Name: Ilaç keşfi için uygundur EMT araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Keşfedin, nöral kök hücre tabanlı in vitro model ile kanserde epitel-mezenkimal geçişi (EMT) araştırın. Bu yöntem, hücre göçü ve invazyon mekanizmalarını anlamak için ilaç keşfine uygundur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Çalışma MHS ve AG (SNF IZLIZ3_157230) bir hibe ile Basel Bilim Vakfı Üniversitesi ve İsviçre Ulusal Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir. Biz teşekkür ederiz: Dr. Tania Rinaldi Burkat cömertçe altyapının sağlanması için; tartışmalar ve yorumlar için Bettler grubun tüm üyeleri. Biz Gerhard Dorne (Leica Microsystems, İsviçre) Full HD MC170 video kamera profesyonel ve yetkin montaj için (Leica Microsystems, İsviçre) teşekkür ederim.

<ol><li>Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-Mesenchymal+Transitions+in+development+and+disease%3A+old+views+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial-Mesenchymal Transitions in development and disease: old views and new perspectives.</a> Int J Dev Biol. 53, 1541-1547 (2009).</li>
<li>Sauka-Spengler, T., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+regulatory+network+orchestrates+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A gene regulatory network orchestrates neural crest formation.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 9, 557-568 (2008).</li>
<li>Barriere, G., Fici, P., Gallerani, G., Rigaud, M. Mesenchymal Transition: a double-edged sword. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarriere%2C+G+%22Clin+Transl+Med%22">Clin Transl Med</a>. 4, 14(2015).</li>
<li>Zawadzka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS-resident+glial+progenitor%2Fstem+cells+produce+Schwann+cells+as+well+as+oligodendrocytes+during+repair+of+CNS+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">CNS-resident glial progenitor/stem cells produce Schwann cells as well as oligodendrocytes during repair of CNS demyelination.</a> Cell Stem Cell. 6, 578-590 (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Ashwell, K. W. S., Törk, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Atlas+of+the+developing+rat+nervous+system%22">Atlas of the developing rat nervous system</a>. , 2nd edn, Academic Press. (1994).</li>
<li>O'Leary, D. D., Chou, S. J., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Area+patterning+of+the+mammalian+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Area patterning of the mammalian cortex.</a> Neuron. 56, 252-269 (2007).</li>
<li>O'Leary, D. D., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+arealization+of+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of arealization of the neocortex.</a> Curr Opin Neurobiol. 18, 90-100 (2008).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+neural+stem+cells+become+invasive+in+vitro+by+combined+FGF2+and+BMP4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Non-invasive neural stem cells become invasive in vitro by combined FGF2 and BMP4 signaling.</a> J Cell Sci. 126, 3533-3540 (2013).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP2+and+FGF2+cooperate+to+induce+neural-crest-like+fates+from+fetal+and+adult+CNS+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP2 and FGF2 cooperate to induce neural-crest-like fates from fetal and adult CNS stem cells.</a> J Cell Sci. 118, 5849-5860 (2005).</li>
<li>Sailer, M., Oppitz, M., Drews, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cellular+contractions+in+the+human+melanoma+cell+line+SK-mel+28+after+muscarinic+cholinergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Induction of cellular contractions in the human melanoma cell line SK-mel 28 after muscarinic cholinergic stimulation.</a> Anat Embryol (Berl). 201, 27-37 (2000).</li>
<li>Wicki, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+role+of+podoplanin+in+tumour+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The potential role of podoplanin in tumour invasion.</a> Br J Cancer. 96, 1-5 (2007).</li>
<li>Wicki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+invasion+in+the+absence+of+epithelial-mesenchymal+transition%3A+podoplanin-mediated+remodeling+of+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor invasion in the absence of epithelial-mesenchymal transition: podoplanin-mediated remodeling of the actin cytoskeleton.</a> Cancer Cell. 9, 261-272 (2006).</li>
<li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+of+podoplanin+in+malignant+astrocytic+tumors+as+a+novel+molecular+marker+of+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Increased expression of podoplanin in malignant astrocytic tumors as a novel molecular marker of malignant progression.</a> Acta Neuropathol. 111, 483-488 (2006).</li>
<li>Motomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+analysis-based+proteomic+subclassification+of+newly+diagnosed+glioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical analysis-based proteomic subclassification of newly diagnosed glioblastomas.</a> Cancer Science. 103, 1871-1879 (2012).</li>
<li>Kono, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+detection+of+the+lymphatic+marker+podoplanin+in+diverse+types+of+human+cancer+cells+using+a+novel+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical detection of the lymphatic marker podoplanin in diverse types of human cancer cells using a novel antibody.</a> Int J Oncol. 31, 501-508 (2007).</li>
