Infect tutmak için her türlü çabayıTutarlı iyon zamanlama deneysel tekrarlamalı arasında varyasyon azaltmaya yardımcı olur sirkadiyen ritimler ve gündüz gen regülasyonu 41,42 etkisini ortadan kaldırmak için. <ol><li> Oda sıcaklığında 2 dakika boyunca 9600 x g&#39;de mikrosantrifüj tüpü içinde 1.5 ml bakteri kültürü Pelet ve supernatant atın. Steril 10 1 ml mM MgCl2 ile bakteri pelletini. Not: Magnezyum katyonları P. motilitesini ve yapışma artırabilir Syringae 43.. Alternatif olarak, aynı konsantrasyonda MgSO 4 kullanın. Steril su Mg tuz çözeltileri için kabul edilebilir bir alternatiftir. </li><li> 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpü içinde 10 mM MgCl2 9 ml bakteri süspansiyonu seyreltilir ve λ = 600 nm bir spektrofotometre ile bakteri optik yoğunluk (OD) ölçün. Nihai OD 600Nm 10 mM MgCl2 = EDS enfeksiyonu tahlili için 0.0002 ile bakteri ile seyreltilir. </li><li> Yaprak InfiltrateSeyreltilmiş bir bakteri çözeltisi ihtiva eder (genel olarak insülin şırınga olarak da bilinir) bir 1 ml&#39;lik kör uç iğnesiz şırınga. </li><li> Tam kapasite ile şırınga kadar doldurmayın. Sızma işlemi sırasında çok daha iyi bir kontrol sağlamak için 0.5-0.6 ml ile doldurun. </li><li> Işaret parmağı üstünde yaprak alt yüzeyini Açığa, yavaşça başparmak yardımıyla yaprak konumunu ayarlamak. Bu basınç eşit dağıtılmış sağlamak için yaprak yüzeyine dik şırınga yerleştirin. Yaprak hasarı azaltmak için sızma sırasında yaprak orta damarı alanı önlemek için deneyin. </li><li> Yavaşça bakteriyel çözüm sızmaya pistonu itmek; koyu renkli bir yaprak rengi ile gösterildiği gibi yaprak mezofil sıvı girişi görselleştirilecektir. Yaprağın tüm yüzeyini sızmak deneyin. Bu, tek bir girişimde başarılı değilse, başka bir infiltrasyon nokta seçin ve tüm yaprak yüzey kaplı kadar yukarıda açıklanan işlemleri tekrarlayın.</li><li> Tamamlandığında, yavaşça ilave patojen çözüm kaldırmak için emici dokusu ile yaprak leke. Görme hasar için enfekte yaprak dokusu inceleyin. Not: sızma tamamlandıktan sonra dairesel şırınga izlenim görünür olmamalıdır. </li><li> Orijinal büyüme koşulları içine dönmeden önce 1-2 saat kurumaya sızmış bitkiler bırakın. Sonraki su ile net bir kubbe sprey ve kapağı enfekte bitkiler 2 saat sonra açılış bir 2-3 üretmek ve enfeksiyon deney geri kalanı boyunca bunu bırakmak kubbeyi çatlak. Not: P. yana Syringae aynı tesiste yetiştirilen diğer bitkilere enfeksiyöz ajanı yayılma riski yoktur, bir havadan patojen değildir. Ancak, ilave bir önlem olarak, yakınlarda bulunan virüslü bitkiler ve diğer deneysel bitkiler arasındaki fiziksel temastan kaçının. Şeffaf bir kubbe ile düz Kaplama patojen virülansını artırmak ve hastalığın ilerlemesini hızlandırır.kaplama dönem bu adımı ve optimal süresi, kullanıcının bitki büyüme tesisinin nem koşullarına göre tespit edilmesi gerekmektedir ihtiyacı. </li></ol></li><li> 5. Gün - medya plakaları ön kurutmaya <ol><li> Soğuk depolama biriminin dışına 150 mm x 15 mm KB plakalarını alın ve plaka üzerinde herhangi bir ön mevcut su yoğunlaşmasını kurulayın. Yaklaşık 24 saat boyunca oda sıcaklığında tutularak kuru tabaklar. Bu işlemi hızlandırmak için, 30-60 dakika boyunca kırık onların kapaklı bir laminer akış kaputu koyun. Not: Bu adım, bir sonraki aşamada plaka yüzeyinde dairesel bir damlacık oluşumu için kritik önem taşır. </li></ol></li><li> Gün 6 - patojen büyümesini nicel Not: Aşağıdaki patojen miktar prosedür bakterilerin eşit miktarda bitkiler yaprak morfolojisi değiştirmiştir, özellikle yaprak halinde teslim edilmektedir teyit etmek için enfeksiyondan sonra erken zaman noktalarında gerçekleştirilebilir. <ol><li> Ortaya çıkmasının ardından enfekte doku işleyinkloroz duyarlı genotiplerde enfekte dokuların sararma ile gösterilen ancak nekrotik lezyonlar gelişimi (Şekil 2B) daha önce. Not: Önerilen örnekleme süresi üç gün patojen aşılamadan sonra olduğunu. Patojen büyüme çevresel bir dizi faktöre bağlı olduğu, ancak, inkübasyon süresi 2 ½ 3 ½ günlük bir aralık içinde değişebilir ve kullanıcının bitki büyüme imkan enfeksiyon ilerlemesinin dikkat gözlemlerle tespit edilmesi gerekmektedir olabilir. <ol><li> Her genotip (Şekil 1) 6 taşlama tüpleri hazırlayın. Bir paslanmaz çelik öğütme topu yerleştirin ve her bir tüpe 10 mM MgCl2, steril 500 ul ilave edin. </li><li> Bitki enfekte yaprak ayırın ve 1 delikli kağıt zımba (Şekil 1) ile bir yaprak diski yumruk. Not: örnekleme hatasını en aza indirmek, aynı pozisyonda her örneklenmiş yaprak yumruk deneyin. Üst yaprak diskinin Örneklemeyaprağın tavsiye edilir. </li><li> Rasgele forseps kullanarak her öğütme tüpe (iki farklı bitkilerden) 2 yaprak diskleri yerleştirin. </li><li> Tüp kapatın ve 10 dakika süreyle maksimum hızda yüksek verimli bir homojenleştirici (dakikada 1600 vuruş) ile doku homojen hale getirilir. Doku iyi homojenize ve çözümleri nedeniyle enfekte yapraklardan klorofil sürümüne yeşile kadar gerekirse bu işlemi tekrarlayın. </li></ol></li><li> Homojenizasyon için beklerken, çok kanallı bir pipet ve pipetleme rezervuarı kullanarak 180 ul 10 mM MgCl2, 96 oyuklu bir kültür plakasına ilk 6 satır doldurun. </li><li> Öğütme işleminden sonra, 96-kuyulu plakanın ilk sıraya temel doku süspansiyonu 20 ul transfer ve sıvı yukarı ve aşağı pipetleme tekrar karıştırılır. Küçük doku parçaları ucu yapışmasına neden olursa, çözümün doğru hacmini edinmelerine yardımcı 2-3 mm tutturun. <ol><li> Üst o üzerinde