Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

Marco Giallombardo; Jorge Chac&#225;rtegui Borr&#225;s; Marta Castiglia; Nele Van Der Steen; Inge Mertens; Patrick Pauwels; Marc Peeters; Christian Rolfo

doi:10.3791/53900

qPCR sayesinde küçük hücre dışı akciğer kanseri (KHDAK) Hasta Plazma içinde Exosomal miRNA Analiz...

JoVE Journal
Medicine

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Medicine

Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients’ Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

qPCR sayesinde küçük hücre dışı akciğer kanseri (KHDAK) Hasta Plazma içinde Exosomal miRNA Analizi: Bir Uygulanabilir Sıvı Biyopsi Aracı

Full Text

11,702 Views

08:49 min

May 27, 2016

DOI: 10.3791/53900-v

Marco Giallombardo*^1,2, Jorge Chacártegui Borrás*^2,3, Marta Castiglia⁴, Nele Van Der Steen³, Inge Mertens^5,6, Patrick Pauwels^7,3, Marc Peeters^8,3, Christian Rolfo^2,3

¹Department of Biopathology and Medical Biotechnology, Section of Biology and Genetics,University of Palermo, ²Phase I-Early Clinical Trials Unit, Oncology Department,Antwerp University Hospital (UZA), ³Center for Oncological Research (CORE),Antwerp University, ⁴Department of Surgical, Oncological and Oral Sciences, Section of Medical Oncology,University of Palermo, ⁵Flemish Institute for Technological Research (VITO), ⁶CORE, Campus Groenenborger,Antwerp University, ⁷Molecular Pathology, Pathology Department,Antwerp University Hospital (UZA), ⁸Oncology Department,Antwerp University Hospital (UZA)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu protokol, dolaşımdaki miRNA'ların kontaminasyonunu önlemek ve NSCLC'deki biyobelirteç özelliklerini değerlendirmek için NSCLC hastalarının plazmasında salınan eksozomlarda miRNA profillemesinin Proteinaz K ve RNAse tedavileri ile ticari bir eksozom izolasyon kiti aracılığıyla gerçekleştirilmesinin fizibilitesini açıklar.

Bu prosedürün genel amacı, KHDAK hastalarının plazmasında bulunan ve serbest dolaşımdaki mikro RNA gibi ekzozomal olmayan mikro RNA kaynaklarından arındırılmış eksozomları, eksozom izolasyonundan önce çift enzimatik bir tedavi kullanarak izole etmektir. Bu yöntem, eksozom bölmesine yapılan mikro RNA lipid biyopsilerinin analizine yardımcı olabilir ve bu da biyobelirteç olarak kullanımlarını aydınlatmaya yardımcı olacaktır. Bu prosedürün ana avantajı, analize müdahale edebilecek ekzozomal olmayan mikro RNA kaynaklarını ortadan kaldıran enzimatik ön işlemdir.

Başlamak için, bir mL'lik bir plazma örneğini buz üzerinde çözdürün. Çözüldükten sonra, oluşmuş olabilecek kriyopresipitatları ayrıştırmak için tüpü birkaç kez ters çevirin. Daha sonra hücreleri ve kalıntıları temizlemek için plazmayı oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 2.000 G'de santrifüjleyin.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos