Name: Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi Arabidopsis Ve Mısır (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-14T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Öğrenin, Arabidopsis ve mısırda hormon tedavileriyle yan kökleri senkron olarak indüklemek için lateral kök indüklenebilir sistemini. Bu yöntem, bitki biyolojisinde kök gelişimi mekanizmalarını incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, teknik yardım ve fotoğrafçılık için Davy Opdenacker'a teşekkür ediyor. Makaleyi geliştirmeye yönelik yararlı önerileri için Dr. Annick Blels'e çok teşekkür ederiz. Bu çalışma, Belçika Federal Bilim Politikası Ofisi'nden Üniversitelerarası Cazibe Polonyaları Programı IUAP P7/29 'MARS', FWO hibe G027313N ve Bilim ve Teknoloji Yenilik Ajansı, IWT (IR) tarafından finanse edilmiştir.

1. Arabidopsis lris Protokolü Not: Metin &quot;küçük&quot; veya &quot;büyük&quot; ölçekli deneyler anlamına gelir. Bu tür işaret hattı analizi ve histolojik boyama 6, 14 gibi küçük ölçekli deneyler, sadece bir kaç numune gereklidir. Bu tür kantitatif gerçek zamanlı Mah-PCR, mikro-diziler 9-11 veya RNA sıralama gibi büyük ölçekli deneyler, örneklerin büyük bir miktarda gerektirir. Bu nedenle, her örnek için 1000 fide Vanneste ve arkadaşları tarafından kullanılan ~ arasında. 11 bir miktar kök kademeli bir diseksiyon sonra mikrodizi deneyi gerçekleştirmek için. 1.GÜN <ol><li> Arabidopsis tohumları Sterilizasyon Not: Tohum sterilizasyonu için aşağıdaki yöntemlerden birini seçin. Bunlardan herhangi protokol aşağıdaki adımları için uygundur. Gaz sterilizasyonu (1.1.2) sıvı sterilizasyon (1.1.1) üzerinden iki ana avantajı sunuyor: Büyük bir uyuşmuş tutarken daha az zaman alırTohumların er, pipetleme bireysel numuneleri oluşabilir gerektiği için; ve sterilize edilmiş tohumlar, daha uzun bir süre boyunca saklanabilir. Bununla birlikte, bu bir desikatörde ve dikkatli bir şekilde kullanılması gerekmektedir. <ol><li> Sıvı sterilizasyon <ol><li> Mikro-santrifüj tüplerine tohumların istenilen sayıda dökün. 2 ml&#39;lik bir mikro santrifüj tüplerine 1.5 ml bir tüp içinde 20 mg (~ 800 tohumlar) ya da 40 mg (~ 1.600 tohumlar) kadar kullanın. </li><li> % 70 etanol içinde 1 ml ilave edilir. Çevirin ya da hafifçe 2 dakika süreyle çalkalayın. </li><li> 15 dakika boyunca 1 ml sterilizasyon solüsyonu ile% 70 etanol değiştirin. (Taze sterilizasyon çözüm hazırlayın: 3.85 ml sodyum hipoklorit (NaOCl) stok (% 12) (DİKKAT: Kullanım) kaput duman 5 ul Tween 20, su ile 10 ml&#39;ye kadar tüm tohumların gelip emin olmak için boruları birkaç kez ters çevirin. çözeltisi ile temas halinde değildir. </li><li> Tekrarlanan bir laminar hava akış kabini olarak, 5 dakika boyunca tohumlar 5 kez 1 ml steril damıtılmış su ile sterilizasyon solüsyonu yerine ve durulamaly taze, steril damıtılmış su içinde 1 ml değiştirilmesi. </li></ol></li><li> Gaz Sterilizasyon <ol><li> 2 ml mikro santrifüj tüpü içinde tohum istenilen sayıda dökün. Birkaç bağımsız çizgiler ile çalışan tek tek tüpler kullanımı ve bunların plastik bir mikro santrifüj tüplerine ya da kutu yuvasına açılan sağlayabilir. Bir tüp tohum sayısı 500 (12.5 mg) üzerinde ise, başarılı bir sterilizasyon sağlamak için boruların uygun sayıda tohum ayırabiliriz. Komşu tüplerin kapakları birbirine örtmeyen emin olun. O sterilizasyon için de desikatöre olması gerekir gibi alt kutunun kapağını birbirine uygun. </li><li> Bir cam beher ile birlikte bir desikatörde bir kase kutusu yerleştirmek (DİKKAT: kaput duman). </li><li> (: Kullan davlumbaz DİKKAT)% 12 NaOCİ 100 ml beher doldurun. Desikatöre kapağı koymak, ama beher yerleştirilen küçük bir diyafram bırakın. </li><li> (CAU% 37 hidroklorik asit (dumanlı) 3 ml ilave edilirTION: kullan küçük delikten beher kaputu) duman ve hızlı bir şekilde desiccator kapatın. Cl 2-gaz oluşumu nedeniyle bir süredir çözüm olacak kabarcık. Sistemi bırakın O / N (veya en azından 8 saat) kapattı. </li><li> Desikatöre kapağını kaldırın. Kutusunu çıkarın ve taşıma sırasında kontaminasyonu önlemek için kapak ile örtün. </li><li> Bir laminar hava akışı kabini içinde kutu koyun kapağını çıkarın ve gaz çıkışına izin vermek için oda sıcaklığında yaklaşık 1 saat için tohum bırakın. Not: Tohum güvenli bir şekilde 4 ° C &#39;de 2 hafta boyunca, kapalı mikro santrifüj tüplerine kuru saklanabilir. </li></ol></li></ol></li><li> Arabidopsis&#39;te yanal kök indüksiyonu <ol><li> Yanal Kök İnhibisyon (NPA Tedavisi) <ol><li> In vitro büyüme için büyüme ortamı hazırlar. Ortamı, yarı kuvvetli Murashige ve Skoog tuzu karışımını 15, 0,1 g / L miyo-inositol, 10 g / L sakkaroz içeren, ve 0.5 ile tamponlanmıştırg / L 2- (N-morfolino) etansülfonik asit (MES). </li><li> 1 M KOH ile 5.7 pH ayarlayın. Bitki doku agar 8 g / L ilave edin ve 121 ° C &#39;de 20 dakika boyunca ortam otoklav. </li><li> Dimetilsülfoksit (DMSO) (: eldiven kullanın DİKKAT) NPA 25 mM stok çözeltisi hazırlayın. Levhalı bir hava akış kabininde, (şişe elle tutulabilen sıcaklıktır) yaklaşık 65 ° C&#39;ye kadar otoklava ortamın soğutulması ve 10 uM NPA nihai bir konsantrasyon elde etmek için, 25 mM stok çözeltisi NPA ekleyin. </li><li> Yavaşça 10 saniye boyunca şişeyi çalkalayarak eklendikten sonra homojenize. Kare petri tabağı başına ortam 50 ml (12 cm x 12 cm) dökün. Not: Büyük ölçekli deney durumunda, kolay aktarım sağlamak için, bir naylon örgü (20 um) uygulanır. Otoklavlama (Şekil 1A) bir örgü (9 cm x 9 cm) hazırlayın. Otoklavda sterilize edildiği zaman steril cımbız (Şekil 1B) kullanarak büyüme ortamına örgü uygulanır. Yavaşça ste kullanarak büyüme ortamına itmek örgü(: Steril şartlarda çalışmak DİKKAT) büyüme ortamına (Şekil 1B) ile iyi temas olduğundan emin olmak için drigalsky rilized. </li><li> NPA-plakalar üzerinde tohum ekmek. , Durumunda büyük ölçekli deneme planlanmaktadır (1.2.2.3 bakınız) örnekleme kolaylaştırmak için 50 tohum 2 yoğun ve iyi hizalanmış satırları saçmak: Not. <ol><li> Sıvı sterilizasyon durumda, 200 ul pipet kullanılarak NPA-plakalar üzerinde tohumları ekmek. 3 kes - sırayla steril koşullar (ya da ipuçları sterilize edilmeden önce) içinde pipet uçları sonu 4 mm tohumları pipetlemeyin edebilmek için. Pipet yukarı ve tohum yeniden askıya birkaç kez aşağı, sonra 10 ile yaklaşık 150 ul steril su pipetlemeyin - 20 tohumlar ve bahşiş altındaki tohumlar sediment kadar bekleyin. (DİKKAT: Steril şartlarda Çalışma) Not: ucu ile hafifçe agar veya örgü dokunulduğunda bir tohumuyla bir damla su (şekil 1C) için serbest bırakılır. </li> &lt;Gaz sterilizasyon durumunda li&gt; yapışkan bir yüzey sağlamak için tohumlarını almadan önce otoklava toothpicks.Pinch agar içine kürdan kullanarak tohumlarını ekmeye. Kürdan kullanarak tek tohum bir pick up ve plakaları (Şekil 1D) tohumları dağıtıyoruz. (: Steril şartlarda çalışmak DİKKAT) Alternatif olarak, tohumlara steril su ekleyin ve 1.2.1.5.1 tarif edildiği gibi ekmek. </li></ol></li><li> Hava yapışkan bir bantla kapatın ve plakalar, en az 2 gün, en fazla bir hafta boyunca karanlıkta 4 ° C de onları plakaları saklayın. Bu tabakalaşma ve senkronize sağlar ve daha verimli çimlenmesi için gereklidir. Not: Alternatif olarak, tohumlar, ekim öncesi tabakalı az soğutma alanı gerektirir mikro santrifüj tüplerine, damıtık suya daldırılır edilebilir. Bu durumda, 4 ° C&#39;de en az bir hafta süreyle tüplerini muhafaza ve hemen (1.2.1.7 bakınız), ekimden sonra büyüme odasında plakaları hareket ettirin. 3. GÜN </li&gt; <li> Büyüme odasında plakaları hareket (sürekli ışık (110 μE m -2 s-1), 21 ° C) yaklaşık dikey bir pozisyonda 5 gün boyunca (çimlenme 2 gün ve büyüme 3 gün) (80-90 °) orta kök üzerinde büyümeyi değil, emin olmak için. 8. GÜN </li></ol></li><li> Yanal Kök İndüksiyon (NAA Tedavisi) <ol><li> 1.2.1.1 ve 1.2.1.2 tarif edildiği gibi aynı büyüme ortamı hazırlayın. (: Eldiven kullanın DİKKAT) DMSO içinde NAA 50 mM stok çözeltisi hazırlayın. Aşağı 65 ° C&#39;ye kadar soğutun ve otoklavlanmış orta 10 uM NAA bir son konsantrasyon elde etmek için ortama NAA solüsyonu (DİKKAT: steril koşullar altında çalışmak). <ol><li> Yavaşça 10 saniye boyunca şişeyi çalkalayarak eklendikten sonra homojenize. Kare petri tabağı başına ortam 50 ml (12 cm x 12 cm) dökün. </li></ol></li><li> Bu sup 10 uM NPA ile desteklenmiş büyüme ortamını ihtiva eden plakalar fide aktarma10 uM NAA ile eklentilerle. <ol><li> Fide kotiledonlarında altında kavisli cımbız silah kanca ve yavaşça plaka çıkarın. Sadece kökleri tamamen tercihen aşağı NPA-büyüme ortamı ile temas büyüdü hangi fidan aktarmak. </li><li> Küçük bir mesafe boyunca NAA içeren büyüme ortamı içinde kök yağsız bir yüzey. Bitki kökleri büyüme ortamı ile iyi temas olduğundan emin olun. Gerekirse, cımbız ile büyüme ortamı yüzeyine hafifçe kök basın. Not: Büyük ölçekli deney durumunda, cımbız ile iki üst köşelerde örgü kaldırarak örgü ve transferi ile temas halinde olmayan tüm fideler çıkarın. Emin örgü küçük bir mesafe (Şekil 1E) üzerinde agar yüzeyi üzerinde örgü kaymağını tarafından NAA içeren ortamı ile iyi temas halinde olun. </li></ol></li><li> Nefes bandı ile yeni plakaları Seal ve (büyüme dolabında con koyun, devamlı ışık örnekleme kadar indüksiyonundan sonra istenen bir süre için dik bir konumda (110 μE m -2 s-1), 21 ° C). Not: büyük ölçekli deney durumunda, ağ üzerine bir defada, doğrudan kök parçalarını kesmek ve yavaşça mesh yüzeyini kazıyarak örnek onları için bir neşter kullanmak. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. lris Mısır Protokolü <ol><li> Mısır çekirdeklerde Tabakalaşma <ol><li> En az 1 hafta süreyle karanlıkta 4 ° C&#39;de mısır tanelerini inkübe edin. Not: Bu protokol B73 mısır kendilenmiş hattı kullanarak geliştirilmiştir. </li></ol></li><li> Mısır çekirdeklerde Sterilizasyon 1.GÜN Not: mısır fideleri edilen steril şartlarda yetiştirildiği olmak zorunda değildir, ancak bu, kağıt rulo mantar büyümesini önlemek için mısır tanelerini sterilize ve steril bir malzeme ile çalışılması tavsiye edilmektedirsistemi. <ol><li> Steril bir cam beher içinde, mısır tanelerinin gerekli sayıda koyun. </li><li> (Su içinde% 6 NaOCl) sterilizasyon solüsyonu (: kullan davlumbaz DİKKAT) 100 ml ekleyin. </li><li> Manyetik bir karıştırma çubuğu ilave edin ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında, düşük karıştırma hızında (yaklaşık 250 rpm), bir manyetik karıştırıcı Beher yerleştirin. </li><li> Taze steril su, 100 ml çözelti yerine 5 dakika boyunca beş kez çalkalayın. </li></ol></li><li> Mısır çekirdeklerde ekim <ol><li> Kontaminasyon riskini azaltmak ve kağıt havlu rulosu almak için eldiven giyin. </li><li> Iki yaprak (yaklaşık 92 cm x 24 cm) toplam uzunluğu ile el havlusu kağıt iki uzanıyor yırtın ve temiz bir yüzeye (Şekil 2A) üzerinde birbirinin üstüne koyun. </li><li> Yaprak uzunluğu (yaklaşık 92 cm x 12 cm) (Şekil 2A) üzerine çift katlayın. </li><li> T üzerinde üstten yaklaşık 2 cm 10 çekirdekleri dağıtmak için cımbız kullanınO kağıt tüm uzunluğu, her iki ucunda (Şekil 2B) serbest, her çekirdek ve 8 cm arasında, 8 cm bir ara tutulmuştur. Çekirdeğin radicle aşağı ve kağıt (Şekil 2B) doğru baktığından emin olun. </li><li> Tohum yerine (Şekil 2B) tutarken yavaşça, uzunluğu boyunca kağıt rulo. Haddeleme kolaylaştırmak için, ilk önce, steril su ile kağıt sprey isteğe bağlıdır. </li><li> Yaklaşık 6 cm çapında ve 14 cm yüksekliğinde (örneğin, 250 ml santrifüj tüpleri) ve steril cam tüplerde kağıt ruloları koyun ve bir rafa (Şekil 2C) koyun. </li></ol></li><li> Mısırda Yanal Kök İndüksiyon <ol><li> (DMSO içinde çözülmüş) bir 50 mM stok çözelti NPA (: kullanımlar eldivenler DİKKAT) hazırlayın. </li><li> Her bir tüp, bir steril cam beher 125 ml steril su 50 mM NPA stok çözeltisinden 125 ul ekleyerek 50 mcM NPA çözümünü yapmak. </li><li> İyice karıştırın vetüp kağıt rulo üzerinde 50 uM NPA çözeltisi 125 ml dökün. Kağıt rulosu çözümü emer ve tamamen batırılmış olacak. Not: Diğer boyutlarıyla kağıt rulo ve tüpler kullanırken, buna göre ses seviyesini ayarlamak. Sıvı alımını sağlamak için yeterli yarım tüp ulaşmalıdır. </li><li> Üç gün (27 ° C, sürekli ışığa,% 70 nispi nem) bir büyüme odasında kağıt rulo sistemi yerleştirin. Çözelti zaman (Şekil 2B) üzerinden buharlaşır çünkü kağıt ruloları, ekstra 50 mcM NPA çözeltisi ilave edilerek sırılsıklam kalır emin olun. 4. GÜN </li><li> (DMSO içinde çözülmüş) bir 50 mM stok çözelti NAA (: kullanımlar eldivenler DİKKAT) hazırlayın. </li><li> Her bir tüp, bir steril cam beher içinde 125 ml steril su, 50 mM NAA stoktan 125 ul eklenmesi ile 50 uM NAA solüsyon hazırlanır. </li><li> Yavaşça kağıt ruloları kalan NPA çözümün en sıkmak ve koyun5 dakika boyunca steril su m (: eldiven kullanın DİKKAT) dışarı yıkamak. Yavaşça kağıt ruloları gelen suyun çoğu sıkmak. Bu yıkama adımı üç kez tekrarlayın. </li><li> İyice karıştırın ve tüplerde kağıt ruloları üzerinde 50 mcM NAA çözüm dökün. Tamamen batırılmış emin olun. </li><li> Indüksiyon sonrası istenilen süre büyüme kabine (27 ° C, sürekli ışık,% 70 bağıl nem) kağıt rulo sistemi yerleştirin. </li></ol></li><li> Mısırın Adventif Taç Roots Yanal Kök İndüksiyon Not: İris primer kök yanal kökler indükler yukarıda tarif edildiği gibi. Ancak, mısır ve birlikte yan kökleri ile diğer monokotiledonlar, birincil kök ve embriyonik seminal kökleri içinde, fide gelişimi sırasında özellikle önemlidir. Bitki büyümesinde Daha sonraki bir aşamada, post-embriyonik adventif kökler kök üzerinde ortaya çıkan ve aynı zamanda yeni bir kök sistemine 16 oluşturmak için yan kökleri gelişir. Iris de kullanmak olabilird embriyonik birincil kök lris bazı küçük ayarlamalar takip ederek bu post-embriyonik adventif taç kökleri üzerinde yanal köklerini uyardığı. <ol><li> Kağıt rulo yapmak için, dış tarafında kağıt havlular sırasıyla iki tabaka ve içindeki çimlenme iki kağıt tabakası ile kağıt bir sandviç oluşturur. Çimlenme iki kağıt arasına sterilize çekirdekleri (adımları 2.2&#39;ye 2.1 bakınız) yerleştirin. Çimlenme kağıt, el havlusu kağıt ile karşılaştırıldığında, kağıt açılması daha sonra daha kolay rulo yapacak kök tüyleri ve yanal kökler tarafından nüfuz daha az eğilimli olacaktır. Diğer yandan, kağıt havlular, iki dış tabakayı sıvı emilimini kolaylaştırır. </li><li> 700 ml&#39;lik cam tüplerde rulo yerleştirin ve üzerlerine NPA olmadan steril su dökün. Tamamen batırılmış emin olun. </li><li> Büyüme kabine sterilize çekirdekleri çimlenmeye (adım 2.4.9 bakınız). </li><li> Adventif taç kökleri kadar fidan büyür(B73 için 6 gün) ortaya başlar. Kağıt ruloları gerektiğinde steril su ekleyerek her zaman ıslak tutulur emin olun. </li><li> Bir yıkama aşamasından sonra 50 uM NAA çözeltisi ile NPA çözeltisi değiştirerek yan kök başlatma benzer indüksiyon ardından 4 gün boyunca (adımları 2.4.4 2.4.1 bakınız) için 25 uM NPA çözeltisi transfer (adım 2.4 2.4.9 için 0,5). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Van Norman, J. M., Xuan, W., Beeckman, T., Benfey, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+branch+or+not+to+branch%3A+the+role+of+pre-patterning+in+lateral+root+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">To branch or not to branch: the role of pre-patterning in lateral root formation.</a> Development. 140, 4301-4310 (2013).</li>
<li>Dolan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+organisation+of+the+Arabidopsis+thaliana+root%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cellular organisation of the Arabidopsis thaliana root.</a> Development. 119, 71-84 (1993).</li>
<li>Bell, J. K., McCully, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histological+study+of+lateral+root+initiation+and+development+in+Zea+mays%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">A histological study of lateral root initiation and development in Zea mays.</a> Protoplasma. 70, 179-205 (1970).</li>
<li>Benkova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local%2C+efflux-dependent+auxin+gradients+as+a+common+module+for+plant+organ+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Local, efflux-dependent auxin gradients as a common module for plant organ formation.</a> Cell. 115, 591-602 (2003).</li>
<li>Beeckman, T., Burssens, S., Inzé, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peri-cell-cycle+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Bot%22%5BJournal%5D)">The peri-cell-cycle in Arabidopsis.</a> J. Exp. Bot. 52, 403-411 (2001).</li>
<li>Himanen, K., Boucheron, E., Vanneste, S., de Almeida Engler, J., Inzé, D., Beeckman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxin-mediated+cell+cycle+activation+during+early+lateral+root+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Auxin-mediated cell cycle activation during early lateral root initiation.</a> Plant Cell. 14, 2339-2351 (2002).</li>
<li>Jansen, L., Parizot, B., Beeckman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+system+for+lateral+roots+in+Arabidopsis+thaliana+and+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Inducible system for lateral roots in Arabidopsis thaliana and maize.</a> Methods Mol Biol. 959, 149-158 (2013).</li>
<li>Casimiro, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxin+transport+promotes+Arabidopsis+lateral+root+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Auxin transport promotes Arabidopsis lateral root initiation.</a> Plant Cell. 13, 843-852 (2001).</li>
<li>Himanen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcript+profiling+of+early+lateral+root+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Transcript profiling of early lateral root initiation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 5146-5151 (2004).</li>
