Name: Fare Lens Basınç Sertliği değerlendirin Cam lameller Sıralı Uygulama: Gerilme ve Morfometrik Analizleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Öğrenin fare lenslerinin basınç sertliğini ve geometrisini basit ve ekonomik bir yöntemle değerlendirmeyi. Bu hassas teknik, genetik ve deneysel faktörlerin lens biyomekanik özelliklerine etkisini incelemek için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Göz Enstitüsü Hibe R01 EY017724 (VMF) ve Ulusal Artrit ve Kas-İskelet ve Deri Hastalıkları Enstitüsü Hibe K99 AR066534 (DSG) tarafından desteklenmiştir.

Bütün hayvan prosedürleri Scripps Araştırma Enstitüsü&#39;nde Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından Sağlık ve onaylı protokol çerçevesinde Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı için Kılavuzu&#39;nda tavsiyeleri doğrultusunda yapıldı. 1. Mercek Diseksiyon <ol><li> Sağlık &quot;Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu&quot; National Institutes ve onaylanmış kuruluş hayvan kullanım protokolleri önerilere göre fareler Euthanize. </li><li> Kavisli bir forseps kullanılarak farelerden göz aydınlatmak. soketten göz getirmek ve daha sonra forseps ile soketten göz koparmak için forseps ile göz etrafında doku basınız. diseksiyon çanak taze 1x fosfat tamponlu salin (PBS) gözleri aktarın. </li><li> mümkün olduğunca göz küresinin kadar yakın optik siniri kesti. Yavaşça ve dikkatlice delik nereye yoluyla küresi içine ince düz bir cımbız eklemeke optik sinir posterior çıkar. </li><li> Dikkatle korneanın kenarından posterior göz küresi içine makas ile bir kesi yapmak. Kemirgen lensler gözün ~% 30 işgal. dikkatle bu kesiler yapmak ve lensi zarar vermemek için çok derin göz içine cımbız veya makas takmayın. </li><li> göz küresi etrafında en az yarım kornea ve sklera arasındaki kavşakta boyunca kesilir. </li><li> Yavaşça adımlarda 1.4 ve 1.5 yapılan açıklıktan göz merceği kaldırmak için kornea üzerinde itin. </li><li> dikkatle hâlâ lense bağlı herhangi bir büyük enkaz kaldırmak için ince uçlu düz forseps kullanın. Görme sertlik ölçümlerine geçmeden önce herhangi bir hasar lensi kontrol edin. </li></ol> 2. Sertlik Ölçümleri <ol><li> bir analitik terazi kullanarak aynı kutudan en az 10 lamelleri tartılır. lamelleri ortalama ağırlığını bulun. Tutarlılık için, tüm deneyler için lamelleri aynı kutusunu kullanın. Ön-yaşDeney başlamadan önce en az 2 saat oda sıcaklığında 1 x PBS içinde lamelleri ve sağ-açılı ayna. </li><li> 1x PBS 75 ml - ölçüm gözüne doldurun 65 ile (Şekil 1 e bakınız). Ölçüm odası bir in-house makine atölyesi tarafından pleksiglas üzerinden yapıldığı ve odasında Divots uygun bir matkap ucu ile istenilen derinliğe kadar ayarlanmış bir matkap basın tarafından yapılmıştır. Lensler mekanik test süresince, oda sıcaklığında 1 x PBS içinde saydam kalır. </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53986/53986fig1.jpg" /> Şekil 1:. Sertlik Ölçüm Odası farklı derinliklerde ve şekiller divots çeşitli ısmarlama sertlik ölçüm odasının boyutlarını gösteren bir fotoğraf. 200 mikron veya 300 mikron derin (sarı ok başları) olan yuvarlak Divots fare lensler üzerinde ölçümler için kullanılmaktadır. Divots 2 mm çapında ve ~ 13 vardır-. Odanın kenarından 14 mm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53986/53986fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="3"><li> lens tutmak için kullanılacak çimen sabit bir mesafede odasına dik açılı ayna yerleştirin. Ayna deney sırasında hareket olmadığından emin olun. </li><li> dikkatle ele geçirmek forseps veya kavisli bir forseps ile ölçüm odasına transfer disseke lensler. </li><li> tepeme gelen yüksüz lens bir üst görünüm resim çekin. mikroskop (altta) ve sol ve sağ tarafta bir fiber optik ışık kaynağı diseksiyon gelen aydınlatma ile 30X büyütmede fare lens fotoğraf çekmek. Maksimum ışık yoğunluğu% 80 fiber optik güç kaynağı olarak ayarlayın. gerektiği gibi ortam aydınlatması, kullanıcı tercihi ve resim kalitesine dayalı güç kaynağı çıkışını ayarlayın. </li><li> ri aracılığıyla görülebilir yüksüz lensin yan görünüm resim çekinGHT-açılı ayna. Kamera kalibre değilse, odak ayna kenarına bir resim çekmek. Ayna kenarı 5 mm uzunluğunda ve bu ölçü daha sonra piksel / mm belirlemek ve görüntülerde bir ölçek çubuğu olarak hizmet için kullanılabilir. </li><li> Yeri çimen içine lens ve lens çimen güvenli ve düz oturduğundan emin olun. yüklemeden önce lensin bir fotoğrafını çekin. lens, ön veya arka direğe çimen istirahat edilmelidir. </li><li> lens üzerine yavaşça 1 lamel yerleştirin. sürünme izin vermek için 2 dakika bekleyin ve yüklü lens başka yan görünüm resim çekmek. </li><li> Adım 2.8 gibi lamelleri ekleme ve 10 lamelleri toplam uygulanır kadar adım 2.8 gibi her lamel eklenmesinden sonra yan görünüm Fotoğraf çekmeye devam edin. </li><li> Tüm lamelleri çıkarın. 