<li>Raica, M., Cimpean, A. M., Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+podoplanin+in+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">The role of podoplanin in tumor progression and metastasis.</a> Anticancer Res. 28, 2997-3006 (2008).</li>
<li>Panchision, D. M., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+neural+stem+cells+by+morphogenic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">The control of neural stem cells by morphogenic signals.</a> Curr Opin Genet Dev. 12, 478-487 (2002).</li>
<li>Lamouille, S., Xu, J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 178-196 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrogenesis+in+the+subventricular+zone+and+the+role+of+epidermal+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Oligodendrogenesis in the subventricular zone and the role of epidermal growth factor.</a> Brain Res Rev. 67, 147-156 (2011).</li>
<li>Hu, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGF-AA+mediates+B104CM-induced+oligodendrocyte+precursor+cell+differentiation+of+embryonic+neural+stem+cells+through+Erk%2C+PI3K%2C+and+p38+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PDGF-AA mediates B104CM-induced oligodendrocyte precursor cell differentiation of embryonic neural stem cells through Erk, PI3K, and p38 signaling.</a> J Mol Neurosci. 46, 644-653 (2012).</li>
<li>Galvao, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+quiescent+adult+oligodendrocyte+precursor+cells+into+malignant+glioma+through+a+multistep+reactivation+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transformation of quiescent adult oligodendrocyte precursor cells into malignant glioma through a multistep reactivation process.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, E4214-E4223 (2014).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+analysis+with+double+markers+reveals+tumor+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic analysis with double markers reveals tumor cell of origin in glioma.</a> Cell. 146, 209-221 (2011).</li>
<li>Das, S., Srikanth, M., Kessler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+and+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clin+Pract+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells and glioma.</a> Nat Clin Pract Neurol. 4, 427-435 (2008).</li>
<li>Modrek, A. S., Bayin, N. S., Placantonakis, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+stem+cells+as+the+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Brain stem cells as the cell of origin in glioma.</a> World J Stem Cells. 6, 43-52 (2014).</li>
<li>Sampetrean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+precedes+tumor+mass+formation+in+a+malignant+brain+tumor+model+of+genetically+modified+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Invasion precedes tumor mass formation in a malignant brain tumor model of genetically modified neural stem cells.</a> Neoplasia. 13, 784-791 (2011).</li>
<li>McNeill, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+astrocytoma+pathogenesis+in+vitro+and+in+vivo+using+cortical+astrocytes+or+neural+stem+cells+from+conditional%2C+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Modeling astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo using cortical astrocytes or neural stem cells from conditional, genetically engineered mice.</a> JoVE. , e51763(2014).</li>
<li>Lara-Padilla, E., Caceres-Cortes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+nature+of+the+tumor-initiating+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">On the nature of the tumor-initiating cell.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 7, 26-35 (2012).</li>
<li>Busch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP-2-dependent+integration+of+adult+mouse+subventricular+stem+cells+into+the+neural+crest+of+chick+and+quail+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP-2-dependent integration of adult mouse subventricular stem cells into the neural crest of chick and quail embryos.</a> J Cell Sci. 119, 4467-4474 (2006).</li>
<li>Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transitions+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease.</a> Cell. 139, 871-890 (2009).</li>
<li>McDonald, O. G., Wu, H., Timp, W., Doi, A., Feinberg, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+epigenetic+reprogramming+during+epithelial-to-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Genome-scale epigenetic reprogramming during epithelial-to-mesenchymal transition.</a> Nat Struct Mol Biol. 18, 867-874 (2011).</li>
<li>Rahimi, R. A., Leof, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+signaling%3A+a+tale+of+two+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">TGF-beta signaling: a tale of two responses.</a> J Cell Biochem. 102, 593-608 (2007).</li>
<li>Xu, J., Lamouille, S., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-induced+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-induced epithelial to mesenchymal transition.</a> Cell Res. 19, 156-172 (2009).</li>
<li>Suva, M. L., Riggi, N., Bernstein, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+reprogramming+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Epigenetic reprogramming in cancer.</a> Science. 339, 1567-1570 (2013).</li>
<li>Sullivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+new+focus+for+stroke+treatment+-+migrating+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">A possible new focus for stroke treatment - migrating stem cells.</a> Expert Opin Biol Ther. , 1-10 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