<li>De Smet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor-like+kinase+ACR4+restricts+formative+cell+divisions+in+the+Arabidopsis+root%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Receptor-like kinase ACR4 restricts formative cell divisions in the Arabidopsis root.</a> Science. 322, 594-597 (2008).</li>
<li>Vanneste, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+progression+in+the+pericycle+is+not+sufficient+for+SOLITARY+ROOT%2FIAA14-mediated+lateral+root+initiation+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Cell cycle progression in the pericycle is not sufficient for SOLITARY ROOT/IAA14-mediated lateral root initiation in Arabidopsis thaliana.</a> Plant Cell. 17, 3035-3050 (2005).</li>
<li>De Rybel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+the+root+cap+in+root+branching+revealed+by+the+non-auxin+probe+naxillin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">A role for the root cap in root branching revealed by the non-auxin probe naxillin.</a> Nat. Chem. Biol. 8, 798-805 (2012).</li>
<li>Jansen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+transcriptomics+as+a+tool+for+the+identification+of+root+branching+genes+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Comparative transcriptomics as a tool for the identification of root branching genes in maize.</a> Plant Biotechnol. J. 11, 1092-1102 (2013).</li>
<li>Parizot, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diarch+symmetry+of+the+vascular+bundle+in+Arabidopsis+root+encompasses+the+pericycle+and+is+reflected+in+distich+lateral+root+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Diarch symmetry of the vascular bundle in Arabidopsis root encompasses the pericycle and is reflected in distich lateral root initiation.</a> Plant Physiol. 146, 140-148 (2008).</li>
<li>Murashige, T., Skoog, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revised+medium+for+rapid+growth+and+bio+assays+with+tobacco+tissue+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Plant%22%5BJournal%5D)">A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures.</a> Physiol. Plant. 15, 473-497 (1962).</li>
<li>Bellini, C., Pacurar, D. I., Perrone, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitious+roots+and+lateral+roots%3A+similarities+and+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Adventitious roots and lateral roots: similarities and differences.</a> Annu Rev Plant Biol. 65, 639-666 (2014).</li>
<li>Grunewald, W., Parizot, B., Inzé, D., Gheysen, G., Beeckman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+biology+of+roots%3A+One+common+pathway+for+all+angiosperms%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Plant+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental biology of roots: One common pathway for all angiosperms?</a> Int. J. Plant Dev. Biol. 1, 212-225 (2007).</li>
<li>Parizot, B., Beeckman, T. Genomics of root development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParizot%2C+B+%22Root+Genomics+and+Soil+Interactions%22">Root Genomics and Soil Interactions</a>. Crespi, M. , 3-28 (2012).</li>
<li>Bargmann, B. O., Birnbaum, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+activated+cell+sorting+of+plant+protoplasts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Fluorescence activated cell sorting of plant protoplasts.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2010).</li>
<li>Nakazono, M., Qiu, F., Borsuk, L. A., Schnable, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-capture+microdissection%2C+a+tool+for+the+global+analysis+of+gene+expression+in+specific+plant+cell+types%3A+identification+of+genes+expressed+differentially+in+epidermal+cells+or+vascular+tissues+of+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Laser-capture microdissection, a tool for the global analysis of gene expression in specific plant cell types: identification of genes expressed differentially in epidermal cells or vascular tissues of maize.</a> Plant Cell. 15, 583-596 (2003).</li>
<li>Ludwig, Y., Hochholdinger, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+microdissection+of+plant+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser microdissection of plant cells.</a> Methods Mol Biol. 1080, 249-258 (2014).</li>
<li>Beeckman, T., Engler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+easy+technique+for+the+clearing+of+histochemically+stained+plant+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol.+Biol.+Rep%22%5BJournal%5D)">An easy technique for the clearing of histochemically stained plant tissue.</a> Plant Mol. Biol. Rep. 12, 37-42 (1994).</li>
<li>Ditengou, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+induction+of+lateral+root+initiation+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Mechanical induction of lateral root initiation in Arabidopsis thaliana.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 18818-18823 (2008).</li>
<li>Lucas, M., Godin, C., Jay-Allemand, C., Laplaze, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxin+fluxes+in+the+root+apex+co-regulate+gravitropism+and+lateral+root+initiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Bot%22%5BJournal%5D)">Auxin fluxes in the root apex co-regulate gravitropism and lateral root initiation.</a> J. Exp. Bot. 59, 55-66 (2008).</li>
<li>Wang, S., Taketa, S., Ichii, M., Xu, L., Xia, K., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+root+formation+in+rice+%28Oryza+Sativa.+L.%29%3A+differential+effects+of+indole-3-acetic+acid+and+indole-3-butyric+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Growth+Regul%22%5BJournal%5D)">Lateral root formation in rice (Oryza Sativa. L.): differential effects of indole-3-acetic acid and indole-3-butyric acid.</a> Plant Growth Regul. 41, 41-47 (2003).</li>
<li>Martinez-de la Cruz, E., Garcia-Ramirez, E., Vazquez-Ramos, J. M., Reyes de la Cruz, H., Lopez-Bucio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxins+differentially+regulate+root+system+architecture+and+cell+cycle+protein+levels+in+maize+seedlings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Auxins differentially regulate root system architecture and cell cycle protein levels in maize seedlings.</a> J Plant Physiol. 176, 147-156 (2015).</li>
<li>Beyer, E. M., Morgan, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ethylene+on+uptake%2C+distribution%2C+and+metabolism+of+indoleacetic+acid-1-14C+and+-2-14C+and+naphthaleneacetic+acid-1-14C%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of ethylene on uptake, distribution, and metabolism of indoleacetic acid-1-14C and -2-14C and naphthaleneacetic acid-1-14C.</a> Plant Physiol. 46, 157-162 (1970).</li>
<li>Delbarre, A., Muller, P., Imhoff, V., Guern, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mechanisms+controlling+uptake+and+accumulation+of+2%2C4-dichlorophenoxy+acetic+acid%2C+naphthalene-1-acetic+acid%2C+and+indole-3-acetic+acid+in+suspension-cultured+tobacco+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Comparison of mechanisms controlling uptake and accumulation of 2,4-dichlorophenoxy acetic acid, naphthalene-1-acetic acid, and indole-3-acetic acid in suspension-cultured tobacco cells.</a> Planta. 198, 532-541 (1996).</li>
<li>Bailey-Serres, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microgenomics%3A+genome-scale%2C+cell-specific+monitoring+of+multiple+gene+regulation+tiers%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Microgenomics: genome-scale, cell-specific monitoring of multiple gene regulation tiers.</a> Annu Rev Plant Biol. 64, 293-325 (2013).</li>
<li>Perez-Torres, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphate+availability+alters+lateral+root+development+in+Arabidopsis+by+modulating+auxin+sensitivity+via+a+mechanism+involving+the+TIR1+auxin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Phosphate availability alters lateral root development in Arabidopsis by modulating auxin sensitivity via a mechanism involving the TIR1 auxin receptor.</a> Plant Cell. 20, 3258-3272 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Arabidopsis lris protokol, sadece tamamen NPA-ihtiva eden büyüme ortamı ile temas içinde büyüdü fide transferi için önemlidir. Bu yanal kök başlatma tüm kök uzunluğu boyunca bloke olmasını sağlar. Aktarım sırasında fidanları yaralama önlemek amacıyla, kavisli bir forseps kolları fide kotiledonlarında altında asılabilir. Devirden sonra fide kökleri NAA içeren agar ortamı ile yeterli temas halinde olduğundan emin olun. Bu, küçük bir mesafe boyunca agar yüzeyi üzerinde kök kaymağının elde edilebilir. Bu, toplam kö...