2 dakika bekleyin ve tüm lamelleri çıkardıktan sonra lens (iç ve dış çimen ve) bir yan bakışı resim çekmek. </li></ol> 3. Objektif Nucleus Ölçümü <ol><li> unsurlar içinLens çekirdeği boyutu ine, 1x PBS ile dolu temiz bir Petri kabı objektif hareket. </li><li> Yavaşça ince düz forseps kullanarak lensi açarlar. </li><li> Slough off eldivenli parmakları arasında merceği yuvarlayarak kortikal lif hücreleri. Kalan lens çekirdeği sert bir mermer gibi hissedeceksiniz. yaş 1 ay başlayan yetişkin lensler üzerinde çekirdeğini izole etmek için bu yordamı kullanın. İzole çekirdeği katı bir cisim olduğundan, mercek çekirdeğin ileri mekanik test, bu anlatılan yöntemi kullanarak yapılamaz. </li><li> Yavaşça Petri kabındaki 1x PBS lens çekirdeği durulayın. </li><li> geri ölçüm odasına (değil çimen olarak) içine lens çekirdeği koyun ve dik açılı ayna aracılığıyla mercek çekirdeğinin bir görüntü alır. </li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53986/53986fig2.jpg" /> Şekil 2:. Ex lameller tarafından Sıkıştırılmış bir fare Lensler (A) şematik ve (B) fotoğraf1x PBS ile dolu ölçüm odasında 200 mikron derinliğinde çimen içinde 2 aylık fare lensi gösteren deneysel bir kurulum. Bir dik açı ayna ve bir diseksiyon mikroskobu üzerine monte edilmiş bir dijital kamera lamelleri ile sıkıştırma sırasında lens görüntüleri toplamak için kullanılmıştır. (C) arka arkaya lamelleri artan sayıda sıkıştırılan 2 aylık vahşi tip lensin sagital görüş Fotoğraflar eksenel ve ekvatoral çapları ölçülerek ve lamel tabanlı sıkıştırma testi sırasında eksenel ve ekvatoral suşları hesaplamak için ham veri sağladı. lensin bir yansıması zaman lamelleri (çoğu açıkça görülebilir 1 lamel görüntüde) görülebilir. ölçümleri yaparken, yansıma görmezden ve lensin apekse ölçün. (D) 2 aylık vahşi tip objektif sonrası sıkıştırma ve izole objektif çekirdeğin sagital manzarası fotoğrafları. Post-sıkıştırma objektif ve izole çekirdek çimen dışında oturuyor. Ölçek çubukları, 1mM. Bu rakam, gökh modifiye edilirve ark. PLoS biri 2012 yılında 19. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53986/53986fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 4. Görüntü Analizi <ol><li> yüklemeden önce ve ImageJ veya benzer bir yazılım kullanarak her yükleme aşamasından sonra lenslerin ekvatoral ve eksenel çaplarını ölçün. Her mercek çekirdeğinin çapını ölçün. Herhangi bir yönde bir ölçüm 19,21 yeterli olacaktır bu yüzden objektif çekirdeği neredeyse küreseldir. </li><li> kullanılan çimen derinliğini ekleyerek çapları eksenel lensi düzeltin. Ölçüm odasında, çimen lens eksenel kalınlığı 200 mikron (2 aylık fare lensler) ya da 300 mikron (4 aylık ve 8 aylık fare lensler) gizlenmiş. </li><li> , Ε = (d - d 0) denklem kullanılarak lens çapı ölçümleri eksenel ve ekvatoral suşları hesaplayın ε suşu / d, 0, d eksenel veya equatorial belirli bir yük altında çapı ve d, 0, sıfır yükte karşılık gelen eksenel veya ekvatoral çapıdır. </li><li> (Mg olarak) uygulanan yükün fonksiyonu olarak eksenel ve ekvatoral suşları çizilir. </li><li> eksenel Ekvator ve nükleer çapları çiziniz. Hesaplayın ve ekvator çapı eksenel çapı bölerek mercek boy oranını arsa. </li><li> Hesaplamak ve denklem kullanılarak objektif hacmini arsa hacmi = r E Ekvator yarıçapı ve r A adımında 2.6 alınan resimden ölçülen eksenel yarıçap olduğunu 4/3 × π × r E 2 × r A,. Bu denklem objektif bir basık küremsi (elipsoid) 1,22 olduğunu varsayar. </li><li> Hesaplayın ve adım 3.5 alınan resimden ölçülen r N objektif çekirdeğinin yarıçapı r N 3, × denklemi, hacim = 4/3 × π kullanarak nükleer hacim arsa. Bu denklem lens çekirdeği i varsayarsa küre 19,21. </li><li> Hesaplayın ve lens hacmine nükleer hacim oranı olarak nükleer fraksiyonu arsa. </li></ol>