EMT analizi kullanan NSC&#39;lerde için standart bir sistem tarif edilmektedir Bu çalışmada, (Ek Şekil 3&#39;te özetlenmiştir). Standardizasyon tekrarlanabilirliği (Tablo 1 ve 2) sağlamaktadır. NSC&#39;lerde gelişmekte korteksinden normal EMT uğramayan bir doku elde edilir. Bu EMT erken aşamada analizi için avantajlıdır. EMT içinde ilk adımlar yeterli genetik değişiklikler birikmiş ve zaten EMT özelliklerini benimsemiş olabilir tümör hücrelerinde okudu edilemez. Ayrıca, primer tümör örn...

Embriyonik gelişme birkaç aşamalarında, epitel hücreleri birbirine (örneğin, sıkı kavşaklar) için güçlü bağlılığı kaybeder ve mezenkimal geçiş (EMT) 1 bir süreç olarak adlandırılan epitel bir göçmen fenotip kazanır. EMT gibi mezenkimal nöral tepe hücreleri gibi ek hücre tiplerinin oluşumu neuroepithelium 2 ayıran bir popülasyon için gereklidir. EMT evrelerinde sadece gerekli değil, aynı zamanda lezyonlar 4 demiyelinizan böyle yara iyileşmesi 3 ve merkezi sinir sistemi (MSS) rejenerasyon olarak yetişkin organizmada fizyolojik süreçleri, korumak için yetişkin hayatının ileriki aşamalarında gerekli değildir. Epitelyal tümörler sonuçta kanser oluşumunu 1,3 giden, göç, istila ve metastaz için bir başlangıç ​​adımı olarak EMT yeniden bilinmektedir. EMT gerçekten merkezi güçlü göç 1,3 bağlantılıdır. c hücresel adımlarıonditioning, başlatılması geçiren ve EMT sürdürmek tam olarak anlaşılamamıştır ve daha fazla araştırma ihtiyaç değildir. Burada tanımlanan büyüme faktörleri ve ortam (hiç serum ve enzim) kullanılmasına NSC&#39;lerde göre standart bir in vitro EMT model sistem sunulmuştur. Bu model sistem EMT üzerinde çalışan bilim adamları için öneme sahiptir. Salyangoz, Zeb ve büküm protein aileleri Geliştirme ve hastalık 1 EMT için kritik olduğu gösterilmiştir. Salyangoz, Zeb ve Büküm aileler de sunulan sistemde yer almaktadır. Sistem normal EMT EMT indüksiyon sırasında ilk olayların incelenmesi için özel bir avantaj sağlayarak uğramayan önbeyin belirli bir bölgeye dayanmaktadır. Bu Salyangoz, Zeb ve büküm proteinleri gibi önemli EMT indükleyiciler, aynı zamanda merkezi sinir sistemi dışındaki doku sistemleri EMT sırasında bulunan yana model sistem, potansiyel olarak, merkezi sinir sistemi dışındaki epitelde EMT çalışma uygulanabilir. Bu model sistem, özellikle, kök hücre, genel olarak özellikleri ve EMT çalışma gelişmekte korteksten NSC&#39;lerde standart izolasyon sağlar. Bu sistemi kullanarak, biz, NSC&#39;lerde izole kaynaklı EMT ve FGF2&#39;deki ve BMP4 etkisindeki sonraki göç okudu. Biz FGF- ve böylece model sistem doğrulayarak, hücre göçü teşvik etmek TGFβ-sinyal ile etkileşime BMP-sinyalizasyon görülmektedir.