Topraktan gelen ankraj ve su alımını ve besin sağlar çünkü kök sistemi, bitki büyümesi için çok önemlidir. Bir kök sistemi gelişimi genel olarak yan kök üretimi dayandığından, bunların başlangıç ​​ve oluşum yaygın olarak incelenmiştir. Yanal kökleri kurucu hücreler 1 olarak adlandırılan, perisiklden hücrelerinin belirli bir alt başlatılır. Örneğin mısır gibi monokotlarda bölgesi, bunlar floem kutup 3 bulunan, oysa Arabidopsis thaliana gibi en dikotillere, bu hücreler, protoxylem kutup 2 yer almaktadır. Kurucu hücreleri özel hücre döngüsü genlerinin sentezlenmesi, ardından artan oksin yanıt 4 ile işaretlenmiştir (örneğin, siklin B1, 1 / CYCB1; 1), bundan sonra, asimetrik anticlinal bölümleri 5 bir birinci tur geçirilir. Koordineli antiklinal ve periclinal bölünmeler bir dizi sonra, lateral kök taslaklarının nihayet a olarak ortaya çıkacak oluşturulmuşturutonomous yanal kök. Bu olaylar bol ne de senkronize ne olduğundan konumu ve yan kök başlama zamanlaması, ancak öngörülebilir değildir. Bu, bu işlem çalışma transkriptomik gibi moleküler yaklaşımların kullanımı engeller. Bu konuya ilişkin olarak, bir yanal kök İndüklenebilir Sistemi (lris), 6 geliştirilmiştir 7. Bu sistemde, fideler, ilk sonuç olarak yan kök başlangıcı bloke, oksin taşınmasını ve birikmesini engelleyen N -1-naphthylphthalamic asit (NPA) ile muamele edilir 8. Sonradan sentetik oksin 1-naftalin asetik asit (NAA) içeren ortama fide aktararak tüm perisiklden tabakası böylece kitlesel yüksek oksin seviyelerinin indükleyici yanal kök hücre başlatarak bölünmeler 6 yanıt verir. Bu nedenle, bu sistem, geç belirli bir aşaması için zenginleştirilmiş kök örnekleri kolayca toplanmasını sağlayan, hızlı, senkron ve geniş yan kökler inisiyasyonlara açarral kök gelişimi. Daha sonra, bu numune yan kök oluşumu sırasında genom çapında ekspresyon profillerini belirlemek için kullanılabilir. Iris diğer bitki türleri bu sistemi uygulamak için yan kök Arabidopsis başlatılması ve mısır 9-13, ancak ihtiyaç hakkında zaten önemli bilgiyi vermiştir fazla genomları sıralı olarak daha belirgin hale gelir ve ekonomik önemli bilgiyi aktarmak için artan bir ilgi var türler. Burada, Arabidopsis ve darı LRISs ayrıntılı protokolleri verilmiştir. Daha sonra, sistemin kullanımına ilişkin bir örnek, mısır Iris elde transkriptomik veriler, farklı bitki türleri boyunca yanal kök başlatma sırasında korunmuş bir fonksiyonu sahip fonksiyonel homologları tespit etmek için kullanılabilir olduğunu göstererek temin edilmektedir. Diğer bitki türlerinin önerildiği için Son olarak, kılavuzlar Iris optimize etmek.