damlacık için yeterli alan sağlamaklevha, uzay alternatif sıralardaki farklı genotipleri doku (Şekil 1) f. On kat seri seyreltme hazırlamak için, ikinci satıra 20 ul sıvı transferi ve altıncı seyreltme kadar bu işlemi tekrarlayın. </li></ol></li><li> Aktarım ayrılır pipet uçları (Şekil 1) kullanılarak 150 mm x 15 mm KB plaka üzerine 96-yuvalı plaka çözeltisi 20 ul. En yoğun en inceltilmiş süspansiyon çalışın. Not: En konsantre seyreltilmiş çoğu hareketle gereksiz seyreltilerde arasındaki pipet uçları değiştirmek için yapar. Plaka de önceden kurutulmuş ise (genellikle 15-30 dakika) absorbe kadar aktarılan damlacık ortamı üstünde sağlam kalmalıdır. Kuruma süresi, oda sıcaklığında ve nem ile değişir. </li><li> Kapak kırık ile oda sıcaklığında plaka kurulayın. Artık sıvı plaka yüzeyinde görülebilir kez kapak, ters kapatın ve oda sıcaklığında plaka ya da 28 ° C inkübatör inkübe. </li><li> Koloniler görünür hale gelene kadar 40-60 saat inkübe. Tabakalarına büyüme oluşturan üniteler (cfu) oluşturan koloni öngörülebilir 10 misli bir düşüş (Şekil 2C) yansıttığını teyit edin. Onlar büyümek ve koloniler sigorta önce bakteri sayın. Örtüşen kolonileri yok düşük sulandırma bakteri sayısını belirler. Genellikle tercih edilen seyreltme 10-50 koloniler arasında içerecektir sayılacak. Not: Varyasyon teknik çoğaltır arasında mevcut olabilir; Bu nedenle, her bir deney için düşük seyreltme ayrı belirlenmelidir. </li><li> Bakteriyel çoğalma seviyelerini hesaplamak için, üst üste (R) yanı sıra, yazılı olarak, her teknik tekrarında (T) içindeki bakteri sayısı sayısı belge. Koloni oluşturan birim sayısını belirler - formülü ile kob / yaprak disk: kob / yaprak disk = (T × 10 R / 20) 500/2 × </li><li> Süreden için aşağıdaki elektronik tablo şablonda verileri yazınbir grafik (Şekil 1) ce (elektronik tablo veri analizi şablon dosyası için, Tablo 2). Her veri noktası, logaritmik ölçekte altı teknik kez tekrarlanan deneyin ortalaması olarak ifade edilir. Hata çubukları, ortalamanın% 95 güven aralığını temsil eder (n = 6). Not:% 95 güven aralıkları hesaplanması teknik çoğaltır sayısına göre ayarlanması gerekir. </li></ol></li></ol></li></ol> 4. SA-Tetikledi Bağışıklık (STI) <ol><li> 1. Gün: Adım 3.1 açıklandığı gibi aynı prosedürü uygulayın. </li><li> Gün 2: Sıvı bakteri kültürü (Aşama 3.2) bitkiler sulama ve başlatılması yanı sıra, SA türevi sodyum salisilat 21 dış uygulama tarafından direnci sağladığım göstermektedir. Not: Saf SA zayıf suda çözünürlüğe sahiptir ve daha önceki pH ayarlama gerektiren, böylece, bu tahlil için tavsiye edilmez. <ol><li> P. karşı SA aracılı savunma indüklemek için syringae ve gelecekteki enfeksiyon 21 için prime bitkiler,(Sahte gibi) iyi bir 1 mM sodyum salisilat buğu veya H2O ile 24, püskürtme bitkileri patojen enfeksiyonundan önce 16-24 saat. </li></ol></li><li> 3. Gün: = OD 600Nm için 0.001 patojen seyreltme hazırlayın ve şırınga infiltrasyon (Adım 3.3) ile tüm yaprak yüzeyine bakteri itin. </li><li> 6. Gün: EDS tahlili (Adımlar 3.4 ve 3.5) için tarif edildiği gibi patojen ölçümü ve sayım işlemi için, prosedürü izleyin. Plaka ve saymak H 2 O ve Sodyum Salisilat - ayrı ön işlem örnekleri. Ön-muamele sistemleri - vahşi tür Arabidopsis thaliana için patojen büyümesinde 1-2 log azalma Sodyum Salisilat beklenmektedir. </li></ol> 5. MAMP-Tetikledi Bağışıklık (MTI) Not: Bu deneme içinde, bizler, vahşi tip Arabidopsis Col-0 ve mutant fls2 ve efr kullanılan bitkiler. FLS2 ve EFR plazma membran lokalize Örüntü Tanıma Reseptörler (PRR) flg22 ve elf18 tanıyabilir, respe vardırctively 9,10. Psm ES4326 dış MAMP tedavi öncesi ve şırınga infiltrasyonu, aşağıdaki mutant değişmeden patojen büyümesinin ile gösterilir MAMP, spesifik tipte bir duyarsızlık her PRR sonuçları kaybı. <ol><li> Gün 1 ve 2: Adım 3.1 ve 3.2 açıklandığı gibi aynı prosedürü uygulayın. </li><li> 3. Gün: MAMP, tedavi öncesi ve patojen enfeksiyonu <ol><li> , MAMP-Tetiklemeli Dokunulmazlık kurmak flagellin epitop flg22 veya EF-Tu epitop elf18 ve 1 mcM solüsyonu hazırlamak için patojen enfeksiyonu (Adımlar 3.3.3-3.3.6) önce tüm yaprak yüzey 4 saat içine şırınga-sızmak. Bu P. karşı MAMP aracılı savunma indüksiyonu için sağlayacak syringae ve başbakan gelecek enfeksiyonu 6,37 için tesisler. Not: Kamuya açık mikrodizi verileri flg22 ya elf18 tedavi 37.44&#39;ü sonra 4 saat olur MAMP duyarlı genlerin yüksek transkripsiyon yeniden programlanması saptandı. Bu durumda, 4 saatlik önerilirCol-0 MAMP ile muamele edilmiş ve fls2 ve efr mutantlar arasında patojen büyümesinin açık bir fark elde sonuçlanır MAMP ön işlem süresi. </li><li> Emici doku ile ekstra MAMP çözüm çıkarın ve yaprak içindeki sıvı emme sürecini hızlandırmak için ortaya bitkiler bırakın. Şırınga basınç infiltrasyonu yaraladı etkisi hesaba katmak için, kontrol bitkilerinin yaprakları içine H 2 O sızmak. </li><li> OD 600 nm için patojen seyreltme hazırlayın = 0,001 MAMP / H2O ile önceden işlemden geçirilmiş bir şırınga infiltrasyonu ile yaprak (Aşama 3.3) tüm yaprak yüzeyine bakteri itin. </li></ol></li><li> 6. Gün: Adım 3.4 ve 3.5 de tarif edildiği gibi patojen ölçümü ve sayım işlemi için, prosedürü izleyin. Plaka ve ayrı ayrı H 2 O ve MAMP-ön tedavi örnekleri sayılır. Yabani tip Arabidopsis, patojen büyümesinde 1-2 log azalma kısmen güçlü olan, MAMP ön tedavisi yapılmış bitkilerde beklenmektedirflg22 aracılık ettiği er redüksiyon elf18 için karşılaştırıldı. </li></ol>

