Name: Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Öğrenin intra-iliak arter enjeksiyonu ile fare modellerinde meme kanseri kemik metastazı oluşturmayı. Bu yöntem mikroskobik metastaz modellerini verimli ve seçici şekilde kurarak kemik mikroçevre etkileşimlerini incelemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Zhang laboratuvarında yapılan araştırma X. H.-F. tarafından desteklenmiştir. Z.'nin NCI CA151293, CA183878, Meme Kanseri Araştırma Vakfı, ABD Savunma Bakanlığı DAMD W81XWH-13-1-0195, CA149196-04 Pilot Ödülü, McNair Tıp Enstitüsü ve HW'nin ABD Savunma Bakanlığı DAMD W81XWH-13-1-0296.

Tüm hayvan çalışmaları Baylor College of Medicine hayvan bakımı kurallarına uygun olarak yapıldı. 1. Hücre Hazırlanması Not: değişik kanser hücresi çizgileri IIA enjeksiyon araştırma amaçlı bağlı olarak kullanılabilir. Meme kanseri hücre çizgileri kullandık MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 ve araştırma prostat kanseri hücre dizisi C4-2. Biz genellikle bizim çalışma için GFP- ve ateşböceği lusiferaz etiketli kanser hücrelerini, hem kullanımı ve GFP-Lusiferaz etiketli MCF7 hücre hattından burada bazı verileri göstermektedir. <ol><li> % 5 CO2 içinde 37 ° C&#39;de,% 10 FBS ve 0.1 mg / ml penisilin-streptomisin içeren DMEM içinde hücreleri korumak. </li><li> % 0.25 tripsin / EDTA çözeltisi ile% 90 birleştiği - IIA enjeksiyondan önce, 80 Hücreleri tripsinize edin. Hücre sayımı için 10 mi, PBS içinde hücreleri hücreleri iki kez yıkama ve yeniden askıya almak için soğuk PBS kullanın. 5 dakika boyunca 800 x g&#39;de PBS santrifüj hücreleri çıkarmak için. </li><li> hücrelerin yeniden askıyabuz soğukluğunda PBS içerisinde 5 x 10 6 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyonda ilave edilebilir. </li><li> 100 ul GFP- ve bir fare IIA enjeksiyon için ateş böceği lusiferaz etiketli kanser hücrelerini kullanarak. Not:. Bu nedenle, her bir hayvan tarafından alınan hücre sayısı 5 x 10 5 sayı ise hücre çizgilerinin saldırganlık dayalı değiştirilmesi gerekebilir. </li><li> Buz üzerinde hücre süspansiyonları tutun. Not: Titreşimler bu enjeksiyon için hazır olana kadar her birkaç dakikada hücre toplanmasını önlemek için gerekli olabilir. (Örneğin, MDA-MB-231 gibi), bazı hücre hatları için, (örneğin, 45 mikron hücre süzgecinden geçen) daha sıkı prosedürler, toplanmayı önlemek için gerekli olabilir. gemilerin takunya doku nekrozuna neden olabileceğini unutmayın ve bu nedenle deneyler karıştırıcı edin. </li></ol> 2. Hayvan hazırlanması <ol><li> Hayvan ağrı tedavisi için, hiçbir az 24 saat ameliyat öncesi farelere besin takviyesi ile 5 mg / kg / gün Devletlerde köpekler (ya da diğer analjezik) vermek. yönetmekameliyat öncesi 0.1 mg / ml buprenorfin deri altından 60 dakikalık bir doz. Not: İsteğe bağlı prosedür ekstra östradiol sağlamak için hayvanların arkasına östradiol palet aşılamaktır. Bu ER + kanser hücrelerinin büyümesine (örneğin, MCF-7 hücreleri) 9 hızlandıracaktır. </li><li> intraperitonal enjeksiyon ile - (100 mg / kg 80) ve ksilazin (10 -12.5 mg / ml) Ketamin ile 6 haftalık fare (yaklaşık 20 gr) - 4 anestezisi. </li><li> Ayak tutam tarafından 20 g fare ve solunum hızı% 50 azalma gözlem sedasyon uygun düzeyde onaylamak ve mukozaları pembe (örneğin, fare kulak cilt ve pençe cilt). Ameliyat sırasında bu hayati belirtileri her 15 dk izleme tutun. Not: hayvan Hiçbir hareket hayvan cerrahisi için yeterli anestezi ve hazır olduğunu gösterir. </li><li> kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın. </li><li> Alt karın özellikle sağ kasık bölgesinde fare Tıraş nerede ameliyat ve enjeksiyon olacakmeydana gelmek. Not: atimik çıplak fareleri kullanılmıştır, bu gerekli değildir. </li><li> , Sırtında fare koymak doğal pozisyonlarında bacakları yaymak ve bant ile mobil diseksiyon karton ayak sopa. </li><li> % 70 izopropil etanol ıslatılmış steril pamuklu sağ kasık alanını silin, betadin cerrahi fırçalayın ile birkaç kez izledi. </li></ol> 3. Ortak İliak Ven ve Arter Konum ve Ayırma <ol><li> Uzun 4. ve bir No. 3 sap düzenlenen steril, 10. karbonlu çelik neşter bıçakları kullanarak sağ alt karında 5. meme arasında 1.2 cm - 1,0 bir cilt kesi olun. Sonra kesi dışında hayvan vücudu kapsayacak şekilde steril cerrahi örtü kullanın. </li><li> Standart tezgah üstü diseksiyon mikroskobu hayvan taşımak. Enjeksiyon için 4X büyütme kullanın. </li><li> Diseksiyon mikroskobu 4X büyütme altında, yağ dokusu ve peritoneu arasındaki künt ayırma forseps eklemekm ve iliak damarları ve sinirleri (Şekil 1) açığa her iki tarafta dışa doğru dokuları itin. Not: orta hattan aort ve arter dallarının alt kısmı arasındaki arter iliyak arter denir. Enjeksiyon gerçekleşir yerdir. </li><li> yakın gemilere, damarları ve sinir arasındaki (bir zar gibi) bağ dokusu kırmaya düz ince forseps bir çift kullanın. </li><li> sol el düz ince forseps geçin. sağ elini kullanan açılı ince forseps bir çift tut. bağ dokusu kırılmış olan aynı pozisyona sağ forseps yerleştirin. Ve sonra gemilerin altında, içinden sağ forseps sopa. </li><li> Aynı zamanda, geçiyor sağ forseps rehberlik damarların sol tarafındaki bağ dokusu içine sol el forseps yerleştirin. </li><li> Sağ forseps gemilerin altında alır sonra, çevredeki ti gelen gemiler ayırmak için deneyinbiraz daha ssue ve ardından sağ el forseps üstünde tutmak. </li><li> sağ forseps bir 4-0 ipek sütür ucu sunmak için sol forseps kullanın ve sonra gemiler altından yoluyla nazikçe ve yavaşça dikiş çekin. Not: Şimdi hem ortak ven ve arter damarları sütür tarafından kaldırılır (Şekil 2). </li></ol> 4. Enjeksiyon ve Post-enjeksiyon Bakımı <ol><li> 31 G insülin şırınga enjekte hücreleri hazırlayın. enjeksiyon başına PBS içinde hücre süspansiyonu 100 ul kullanın. aşağı enjekte edilen hücrelerin yapışmasına neden olabilir ve kan akışını bloke olmayacak şekilde hücreleri ayırmak ve toplanmasını önlemek için birkaç kez pipet ve emin olun. </li><li> sol elinde açılı forseps ile, forseps yavaşça düzenlenen damarları olan sütür rehberliğinde boyunca gemilerin altında forseps koymak ve sonra forseps iki kolu açın. Not: forseps iki kolu arasında aralık i olacaknjection sitesi. </li><li> enjeksiyona hazır, yukarı iğne konik ile sağ elinde 100 ul hücre süspansiyonları ile 31 G iğne tutun. </li><li> arter lümenine iğne takın (kan iğne ucu girecek). Sonra hücreler enjekte etmek yavaşça hücre süspansiyonu itin. Hücre süspansiyonu kapta kırmızı kanı itecektir. damarları kırmak ya da hücre süspansiyonu sızmasına çalışın. </li><li> Enjeksiyon tamamlandığında, nazikçe iğneyi geri çekin ve kanamayı durdurmak için sol forseps gemiler tutan tutun. Sonra dikiş uzak çekin. </li><li> sol el forseps çekmeye ve hızlı bir şekilde kanamayı durdurmak için arter kesi alanı basın bir pamuklu bir bez kullanın. Not: Genellikle 5-10 dk sürekli basınç kanamayı durdurmak için yeterlidir. </li><li> Zaman kanama durur, cerrahi bölgede cilt kenarlarını kapatmak için cilt yapıştırıcı kullanın. bir kulak-etiketi olun ve enjekte edilen hücrelerin dağılımını incelemek için sinyal biyolüminesans kontrol edin. &lt;br /&gt; Not: Başarılı bir enjeksiyon Şekil 3&#39;e benzer bir görüntü neden olur. <ol><li> 75 mg / içi orbital sinüs yoluyla kg fare konsantrasyonda PBS / ml luciferase 100 ul 15 mg enjeksiyon biyoışıldama sinyali kontrol edin. <ol><li> intra-yörünge enjeksiyon için, fare gözün her iki tarafta parmaklarını koymak göz top biraz, göz çerçevesinden dışarı pop göz top ve burun arasındaki 28 G insülin şırınga iğneleri yerleştirin ve sonra yavaş yavaş luciferase enjekte şırınga itmek yapmak için basınç kullanmayın . Not: Doğru pozisyonda, iğne 2 derinliğe ulaşmak mümkün olmalıdır - sert doku (kemik) isabet önce 3 mm. </li><li> 10, in vivo bütün hayvan görüntüleme için görüntüleme sistemi içine fare yerleştirin - 5 dakika içinde 60 sn (bakınız Şekil 3). Not: İsteğe bağlı prosedür ekstra östradiol sağlamak için hayvanların arkasına östradiol pelet aşılamaktır. Bu ER + kanser hücrelerinin büyümesini (örn MCF-7 hızlandıracakhücre) 15. </li></ol></li></ol></li><li> o uyanana kadar sıcak bir ısıtma yastığı üzerinde fare bırakın. , Ameliyat sonrası dönemde açılma ve ağrı belirtileri, kanama Monitör şişme. Ağrı bulgusu kadar ağrı tedavisi için verilen analjezik kapsama (carprofin besin takviyesi önerilir) ile kafesine geri fareler koyun. ameliyatı takiben 7 gün boyunca hayvanlara yakın ilgi ve özeni gösteriniz. </li></ol> 5. İzleme Metastatik Büyüme <ol><li> histomorofmetrisi: Büyüme plakası <ol><li> Kemik dokularını taşıyan Hasat tümörü, daha sonra, 24 saat süreyle% 4 paraformaldehid içinde kemik tamir pH 3 7.0% 14 EDTA çözeltisi bunları kirecini - 5 gün ve daha önce gömme 14 tarif parafin tabi tutabilir. </li><li> Bölüm parafin-embed kemik 3 mikron kalınlığında dokular ve daha önce 14 açıklandığı gibi Hematoksilen / Eosin boyama standart histolojik yöntemi gerçekleştirmek. </li></ol></li><li> Immunohistochemisdeneyin: <ol><li> Konu parafine gömülü tümör taşıyan kemik önce 14 tarif edildiği gibi, çeşitli amaçlar için boyama imünohistokimya için kayar. Kısaca, sırası ile, anti-Osterix antikorları ve anti-alkalin fosfataz (ALP) antikorlar ile anti-GFP antikorları ve immunostain osteojenik hücre düşen (osteoblast ve osteoblastlar), MCF7 kanser hücrelerinin immunostain. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Kang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multigenic+program+mediating+breast+cancer+metastasis+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone.</a> Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).</li>