<table><tbody><tr><td><güçlü>ARABIDOPSIS LRIS</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tohumlar<güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arabidopsis tohumları</td><td></td><td></td><td>Col-0 ecotype</td></tr><tr><td><güçlü>Tohumların gaz sterilizasyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mikro-santrifüj tüpleri 1.5 ml</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>0030 125.215</td><td>Eppendorf mikrotüpler 3810X, PCR temiz</td></tr><tr><td>mikro santrifüj tüpleri 2 ml</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>0030 120.094</td><td>Eppendorf Safe-Lock mikrosantrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>hidroklorik asit</td><td>Merck KGaA</td><td>1,003,171,000</td><td>%37 (dumanlı) analiz için EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eu</td></tr><tr><td>cam kurutucu</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td></td><td>Pyrex</td></tr><tr><td>cam beher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>plastik mikro santrifüj tüpleri kutu veya tutucu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü > tohumların ağartıcı sterilizasyonu< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Chem-Lab nv</td><td>CL00.0505.1000</td><td>Etanol, abs. %100 AR %</td></tr><tr><td>70'e seyreltinsodyum hipoklorit (NaOCl)</td><td>Carl Roth</td><td>9062.3</td><td>%12</td></tr> <tr><td>Tween 20</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>steril su</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Büyüme ortamı</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Murashige ve Skoog tuzu karışımı</td><td>DUCHEFA Biochemie BV</td><td>M0221-0050</td><td></td></tr><tr><td>mio-inositol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>I5125-100G</td><td></td></tr><tr><td>2- (N-morfolino) etansülfonik asit (MES)</td> <td>DUCHEFA Biochemie BV</td><td>M1503.0100</td><td></td></tr><tr><td>sükroz</td><td>VWR, Uluslararası LLC</td><td>27483.294</td><td>D (+) - Sükroz Ph. Eur.</td></tr><tr><td>Analiz için KOH</td><td>Merck KGaA</td><td>1050211000</td><td>peletleri (maks. %0,002 Na) EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur</td></tr><tr><td>Bitki Doku Kültürü Agar</td><td>LabM Limited</td><td>MC029</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Yanal kök indüksiyon kimyasalları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-1-naftaltamik asit (NPA)</td><td>DUCHEFA Biochemie BV</td><td>Hayır. N0926.0250</td><td>10 & M (Arabidopsis)</td></tr><tr><td>1-naftalin asetik asit (NAA)</td><td>DUCHEFA Biochemie B.V.</td><td>Hayır. N0903.0050</td><td>10 & M (Arabidopsis)</td></tr><tr><td>dimetilsülfoksit (DMSO)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>494429-1L</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Aktarım için ağ yapma</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>naylon ağ</td><td>Prosep byba</td><td></td><td>Sentetik naylon ağ 20 ve mikro; m</td></tr><tr><td><güçlü>Ekim ve fide işleme</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr>kare <tr><td>petri kabı</td><td>plakaları GOSSELIN</td><td>BP124-05 12</td><td>x 12 cm</td></tr><tr><td>50 ml DURAN tüpleri</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>CLS430304</td><td>Corning&nbsp; 50 ml santrifüj tüpleri</td></tr><tr><td>drigalski</td><td>Carl Roth</td><td>K732.1</td><td></td></tr><tr><td>pipet</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>kesimli pipet uçları</td><td>Daslab</td><td>162001X</td><td>Universal 200, otoklavlamadan önce 5 mm ucu kesin</td></tr><tr><td>nefes alabilen bant&nbsp;</td><td>3M Deutschland GmbH</td>, <td>kat. no. 1530-1</td><td></td></tr>, <tr><td>cımbız</td>, <td>Fiers nv/sa</td><td>, K342.1; K344.1</td><td>Dumont cımbız tip a nr 5; Dumont cımbız tip e nr 7</td></tr><tr><td><güçlü>Büyüme koşulları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>büyüme odası</td><td></td><td></td><td>21 & C, sürekli ışık</td></tr><tr><td><güçlü>Malzemeler</güçlü></td><td><güçlü>Şirket</güçlü></td><td><güçlü>Katalog</güçlü></td><td><güçlü>Yorumlar</güçlü></td></tr><tr><td><güçlü>MISIR LRIS</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tohumlar</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mısır taneleri</td><td></td><td></td><td>B-73</td></tr><tr><td>< güçlü > Çekirdeklerin ağartıcı sterilizasyonu< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>cam beher</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>manyetik karıştırıcı ve nbsp;</td><td>Fiers nv/sa</td><td>C267.1</td><td></td></tr><tr><td>sodyum hipoklorit (NaOCl)</td><td>Carl Roth</td><td>9062.3</td><td>%12</td></tr> <tr><td>steril su</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Yanal kök indüksiyon kimyasalları</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-1-nafttalamik asit (NPA)</td><td>DUCHEFA Biochemie BV</td><td>Hayır. N0926.0250</td><td>50 & M (mısır birincil kökü), 25 & M (mısır maceracı kökü)</td></tr><tr><td>1-naftalin asetik asit (NAA)</td><td>DUCHEFA Biochemie B.V.</td><td>No. N0903.0050</td><td>50 & M (mısır)</td></tr> <tr><td>dimetilsülfoksit (DMSO)</td> <td>SIGMA-ALDRICH</td><td>494429-1L</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ekim ve fide işleme< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>kağıt el havlusu</td><td>Kimberly-Clark Professional*</td><td>6681</td><td>SCOTT El Havlusu - Rulo / Beyaz; yaprak boyutu (24 x 46 cm)</td></tr> <tr><td>tohum çimlenme kağıdı</td><td>Çapa Kağıt Şirketi</td><td></td><td>10 X 15 38 # tohum çimlenme kağıdı</td></tr><tr><td>cımbız</td><td>Fiers nv/sa</td><td>K342.1; K344.1</td><td>Dumont cımbız tip a nr 5; Dumont cımbız tip e nr 7</td></tr><tr><td>250 ml (santrifüj) tüpler</td><td>SCHOTT DURAN</td><td>2160136</td><td>yaklaşık 5,6 cm çap ve 14,7 cm yükseklik&nbsp;</td></tr><tr><td>700 ml tüpler</td><td>DURAN GROUP</td><td>213994609</td><td>silindirleri, yuvarlak ayak tüpü, D 60 ve nbsp; x 250</td></tr><tr><td>mısır tüpleri için raf</td><td></td><td></td><td>, ev yapımı</td></tr><tr><td>steril su</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Büyüme koşulları< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>büyüme dolabı</td><td></td><td></td><td>27 & derece; C, sürekli ışık, %70 bağıl nem</td></tr></tbody></table>