<table><tbody><tr><td>BMP4, rhBMP4</td><td>RnD Sistemleri&nbsp;</td><td>314-BP-01M</td><td></td></tr><tr><td>Sığır pankreas insülini</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>I1882</td><td></td></tr><tr><td>Boyden odası, CytoSelect hücre istilası testi</td><td>Cell Biolabs</td><td>CBA-110</td><td>24 oyuklu plaka sistemi</td></tr><tr><td>Izgaralı hücre kültürü kabı</td><td>Ibidi 500 mm çanak, 35 mm</td><td>80156</td><td></td></tr><tr><td>CellMask Orange</td><td>Life Technologies</td><td>C10045</td><td>Plazma membran boyası, 1:1.000'de kullanın.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>LifeTechnologies</td><td>D1306</td><td>5 mg / ml'de stok. 1: 10.000'de kullanın. Kanserojen. Uygun koruma (eldiven, mont, gözlük) gereklidir.</td></tr><tr><td>DMEM / F12 1: 1 orta boy şişe</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>21331-020</td><td></td></tr><tr><td>FGF2, rhFGF2</td><td>RnD Sistemleri</td><td>233-FB-01M</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin, sığır</td><td>Sigma ve nbsp;</td><td>F4759</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax takviyesi&nbsp;</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Piksel ölçüm özelliğine sahip grafik yazılımı</td><td>Fiji</td><td>fiji.sc/Fiji</td><td>sürüm 2.0.0-rc-30/1.49s</td></tr><tr><td>HBSS media</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H9394</td><td></td></tr><tr><td>İnsan apo-Transferrin</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td>Olası akciğer tahriş edici. Solumaktan kaçının. Uygun koruma kullanın.</td></tr><tr><td>L-glutamin</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Nestin, Fare anti Nestin antikoru</td><td>Genetex</td><td>GTX26142</td><td>1:100'de kullanım, %4 PFA fiksasyonu, Triton X100 %0.1</td></tr> <tr><td>Olig2'de, Tavşan anti Olig2 antikoru</td><td>Hirohide Takebayash tarafından sağlanmıştır</td><td>Kişisel stok</td><td>1: 2.000,% 4 PFA fiksasyonunda, Triton X100'de% 0.1'de kullanın</td></tr> <tr><td>Penisilin / Streptomisin / Fungizone</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Podoplanin, Fare anti Podoplanin antikoru</td><td>Acris</td><td>DM3614P</td><td>1:250,% 4 PFA fiksasyonunda kullanın, Triton X100</td></tr><tr><td>Poly-L-ornitin</td><td>Sigma'dan</td> kaçının<td>P3655</td><td></td></tr><tr><td>Putresin</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P5780</td><td>Cildi ve gözü tahriş eder. Uygun koruma gereklidir.</td></tr><tr><td>Sodyum selenit</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox10, Tavşan anti Sox10 antikoru</td><td>Millipore Chemicon</td><td>AB5774</td><td>1:200'de, %4 PFA fiksasyonunda kullanın, Triton X100 %0.1'de</td></tr> <tr><td>TGFb1, rhTGFb1</td><td>RnD Sistemleri</td><td>240-B-010</td><td></td></tr><tr><td>Kaplamasız Petri kapları</td><td>Falcon Corning</td><td>351029</td><td></td></tr></tbody></table>

ilaç keşfi için uygundur emt araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli

An Enzyme- and Serum-free Neural Stem Cell Culture Model for EMT Investigation Suited for Drug Discovery