<li>Lu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VCAM-1+promotes+osteolytic+expansion+of+indolent+bone+micrometastasis+of+breast+cancer+by+engaging+alpha4beta1-positive+osteoclast+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors.</a> Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).</li>
<li>Ell, B., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SnapShot%3A+Bone+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SnapShot: Bone Metastasis.</a> Cell. 151 (3), 690-690 (2012).</li>
<li>Kretschmann, K. L., Welm, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis to bone.</a> Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).</li>
<li>Lelekakis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+model+of+breast+cancer+metastasis+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone.</a> Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).</li>
<li>Rose, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoactivin+promotes+breast+cancer+metastasis+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone.</a> Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).</li>
<li>Welm, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage-stimulating+protein+pathway+promotes+metastasis+in+a+mouse+model+for+breast+cancer+and+predicts+poor+prognosis+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+TGF-beta+Responsiveness+in+Prostate+Stromal+Cells+Alters+Chemokine+Levels+and+Facilitates+the+Development+of+Mixed+Osteoblastic%2FOsteolytic+Bone+Lessions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions.</a> Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).</li>
<li>Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+Cancer+Cells+Induce+Osteolytic+Bone+Lesions+In+vivo+through+a+Reduction+in+Osteoblast+Activity+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ON%22%5BJournal%5D)">Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice.</a> PLoS ON. 8 (9), e68103(2013).</li>
<li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excess+TGF-%CE%B2+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Bone+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Bone Metastasis.</a> Vet Pathol. 52 (5), 827-841 (2015).</li>
<li>Werbeck, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microenvironment+regulates+metastasis+and+metastasis+genes+of+mouse+MMTV-PymT+mammary+cancer+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo.</a> Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).</li>
<li>Xiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+Protein+Epitope+Mimetic+Antagonist%2C+POL5551%2C+Disrupts+Metastasis+and+Enhances+Chemotherapy+Effect+in+Triple+Negative+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer.</a> Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteogenic+niche+promotes+early-stage+bone+colonization+of+disseminated+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells.</a> Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).</li>
<li>Hoffmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+new+estrogen+receptor+destabilizing+compounds%3A+effects+on+estrogen-sensitive+and+tamoxifen-resistant+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).</li>
<li>Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+zoledronic+acid+and+osteoprotegerin+on+growth+of+human+lung+cancer+in+the+tibias+of+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice.</a> Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).</li>
<li>Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Dynamic+Bone+Histomorphometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Dynamic Bone Histomorphometry.</a> J Bone Miner Res. 27 (2), 486-495 (2012).</li>
<li>Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroPET%2FSPECT%2FCT+imaging+of+small+animal+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease.</a> Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Canine+prostate+cancer+cell+line+%28Probasco%29+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li>
<li>Amend, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombospondin-1+regulates+bone+homeostasis+through+effects+on+bone+matrix+integrity+and+nitric+oxide+signaling+in+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts.</a> J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Sadece iliyak arter kanser hücrelerinin enjeksiyon hedef olmasına rağmen, biz çevre dokulara hem iliak ven ve arter ayrılmasını tavsiye ve bir paket olarak birlikte bunları kaldırmak için. damar ve arter yoğun birbirleriyle temas için bu ve venöz damar duvarı ince ve kırmak için kolaydır. kanser hücreleri sadece artere enjekte edilir, ancak bu nedenle, başarılı bir enjeksiyon için, bu zaman ve birlikte iki gemi tutmak için çaba kaydeder. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi bir 4-0 ipek dikiş bu işlemi yard...