lateral kök İndüklenebilir sistemi<em&gt; arabidopsis</em&gt; ve mısır

Lateral Root Inducible System in Arabidopsis and Maize

Yanal kök gelişimi, kök sistemine önemli ölçüde katkıda bulunur ve bu nedenle bitki büyümesi için çok önemlidir. Bununla birlikte, yanal kök başlangıcının incelenmesi sıkıcıdır, çünkü sadece kök içindeki birkaç hücrede ve öngörülemeyen bir şekilde meydana gelir. Bu sorunu aşmak için bir Yanal Kök İndüklenebilir Sistem (LRIS) geliştirilmiştir. Fideleri bir oksin taşıma inhibitörü ve bir sentetik oksin ile art arda muamele ederek, yüksek kontrollü yanal kök başlangıcı, birincil kökte eşzamanlı olarak gerçekleşir ve istenen bir gelişim aşamasının bol miktarda örneklenmesine izin verir. LRIS ilk olarak Arabidopsis thaliana için geliştirilmiştir, ancak diğer bitkilere de uygulanabilir. Buna göre mısırda (Zea mays) kullanım için uyarlanmıştır. Her iki tesiste de LRIS'in farklı adımlarına ayrıntılı bir genel bakış verilmiştir. Bu sistemin karşılaştırmalı transkriptomik ile kombinasyonu, burada CYCLIN B1 için gösterildiği gibi diğer türlerde Arabidopsis lateral kök başlatma genlerinin fonksiyonel homologlarını tanımlamayı mümkün kılmıştır; 1 (CYCB1; 1) Mısırda hücre döngüsü geni. Son olarak, diğer bitki türleri için bir LRIS geliştirilirken dikkate alınması gereken ilkeler tartışılmaktadır.

Iris Uygulama Yanal Kök Başlatma Süreci Karşılaştırmalı transkriptomik gerçekleştir İris bir uygulaması, farklı türlerde yan kök oluşumu esnasında karşılaştırma ve gen ekspresyon profillerinin korelasyondur. Karşılaştırmalı transkriptomik farklı türler lateral kök geliştirme sürecine dahil orthologous genleri saptamak için olanak yaratmak yaklaşır. Önceden oluşturulmuş kök ekseninin içinde yer hücrelerinin bir...

Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi (LRIS), lateral köklerin senkron indüksiyonuna izin verir ve Arabidopsis thaliana ve mısır için sunulmuştur.

Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Ve Mısır

Lateral root development contributes significantly to the root system, and hence is crucial for plant growth. The study of lateral root initiation is ...

