Geliştirilmiş Hücre yapışma Politetrafloroetilen Islak Kimya ve Peptit İmmobilizasyonu

Bu prosedürün genel amacı, çiçek karbon polimeri politetrafloroetilen veya PTFE için ıslak kimya bazlı bir yüzey işlemi sağlamaktır. Bu yöntem, tıbbi polimerlerin biyo-uyumluluğunun nasıl geliştirileceği gibi biyomalzemeler alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, sadece minimum ekipman gerektirmesi ve yöntemin diğer yöntemlere kıyasla daha genel olarak uygulanabilir olmasıdır.

Sodyum naftalinit çözeltisinin hazırlanması kesinlikle anhidröz koşullara ihtiyaç duyar. Çözünmeyi artırmak için 0.25 gram sodyum metalini küçük parçalar halinde kesin. Sodyum metalini, PTFE kaplı manyetik karıştırma çubuğu ile donatılmış, vidalı kapaklı 100 mililitrelik bir cam şişede 20 mililitre tetrahidrofuran içinde 1.4 gram naftelin çözeltisine ekleyin.

Çözünmeyi daha da arttırmak için çözeltiyi ılımlı bir şekilde ısıtın. Nihai çözelti koyu, hafif yeşilimsi bir renge sahiptir ve kesinlikle kuru koşullar altında saklanabilir. 0,5 milimetre kalınlığındaki folyo malzemeden 12 milimetre çapındaki PTFE diskleri delin

Bir tarafı işaretleyin ve temiz izo-propanoldür. PTFE örneklerini forseps kullanarak aktive edici çözelti içinde bir ila iki dakika ayrı ayrı inkübe edin. Beyazdan koyu kahverengiye renk değişimi tedavinin başarılı olduğunu gösterir.

Daha sonra iki kez THF ile ve ardından izo-propanol ile durulayın. İşlem görmüş numuneleri üç saat boyunca %20 trikloroasedik asit içeren %30 hidrojen peroksit içinde oksitleyin. Su ile yıkayın ve kurulayın.

Yüzey şimdi hafif kahverengimsi bir görünüme sahiptir. Oksitlenmiş diskleri iki saat boyunca kuru THF'de% 50 HMDI ile muamele edin. Daha sonra THF ile durulayın ve kurumaya bırakın.

Son olarak, izo-siyanat taşıyan numuneleri iki ila üç saat suda hidrolize edin ve kurutun. Her bir aminasyonlu diski, işaretli tarafı yukarı bakacak şekilde 24 oyuklu bir plakanın ayrı oyuklarına yerleştirin. Numunelerin tam olarak kaplanmasını sağlamak için 1,5 mililitre epoksit çözeltisi ekleyin.

İki saat inkübe ettikten sonra, iki kez su ile ve bir kez karbonat tamponu ile yıkayın. Taze bir 24 oyuklu plakanın tek tek kuyucuklarının diplerine, mililitre peptit başına 50 mikrolitre 0.5 miligram ve% 0.1 sodyum azid içeren 50 milimolar karbonat tamponu, pH dokuz ekleyin. Epoksi ile işlevselleştirilmiş diskleri, peptit çözeltisinin damlalarının üzerine baş aşağı dikkatlice yerleştirin.

Bir kuyu dibi ile PTFE disk arasındaki boşluğun, kılcal hareket nedeniyle tamamen ıslandığından emin olun. Plakayı en az üç saat veya gece boyunca nemlendirilmiş bir atmosfere sahip ıslak bir odada inkübe edin, bu da odanın dibine ıslak kağıt mendil yerleştirerek elde edilir. İnkübasyondan sonra üç kez su ile yıkayın ve% 50 izo-propanol suda en az 30 dakika sterilize edin.

Hücre tohumlamadan önce, metin protokolünde açıklandığı gibi, numuneleri steril fosfat tamponlu tuzlu su içinde durulayın. Önemli kimyasal reaksiyon adımlarının sonuçları kızılötesi spektroskopi ile izlendi. Sodyum naftalamid ile ilk aktivasyon, çift bağlar ve küçük bir ölçüde hidroksil işlevleri oluşturur.

Karbon çift bağlarını gösteren sinyal, oksidasyon üzerine kaybolur ve neredeyse yalnızca hidroksil grupları taşıyan bir yüzey verir. Aktivasyon ve oksidasyona bağlı renk değişimleri beklenen kimya ile uyumludur. Konjuge çift bağlama sistemlerinin kahverengimsi olması beklenir ve çift bağlama sistemlerinin kaybı parlamaya neden olur.

Ek olarak, yüzey morfolojisi üzerindeki aktivasyon ve oksidasyonun olası sonucu, taramalı elektron mikroskobu ile araştırıldı. Tedavinin neredeyse hiçbir zararlı etkisi gözlenmedi. Endotel hücre adeziv peptit, arginin, glutamin, aspartik asit valinin polimer yüzeyine immobilizasyonu endotel hücre büyümesini destekler.

İşlenmemiş materyal üzerinde hemen hemen hiç hücre yapışması ve proliferasyonu meydana gelmezken, modifikasyon iki haftalık bir süre boyunca kolonizasyonu güçlü bir şekilde destekler. Klinik bir uygulama için örneklenen modifikasyon, bir haftalık bir süre boyunca benzer sonuçlarla genişletilmiş PTFE'den yapılmış ticari olarak temin edilebilen bir greftten elde edilen orijinal materyal üzerinde aynı şekilde gerçekleştirildi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik yaklaşık 12 saat sürer.

Bu işlemin PTFE'ye özel olduğu unutulmamalıdır. Bu videoyu izledikten sonra, PTFE'yi nasıl aktive edeceğinizi ve sonraki adımlarda peptitleri nasıl hareketsiz hale getireceğinizi iyi anlamalısınız. Bu prosedürü takiben, polisakkaritler veya kordon faktörleri gibi diğer moleküller de benzer şekilde immobilize edilebilir.

Yüksek derecede toksik ve aşındırıcı kimyasallarla çalışmanın tehlikeli olduğunu ve standart önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.