<ol><li>Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+mechanisms+of+defense+against+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Contrasting mechanisms of defense against biotrophic and necrotrophic pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 43, 205-227 (2005).</li>
<li>Hammond-Kosack, K. E., Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+disease+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Plant disease resistance genes.</a> Annual review of plant biolog. 48, 575-607 (1997).</li>
<li>Pontier, D., Balague, C., Roby, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypersensitive+response.+A+programmed+cell+death+associated+with+plant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+II%22%5BJournal%5D)">The hypersensitive response. A programmed cell death associated with plant resistance.</a> C R Acad Sci II. 321, 721-734 (1998).</li>
<li>Ryals, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Acquired+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Systemic Acquired Resistance.</a> Plant Cel. 8, 1809-1819 (1996).</li>
<li>Jones, J. D., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The plant immune system.</a> Natur. 444, 323-329 (2006).</li>
<li>Newman, M. A., Sundelin, T., Nielsen, J. T., Erbs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAMP+%28microbe-associated+molecular+pattern%29+triggered+immunity+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sc%22%5BJournal%5D)">MAMP (microbe-associated molecular pattern) triggered immunity in plants.</a> Front Plant Sc. 4, 139(2013).</li>
<li>Fritig, B., Heitz, T., Legrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+proteins+in+induced+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial proteins in induced plant defense.</a> Curr Opin Immuno. 10, 16-22 (1998).</li>
<li>Nicaise, V., Roux, M., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+PAMP-triggered+immunity+against+bacteria%3A+pattern+recognition+receptors+watch+over+and+raise+the+alarm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physio%22%5BJournal%5D)">Recent advances in PAMP-triggered immunity against bacteria: pattern recognition receptors watch over and raise the alarm.</a> Plant Physio. 150, 1638-1647 (2009).</li>
<li>Zipfel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+disease+resistance+in+Arabidopsis+through+flagellin+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception.</a> Natur. 428, 764-767 (2004).</li>
<li>Kunze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N+terminus+of+bacterial+elongation+factor+Tu+elicits+innate+immunity+in+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">The N terminus of bacterial elongation factor Tu elicits innate immunity in Arabidopsis plants.</a> Plant Cel. 16, 3496-3507 (2004).</li>
<li>Gust, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria-derived+peptidoglycans+constitute+pathogen-associated+molecular+patterns+triggering+innate+immunity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Che%22%5BJournal%5D)">Bacteria-derived peptidoglycans constitute pathogen-associated molecular patterns triggering innate immunity in Arabidopsis.</a> J Biol Che. 282, 32338-32348 (2007).</li>
<li>Alfano, J. R., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+III+secretion+system+effector+proteins%3A+double+agents+in+bacterial+disease+and+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Type III secretion system effector proteins: double agents in bacterial disease and plant defense.</a> Annu Rev Phytopatho. 42, 385-414 (2004).</li>
<li>Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entering+and+breaking%3A+virulence+effector+proteins+of+oomycete+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbio%22%5BJournal%5D)">Entering and breaking: virulence effector proteins of oomycete plant pathogens.</a> Cell Microbio. 11, 13-20 (2009).</li>
<li>He, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+bacterial+suppressors+of+MAMP+signaling+upstream+of+MAPKKK+in+Arabidopsis+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Specific bacterial suppressors of MAMP signaling upstream of MAPKKK in Arabidopsis innate immunity.</a> Cel. 125, 563-575 (2006).</li>
<li>Gimenez-Ibanez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AvrPtoB+targets+the+LysM+receptor+kinase+CERK1+to+promote+bacterial+virulence+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">AvrPtoB targets the LysM receptor kinase CERK1 to promote bacterial virulence on plants.</a> Curr Bio. 19, 423-429 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+PAMP-induced+MAP+kinase+cascade+by+a+Pseudomonas+syringae+effector+activates+plant+immunity+mediated+by+the+NB-LRR+protein+SUMM2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Disruption of PAMP-induced MAP kinase cascade by a Pseudomonas syringae effector activates plant immunity mediated by the NB-LRR protein SUMM2.</a> Cell Host Microb. 11, 253-263 (2012).</li>
<li>Chisholm, S. T., Coaker, G., Day, B., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions%3A+shaping+the+evolution+of+the+plant+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions: shaping the evolution of the plant immune response.</a> Cel. 124, 803-814 (2006).</li>
<li>Jones, D. A., Takemoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+innate+immunity+-+direct+and+indirect+recognition+of+general+and+specific+pathogen-associated+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Plant innate immunity - direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules.</a> Curr Opin Immuno. 16, 48-62 (2004).</li>
<li>Elmore, J. M., Lin, Z. J., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+NB-LRR+signaling%3A+upstreams+and+downstreams%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Plant NB-LRR signaling: upstreams and downstreams.</a> Curr Opin Plant Bio. 14, 365-371 (2011).</li>
<li>Gassmann, W., Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector-triggered+immunity+signaling%3A+from+gene-for-gene+pathways+to+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interac%22%5BJournal%5D)">Effector-triggered immunity signaling: from gene-for-gene pathways to protein-protein interaction networks.</a> Mol Plant Microbe Interac. 25, 862-868 (2012).</li>
<li>Wang, D., Weaver, N. D., Kesarwani, M., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+protein+secretory+pathway+is+required+for+systemic+acquired+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">Induction of protein secretory pathway is required for systemic acquired resistance.</a> Scienc. 308, 1036-1040 (2005).</li>
<li>Bednarek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+warfare+or+modulators+of+defence+responses+-+the+function+of+secondary+metabolites+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Chemical warfare or modulators of defence responses - the function of secondary metabolites in plant immunity.</a> Curr Opin Plant Bio. 15, 407-414 (2012).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Mol Bio. 44, 321-334 (2000).</li>
<li>Fu, Z. Q., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acquired+resistance%3A+turning+local+infection+into+global+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Systemic acquired resistance: turning local infection into global defense.</a> Annu Rev Plant Bio. 64, 839-863 (2013).</li>
<li>Cao, H., Glazebrook, J., Clarke, J. D., Volko, S., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+gene+that+controls+systemic+acquired+resistance+encodes+a+novel+protein+containing+ankyrin+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 gene that controls systemic acquired resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats.</a> Cel. 88, 57-63 (1997).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+protein+is+a+receptor+for+the+plant+defense+hormone+salicylic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Re%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 protein is a receptor for the plant defense hormone salicylic acid.</a> Cell Re. 1, 639-647 (2012).</li>
<li>Smith, J. M., Heese, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+bioassay+to+measure+early+reactive+oxygen+species+production+in+Arabidopsis+leave+tissue+in+response+to+living+Pseudomonas+syringae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Rapid bioassay to measure early reactive oxygen species production in Arabidopsis leave tissue in response to living Pseudomonas syringae.</a> Plant Method. 10, 6(2014).</li>
<li>Nomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bacterial+virulence+protein+suppresses+host+innate+immunity+to+cause+plant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">A bacterial virulence protein suppresses host innate immunity to cause plant disease.</a> Scienc. 313, 220-223 (2006).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+thaliana-Pseudomonas+syringae+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Arabidopsis+book%2FAmerican+Society+of+Plant+Biologist%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction.</a> The Arabidopsis book/American Society of Plant Biologist. 1, (2002).</li>
<li>Sawada, H., Suzuki, F., Matsuda, I., Saitou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+analysis+of+Pseudomonas+syringae+pathovars+suggests+the+horizontal+gene+transfer+of+argK+and+the+evolutionary+stability+of+hrp+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Evo%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic analysis of Pseudomonas syringae pathovars suggests the horizontal gene transfer of argK and the evolutionary stability of hrp gene cluster.</a> J Mol Evo. 49, 627-644 (1999).</li>
<li>Xin, X. F., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%3A+a+model+pathogen+for+probing+disease+susceptibility+and+hormone+signaling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000: a model pathogen for probing disease susceptibility and hormone signaling in plants.</a> Annu Rev Phytopatho. 51, 473-498 (2013).</li>
<li>Dong, X., Mindrinos, M., Davis, K. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Arabidopsis+defense+genes+by+virulent+and+avirulent+Pseudomonas+syringae+strains+and+by+a+cloned+avirulence+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Induction of Arabidopsis defense genes by virulent and avirulent Pseudomonas syringae strains and by a cloned avirulence gene.</a> Plant Cel. 3, 61-72 (1991).</li>
<li>Mackey, D., Holt 3rd, B. F., Wiig, A., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIN4+interacts+with+Pseudomonas+syringae+type+III+effector+molecules+and+is+required+for+RPM1-mediated+resistance+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">RIN4 interacts with Pseudomonas syringae type III effector molecules and is required for RPM1-mediated resistance in Arabidopsis.</a> Cel. 108, 743-754 (2002).</li>
<li>Tornero, P., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high%E2%80%90throughput+method+for+quantifying+growth+of+phytopathogenic+bacteria+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journa%22%5BJournal%5D)">A high‐throughput method for quantifying growth of phytopathogenic bacteria in Arabidopsis thaliana.</a> The Plant Journa. 28, 475-481 (2001).</li>
<li>Ishiga, Y., Ishiga, T., Uppalapati, S. R., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+seedling+flood-inoculation+technique%3A+a+rapid+and+reliable+assay+for+studying+plant-bacterial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis seedling flood-inoculation technique: a rapid and reliable assay for studying plant-bacterial interactions.</a> Plant Method. 7, 32(2011).</li>
<li>Zheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronatine+promotes+Pseudomonas+syringae+virulence+in+plants+by+activating+a+signaling+cascade+that+inhibits+salicylic+acid+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation.</a> Cell Host Microb. 11, 587-596 (2012).</li>
<li>Pajerowska-Mukhtar, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HSF-like+transcription+factor+TBF1+is+a+major+molecular+switch+for+plant+growth-to-defense+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">The HSF-like transcription factor TBF1 is a major molecular switch for plant growth-to-defense transition.</a> Curr Bio. 22, 103-112 (2012).</li>
<li>Rusterucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+associated+with+the+transition+to+flowering+in+Arabidopsis+and+is+effective+against+Peronospora+parasitica%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+molecular+plant+patholog%22%5BJournal%5D)">Age-related resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato is associated with the transition to flowering in Arabidopsis and is effective against Peronospora parasitica.</a> Physiological and molecular plant patholog. 66, 222-231 (2005).</li>
<li>Boyes, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+stage%E2%80%93based+phenotypic+analysis+of+Arabidopsis+a+model+for+high+throughput+functional+genomics+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Growth stage–based phenotypic analysis of Arabidopsis a model for high throughput functional genomics in plants.</a> The Plant Cell Onlin. 13, 1499-1510 (2001).</li>
<li>Regna, P. P., Wasselle, L. A., Solomons, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stability+of+streptomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistr%22%5BJournal%5D)">The stability of streptomycin.</a> Journal of Biological Chemistr. 165, 631-638 (1946).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Natur. 470, 110-114 (2011).</li>
<li>Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+plant+immunity+by+light%2C+circadian+rhythm%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Modulation of plant immunity by light, circadian rhythm, and temperature.</a> Current opinion in plant biolog. 16, 406-413 (2013).</li>
<li>Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbio%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Appl Environ Microbio. 54, 629-632 (1988).</li>
<li>Qutob, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytotoxicity+and+innate+immune+responses+induced+by+Nep1-like+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Phytotoxicity and innate immune responses induced by Nep1-like proteins.</a> The Plant Cell Onlin. 18, 3721-3744 (2006).</li>
<li>Pimentel, D., Lach, L., Zuniga, R., Morrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+economic+costs+of+nonindigenous+species+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BioScienc%22%5BJournal%5D)">Environmental and economic costs of nonindigenous species in the United States.</a> BioScienc. 50, 53-65 (2000).</li>
<li>Zeng, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata%3A+a+checkpoint+of+host+immunity+and+pathogen+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+biotechnolog%22%5BJournal%5D)">Plant stomata: a checkpoint of host immunity and pathogen virulence.</a> Current opinion in biotechnolog. 21, 599-603 (2010).</li>
<li>Ton, J., Flors, V., Mauch-Mani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+ABA+in+disease+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+plant+scienc%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of ABA in disease resistance.</a> Trends in plant scienc. 14, 310-317 (2009).</li>
<li>Mahajan, S., Tuteja, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+salinity+and+drought+stresses%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+biochemistry+and+biophysic%22%5BJournal%5D)">Cold salinity and drought stresses: an overview.</a> Archives of biochemistry and biophysic. 444, 139-158 (2005).</li>
<li>León, J., Rojo, E., Sánchez‐Serrano, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+signalling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Botan%22%5BJournal%5D)">Wound signalling in plants.</a> Journal of Experimental Botan. 52, 1-9 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Nüfusu mevcut arazileri azalan ve artan dünyada araştırmacılar ekin iyileştirilmesi için acil ihtiyaçları zorlanmaktadır. Verim büyük ölçüde çeşitli biyotik ve abiyotik streslere etkilenebilir. Bunlar arasında, patojen enfeksiyonu tek başına 45 ABD&#39;de yaklaşık% 12 kayıp sorumlu mahsul verim azalmasına önde gelen nedenlerinden biridir. Bu sorunu gidermek için, masif araştırma modeli Arabidopsis&#39;de yapılmıştır - P. syringae pathosystem kapsamlı bileşenleri ve bitki bağışıklık tepkilerinin düzen...