<ol><li>Lovicu, F. J., Robinson, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLovicu%2C+FJ+%22Development+of+the+ocular+lens%22">Development of the ocular lens</a>. , Cambridge University Press. (2004).</li>
<li>Piatigorsky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+differentiation+in+vertebrates.+A+review+of+cellular+and+molecular+features%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features.</a> Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).</li>
<li>Glasser, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+accommodation%3A+surgical+options+for+correction+of+presbyopia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">Restoration of accommodation: surgical options for correction of presbyopia.</a> Clin Exp Optom. 91 (3), 279-295 (2008).</li>
<li>Keeney, A. H., Hagman, R. E., Fratello, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKeeney%2C+AH+%22Dictionary+of+ophthalmic+optics%22">Dictionary of ophthalmic optics</a>. , Butterworth-Heinemann. (1995).</li>
<li>Millodot, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMillodot%2C+M+%22Dictionary+of+optometry+and+visual+science%22">Dictionary of optometry and visual science</a>. 7, Elsevier/Butterworth-Heinemann. (2009).</li>
<li>Heys, K. R., Cram, S. L., Truscott, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massive+increase+in+the+stiffness+of+the+human+lens+nucleus+with+age%3A+the+basis+for+presbyopia%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Massive increase in the stiffness of the human lens nucleus with age: the basis for presbyopia.</a> Mol Vis. 10, 956-963 (2004).</li>
<li>Heys, K. R., Friedrich, M. G., Truscott, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presbyopia+and+heat%3A+changes+associated+with+aging+of+the+human+lens+suggest+a+functional+role+for+the+small+heat+shock+protein%2C+alpha-crystallin%2C+in+maintaining+lens+flexibility%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Presbyopia and heat: changes associated with aging of the human lens suggest a functional role for the small heat shock protein, alpha-crystallin, in maintaining lens flexibility.</a> Aging Cell. 6 (6), 807-815 (2007).</li>
<li>Pierscionek, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+response+of+human+lenses+to+stretching+forces%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Age-related response of human lenses to stretching forces.</a> Exp Eye Res. 60 (3), 325-332 (1995).</li>
<li>Glasser, A., Biometric Campbell, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((optical+and+physical+changes+in+the+isolated+human+crystalline+lens+with+age+in+relation+to+presbyopia%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">optical and physical changes in the isolated human crystalline lens with age in relation to presbyopia.</a> Vision Res. 39 (11), 1991-2015 (1999).</li>
<li>Weeber, H. A., van der Heijde, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+relationship+between+lens+stiffness+and+accommodative+amplitude%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">On the relationship between lens stiffness and accommodative amplitude.</a> Exp Eye Res. 85 (5), 602-607 (2007).</li>
<li>Weeber, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+mechanical+properties+of+human+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamic mechanical properties of human lenses.</a> Exp Eye Res. 80 (3), 425-434 (2005).</li>
<li>Fisher, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastic+properties+of+the+human+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Elastic properties of the human lens.</a> Exp Eye Res. 11 (1), 143(1971).</li>
<li>Krueger, R. R., Sun, X. K., Stroh, J., Myers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+increase+in+accommodative+potential+after+neodymium%3A+yttrium-aluminum-garnet+laser+photodisruption+of+paired+cadaver+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Experimental increase in accommodative potential after neodymium: yttrium-aluminum-garnet laser photodisruption of paired cadaver lenses.</a> Ophthalmology. 108 (11), 2122-2129 (2001).</li>
<li>Burd, H. J., Wilde, G. S., Judge, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+spinning+lens+test+to+determine+the+stiffness+of+the+human+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An improved spinning lens test to determine the stiffness of the human lens.</a> Exp Eye Res. 92 (1), 28-39 (2011).</li>
<li>Glasser, A., Campbell, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presbyopia+and+the+optical+changes+in+the+human+crystalline+lens+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Presbyopia and the optical changes in the human crystalline lens with age.</a> Vision Res. 38 (2), 209-229 (1998).</li>
<li>Pau, H., Kranz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+increasing+sclerosis+of+the+human+lens+with+age+and+its+relevance+to+accommodation+and+presbyopia%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The increasing sclerosis of the human lens with age and its relevance to accommodation and presbyopia.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 229 (3), 294-296 (1991).</li>
<li>Hollman, K. W., O'Donnell, M., Erpelding, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+elasticity+in+human+lenses+using+bubble-based+acoustic+radiation+force%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Mapping elasticity in human lenses using bubble-based acoustic radiation force.</a> Exp Eye Res. 85 (6), 890-893 (2007).</li>
<li>Baradia, H., Nikahd, N., Glasser, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+lens+stiffness+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse lens stiffness measurements.</a> Exp Eye Res. 91 (2), 300-307 (2010).</li>
<li>Gokhin, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tmod1+and+CP49+synergize+to+control+the+fiber+cell+geometry%2C+transparency%2C+and+mechanical+stiffness+of+the+mouse+lens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Tmod1 and CP49 synergize to control the fiber cell geometry, transparency, and mechanical stiffness of the mouse lens.</a> PLoS One. 7 (11), e48734(2012).</li>
<li>Sindhu Kumari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Aquaporin+0+in+lens+biomechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Role of Aquaporin 0 in lens biomechanics.</a> Biochem Biophys Res Commun. , (2015).</li>
<li>Fudge, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermediate+filaments+regulate+tissue+size+and+stiffness+in+the+murine+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Intermediate filaments regulate tissue size and stiffness in the murine lens.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (6), 3860-3867 (2011).</li>
<li>Kuszak, J. R., Mazurkiewicz, M., Zoltoski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+modeling+of+secondary+fiber+development+and+growth%3A+I.+Nonprimate+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Computer modeling of secondary fiber development and growth: I. Nonprimate lenses.</a> Mol Vis. 12, 251-270 (2006).</li>
<li>Scarcelli, G., Kim, P., Yun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+measurement+of+age-related+stiffening+in+the+crystalline+lens+by+Brillouin+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">In vivo measurement of age-related stiffening in the crystalline lens by Brillouin optical microscopy.</a> Biophys J. 101 (6), 1539-1545 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Lens sertliği ölçmek için bu yöntemi kullanırken birkaç önemli hususlar vardır. odanın (θ) alt kısmına göre - (8.5 ° 8) İlk olarak, lamelleri hafif eğik bir açıyla lens uygulanır. Bu da, eksenel fazla ekvatoryal yerine yük çok küçük bir bileşen uygulanır. Ancak, bu ekvatoral yük günah θ ≈ 0.1 19 çünkü önemsiz kabul edilir. Bu yöntem büyük lensler için adapte edilirse, odasının tabanına lamelleri açısı ekvator yük gerilme hesaplamaları hesaba gerekip gerekmediğini belirlemek üzere ölçülecek gerekir. İkinci ola...