Metastaz solid tümörlerin yol açtığı ölümlerin% 90&#39;ından sorumludur. Kemik çeşitli kanser türleri, özellikle meme ve prostat kanserlerinin metastazları en sık etkilediği organdır. klinikte teşhis edildiğinde, kemik metastazları genellikle zaten sık sık nörolojik semptomlar eşlik kemikte osteolitik veya osteoblastik ya değişiklikler ile ileri aşamalarında girdiniz. Önceki çalışmalar ağırlıklı olarak ancak şu anda osteolitik sürecinin başlangıcından önce kemiklerinde mikrometastazlar anlayışı sınırlı, açık osteolitik kemik metastazları 1-3 üzerinde duruldu. Bu durum, uygun deneysel model ve yaklaşımların eksikliği en azından kısmen. Göğüs kanseri genetik mühendisliği fare modelleri genellikle akciğer metastaz, ama daha az verimli bir şekilde kemik 4. Aynı şekilde, orthotopically nakledilen tümörler nadiren bazı kemik tropikal 4T1 meme kanserleri, spontan kemik metastazları geliştirmekbir alt-klonlar MSP istisnalar 5-7 olarak PyMT transjenik fare modeli aşırı. Intra-tibia sondaj kemiğe 8-10 kanser hücrelerini sunabilirsiniz, ama aynı zamanda yerel dokulara zarar ve iltihap doğurur. Şu anda, meme kanseri hücre çizgilerinin intrakardiyak enjeksiyonu kemik kolonizasyon 11-13 araştırmak için önemli bir yaklaşım olmuştur. kanser hücreleri sol ventrikül içine tanıtıldı Ancak, sonra sadece sınırlı oranda nihayet zor ölçülebilir şekilde mikroskobik metastazlar izlemek için yapım, kemik ve kemik iliği ulaşacaktır. Bu çalışmada, selektif bir şekilde, yerel dokulara zarar vermeden kemik ve kemik iliği kanser hücrelerini zenginleştirmek, arka bacak dokulara kanser hücrelerini sunmak için bir teknik, yani içi ilyak arter (IIA) enjeksiyonu 14 oluşturmaktadır. Çünkü kemik özgüllük, bu yaklaşım aynı zamanda, sonunda bir önceki kolonize tembel kanser hücrelerinin yeterli zaman tanırimals diğer hayati organlarda primer tümör veya metastaz yenik. Böyle biyoparlaklık görüntüleme, immünofloresan boyama ve kemik histomophimetri gibi diğer teknikler, çeşitli ile kombine edildiğinde, IIA enjeksiyon özellikle çok hücreye tek kanser hücrelerinden ilerlemesini izlemek için, kemik metastazı ile ilgili araştırma amaçlı geniş bir kapsam için potansiyel olarak yararlı olan mikrometastazlar. Özellikle, IIA enjeksiyon kanser hücreleri ve kemik mikro-hücreleri çevreleyen çeşitli arasındaki etkileşimi görselleştirmek sağlıyor gösterdi.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Malzemeler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>HyClone</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000</td><td></td></tr><tr><td>Kalem / Strep Amfeterisin B</td><td>Lonza Biowhittaker</td><td>17-745E</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Lonza Biowhittaker</td><td>17-516F</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin / EDTA çözeltisi</td><td>HyClone</td><td>SH30042.01</td><td></td></tr><tr><td>45 &mu; M hücre süzgeci</td><td>VWR Uluslararası Laboratuvarı</td><td>195-2545</td><td></td></tr><tr><td>MediGel CPF, carprofen&nbsp;</td><td>BCM'de</td><td></td> veteriner bakımından kontrollü ürün <td>Ağrı yönetimi için</td></tr><tr><td>Buprenorfin&nbsp;</td><td>BCM'de</td><td></td> veteriner bakımından kontrollü ürün <td>Ağrı