Nedeniyle sapsız doğası, bitkiler sürekli çeşitli yaşam tarzları ve beslenme stratejileri 1 sergileyen patojenlerin bir bolluk tarafından tehdit edilmektedir. Nekrotrofik patojenler aktif gizli toksinler ve enzimler konak dokusunu öldürmek ve ölü hücreleri 1 beslemek için ise bir ilk yaklaşım için, biotrophic patojenler, besin almak için hayatta onların ev sahibi korumak. Patojenler olarak adlandırılan hemibiotrophs başka bir grup, patojen birikimi 2 belli bir eşik ulaştıktan sonra nekrotrofik sahneye biotrophic sahne ve vardiya ile enfeksiyon kursu başlıyor. Etkili bu mikroorganizmalara karşı kendilerini savunmak amacıyla, bitkiler patojen saldırı tespit ve tetiklemek için birden fazla gözetim mekanizmaları ile donatılmış karmaşık bir doğal bağışıklık sistemini geliştirmişlerdir hücre ölümünü 3 yanı sıra Sistemik Kazanılmış Direnç (SAR) 4 programlanmış lokalize. Mevcut araştırma temel sig karakterize odaklanmıştırnaling bileşenleri ve bitki bağışıklık sistemi 5 içinde çapraz görüşmeler. &quot;Zik-zak&quot; modeli 5 önerildiği gibi, bitki doğuştan gelen bağışıklık tepkisinin birinci tabaka bir mikrop istilasına tespit etmek için, plazma membran lokalize bir görüntü tanıma Reseptörler (PRR) varlığını gerektirir. PRR&#39;ler Mikrop İlişkili Moleküler Desenler (MAMPs) tanımak ve MAMP-Tetikledi Dokunulmazlık (MTI) 6 kurabiliyoruz. Antimikrobiyal PR proteinleri 7 kodlayan genlerin transkripsiyonel bir regülasyonunu indükleyici yanı sıra, MTI hücre duvarına reaktif oksijen türlerinin üretimi (ROS) ve reaktif nitrojen (RNS), kaloz birikimini içeren patojen büyümesini tutuklama etkinlikleri çeşitli yol açar yanı sıra birden fazla kinaz sinyal aktivasyonu 8 yolaklarıyla olarak. Şimdiye kadar, çok sayıda bakteriyel MAMPs flg22 9 da dahil olmak üzere, Arabidopsis&#39;te MTI tetiklemek için tespit edilmiştir </sup&gt; (Flagellin türetilen bir 22 amino asit fragmanı) ve yapısal hücre duvarı bileşeni elf18 10 (bakteriyel için uzatma faktörü Tu 18 amino asit), 11 peptidoglikanlar. Başarılı bir enfeksiyon kurmak için, bazı özel patojenler, hücre içi veya hücreler arası boşluklar içine gizli virülans efektör proteinleri yeteneği gelişti ve dolayısıyla MTI bastırmak ve Efektör-Tetikledi Hassasiyetinin (ETS) 12,13 tetikleyebilir var. Örneğin, hastalık oluşturma efektörler enfekte olmuş doku 14-16 içinde hastalık gelişimini azaltmak için TEB Mitojen Aktive Protein Kinaz (MAPK) fosforilasyon kaskadlar etkisiz hale getirebilir. Host ve patojen arasındaki dinamik işbirliği evrimi sırasında, bitkiler de efektör proteinleri tanır ve patojen hastalık oluşturma 17 molekülleri azaltmak için kontra strateji geliştirmiştir. Bu, doğrudan veya dolaylı efektör tanıma hastalık direnci (R) proteinleri 18 aracılık eder. T çoğuetek NB-LRG üyeleri (nükleotid Bağlama ve Lösin Zengin Tekrarlar) ailesi 19 vardır. R proteini tarafından avirulent efektör algısı Efektör-Tetikledi Bağışıklık (ETİ) 20 olarak karakterize güçlü ve daha geniş bir bağışıklık tepkisi ortaya çıkarır. Savunma genlerinin 21 ekspresyonunu ve savunma metabolitlerinin 22 üretimini indükleyen yanı sıra, ETİ genellikle komşu doku 3 içine yayılmasını kısıtlamak için patojen Hiperduyarlı Cevap (HR) olarak bilinen bir hızla lokalize programlı hücre ölümüne yol açar. Programlanmış lokalize hücre ölümü 23 ek olarak, bitkileri (SAR) 4 Sisteme Etki Eden Kazanılmış Direnç olarak adlandırılan uzun süreli ve sistem genelinde bir bağışıklık tepkisi başlatılması yeteneğine sahiptir. Bir biotrophic patojen ile tehditten sonra, bitki hücreleri, lokal ve sistemik dokularda 24 hem de endojen fitohormon salisilik asit (SA) ve PR proteinlerinin sentezini ve birikimini tetikler. T yoluylaHer ne kadar süreç, hazırlık yüksek bir durumu patojenlerin 24, geniş bir spektrum ile daha sonraki bir enfeksiyona karşı savunma davranışlarını sırasında daha hızlı bir montaj sağlar enfekte edilmemiş yaprak elde edilir. SA ve örneğin benzo gibi sentetik analogları (1,2,3) tiadiazol-7-karbotioik asit S-metil ester (BTH) ve 2,6-dikloroizonikotinik asit (INA) kimyasal Salisilik asit uyarabildiğinden (SA) dış uygulama 24 üzerine -Triggered Bağışıklık (STI). Patojenesis-ilgili genler 1 (NPR1) arasında Nonexpressor lokal ve sistemik dokularda 21,25,26 hem de SA aracılı savunma cevabı sırasında büyük bir kopyalama düzenleyicisi SA reseptörleri ve işlevlerinden biri olarak kabul edilmektedir. Bu kesin NPR1 SAR kurulması için gerekli olan ve NPR1 kaybı, Pseudomonas syringae&#39;ye 25 doğru dramatik bir duyarlılığa yol açtığı gösterilmiştir. Yoğun bitki moleküler katkı karakterize etmek içinbitki-patojen etkileşimlerine bileşenleri, çok sayıda biyo-deneyler, ROS 27 patlama da dahil olmak üzere, belirli bir savunma etkinlikleri ölçmek için protein ürünlerinin 21 kaloz birikimi 28 savunma genleri ekspresyonunu ve birikimini geliştirilmiştir. Bu bireysel deneyler bitki bağışıklık tepkisinin özel bir forma anlayış sağlamak mümkün olmakla birlikte, bunların hiçbiri, ancak, tüm tesis düzeyinde tam bir savunma yanıtı temsil edebiliyoruz. Bunun aksine, enfeksiyondan sonraki patojen büyümesinin miktar organizma seviyesinde bağışıklık tepkisinin genel bir tahmin sağlar. Bu nedenle, kesin ve son derece standart patojen aşılama testinin geliştirilmesi ve optimizasyonu Arabidopsis bağışıklık tepkiler üzerine araştırma ve keşifler kadar yakıt için kritik öneme sahiptir. Pseudomonas syringae, bir Gram negatif bir bakteridir, Arabidops da dahil olmak üzere bitki hücrelerine bir dizi hastalığa neden olabilen bir fitopatojenin olarak tanımlandı29 olduğunu. P. - Model bitki-patojen sistemi, Arabidopsis gibi syringae etkileşim yaygın moleküler mekanizmaları altında yatan bitki savunma yanıtları 29 anlamak için uygulanmıştır. Şimdiye kadar, üzerinde 50 P. Syringae pathovars farklı bitki türlerinin 30 bulaştırmak için kendi yeteneklerine göre tespit edilmiştir . P. syringae pv. tomato DC3000 (Pst DC3000) 31 ve P. syringae pv. maculicola ES4326 (Psm ES4326) 32 iki en yaygın olarak kullanılan ve yaygın karakterize öldürücü suşlar vardır. Kenara bitki tarafından tanınan ve MTI yanıtı tetikleyen olmaktan, Pst DC3000 ve Psm ES4326 MTI bastırmak ve patojen büyüme 31,33 lehine ETS tetiklemek için öldürücü efektör proteinleri salgılayan yeteneğine sahiptirler. Işlevsel Arabidopsis ve P. etkileşimini incelemek syringae, çoklu0; patojen enfeksiyon yöntemleri patojen teslim yaklaşımına dayalı geliştirilmiştir. Toprak yetiştirilen bitkiler için patojen şırınga infiltrasyonu, vakum infiltrasyonu, daldırma aşılama ve sprey aşılamadan 29,34 ile teslim edilebilir. Son zamanlarda, fide sel aşılama tahlil doku kültürü üzerinde büyük ölçekli ekranlar gerçekleştirmek için geliştirilen genç Arabidopsis bitkiler 35 plakaları yetiştirilen. Şırınga sızma, en sık kullanılan yaklaşım olarak, elle stoma 29 olarak adlandırılan doğal yaprak deliklerden apoplast içine patojeni sunar. P. Bu yaklaşım sayesinde, eşit miktarlarda syringae enfekte kanadı içine sızabilir ve bitki bağışıklık tepkisinin gücü ters patojen artışı seviyeleri ile bağıntılıdır. Bu nedenle, patojen büyümesinin ölçümü bütün bitki düzeyinde bağışıklık fonksiyonunu değerlendirmek için en uygun yaklaşım olarak hizmet vermektedir. Buna ek olarak, şırınga infiltrasyonu lokal ve sistemik doku ayırt edebilirsiniz, hangi olabilir bSAR 36 altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize uygulanabilir e. Aşağıdaki protokol, artan hastalık yatkınlık (EDS) için Arabidopsis mutantlar ekrana Psm ES4326 ile optimize edilmiş şırınga sızma testi açıklar. Bu protokol, iki Arabidopsis genotipleri istihdam sağlayacak: vahşi tip ekotipinin Columbia-0 (Col-0) bitkileri (kontrol) ve npr1-1 kayıp fonksiyon-mutantlar (hypersusceptible) Bu öldürücü bakteri suşu Psm ES4326 37 ile enfekte olacaktır. Npr1-1 mutant tirozin son derece korunmuş histidin değiştirir ve 25 fonksiyonel olmayan protein işler NPR1 molekülünün ankirin-tekrar konsensüs dizisi içinde bir nokta mutasyonu taşır. Buna ek olarak, şırınga süzme analizinde modifikasyonları bir dizi MTI ve STI da dahil olmak üzere bağışıklık tepkisi, spesifik tabakalar kusurların kantifikasyonuna izin veren bu tarif edilmiştir.

<table><tbody><tr><td>MetroMix 360&nbsp;</td><td>Grosouth</td><td>SNGMM360</td><td></td></tr><tr><td>Büyük tencere</td><td>Grosouth</td><td>TEKUVCC10TC</td><td></td></tr><tr><td>12 x 6 Kesici</td> uçlar <td>Grosouth</td><td>LM1206</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Deliksiz daireler</td><td>Grosouth</td><td>LM1020</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Delikli daireler</td><td>Grosouth</td><td>LM1020H</td><td></td></tr><tr><td>Vinil yayılma kubbeleri</td><td>Grosouth</td><td>CW-221</td><td></td></tr><tr><td>Proteoz Peptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0122-17-4</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Dibazik Trihidrat&nbsp;</td><td>MP Biyomedikaller</td><td>151946</td><td></td></tr><tr><td>Ağar&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A360-500</td><td></td></tr><tr><td>Streptomisin sülfat</td><td>Bio Basic Inc</td><td>SB0494</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm Petri kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>150 x 15 mm Petri kapları</td><td>Fisher Scientific</td><td>R80150</td><td></td></tr><tr><td>Dikdörtgen plaka</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 Heksahidrat</td><td>Bio Basic Inc</td><td>MB0328</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Bio Basic Inc</td><td>GB0232</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp; </td><td>Bio Basic Inc</td><td>MN1988</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9992493&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Taşlama boruları&nbsp;</td><td>Denville Scientific</td><td>B1257</td><td></td></tr><tr><td>Boruların öğütülmesi için kapaklar</td><td>Denville Scientific</td><td>B1254</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik taşlama bilyası</td><td>Fisher Scientific</td><td>2150</td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu plaka&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Salisilat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>s3007-1kg</td><td></td></tr><tr><td>flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)</td><td>Genescript</td><td>Sipariş üzerine</td><td></td>üretilmiştir</tr><tr><td>elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)</td><td>Genescript</td><td>Sipariş</td><td></td>üzerine üretilmiştir</tr><tr><td>Delgeç</td><td>Zımbalar</td><td>146308</td><td></td></tr><tr><td>Biyofotometre artı</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td>952000006</tr><tr><td>PowerGen Yüksek Verimli Homojenizatör</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-503</td><td></td></tr><tr><td>Accu spin mikro santrifüj</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-100-675</td><td></td></tr><tr><td>Çok kanallı pipet (10-100 ve mikro; l)</td><td>Eppendorf</td><td>3122 000.043</td><td></td></tr><tr><td>Çok kanallı pipet (30-300 & mikro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td>3122 000.060</td><td></td></tr><tr><td>Pipet (20&mikro; l)</td><td>Eppendorf</td><td>3120 000.038</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>3552-HR</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie kalıcı işaretleyici</td><td>Zımba</td><td>507130</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml tüp</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-890</td><td></td></tr></tbody></table>