Lens, gözün ön kamarasında bulunan ve ışığın retinaya ince bir şekilde odaklanmasından sorumlu şeffaf ve avasküler bir organdır. Lens kapsülü adı verilen berrak bir bazal zar, epitel hücrelerinin1,2 ön tek tabakası ile kaplanmış uzun lif hücrelerinin bir yığınını çevreler. Lensin yaşam boyu büyümesi, lens ekvatorundaki epitel hücrelerinin sürekli çoğalmasına ve farklılaşarak yeni fiber hücrelere dönüşmesine ve bu hücrelerin önceki nesil fiber hücrelere konsantrik bir şekilde eklenmesine bağlıdır2. Zamanla, lens lifi hücreleri sıkışır ve lensin ortasında çekirdek1 adı verilen sert bir merkez oluşur. Gözün optik gücündeki diyoptrik bir değişiklik olarak tanımlanan akomodasyon, insanlarda siliyer kaslar lensi deforme etmek için kasıldığında ve yakındaki nesnelere odaklanmak için optik güçte gerçek bir artışa izin verdiğindemeydana gelir 3-5. Yerleştirilmemiş gözde, lens, zonüler liflerden gelen gerilim nedeniyle nispeten düzleştirilmiş bir durumda tutulur. Siliyer kaslar kasıldığında, lens üzerindeki gerilim serbest bırakılır, bu da lens ekvator çapının azalmasına ve eksenel kalınlığın artmasına neden olur. Lenste yaşa bağlı değişiklikler, ilerleyici bir lens konaklama kaybı olan presbiyopiye neden olur ve bu da okuma gözlüğü ihtiyacına yol açar. 
Birçok çalışma, presbiyopiyi lens6-11'in içsel sertliğinde yaşa bağlı artışla ilişkilendirmiştir. Sertlik, elastik bir nesnenin uygulanan yük altında deforme olmaya karşı gösterdiği direnç olarak tanımlanır. İnsan lenslerinin sertliğini incelemek için spin sıkıştırma12-14, aktüatör sıkıştırma15, prob girintisi16, dinamik mekanik analiz 6,10 ve kabarcık tabanlı akustik radyasyon kuvveti17 dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılmıştır. Fare lensleri presbiyopiyi barındırmaz veya geliştirmezken, lens patolojileri için fare modelleri değerli araçlardır, çünkü fareler daha büyük hayvanlardan daha ucuzdur, genetik olarak iyi karakterize edilir ve hızlı yaşlanma nedeniyle yaşa bağlı hızlandırılmış değişikliklere uğrar. Bir avuç çalışma, fare merceği sertliğini kompresyon yöntemleriyle incelemiş ve yaşlanma veya hedeflenen genetik bozulmalara bağlı olarak lens sertliğindeki değişiklikleri göstermiştir18-21. Bu nedenle, fare lensleri, lens sertliğindeki yaşa bağlı değişiklikleri incelemek için iyi modellerdir. 
Bu protokol, merceğin bir diseksiyon mikroskobu ve ayna aracılığıyla fotoğraflanmasıyla bağlantılı olarak mercek üzerine cam lamellerin uygulanmasına dayalı fare merceği sertliğini belirlemek için basit ve ucuz, ancak kesin ve tekrarlanabilir bir sıkıştırma yöntemini tanımlar. Bu yöntem, kolayca imal edilen ve monte edilen bir aparat ile sağlam gerinim ve morfometrik veriler sağlar. Temsili sonuçlar, fare lenslerinin yaşla birlikte sertliğinin arttığını doğrulamaktadır.

<table><tbody><tr><td>İnce uçlu düz forseps</td><td>İnce Bilimsel Aletler</td><td>11252-40</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodiseksiyon makası, düz kenar</td><td>İnce Bilimsel Aletler</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli forseps</td><td>İnce Bilimsel Aletler</td><td>11272-40</td><td></td></tr><tr><td>Forseps tutma</td><td>Hammacher</td><td>HSC 702-93</td><td>İsteğe bağlı</td></tr><tr><td>Diseksiyon kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12565154</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>0875713A</td><td></td></tr><tr><td>1x fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>18 x 18 mm cam lameller</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542A</td><td></td></tr><tr><td>Lensleri</td><td></td><td></td> tutmak için bölmeli ölçüm bölmesi <td>Özel yapım (bkz. <güçlü>Şekil 1</güçlü>)</td></tr><tr><td>Dik açılı ayna</td><td>Edmund Optics</td><td>45-591</td><td></td></tr><tr><td>Işık kaynağı</td><td>Schott/Fostec</td><td>8375</td><td></td></tr><tr><td>Işıklı diseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>SZX-ILLD100</td><td>SZ-PT fototüplü</td></tr><tr><td>Dijital fotoğraf makinesi</td><td>Nikon</td><td>Coolpix 990</td><td></td></tr></tbody></table>

fare lens basınç sertliği değerlendirin cam lameller sıralı uygulama: gerilme ve morfometrik analizleri

Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses

Göz merceği kırar ve retinada net bir görüntü oluşturmak için ışık odaklanan şeffaf bir organdır. İnsanlarda, siliyer kaslar kasılır yakındaki nesnelere odaklanmak lens optik güç, konaklama olarak bilinen bir süreç içinde bir artışa yol açarak, lensi deforme etmek. Lens sertliği yaşa bağlı değişiklikler presbiyopi bağlantılı olmuştur, uzantısına göre karşılamak için objektif yeteneğini azalma ve, okuma gözlükleri için gereklidir. Fare lensler karşılamak ya da presbiyop geliştirmek değil olsa bile, fare modelleri anlayış lens patolojileri için paha biçilmez bir genetik araç sağlayabilir ve farelerde gözlenen hızlandırılmış yaşlanma lens yaşa bağlı değişikliklerin çalışmayı sağlar. Bu protokol, fare lens sertliği belirleyen sırayla uygulamak lens üzerine sıkıştırma yüklerini artan cam lamelleri kullanarak, basit, hassas ve düşük maliyetli yöntem gösterilmektedir. Temsilcisi veri fare lensler gibi, yaşla birlikte daha sert hale teyitİnsan lensler. Bu yöntem son derece tekrarlanabilir ve potansiyel büyük hayvanlar test lensleri mekanik olarak kadar ölçeklendirilebilir.

sertliği ve 2, 4 ve 8 aylık bir fare lenslerin boyutlarının ölçüldü. Fareler TSRI Hayvancılık Tesisi elde edilen saf C57BL6 suşu arka planda tüm yabani tip hayvanlar vardı ve her lens 1 ila 10 lamelleri ile yüklendi. eksenel ve ekvatoral suşları her lamel ilave edildikten sonra lensin eksenel ve ekvatoral çapları ölçülerek ve daha sonra karşılık gelen boş çapa çapında her değişikliği normalize ederek uygulanan yükün bir fonksiyonu olarak hesaplandı. Her yaştan sekiz lensler test edildi v...

Göz merceği sertliğinde yaşa bağlı artışlar presbiyopi ile bağlantılıdır. Bu protokol, fare merceği sertliğini ölçmek için basit, uygun maliyetli bir yöntemi açıklar. Fare mercekleri, insan mercekleri gibi, yaşla birlikte daha sert hale gelir. Bu yöntem hassastır ve daha büyük hayvanlardan elde edilen lensler için uyarlanabilir.

Fare Lens Basınç Sertliği değerlendirin Cam lameller Sıralı Uygulama: Gerilme ve Morfometrik Analizleri

The eye lens is a transparent organ that refracts and focuses light to form a clear image on the retina. In humans, ciliary muscles contract to deform the ...