yönetimi için</td></tr><tr><td>Estradiol peleti</td><td>Amerika'nın Yenilikçi Araştırması</td><td>SE-121</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin ve ksilazin</td><td>BCM'de</td><td></td><td></td>veteriner bakımından kontrollü ürün</tr><tr><td>Veteriner merhemi</td><td>BCM'de</td><td></td> veteriner bakımından kontrollü ürün <td>Göz kuruluğunu önleyin</td></tr><tr><td>Tıraş Makinesi</td><td>Oster</td><td>78005-050</td><td>İçin kürklü fareler</td></tr><tr><td>İzopropil etanol</td><td>ACROS</td><td>67-63-0</td><td></td></tr><tr><td>Betadine cerrahi önlük</td> BCM <td></td><td></td># 10 neşter <td>bıçaklarında veteriner bakımından kontrollü ürün</td></tr> <tr><td></td><td>Ted Pella, Inc</td><td>549-3CS-10</td><td>Çoklu</td></tr><tr><td>No. 3 tutamak</td><td>Ted Pella, Inc</td><td>541-31</td><td>Otoklavlanması gerekiyor</td></tr><tr><td>Steril cerrahi örtü</td><td>Sai İnfüzyon Teknolojisi</td><td>PSS-SD1</td><td></td></tr><tr><td>Düz forseps&nbsp;</td><td>Roboz Cerrahi Alet</td><td>RS-5132</td><td>Otoklavlanması gerekiyor</td></tr><tr><td>Düz ince forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11253-20</td><td>Otoklavlanması gerekiyor</td></tr><tr><td>Kenarlı ince forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11253-25</td><td>Otoklavlanması gerekiyor</td></tr><tr><td>4-0 Vicryl ipek sütür</td><td>Johnson & Johnson Health Care</td><td>J214H</td><td></td></tr><tr><td>31 G insülin şırıngaları</td><td>BD</td><td>328418</td><td>Çoklu</td></tr><tr><td>Q-uçlu pamuklu çubuklar (Steril)</td><td>VWR Uluslararası Laboratuvar</td><td>89031-272</td><td></td></tr><tr><td>Cilt tutkalı</td><td>Henry Schein Hayvan Sağlığı</td><td>31477</td><td>Ameliyat yeri cilt kapatma için</td></tr><tr><td>Kulak Küpesi Aplikatörü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>24220-00</td><td></td></tr><tr><td>Kulak küpeleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>24220-50</td><td></td></tr><tr><td>D-lusiferin</td><td>Altın Biyoteknoloji</td><td>ŞANS</td><td>Işıktan kaçının ve buza koyun</td></tr><tr><td>28 G insülin şırıngaları</td><td>BD</td><td>329410</td><td>Orbital enjeksiyon için</td></tr><tr><td>Paraformadehit</td><td>Alfa Aesar</td><td>30525-89-4</td><td>Doku fiksasyonu için</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>OmniPur</td><td>4050</td><td>Kemik dokusu dekalifikasyonu için</td></tr><tr><td>< güçlü > Adı< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< güçlü ></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ekipmanları < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Leica Leica</td><td>S6E stereo</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II görüntüleme sistemi</td><td>Gelişmiş Moleküler Vizyon</td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü > İsim</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Antikorlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-GFP antikorları (JL-8)</td><td>Clontech</td><td>632381</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ALP antikorları</td><td>Abcam</td><td>ab108337</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Osterix antikorlar</td><td>Abcam</td><td>ab22552</td><td></td></tr></tbody></table>