mezenkimal geçiş (EMT) için epitel epitel mezenşimin içine transdifferentiating işlemi anlatılmaktadır. EMT da yaygın, glioblastoma en sık malign beyin tümörü meydana embriyonik gelişim sırasında temel bir süreçtir. EMT, aynı zamanda, göğüs kanseri, akciğer kanseri, kolon kanseri, mide kanseri de dahil olmak üzere beyin dışında çok karsinom gözlenmiştir. EMT merkezi göç, işgali ve metastaz oluşumunu teşvik ederek malignite bağlantılıdır. EMT indüksiyon mekanizmaları tam olarak anlaşılmış değildir. Burada kortikal nöral kök hücre (NSC&#39;lerde) ve daha sonra EMT indüksiyonu standart izolasyonu için in vitro bir sistem tarif eder. Bu sistem tek hücreler veya eksplant kültürü ya da kullanmak için esneklik sağlar. Bu sistemde, sıçan veya fare embriyonik ön beyin NSC&#39;lerde, tanımlanmış bir ortam içinde kültürlenmiş ve serum enzimlerin yoksundur. NSC&#39;lerde oligodendrositlerin gözlenen olig2 ve Sox10 iki transkripsiyon faktörleri olarak ifadeYTE ön-madde hücreleri (OPC). Bu sistemi kullanarak, FGF-, BMP- arasındaki etkileşimler Zeb1, Zeb2 içeren TGFβ-sinyal ve Twist2 TGFβ etkinleştirme önemli ölçüde sinerjistik BMP- / TGFβ-etkileşim olduğunu, hücre göçü geliştirilmiş burada gözlenmiştir. Sonuçlar EMT indüksiyonu ve bakım dahil olmak FGF-, BMP- ve TGFβ-sinyal ağı işaret eder. Bu model sistemi, in vitro EMT araştırmak için uygundur. Bu düşük maliyetli ve yüksek tekrarlanabilirlik göstermektedir. Ayrıca, göç yanıtlara göre (kantitatif mesafe ölçümü) ve inhibe etmek veya EMT (kalitatif ölçümü) geliştirmek için bileşikler yüksek verimli tarama ile farklı bileşiklerin karşılaştırılmasına imkan verir. modeli bu nedenle de EMT etkileyen maddeler için ilaç kütüphaneleri test etmek için uygundur.

Bu EMT model sistem olarak tek hücre ya da gelişmekte olan sinir tüpün belirli bir bölgeden eksplant olarak iki NSC&#39;lerde standart izolasyonuna dayanmaktadır, merkezi korteks (Şekiller 1 ve 2). Nicel değerlendirmesi için, eksplantlar 500 mikron ızgara kültürü çanak (Şekil 3) merkezinde hakkı ekildi. Merkezi korteksten eksplantlar ilk büyüme faktörleri (Tablo 1) farklı kombinasyonları ilave iki gün sonra iki gün FGF2&...

Epitelden mezenkimal geçişe (EMT) kanserlerin invaziv hale gelmesine izin verir. EMT'yi araştırmak için, serum ve enzimlerden yoksun bir nöral kök hücre (NSC) tabanlı in vitro model tanımlanmıştır. Bu standartlaştırılmış sistem, hücre göçünün, gen ve protein ekspresyonunun kantitatif ve kalitatif değerlendirmesine izin verir. Model, ilaç keşfi için uygundur.

Ilaç keşfi için uygundur EMT araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) describes the process of epithelium transdifferentiating into mesenchyme. EMT is a fundamental process during ...

Bu prosedürün genel amacı, tipik olarak göç etmeyen hücrelerde göçü tetiklemek ve göçü aktive eden veya engelleyen spesifik bileşikleri belirlemektir. Bu yöntem, hücre göçü ve invazyonu alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir ve özellikle nöral kök hücrelerle çalışan bilim insanlarının ilgisini çekebilir. Bu tekniğin temel avantajı, göç etmeyen ve invaziv olmayan hücrelerin, göç edici ve invaziv hale gelme süreçleri sırasında analiz edilebilmesidir.Bu tekniğin etkileri, nöral kök hücrelerden türediğine inanılan insan yüksek dereceli gliyomalarda meydana gelen epitelyal-mezenkimal geçişi veya EMT'yi bloke eden yeni bileşiklerin tanımlanmasına kadar uzanmaktadır. Bu yöntem EMT ve nöral kök hücreler hakkında bilgi sağlayabilse de meme, akciğer veya kolon kanseri gibi diğer epitel kanserlerini incelemek için de kullanılabilir. Embriyonik gün 14,5'te, bir sıçan ön ekstremitesinde başlangıç parmak oluşumunun varlığına bakarak sıçan embriyolarının doğru yaşını teyit edin.Ardından embriyoları, stereo mikroskop altına yerleştirilmiş, buz gibi soğuk PBS ile doldurulmuş, kaplanmamış bireysel petri kaplarına aktarın. Embriyonik kabukları çıkarmak için ince uçlu bir pens kul

an-enzyme-serum-free-neural-stem-cell-culture-model-for-emt

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video embriyonik farelerin gelişmekte olan korteks neuroprecursors izolasyonu için kullanılan yöntem açıklanır. , Embriyoların rahim kaldırarak, kortikal doku diseksiyon, ve sindirerek izole serebral korteks prosedür gösterilmiştir.