Bu prosedürün genel amacı, basit ve ucuz bir yaklaşım kullanarak fare lenslerinin basınç sertliğini ve geometrisini değerlendirmektir. Bu yöntem, lens alanındaki önemli soruları yanıtlayabilir. Farklı genetik ve deneysel bozulmaların lens biyomekanik özelliklerini nasıl etkilediği gibi.Bu tekniğin temel avantajları, kesin olması, tekrarlanabilir olması ve pahalı veya özel ekipman gerektirmemesidir. Bu yöntem, sıçanlar ve tavşanlar gibi daha büyük model organizmalara potansiyel uygulama ile fare lenslerinin özellikleri hakkında bilgi sağlar. Yöntemin görselleştirilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü lens diseksiyonu ve lamel uygulama adımlarının gösteri yapılmadan öğrenilmesi zordur.Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir doktora sonrası olan Catherine Cheng olacak. Ötenazi uygulanmış bir farenin göz çevresindeki dokuyu bastırmak için kavisli forseps kullanarak diseksiyona başlayın ve gözü yuvadan çıkarın. Daha sonra gözü çıkarın ve diseksiyon mikroskobu altında taze PBS içeren bir diseksiyon kabına yerleştirin.Optik siniri göz küresine mümkün olduğunca yakın kesin. Ve nazikçe ve dikkatli bir şekilde ince, düz cımbızları, optik sinirin organın arka kısmından çıktığı delikten göz küresine sokun. Lense zarar vermemeye dikkat ederek korneanın arka kısmından kenarına doğru makasla dikkatlice bir kesi yapın.Kesiye kornea ve sklera arasındaki kavşak boyunca, göz küresinin en az yarısına kadar devam edin. Ve lensi açıklıktan gözden çıkarmak için korneayı hafifçe itin. Ardından, lense hala bağlı olan büyük kalıntıları dikkatlice temizlemek için ince uçlu düz forseps kullanın.Ve lensin hasarsız olduğunu görsel olarak onaylayın. Rijitlik ölçümlerine başlamadan en az iki saat önce, aynı kutudan en az 10 lamel tartmak için bir analitik terazi kullanın. Kapak fişlerinin ortalama ağırlığını belirleyin.Ardından, kapak kızaklarını ve dik açılı aynayı oda sıcaklığında PBS'de önceden ıslatın. Malzemeler hidratlanırken, ölçüm odasını 65 ila 75 mililitre PBS ile doldurun. Ve odayı, alttan aydınlatma ve sol ve sağ taraflarda bir fiber optik ışık kaynağı ile 30 X büyütmeye ayarlanmış bir diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin.Kapak fişleri hazır olduğunda, dik açılı aynayı, lensi tutmak için kullanılacak divottan sabit bir mesafede hazneye yerleştirin. Daha sonra, kavisli forseps kullanarak, disseke edilmiş lensleri dikkatlice ölçüm odasına aktarın. Güç optik güç kaynağını maksimum ışık yoğunluğunun %80'ine ayarlayın ve güç kaynağı çıkışını ortam aydınlatmasına, kullanıcı tercihine ve görüntü kalitesine göre gerektiği gibi ayarlayın.Boşaltılan lenslerin üstten görünüm görüntülerini doğrudan haznenin üstünden elde edin. Ardından, odaktaki ayna kenarının bir resmini çekin ve ardından divotun dışındaki aynadan boşaltılan merceğin yandan görünüm görüntüsünü çekin. Ardından, divotun içine bir lens yerleştirin ve lensin ön veya arka kutbu üzerindeki divot içinde güvenli ve düz bir şekilde oturduğunu onaylayın.Aynada lensin fotoğrafını çekin. Ardından, lensin üzerine nazikçe bir kapak kılıfı yerleştirin. İki dakika sonra, yüklenen lensin başka bir yandan görünüm görüntüsünü çekin.Her bir kapak fişinin eklenmesinden iki dakika sonra, toplam 10 kapak fişi uygulanana kadar yandan görünüm görüntüleri elde ederek kapak fişlerini eklemeye devam edin. Ardından, tüm kapak fişlerini çıkarın, son iki dakika bekleyin ve divotun içindeki ve dışındaki lensin yandan görünüm görüntülerini elde edin. Ve divotun dışındaki lensin üstten görünüm görüntüsü.Lens çekirdeği boyutunu belirlemek için, bir lensi PBS ile doldurulmuş temiz bir petri kabına yerleştirin ve lensi nazikçe kapsüllemek için ince, düz forseps kullanın. Kortikal lif hücrelerini çıkarmak için lensi eldivenli parmaklar arasında yuvarlayın. Ardından, lens çekirdeğini PBS'de nazikçe durulayın ve çekirdeği tekrar ölçüm odasına yerleştirin.Dik açılı aynadan lens çekirdeğinin bir görüntüsünü elde edin. Son olarak, görüntüleri analiz etmek için, her yükleme adımından önce ve sonra lenslerin ekvator ve eksenel çaplarını ölçmek için uygun görüntü analiz yazılımını kullanın. Her bir lens çekirdeğinin çapını da ölçün.Bu temsili deneyde, iki, dört ve sekiz aylık fare lenslerinin sertliği ve boyutları ölçüldü ve eksenel ve ekvatoral suşlar hesaplandı. Eksenel gerinim, uygulanan yükün logaritmik bir fonksiyonudur ve uygulanan maksimum yük altında eksenel ve ekvatoral gerinimlerde istatistiksel olarak anlamlı, yaşa bağlı bir azalma sağlar, bu da fare merceğinin yaşla birlikte sertleştiğini gösterir. Bu deney sırasında toplanan görüntü verileri, diğer bazı lens morfolojik özelliklerini belirlemek için de kullanıldı.Beklendiği gibi, eksenel ve ekvatoral çaplar ve lens hacmi yaşla birlikte artmıştır. En boy oranı, lensin eksenel çaptan biraz daha büyük bir ekvator çapına sahip olduğunu gösterir. Ve bu parametre yaşla birlikte değişmedi.Lens çekirdeğinin çapı, hacmi ve fraksiyonu yaşla birlikte artar, bu da lens çekirdeğinin lens yaşlandıkça göreceli boyutta artacak şekilde yeniden şekillendiğini düşündürür. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa lens başına 30 ila 45 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, lensi bölmenin içine eşit bir şekilde yerleştirmek ve lensin her ek kapak kayması arasında iki dakika boyunca gerilme rahatlamasına izin vermek önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, kapak kaymalarının sıralı uygulamasını kullanarak fare lenslerinin basınç sertliğini ve morfometrisini nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Bu kesin, basit ve ucuz teknik, lens araştırmacılarının farelerdeki gen mutasyonlarının biyomekanik etkilerini keşfetmelerinin yolunu açıyor.

sequential-application-glass-coverslips-to-assess-compressive

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Daha önce tasarlanmış bir cihazı kullanarak bağlı hücrelere mekanik gerilme uygulamak için, bu yazıda bir yeniden tasarlanan substratum geometrisi ve 100 x yağ daldırma amacı ile gergin hücrelerin yüksek çözünürlüklü tek hücreli görüntüleme için özelleştirilmiş bir cihaz açıklanmaktadır.