kullanarak bitki savunma yanıtları ince karakterizasyonu için bakteriyel yaprak sızma deneyi<em&gt; arabidopsis thaliana-pseudomonas syringae</em&gt; pathosystem

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

Özel bir mobil bağışıklık hücrelerinin yokluğunda, bitkiler lokalize programlanmış hücre ölümü ve Sisteme Etki Eden Kazanılmış Direnç patojen saldırısına karşı kendilerini savunmak için kullanmaktadır. Genel bitki bağışıklık tepkisinin belirli bir Arabidopsis geni katkısı spesifik olarak ve kantitatif olarak enfekte olmuş doku içinde patojen büyümesinin tahlil ile değerlendirilebilir. Üç yılı aşkın süredir, hemibiotrophic bakteri Pseudomonas syringae pv. Maculicola ES4326 (Psm ES4326) yaygın Arabidopsis bağışıklık tepkisini altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için bir model patojen olarak uygulanmıştır. Yaprak dokusuna patojenleri teslim etmek, birden fazla aşılama yöntemleri kurulmuştur, örneğin, şırınga sızma, daldırma aşılama, sprey, vakum infiltrasyon ve sel aşılama. Aşağıdaki protokol yetişkin yaprakları içine zehirli Psm ES4326 sunmak için optimize edilmiş bir şırınga sızma yöntem açıklanırArabidopsis bitkileri, toprak yetiştirilen ve doğru bu patojenin yönelik artan hastalık yatkınlık (EDS) için ekran. Buna ek olarak, bu protokol daha Salisilik Asit (SA) -Triggered Bağışıklık (STI) ve MAMP-Tetikledi Bağışıklık (MTI) dahil bitki savunma farklı katmanları, içinde belirli bağışıklık kusurları incelemek için birden fazla ön tedaviler ile takviye edilebilir.

Burada açıklamak protokol optimize edilmiş P. temsil syringae şırınga sızma deneyi nicel Arabidopsis bitkilerde bağışıklık tepkisini değerlendirmek için. Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, Psm ES4326 şırınga infiltrasyonu sulandırılmış hali ve koloniler numaralandırma ile patojen ekstre edilmek ve nicelendirilmek izlemektedir. Protokol metin içinde Aşama 3&#39;de tarif edildiği gibi, Psm ES4326 karşı Geliştirilmiş Hastalık Duyarlı...

Patojen büyümesinin niceliksel olarak belirlenmesi, çeşitli Arabidopsis thaliana (bundan böyle Arabidopsis olarak anılacaktır) bağışıklık tepkilerini karakterize etmek için güçlü bir araçtır. Burada açıklanan yöntem, Pseudomonas syringae pv'yi ölçmek için optimize edilmiş bir şırınga infiltrasyon testi sunar. maculicola ES4326 yetişkin Arabidopsis yapraklarında büyüme.

Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

Bu prosedürün genel amacı, optimize edilmiş bir şırınga infiltrasyon deneyi aracılığıyla Arabidopsis diliana'nın bağışıklık yanıtını nicel olarak karakterize etmektir. Bu işlem, öncelikle bakterilerin stoma adı verilen doğal açıklıklardan yaprak içine manuel olarak iletilmesi için şırınga infiltrasyonu kullanılarak gerçekleştirilir. İkinci adım ise, hastalık semptomlarının gelişmesinin ardından enfekte olmuş yaprak dokusundan diskler elde etmektir.Ardından, bakteriler yüksek verimli homojenizasyon yoluyla yaprak disklerinden ekstrakte edilir. Son adım, kolonileri saymak için bakteriyel sayım plaklarına seri dilüsyon ve damlatma işleminin yapılmasıdır. Nihayetinde, her bir yaprak diskindeki bakteriyel büyüme, bitki bağışıklık tepkisinin göreceli gücüyle ilişkilendirilebilir.Bu yöntem, biyotik strese karşı savunma yanıtlarına katkıda bulunan genlerin belirlenmesi gibi bitki immünitesi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, enfekte bitki dokusundaki patojen büyümesinin hassas bir şekilde miktar tayinine olanak tanıması ve farklı gelişim durumlarındaki yaprakların örneklemesinden kaynaklanan deneysel hataların önlenmesine yardımcı olmasıdır. Bu yöntem, virülent bir bakteriyel patojen enfeksiyonuna karşı bitki immün yanıtı hakkında içgörüler sağlayabilir ve ayrıca salisilik asit veya mikrop ilişkili moleküler paternlerin tetiklediği immün yanıtlar gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.Genellikle, bu yönteme yeni başlayan kişiler, doku hasarı vermeden bakterileri yaprağa aktarma konusunda zorluk yaşarlar. Aşağıdaki prosedürü, laboratuvarımdan doktora sonrası araştırmacı Hindu ile lisansüstü öğrenciler Shalu ve Yali uygulamalı olarak göstereceklerdir. Bu videoda, artırılmış hastalık duyarlılığı analizi gösterilecektir.Deneyden önce, protokol metninde açıklandığı şekilde bir litre KB katı besiyeri hazırlayarak King's B veya KB besiyeri plaklarını hazırlayın ve manyetik karıştırıcı üzerinde soğumaya bırakın. Besiyeri dokunulabilecek sıcaklığa soğuduğunda, besiyerine %80 gliserol, bir molar magnezyum sülfat ve streptomisin ekleyin; ardından iki farklı boyutta KB besiyeri plağı dökün. Daha küçük Petri kabı birincil bakteri kültür plağı, daha büyük Petri kabı ise bakteri sayım plağı olarak kullanılır.Plakaları, ekimden iki gün önce dört °C'de saklayın. PSM ES 43 26. Negatif 80 °C gliserol stokundaki bakterileri bir KB strep bakteri kültür plağına ekin ve ertesi gün 28 °C'de 24 ila 48 saat boyunca inkübe edin.Sıvı kültürü, steril bir deney tüpünde, mililitrede 50 mikrogram streptomisin içeren dört mililitre sıvı kb ortamı ile başlatın. 28 derece sıcaklıkta, 250 RPM'de gece boyunca çalkalayın. Deney için kullanılacak Arabidopsis bitkileri, sıvı bakteri kültürünün başlatıldığı gün, protokol metninde detaylandırılan koşullar altında yetiştirilir.Örnekleme sırasında enfekte dokunun kolayca tanımlanabilmesi için beş ve altı numaralı yaprakların taç yapraklarını küt uçlu ve suya dayanıklı bir kalemle işaretleyin. STA'nın açılmasını artırmak ve patojen çözeltisinin yaprak suyuna girişini kolaylaştırmak için, saksının alt kısmını 20 dakika boyunca suya daldırarak bitkileri iyice sulayın.20 dakika sonra fazla suyu süzün. Arabidopsis bitkilerinin enfeksiyon işlemi gerçekleştirilir. Sıvı kültürün başlatılmasından bir gün sonrası.Bakteri kültürünü 1,5 mililitrelik bir mikro santrifüj tüpüne aktarın ve iki dakika boyunca 9.600 G'de santrifüjleyin. Oda sıcaklığında, süpernatantı dökün ve bakteri peletini bir mililitre steril 10 milimolar magnezyum klorür ile yeniden süspande edin; bakteri süspansiyonunu 50 mililitrelik bir santrifüj tüpünde dokuz mililitre 10 milimolar magnezyum klorür ile seyreltin. Bakterilerin optik yoğunluğunu ölçtükten sonra, bakterileri 10 milimolar magnezyum klorür ile nihai OD 600 değeri 0,0002 olacak şekilde seyreltin.EDS enfeksiyon analizi için. İnfiltrasyon işlemi için yaygın olarak insülin şırıngası olarak bilinen, bir mililitrelik küt uçlu, iğnesiz bir şırınga kullanılır. İnfiltrasyon işlemi sırasında çok daha iyi kontrol sağlamak için şırıngayı 0,5 ila 0,6 mililitre seyreltilmiş bakteri solüsyonu ile doldurun; şırıngayı tam kapasite doldurmayın.İşaret parmağının ucunda yaprağın alt yüzeyini açığa çıkarın ve ardından başparmağın yardımıyla yaprağın konumunu nazikçe ayarlayın. Yaprak hasarını azaltmak için basıncın eşit dağılımını sağlamak amacıyla şırıngayı yaprak yüzeyine dikey olarak yerleştirin. İnfiltrasyon sırasında orta damar bölgesinden kaçınmaya çalışın.Bakteriyel çözeltiyi infiltre etmek için pistonu yavaşça itin. Sıvının yaprak mezofiline girişi, yaprak renginin koyulaşmasıyla görselleştirilecektir; gerekirse birden fazla deneme yaparak yaprağın tüm yüzeyini infiltre edin. İnfiltrasyon tamamlandığında, fazla patojen çözeltisini temizlemek için yaprağı emici bir peçete ile nazikçe kurulayın.Enfekte olmuş yaprak dokusunu hasar açısından görsel olarak inceleyin. İnfiltre edilmiş bitkileri bir ila iki saat boyunca kurumaya bırakın, ardından bitkileri orijinal büyüme koşullarına geri döndürün. Şeffaf bir kubbeyi suyla püskürtün ve enfekte bitkileri iki saat boyunca örtün.Ardından, iki ila üç inçlik bir açıklık oluşturmak için kubbeyi çatlatın ve genellikle üç gün süren enfeksiyon Deneyi'nin geri kalanı boyunca kubuğu üzerinde bırakın. Patojen büyümesini nicelendirmeden bir gün önce, 150 milimetre çarpı 15 milimetrelik KB besiyeri plaklarını önceden kurutun.Plakaları yaklaşık 24 saat boyunca oda sıcaklığında tutarak kurutun. Duyarlı genotiplerde enfekte dokunun sararmasıyla belirtilen skleroz ortaya çıktıktan sonra, ancak nekrotik lezyonlar gelişmeden önce enfekte dokuyu işleyin. Her genotip için altı adet öğütme tüpü hazırlayın.Her tüpe bir adet paslanmaz çelik öğütme bilyesi yerleştirin ve 500 µL steril, 10 mM magnezyum klorür ekleyin. Ardından, enfekte olmuş yaprağı bitkiden ayırın ve bir delikli kağıt zımbası kullanarak penset yardımıyla rastgele bir yaprak diski çıkarın; iki farklı bitkiden alınan ikişer yaprak diskini her bir öğütme tüpüne yerleştirin. Tüpleri kapatın ve dokuyu yüksek kapasiteli bir homojenizatör ile maksimum hızda 10 dakika boyunca homojenize edin.Doku iyice homojenleşene ve beklerken enfekte yapraklardan klorofil salınımı nedeniyle çözeltiler yeşile dönene kadar gerekirse bu işlemi tekrarlayın. Homojenizasyon için, 96 kuyucuklu bir kültür plağının ilk altı sırasındaki her bir kuyucuğu 180 µL 10 mM magnezyum klorür ile doldurun. Öğütülmüş doku süspansiyonundan 20 µL'yi 96 kuyucuklu plağın ilk sırasındaki her bir kuyucuğa aktarın ve sıvıyı pipetle tekrarlayan şekilde aşağı yukarı çekerek karıştırın.Eğer küçük doku parçaları ucu tıkarsa, çözeltinin doğru hacmini elde etmeye yardımcı olmak için ucu iki ila üç milimetre kesin; plaka yüzeyindeki damlacık için yeterli alan sağlamak amacıyla farklı genotiplerdeki dokuları alternatif sıralara yerleştirin. On katlık seri dilüsyon hazırlamak için, doku süspansiyonundan 20 µL'yi ikinci sıraya aktarın ve bu prosedürü altıncı dilüsyona kadar tekrarlayın. Bölünmüş pipet uçlarını kullanarak, 96 kuyucuklu plaka içerisindeki çözeltiden 20 µL'yi 150 mm x 15 mm'lik KB plakasına aktarın.Seyreltme sırasında pipet uçlarını değiştirmeye gerek kalmaması için, en seyreltik süspansiyondan en konsantre olana doğru çalışın. Plakayı, kapağı hafifçe aralık bırakarak oda sıcaklığında kurutun. Plaka yüzeyinde artık sıvı görülmediğinde, kapağı kapatın, plakayı ters çevirin ve oda sıcaklığında inkübe edin.Koloniler görünür hale gelene kadar plakları 40 ila 60 saat boyunca inkübe edin. Plaklardaki bakterilerin, öngörülen on katlık koloni oluşturan birim düşüşünü yansıttığını doğrulayın.Bakterileri aşırı çoğalıp koloniler birleşmeden önce sayın. Üst üste binen kolonilerin bulunmadığı en düşük dilüsyondaki bakteri sayısını belirleyin. Genellikle sayım için tercih edilen dilüzyon 10 ila 50 arasında koloni içerir ve bu sayı teknik tekrarlar arasında farklılık gösterebilir.Bakteriyel proliferasyon seviyelerini hesaplamak için, R'nin satır sayısı ve T'nin her bir teknik replika içindeki bakteri sayısı olduğu şu formülü kullanarak yaprak diski başına koloni oluşturan birim sayısını belirleyin. Veriler daha sonra bir grafik oluşturmak için kullanılır. Her bir veri noktası, logaritmik ölçekte altı teknik replikanın ortalaması olarak temsil edilir.Hata çubukları, artmış hastalığın ortalamasının %95 güven aralığını temsil etmektedir. P-S-M-E-S 43 26'ya karşı duyarlılık, OD 600 değeri 0,0002 olan bir inokulumla enfeksiyon uygulanarak değerlendirilmiştir. Sonuçlar, yüksek duyarlılığa sahip NPR 1 mutantlarının, vahşi tip Columbia 0 bitkilerine kıyasla yaklaşık 2,5 log veya 300 kat daha fazla patojen büyümesi sergilediğini göstermektedir.Şırınga infiltrasyon analizi, bağışıklık yanıtının farklı katmanlarını değerlendirmek için modifiye edilebilir. Salisilik asit tarafından tetiklenen bağışıklığı değerlendirmek için, bağışıklık yanıtını tetiklemek amacıyla sodyum salisilatın dışarıdan uygulanması kullanılır ve bu yanıt patojen büyümesi ile nicelendirilir. Salisilik asit reseptörü ve salisilik asit bağımlı hedef genlerin ana transkripsiyonel ko-regülatörü olarak işlev gören NPR1'in kaybı, salisilik asit türevlerinin ekzojen uygulamasına karşı duyarsızlığa yol açar.Mikrop ilişkili moleküler desenle tetiklenen bağışıklılığı karakterize etmek için bitkiler iki bilinen tetikleyici ile ön işlemden geçirildi. FLAG 22 ve L 18 kullanıldı; FLAG 22 ile işlem görmüş yabani tip Columbia 0 bitkileri, bakteriyel popülasyonda bir log veya 10 kat azalmayı desteklerken, FLS2 mutant bitkileri bakteriyel büyüme kısıtlama etkisini tetikleyemedi. Benzer şekilde, EFR mutant bitkileri L 18 ön işlemine karşı duyarsızdı.Bu videoyu izledikten sonra, şırınga infiltrasyon deneyi aracılığıyla Arabic opsys bağışıklık yanıtının nasıl nicelleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu prosedürü uygularken, hastalık gelişimini izlemenin ve corsis ortaya çıktıktan sonra doku örneği almanın önemli olduğunu unutmamak gerekir. Pseudomona pather cul cola S phos 3, 2 6 hemi atrofik bir patojendir.Bu nedenle, örnekleme nörotrofik evreye geçişten önce gerçekleştirilmelidir. Bu prosedürü takiben, hangi spesifik immün sinyalizasyon yolunun bozulduğu gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla kantitatif gerçek zamanlı PCR ve Western kan analizi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Canlı bakterilerle çalıştığınızı unutmayın.Pseudomona Senge insanlar için patojenik olmasa da, lütfen bu prosedürü gerçekleştirirken kontamine olmuş sarf malzemelerini ve enfekte bitkileri uygun şekilde imha etmeyi unutmayın.