Yanal kök indüklenebilir sisteminin genel amacı, hormon uygulamaları kullanarak bitkilerde yanal kök başlangıcını senkronize bir şekilde indüklemektir. Bitki kökleri gizli kısımlardır ve incelenmesinin son derece zor olduğu bilinmektedir. Yanal kök başlangıcı sürecinin sitolojik, histolojik ve moleküler düzeyde incelenmesine olanak tanıyan bir in vitro sistem geliştirmiş bulunmaktayız.Genel olarak, bu yöntemde yeni olan bilim insanları, bitkiler ortamla uygun şekilde temas kurup büyümediği için lateral köklerin homojen bir şekilde indüklenememesi sorunuyla karşılaşabilirler. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi, homojen bir indüksiyon sağlamak için dikkate alınması gereken kritik adımların gösterilmesine yardımcı olur. Bu sistem başlangıçta küçük bir bitki olan Arabidopsis için geliştirilmiş olsa da mısır, pirinç veya arpa gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.Başlamak için, steril bir pens yardımıyla 20-mikronluk naylon bir ağı NPA ile takviye edilmiş büyüme ortamına yerleştirin. Ağın ortamla iyi temas ettiğinden emin olmak için bir drigalski kullanarak ağı büyüme ortamının üzerine hafifçe bastırın. Ardından, kürdanın üzerinde yapışkan bir yüzey oluşturmak için steril bir kürdanı agara bastırın.Gazla sterilize edilmiş tohum paketini hazırlanan plaklara eşit şekilde dağıtmak için kürdan kullanın. Plakları nefes alabilen yapışkan bantla mühürleyin ve en az iki gün, en fazla bir hafta boyunca dört degrees Celsius sıcaklıkta, karanlıkta saklayın. Bu işlem stratifikasyon için gereklidir ve senkronize ve verimli bir çimlenme sağlar.Üçüncü günde, plakaları önce iki günlük çimlendirme, ardından 80 ila 90 derecelik bir açıyla üç günlük büyüme için büyüme odasına taşıyın. Sekizinci günde, tamamen ağ ile temas halinde büyümüş kökleri ve buna karşılık ağ ile temas etmeyen kökleri belirleyin. Kökleri ağ ile temas etmeyen tüm fideleri uzaklaştırın.Fide içeren ağları, 10 micromolar NAA ile desteklenmiş plakalara aktarın. Plakaya yerleştirdikten sonra, büyüme ortamı ile iyi temas sağladığından emin olmak için gerekirse ağın üzerinden hafifçe geçerek ortam yüzeyine yayın. Tüm fidelerde homojen bir indüksiyon sağlamak için, NPA destekli ortamda ağ ile temas kuracak kadar büyümemiş fidelerin ayıklanması ve NAA destekli ortamda gerekirse ağın düzgünce yayılması önemlidir.Yeni plakaları nefes alabilir bantla mühürleyin ve indüksiyondan sonra istenen süre boyunca büyüme odasına dikey konumda yerleştirin. Örnekleri toplama aşamasına gelindiğinde, bir skalpel kullanarak kök segmentlerini doğrudan ağ üzerinde tek seferde kesin ve ağın yüzeyini nazikçe sıyırarak örnekleme yapın. Şimdi, mısırda lateral kök indüklenebilir sisteminin bazı adımlarını göstereceğiz.Gerekli sayıdaki mısır tanelerini steril bir cam behere yerleştirerek mısır tanelerinin sterilizasyonu ile başlayın. Ardından, behere 100 milliliters suyla hazırlanmış %6 sodyum hipoklorit ekleyin ve bir manyetik karıştırma çubuğu yerleştirin. Beheri manyetik karıştırıcı üzerine koyun ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca düşük hızda karıştırın.Çamaşır suyu çözeltisini nazikçe uzaklaştırın. Bunun yerine 100 milliliters taze steril su ekleyin ve çekirdekleri beş dakika boyunca durulayın. Bu adımı beş kez tekrarlayın.Bir çift eldiven giyin ve iki parça kağıt havluyu koparıp temiz bir yüzey üzerine üst üste yerleştirin. Ardından, havluları uzunluk boyunca ikiye katlayın. Bir cımbız kullanarak 10 adet çekirdeği, üst kısımdan yaklaşık iki santimetre uzaklığa, her çekirdek arasında sekiz santimetre boşluk bırakacak ve her iki uçta sekiz santimetre boş yer kalacak şekilde kağıdın tüm uzunluğu boyunca dağıtın.Çekirdeğin radikal kısmının aşağıya ve kağıda doğru baktığından emin olun. Tohumları yerinde tutarak kağıdı uzunlamasına nazikçe rulo yapın. Gerektiğinde, kağıda steril su püskürtmek bu adımı kolaylaştırabilir.Ruloları sterilize edilmiş cam tüplere yerleştirin ve diğer tüpleri rakete ekleyin. Tüpteki kağıt rulonun üzerine 125 mililitre 50 micromolar NPA çözeltisi dökün. Kağıt rulo çözeltiyi emerek tamamen ıslanacaktır.Kağıt rulo sistemini üç gün boyunca bir yetiştirme kabinine yerleştirin. Gerektiğinde ekstra NPA çözeltisi ekleyerek, inkübasyon sırasında kağıt ruloların ıslak kaldığından emin olun. Yan kök oluşumunun homojen bir şekilde indüklenmesini sağlamak için, kağıt ruloların NPA çözeltisi ile nemli kaldığını ancak köklerin sıvının kendisinin içine gömülmediğini kontrol etmek önemlidir.NPA uygulamasının üçüncü gününden sonra, mısır fidelerinin küçük bir sürgünü ve yaklaşık iki ila üç santimetre uzunluğunda bir kökü bulunur. Dördüncü günde, kağıt rulo içinde kalan NPA çözeltisinin çoğunu nazikçe sıkın ve rulolar doygun hale gelene kadar steril suyun içinde bekletin. Yaklaşık beş dakika sonra, kağıt rulolardaki suyun çoğunu nazikçe sıkın.Yıkama adımını üç kez tekrarlayın. Son durulamadan sonra, suyun çoğunu sıkın ve numuneyi tekrar tüpe yerleştirin. Tüplerdeki kağıt rulo tamamen ıslanana kadar üzerlerine 50 micromolar NAA çözeltisi dökün.Ardından, indüksiyon sonrası istenen süre boyunca kağıt rulo sistemini büyüme kabinine yerleştirin. NAA üzerinde büyütülmemiş veya NAA üzerinde bir saat boyunca büyütülmüş oksin yanıt belirteç hattı pDR5-GUS fideleri ile karşılaştırıldığında, NAA üzerinde iki saat boyunca büyütülen fideler, yan kök oluşumunu tetikleyen ilk olaylardan biri olan bir oksin yanıtı gösterir. Bu bölünmeler, yaklaşık iki saatten itibaren uçtan yukarı doğru hareket etmeye başlar ve NAA'ya maruz kalma süresi uzadıkça artış gösterir.Hücre döngüsü markör hattı pCYCB1;1-Gus kullanılarak, yan kök oluşumuna yol açan ilk hücre bölünmeleri, NAA uygulamasının başlamasından yaklaşık altı saat sonra görülmeye başlar. Yan kök indüksiyonu sırasında Arabidopsis ve mısır köklerinin farklı bölgelerindeki çeşitli genlerin ekspresyonunu değerlendirmek için mikro diziler ve kantitatif rt-PCR kullanılabilir. Hem Arabidopsis hem de mısırda, bitkiler daha uzun süre büyüdüğünde, indüklenen bölünmeler yan köklerin gelişimi ve dışa doğru büyümesiyle sonuçlanacaktır.Sistemin mısır üzerindeki kavram kanıtı olarak, karşılaştırma amacıyla farklı koşullar altında büyütülen fideler burada sunulmuştur. Su üzerinde 10 gün boyunca büyütülen fidelerin, senkronize bir şekilde oluşmamış ve eksen boyunca geniş aralıklarla yerleşmiş yan kökleri vardır. NPA üzerinde 10 gün boyunca büyütülen fidelerde ise hiç yan kök bulunmamaktadır.Önce NPA'da üç gün boyunca büyütülen, ardından NAA uygulamasına tabi tutulan fideler, yaygın ve senkronize bir yan kök indüksiyonu gösterir. Bu videoda, kök dallanma sürecine dair temel yeni bilgilerin keşfinde çok önemli olduğu ortaya çıkan, yan kökle indirgenebilir bir sistemin nasıl kurulacağını gösterdik. Bu sistemin Arabidopsis ve mısır için nasıl çalıştığını gösterdik, ancak seçilen diğer bitki türlerine kolaylıkla uyarlanabilir.Başarılar dileriz.