Tek eksenli çekme gerinim altında canlı hücrelerde nükleer dinamiklerin yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

Çok güçlü O9-1 nöral kret hücreleri ve değişen sertlikteki poliakrilamid hidrojeller kullanılarak in vitro mekanik sinyallerin incelenmesi için ayrıntılı adım adım protokoller burada açıklanmıştır.

Nöral Kret Hücrelerindeki Mekanik Sinyalleri İncelemek İçin Optimize Edilmiş Bir O9-1/Hydrogel Sistemi

Burada, doğrudan ilgilenilen dokuya/organa ve cilde yapıştırılabilen optik olarak net, silikon pencereler kullanılarak uzun süreli intravital görüntüleme için bir yaklaşım sunulmuştur. Bu pencereler şu anda sahada kullanılan diğerlerinden daha ucuz ve çok yönlüdür ve cerrahi yerleştirme hayvanlarda sınırlı iltihaplanma ve sıkıntıya neden olur.

Şeffaf Silikon Pencerelerle Uzunlamasına İntravital Görüntüleme

Protokol, hücre dışı matris viskoelastisitesinin incelenmesi ve protein bileşimine veya çevresel faktörlere bağımlılığı için bir yöntem tanımlamaktadır. Hedeflenen matris sistemi fare zonule'sidir. Yöntemin performansı, vahşi tip zonular liflerin viskoelastik davranışı ile mikrofibril ilişkili glikoprotein-1'den yoksun olanlar karşılaştırılarak gösterilmiştir.

Zonular Liflerin Viskoelastik Özelliklerinin Belirlenmesinde Biyolojik Hazırlık ve Mekanik Teknik

Bu protokol, karmaşık hücreden hücreye interdigitasyonları ve membran mimarisini incelemek için periferik, olgun ve nükleer göz merceği fiber hücrelerini immünofloresan boyama için hazırlama yöntemlerini açıklar.

Göz Merceğinin Korteks ve Çekirdeğinden Demetlerin ve Tek Fiber Hücrelerin Hazırlanması ve İmmünofloresan Boyanması

Mevcut protokoller, oküler lensteki periferik yapıların görüntü niceleme yöntemleriyle görselleştirilmesi için yeni tam montajlı görüntülemeyi tanımlamaktadır. Bu protokoller, lens mikro ölçekli yapıları ile lens gelişimi/işlevi arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için yapılan çalışmalarda kullanılabilir.

Periferik lens yapısını, hücre morfolojisini ve organizasyonunu görselleştirmek ve ölçmek için tam montajlı görüntüleme

Bir kompresyon testi kullanarak bir oküler lensin etkili elastik modülünü karakterize etmek için otomatik bir yöntem sunuyoruz.

Oküler lensin otomatik kompresyon testi

Bu yöntem, katarakt ameliyatını modeller: in vivo yetişkin farelerden lens lifi hücrelerini çıkararak ve bağlı lens epitel hücreleri (LEC'ler) ile kapsül torbasını geride bırakarak. Yaralanma yanıtı daha sonra cerrahi sonrası moleküler ve morfolojik kriterler kullanılarak çeşitli zamanlarda değerlendirilir.

Farelerde Katarakt Cerrahisinin Modellenmesi

Yakın zamanda retina kapiller sertleşmesini diyabetle ilişkili retina disfonksiyonu için yeni bir paradigma olarak tanımladık. Bu protokol, fare retina kılcal damarlarının ve subendotel matrisinin retinal endotel kültürlerinden izolasyon adımlarını detaylandırır ve ardından atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak sertlik ölçüm tekniğinin bir açıklaması yapılır.

Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Sertlik Ölçümü için Fare Retina Kılcal Damarlarının ve Subendotelyal Matriksin İzolasyonu

Bu yöntem, konfokal yansıma mikroskobu kullanarak vitreus gövdesindeki kollajen liflerinin doğal yapısını görselleştirir.

Vitreus kollajen lif ağını görselleştirmek için domuz gözlerinin konfokal yansıma mikroskobuna hazırlanması

Öğrenin fare lenslerinin basınç sertliğini ve geometrisini basit ve ekonomik bir yöntemle değerlendirmeyi. Bu hassas teknik, genetik ve deneysel faktörlerin lens biyomekanik özelliklerine etkisini incelemek için kullanılabilir.

Fare Lens Basınç Sertliği değerlendirin Cam lameller Sıralı Uygulama: Gerilme ve Morfometrik Analizleri

Daha fazla video keşfet