mikroskopik kemik metastazı verimli ve seçici modelleme için intra-iliak arter enjeksiyon

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

İntrailiak arter (IIA) enjeksiyonu, hayvanlarda çeşitli kanser hücrelerinin metastatik lezyonlarını tanıtmak için etkili bir yaklaşımdır. Yaygın olarak kullanılan intrakardiyak ve intra-tibial enjeksiyonlarla karşılaştırıldığında, IIA enjeksiyonu çeşitli avantajlar sağlar. İlk olarak, özellikle arka bacak kemiklerine büyük miktarda kanser hücresi verebilir, böylece mekansal-zamansal olarak senkronize erken evre kolonizasyon olayları sağlayabilir ve yayılmış tümör hücrelerinin sağlam bir şekilde ölçülmesine ve hızlı bir şekilde tespit edilmesine izin verebilir. İkincisi, kanser hücrelerini lokal dokulara zarar vermeden dolaşıma enjekte eder, böylece kemik kolonizasyon sürecini karıştıran enflamatuar ve yara iyileşme süreçlerinden kaçınır. Üçüncüsü, IIA enjeksiyonu kemik dışı organlarda çok az metastatik büyümeye neden olur, böylece hayvanların diğer hayati metastazlara yenik düşmesini önler ve indolent kemik lezyonlarının sürekli izlenmesine izin verir. Bu avantajlar, geçmişte büyük ölçüde zor olan tek kanser hücrelerinden çok hücreli mikrometastazlara ilerlemenin incelenmesi için özellikle yararlıdır. Biyolojik görüntüleme ve kemik histolojisinin en son yaklaşımları ile birleştirildiğinde, IIA enjeksiyonu kemik metastazları ile ilgili çeşitli araştırma amaçlarına uygulanabilir.

Şekil 1 anatomik konumu ve iliyak arter (kırmızı) ve ven (mavi) ilişkiyi göstermektedir. Şekil 2 diseksiyon mikroskobu altında iliak damarlar ve sinirlerin göreli konumunu göstermektedir. Şekil 2A gösterildiği gibi, damarlar ve sinirlerin periton duvarına altında doğru ve cilt kesi yapılır ve periton itti sonra ortaya çıkabilmektedir. iliyak ven solda ve artere göre daha büyük...

Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Bu prosedürün genel amacı, kanser hücrelerini intra-iliyak arter enjeksiyonu yoluyla kemikler de dahil olmak üzere arka ekstremite dokularına doğrudan ileterek deneysel kemik metastazı oluşturmaktır. Bu yöntem, meme kanserinin kemik kolonizasyonuyla ilgili temel soruları, özellikle de bu sürecin erken aşamasında meme kanseri hücrelerinin kemikteki mikroçevre hücreleriyle nasıl etkileşime girdiği konusundaki soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bugün iliyak arter enjeksiyonu gerçekleştirdik.Bu tekniğin temel avantajı, lokal doku hasarına yol açmadan çeşitli kanser türleri için etkili ve seçici bir deneysel mikroskobik kemik metastaz modeli oluşturabilmesidir. Genellikle, bu yöntemi ilk kez kullanan kişiler zorluk yaşayabilir; çünkü mikroskop altında doğru bir enjeksiyon noktası ve iliak arter enjeksiyon pozisyonu bulmak, yüzde doksanın üzerinde bir enjeksiyon başarı oranına ulaşmak için pratik gerektirebilir. İşleme, beş ila altı haftalık, 20 g ağırlığındaki bir farenin ayak parmağına sıkıştırma testi yaparak uygun sedasyon seviyesini doğrulayarak başlayın.Göz pomadı uyguladıktan sonra, tıraş edilmiş sağ kasık bölgesini sırasıyla steril, %70 izopropil etanolle ıslatılmış pamuklu çubuklarla birkaç kez silin ve ardından betadine cerrahi scrub ile temizleyin. Sonrasında, farenin tamamını steril bir örtüyle örtün. Ardından, sağ alt karın bölgesinde dördüncü ve beşinci meme uçları arasında 1 ila 1,2 santimetrelik bir cilt insizyonu yapmak için steril 10 numara karbon çelik bistüri bıçağı ve 3 numara tutucu kullanın.Ardından hayvanı standart bir masaüstü diseksiyon mikroskobuna aktarın. 4X objektif altında, yağ dokusu ile periton arasındaki insizyona küt ayırma pensleri yerleştirin ve iliak damarları ile sinirleri açığa çıkarmak için dokuları her iki yana doğru itin. Daha sonra, damarlar ile damarlara en yakın sinir arasındaki bağ dokusunu ayırmak için düz, ince pensler kullanın.Ardından, açılı pensi bağ dokusunun içinden ve iliak damarların altından kaydırırken, açılı pensin doku boyunca ilerlemesine rehberlik etmek için karşı taraftaki bağ dokularına düz pensi yerleştirin. Bu adım için iliak kenarı ve arteri bir demet halinde ayırmayı ve kaldırmayı öneririz. Tümör hücreleri sadece artere enjekte edilse de, her iki damarı birlikte izole etmek zaman ve emek tasarrufu sağlar.Açılı pensler yerleştirildikten sonra, diseksiyon sırasında damarları açılı penslerin üzerinde tutarak iliak ven ve arteri çevre dokudan daha fazla ayırın. Damarlar tamamen açığa çıktığında, düz pens yardımıyla 4-0 ipek süturun ucunu açılı penslere iletin ve süturu damarların altından yavaşça ve nazikçe çekin. Ardından hem ortak iliak ven hem de arter damarları süturla yukarıda tutulmuş olmalıdır.Kaplar hazır olduğunda, tümör hücrelerini tek hücreli bir çözelti haline getirmek ve varsa topaklanmaları dağıtmak için pipetle birkaç kez aşağı yukarı çekip boşaltın. Ardından, fare başına 100 microliters hücreyi 31 gauge bir insülin şırıngasına aspire edin. Şimdi, dikiş ipini kılavuz olarak kullanarak açılı penseti kapların altına geri kaydırın ve kapların uçlara nazikçe yerleşmesi için penseti açın.Diğer elinizle, iğne ucunu eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde, pens uçları arasındaki arter kesitinin lümenine yerleştirin. Hücreleri enjekte etmek için pistonu yavaşça bastırın. Hücre süspansiyonu, kanı damar boyunca dışarı itecektir.Tüm hücreler aktarıldığında, kanamayı önlemek için damarları pensetle yukarıda tutarak iğneyi nazikçe çıkarın. Ardından, sütürü çekip çıkarın. Son olarak, penseti hızla kaldırın ve kanamayı durdurmak için kesi yerinin üzerine beş ila 10 dakika boyunca pamuklu bir çubukla bastırın.Burada, beş x 10⁵ GFP lusiferin işaretli MCF-7 meme kanseri hücresinin intra-iliyak arter yoluyla enjeksiyonunun ardından retro-orbital sinüs enjeksiyonu ile d-lusiferin uygulanması sonrası elde edilen temsili bir tüm hayvan biyolüminesans görüntüsü gösterilmektedir. Enjeksiyondan sonraki 14. günde, intra-iliyak artere enjeksiyon yapılan arka kemikten güçlü bir biyolüminesans sinyali elde edilirken, karşıt kontrol kemiğinden sinyal alınmamış olup bu durum enjekte edilen hücrelerin spesifik lokalizasyonunu doğrulamıştır. Tümör taşıyan kemiklerin H&E boyamalı kesitleri, intra-iliyak arter enjeksiyonundan 14 gün sonra kemik dokusunda mikroskobik MCF-7 metastatik lezyonlara işaret eden, büyük çekirdekli, kompakt ve parke taşı benzeri bir hücre popülasyonunu da ortaya koymuştur.Ayrıca, kemik kesitlerinin immünofloresan boyaması, MCF-7 hücrelerinin osteoblastlar ve preosteoblastlar ile bir arada bulunduğunu ortaya koymuştur. Uzmanlaşıldığında, bu teknik on ila on beş dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürlerin ardından, ek soruları yanıtlamak için diğer yöntemleri kullanabilirsiniz.Örneğin, metastaz nişindeki mikroçevre hücrelerini profillemek ve bunları normal hücrelerle karşılaştırmak için RNA-Seq kullanabiliriz. Bu teknik, meme kanseri araştırmacıları ve prostat kanseri araştırmacıları için hayvanlarda kemik mikrometastazını incelemenin bir yolunu sunar. Bu videoyu izledikten sonra, intra-iliak arter enjeksiyonu ile meme kanseri kemik metastazı modelinin nasıl kurulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Ketamin ve ksilazin ile çalışmak son derece tehlikeli olabileceğinden lütfen uygun önlemleri alın.