lateral-root-inducible-system-in-arabidopsis-and-maize

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz Arabidopsis thaliana tohum tohum kat yatak tahlili (SCBA) monte prosedürü sunuyoruz. SCBA genetik ve in vitro keşfetmek için güçlü bir araç olduğu gösterilmiştir nasıl uyuyan tohum ve hafif uyaranlara yanıt olarak endosperm kontrolleri tohum çimlenme. SCBA endosperm embriyonik büyümeyi etkilemek için şüphelenilen her durumda altında uygulanabilir prensip olarak.

Genetiği keşfedin A Tohum Kabuğunun Yatak Deneyi<em&gt; In Vitro</em&gt; Nasıl Endosperminde Denetimler Çimlenme içinde<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

Bir çift sarmallı RNA girişimi (dsRNAi) tekniği mısır sinamoil koenzim alt bitki lignin içeriğine A redüktaz (ZmCCR1) geni aşağı regüle etmek için kullanılır. Lignin hücre duvarından aşağı-regülasyon mikroskopik analiz ile görselleştirilmiştir ve Klason yöntemi ile ölçülür. Yarı selüloz ve kristalin selüloz içinde Bileşim değişiklikler analiz edilmiştir.

Lignin Aşağı düzenleme<em&gt; Zea mays</em&gt; DsRNAi ve Klason Lignin Analizi ile

Gelişimsel olarak önemli birçok genin hücre veya dokuya özgü ekspresyon paternleri vardır. Bu makale, mısır yaprağı bıçak-kılıf sınırında ve lg1-R mutantlarında vahşi tipe kıyasla farklı şekilde ifade edilen genleri tanımlamak için LM RNA-seq deneylerini açıklamaktadır. Burada tartışılan deneysel düşünceler, diğer gelişimsel fenomenlerin transkriptomik analizleri için geçerlidir.

Lazer Diseksiyon RNA Sek için Deneysel Tasarım: Mısır Yaprak Kalkınma bir Analiz Dersler

Bu protokol, ışık tabakası mikroskobu için bir bitki örneği hazırlama yöntemini gösterir. Kurulum, bitkinin bir jelin yüzeyine dikey olarak monte edilmesi ve kontrollü parlak koşullarda büyümesine izin verilmesiyle karakterize edilir. Bu, standartlaştırılmış koşullarda bitki organ gelişiminin uzun süreli gözlemlenmesini sağlar.

Bir Gel Yüzeyinde Büyüyen Bitki kökleri Işık Sac Flüoresan Mikroskopi

Bu iletişim kuralı Arabidopsis içinde embriyogenez embriyo Desen oluşumu bir mikroskop altında incelenmesi ve ardından ovule izni ile gözlemlemek için bir yöntem özetliyor.

Embriyogenez Arabidopsis olarak karakterize bir yöntem

Gelişmiş bir iletişim kuralı muhabir yapıları arpa aleurone hücrelerdeki geçici gen ifadeden sonra partikül bombardımanı ölçümü için sunulmaktadır. Otomatik tahıl 96-şey plaka enzim deneyleri ile bileme yordamı için yüksek üretilen iş sağlar.

Gen ifadesinin artan işlem hacmi ile alı arpa Aleurone katmanlarında ölçme

Burada, biz üretimi tarif ve transgenik Arabidopsis thaliana bir dizi uygulama etkinleştirme indüklenebilir, doku özel ifade üç ana sürgen, sürgün apikal meristem, kök apikal meristem ve cambium satırları.

İndüklenebilir, hücre türüne özgü ifade Arabidopsis thaliana aracılığıyla LhGR-aracılı Trans-harekete geçirmek

Bitki morfojenik genler inatçı genotiplerin genetik dönüşümlerini iyileştirmek için kullanılabilir. Burada açıklanan bir Agrobacteriumaracılı genetik dönüşüm (QuickCorn) üç önemli kamu mısır inbred hatları için protokoldür.

Agrobacterium-Rekalsitrant Mısır Inbred Hatları Morfojenik Genler Kullanarak Aracılı Olgunlaşmamış Embriyo Dönüşümü

Ribozom yakınlık arınması (TRAP) çevirisi, organ ve dokuların en az işlenmesi yle gelişim programlarını inceleme olanağı sunar. Protokol, yeşil floresan protein (GFP) etiketli ribozomal alt ünite ile hedeflenen hücrelerden yüksek kaliteli RNA verir. QRT-PCR veya RNA-seq gibi alt akış analiz araçları doku ve hücre tipine özgü ifade profillerini ortaya çıkarır.

Bir Hücre Tipine Özel Ölçekte Arabidopsis thaliana Kök Gelişimini Araştırmak Için Ribozom Affinity Arınma (TRAP) Çevirisi

Bu protokol, bitki köklerini toprak kaynaklı mikroplarla aşılamak için stratejilerin ayrıntılı bir özetini sunar. Verticillium longisporum ve Verticillium dahliae mantarları için örneklendirilen üç farklı kök enfeksiyon sistemi tanımlanmıştır. Potansiyel uygulamalar ve olası aşağı akış analizleri vurgulanır ve her sistem için avantajlar veya dezavantajlar tartışılır.

Bitki Köklerini Toprak Kaynaklı Mikroorganizmalarla Enfekte Etmek için Aşılama Stratejileri

Arabidopsis ve Medicago'nun kök sistem mimarisini (RSA) incelemek için basit laboratuvar araçları kullanıyoruz. Fideler ağ üzerinde hidroponik olarak yetiştirilir ve RSA'yı ortaya çıkarmak için bir sanat fırçası kullanılarak yayılır. Görüntüler tarama veya yüksek çözünürlüklü bir kamera kullanılarak alınır, daha sonra özellikleri haritalamak için ImageJ ile analiz edilir.

Bitki kök sistemi mimari özelliklerini haritalamak için basit bir protokol

Öğrenin, Arabidopsis ve mısırda hormon tedavileriyle yan kökleri senkron olarak indüklemek için lateral kök indüklenebilir sistemini. Bu yöntem, bitki biyolojisinde kök gelişimi mekanizmalarını incelemeye yardımcı olur.

Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi

Daha fazla video keşfet