Fare Nöral Kök Hücre Öncüleri Kültür

Bu video protokolü, embriyonik gün 14-fare beyninde ganglion eminences nöral kök hücrelerin izolasyonu ve genişleme için neurosphere testinin uygulama göstermektedir.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

protokoller, insan embriyonik kök hücreleri ve transcriptome çalışmalarına dayalı iki in vitro gelişimsel toksisite test sistemleri (UKK ve UKN1) açıklar. test sistemleri, insan gelişimsel toksisite tehlike tahmin ve hayvan çalışmaları, maliyet ve kimyasal güvenlik testi için gerekli süreyi azaltmak için katkıda bulunabilir.

Kimyasal Güvenlik Tarama ve Sistem Biyolojisi Veri Üretimi Gelişim Toksisite Tahliller Tabanlı İnsan Pluripotent Kök Hücre

Fare ES hücrelerini, işleyen sinapslar ve ortaya çıkan ağ davranışı sergileyen yüksek saflıkta nöronların tanımlanmış popülasyonlarına ayırmak için özel bir protokol tanımlanmıştır. Elektrofizyolojik analiz, botulinum nörotoksin serotipleri /A-/G ve tetanoz nörotoksinine maruz kaldıktan sonra sinaptik iletim kaybını göstermektedir.

Kök ve Ağ Kültürlerde Biyolojik nörotoksinlerin Fonksiyonel Değerlendirme Merkezi Sinir Sistemi Nöronlar Hücre-türetilmiş

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Bu protokol, serum içermeyen tek katmanlı bir yöntem kullanarak embriyonik kök hücrelerden nöral progenitörler üretme yöntemini ayrıntılı olarak açıklar. Bu progenitörler, olgun nöral hücre tiplerini türetmek veya nöral spesifikasyon sürecini incelemek için kullanılabilir ve bileşik tarama için çok kuyulu format ölçeklendirmesine uygundur.

Serum serbest Tek tabakalı Kültüründe Fare Embriyonik Kök Hücre Sinir Farklılaşma

Burada, insandan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (hiPSC) serum serbest embriyo gövdesi (SFEB) denilen üç boyutlu (3 boyutlu) bir sistem geliştirmek için bir protokol bildirdik. Bu 3 Boyutlu model, insan kortikal gelişimini modellemek için organotipik dilim kültürü gibi ve gelişmekte olan sinir devrelerinin fizyolojik sorgusu için kullanılabilir.

Fizyolojik Olarak İlgili Tahliller Kullanılarak 3-D Kök Hücre Kültürlerinin Sorgulanması İçin HiPSC Türevi Serum Serbest Embriyoid Cisim Geliştirilmesi

Burada sunulan insan embriyonik kök hücrelerinin tek hücreli kültür ve nöral progenitor hücrelere sonraki farklılaşma için bir protokoldür. Protokol basit, sağlam, ölçeklenebilir ve ilaç tarama ve rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinin Tek Hücre Kültürünü Kullanarak Etkin Nöral Farklılaşma

Burada embriyonik kök hücrelerden nöronlara hızlı ve verimli farklılaşmayı yönlendiren düşük maliyetli ve kullanımı kolay bir yöntem kurduk. Bu yöntem laboratuvarlar arasında popülerleşmeye uygundur ve nörolojik araştırmalar için yararlı bir araç olabilir.

Fare Embriyonik Kök Hücre in vitro nöronal farklılaşma

Keşfedin, nöral kök hücre tabanlı in vitro model ile kanserde epitel-mezenkimal geçişi (EMT) araştırın. Bu yöntem, hücre göçü ve invazyon mekanizmalarını anlamak için ilaç keşfine uygundur.

Ilaç keşfi için uygundur EMT araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli

Daha fazla video keşfet