intra-iliac-artery-injection-for-efficient-selective-modeling

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Kemik metastazının patogenezine, anjiyojenez önemli bir proses ve bu nedenle görüntüleme ve tedavi için bir hedef temsil eder. Burada siteye özel meme kanseri kemik metastazı bir sıçan modeli sunmak ve non-invaziv görüntü anjiyogenez için stratejiler...

Manyetik Rezonans Görüntüleme, Volumetrik Bilgisayarlı Tomografi ve Ultrason Kullanımı Meme Kanseri Kemik metastazı bir Nude Rat Model Angiogenezis Multi-modal Görüntüleme

Hayvan modelleri sık kemik kanseri metastazı araştırmak için kullanılmaktadır. Bu protokolü biz kemik metastazı çalışmaları için tümör inokülasyonu iki genel metot tanımlamak ve kısaca bu modeller izlemek ve ölçmek için kullanılan analizler bazı anlatacağız.

Kemik Metastaz Modelleri

Kaynak: Lim, M.,  et al. Kanser hücrelerinin iç karotis arter enjeksiyonu ile beyin metastazının modellenmesi. J. Vis. Uzm.  (2022)Bu videoda, anestezi uygulanmış bir fare, beyne hedeflenen iletimi kolaylaştırmak için kanser hücrelerinin ortak karotis artere (CCA) enjekte edildiği cerrahi bir prosedürden geçiyor. Prosedür, enjekte edilen hücreleri iç karotis artere (ICA) yönlendirmek için karotis arterlerin hassas bir şekilde dikilmesini ve manipüle edilmesini içerir ve zamanla beyinde tümör...

Kanser Hücrelerinin İnternal Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Tümörü Metastazının Modellenmesi

Otolog ve allojenik kemik greft implantasyonu önemli kraniofasial kemik kaybını tedavi yaklaşımları kabul teşkil. Oysa neovaskülarizasyon, hücre farklılaşması ve kemik oluşumu arasındaki etkileşime greft bileşiminin etkisi belirsizdir. Biz greft yakınlık anjiyogenez-osteogenesis bağımlılığın aydınlatmak için amaçlandığı multimodal görüntüleme protokol mevcut.

Bilgisayarlı Tomografi ve Osteogenezi-anjiyogenez bağlamalar Optik Görüntüleme Kranial Kemik Otogreftlerin ve allogreft Entegrasyon değerlendirmek için

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Kemik metastazı modellerinde metastaz düzgün bir şekilde veya %100 insidansla gelişmez. Doğrudan intraosseöz tümör hücresi enjeksiyonu akciğerin embolizasyonu ile sonuçlanabilir. Primer kemik tümörlerini ve kemik metastazlarını, kemik içine solid tümör grefti implantasyonu kullanılarak modelleyen, tekrarlanabilir engraftman ve büyümeye yol açan tekniğimizi sunuyoruz.

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Burada, kemik metastazı lezyonları olan bir fare modeli oluşturmak için insan prostat kanseri hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

Stereotaktik intrakranial enjeksiyon tekniği, tümör hücrelerinin fare korteksine hassas ve lokal bir şekilde yerleştirilmesini sağlar ve böylece beynin metastatik kolonizasyonunu incelemek için güçlü bir model olur.

Beyin Metastazının Modellenmesi: Metastatik Kolonizasyon ve Histolojik Büyüme Kalıplarının Stereotaktik İntrakortikal Enjeksiyonla Standartlaştırılmış Analizi

Öğrenin intra-iliak arter enjeksiyonu ile fare modellerinde meme kanseri kemik metastazı oluşturmayı. Bu yöntem mikroskobik metastaz modellerini verimli ve seçici şekilde kurarak kemik mikroçevre etkileşimlerini incelemenizi sağlar.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Daha fazla video keşfet