bacterial-leaf-infiltration-assay-for-fine-characterization-plant

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

PTI Nicotiana benthamiana bitkiler için bir hücre ölümü tabanlı test açıklanmıştır.

Patojen İlişkili Moleküler Desen (PAMP) Triggered Tesisleri Bağışıklık (PTI) için Testi

Biz canlı bakteri stoma yanıt erişmek için basit ve tekrarlanabilir bir protokol geliştirmiştir. Bu yöntem daha önce bildirdiği epidermal peeling kullanımı ile karşılaştırıldığında yaprak yaralama ve manipülasyona en aza indirir.

Tüm Yaprak Görüntüleme kullanarak Bakteriyel Hücreler Live Stoma Tepki Değerlendirilmesi

Kaynak: Lee, H. ve diğerleri, Enfeksiyon Sırasında Bakterilerden Verilen Efektörleri Görselleştirmek için Bölünmüş Yeşil Floresan Protein Sistemi. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, konfokal mikroskopi ile birlikte bölünmüş süper klasör yeşil floresan proteini (sfGFP) tamamlama kullanılarak bitki hücrelerinde bakteriyel enfeksiyonu ve efektör protein dağıtımını izlemek için bir yöntem göstermektedir. Yaklaşım, efektör translokasyonunun konakçı hücre sitozolüne hassas bir şekilde görselleştirilmesini...

Bitki Hücrelerinde Bakteriyel Enfeksiyon ve Efektör Protein Dağıtımının İzlenmesi

Kaynak: Rufián, J. S., et.al. Bitki dokusunda Pseudomonas Syringae genlerinin tek hücreli analizi. J. Vis. Exp. (2022)Bu video, Arabidopsis bitki yapraklarına bakteriyel bir patojenin girmesi için vakum sızma yöntemini gösteriyor. Yaklaşım, stoma yoluyla uniform girişi sağlamak için hazırlanmış bakteriyel süspansiyon ve vakum darbeleri kullanır ve kontrollü yaprak enfeksiyonuna yol açar.

Arabidopsis yapraklarına vakum infiltrasyonu yoluyla bakteriyel bir patojenin aşılanması

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Assessing Pseudomonas syringae Infection Load in Arabidopsis thaliana Leaves

Floresan canlı görüntüleme Arabidopsis thaliana yaprakların uzun bir zaman aralığı içinde gerçekleştirmek için basit ve çok yönlü bir yöntemi bildirin. Biz bir transgenik Arabidopsis bitki bitki bağışıklık yanıtı kronolojik zamanmekansal anlayış kazanıyor için bir örnek olarak bir bağışıklık ile ilgili düzenleyici denetimi altındaki bir floresan muhabir gen ifade kullanın.

Arabidopsis montaj için çok yönlü bir yöntem Intravital zaman hata görüntüleme için yaprakları

Bu yazıda bağışıklık elicitors maruz aşağıdaki Arabidopsis thaliana savunma tepkiler miktarının için iki yöntem açıklanmaktadır: geçici oksidatif patlama ve fide büyüme inhibisyonu.

Arabidopsis thaliana 'Da desen tetiklenen oksidatif patlama ve fide büyüme Inhibisyonu asder

Bu protokol, bitki apoplastı içinde yetiştirilen Pseudomonas şırıngası popülasyonları üzerinde tek hücreli gen ekspresyon analizine izin veren bir yöntemi açıklamaktadır.

Bitki Dokusu İçindeki Pseudomonas syringae Genlerinin Ekspresyonunun Tek Hücreli Analizi

Burada, Arabidopsis thaliana'da bakteri istilasına karşı stoma yanıtlarının doğrudan gözlemlenmesi ve otomatik ölçümü için basit bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, cihaz tarafından yakalanan yaprak görüntüleri için tasarlanmış bir görüntü analizi boru hattı ile birlikte taşınabilir bir stoma görüntüleme cihazından yararlanır.

Pseudomonas syringae pv'ye Stoma Yanıtlarının Doğrudan Gözlemi ve Otomatik Ölçümü. domates DC3000 içinde Arabidopsis thaliana

Bu protokol, aynı örnekte bitki iyon sızıntısı, peroksidaz aktivitesi ve kallos üretimini değerlendirmek için yüksek verimli bir yaklaşımı tanımlar.

Mikrobiyal İkincil Metabolitlere Yaprak Yanıtlarının Yüksek Verimlilikli Bir Formatla Değerlendirilmesi

Keşfedin, şırınga infiltrasyonu yöntemiyle Arabidopsis thaliana bitki bağışıklık yanıtlarını niceliksel olarak karakterize etme tekniğini. Pseudomonas syringae patojen büyümesini ölçerek savunma mekanizmalarını inceleyin.

Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem (Video) | JoVE Journal

Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi

Daha fazla video keşfet