Name: Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Öğrenin, Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinde GFP eksprese eden pankreas kanseri hücrelerinin ortotopik implantasyonunu. Bu model, canlı hayvanlarda tümör ilerlemesinin invaziv olmayan görüntülenmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Batı Sağlık Bilimleri Üniversitesi'ne Intramural Hibe için teşekkür ederiz.

Aşağıda açıklanan protokol rehberlik ve Batı Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu onayı altında yürütülür. Bütün deneyler ilgili tüm kurallar, yönetmelik ve düzenleyici kurumlar ile uyumlu yapılmaktadır. 1. Hücre Kültürü <ol><li> Komple ortam hazırlanması <ol><li> Sınıf biyolojik güvenlik kabini kullanılarak aseptik olarak RPMI medyum 500 ml&#39;lik bir şişeye fetal sığır serumu (FBS) ve penisilin streptomisin (P / S) eklenerek tam bir ortam hazırlar. dönen hafifçe karıştırın. Her bir ek nihai konsantrasyonu% 10 FBS ve% 1 P / S (hac / hac). Örneğin, 56 ml FBS ve 6 ml P / S ile medya 500 ml tamamlar. </li><li> 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde tam orta yerleştirin. </li></ol></li><li> Çözülme ve yayılan Hücreler <ol><li> sıvı azot PANC-1 GFP hücreleri alın. 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde yavaşça sallanarak şişe çözülme. Not:(- 3 dakika, yaklaşık 2) Çözülme hızlı olmalıdır. </li><li> Etiket, T-75 şişeler, (a) hücre hattı adı, (B) geçiş sayısı, (c) güncel, ve (d) Araştırmacının baş ile birlikte kullanılmak üzere. </li><li> Bir Biyogüvenlik kabini için% 70 etanol ve transfer flakon ile flakon silin. </li><li> Hücreler yaymak 15 ml konik tüp tam orta 9.0 ml ekleyin. 1.0 ml pipet kullanarak dikkatli bir şekilde hücre süspansiyonu transferi ve tam ortam 9 ml asın. </li><li> Oda sıcaklığında 8 dakika boyunca 125 x g&#39;de santrifüjleyin. Bir biyogüvenlik kabini konik flakon transfer ve pelet bozmadan süpernatant aspire. </li><li> hafifçe yukarı ve aşağı süspansiyon pipetleme taze tamamlanmış besiyeri 10 ml pelet askıya. </li><li> Bir hemasitometre ile hücre sayımı 2.1 x 10 6 hücre / şişe yoğunluğunda, T-75 şişelerinde bunları plaka. 37 ° C&#39;de bir inkübatör içine yerleştirilir ve% 5 CO2. </li><li> gözle ve mikroskopla günlük hücreleri izleyin. grip iseyenileme gerekli id, aseptik şişesi tam büyüme ortamı aspire ve atın. Taze tam orta eşit miktarda ekleyin. </li></ol></li><li> Hücreler yayılan <ol><li> Aseptik olarak şişesi bulunan ortamı çıkarın. hücreleri durulayın ve atmak için Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) içinde 5 ml. </li><li> % 0.25 tripsin 3 ml ekleyerek şişeden hücreler ayırın. 5 ila 10 dakika boyunca 37 ° C&#39;de tripsin ve% 5 CO2 ihtiva eden bir şişeye inkübe edin. </li><li> mikroskobu (10X büyütme) altında hücreleri gözlemleyin ve yuvarlak ve yerinden sağlamak. </li><li> tam orta eşit hacimde ekleyerek tripsin nötralize ve yavaşça yukarı ve aşağı pipetleme öbekler kırmak. </li><li> Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve 1.2.7 belirtilen hücre yoğunluğunda yeni şişelere uygun hücre süspansiyonu hacmi aktarmak; son hacim şişesi başına 10 ml olacak şekilde yeterli taze medya ekleyin. </li></ol></li><li> hücre SuspensEnjeksiyon için iyon Hazırlık Not: bazal membran matrisi yüksek konsantrasyonu, oda sıcaklığında katılaşan için, buz üzerinde tüm malzemeleri tutmak. gece boyunca dondurucuya tüm steril pipet uçları ve şişeleri yerleştirin ve süspansiyon üzerinde çalışırken buz üzerinde tutmak. <ol><li> buz üzerinde hiçbir katkı maddesi olmadan RPMI medya bir şişe tutun. Üreticinin talimatlarını takip ederek bazal membran matrisi, yüksek konsantrasyon, çözülme. Tercihen, küçük şişeleri içine kısım birden donma-çözülme döngüleri 10 önlemek için. </li><li> Aspire Bütün şişeler ortam ve DPBS 5 ml ile yıkayın. 1.3.4 adıma bir önceki bölümünde tüm adımları tekrarlayın. </li><li> Oda sıcaklığında 8 dakika boyunca 125 x g&#39;de 15 ml konik bir tüp ve santrifüj aktarın. Biyogüvenlik kabini konik flakon transfer ve DPBS 10 ml kullanılarak pelet yeniden askıya. </li><li> Yavaşça pelet kırmaya yukarı ve aşağı süspansiyonu pipetle. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. </li><li> s belirtilen daha santrifüj1.4.3 TEP. Süpernatant aspire ve hücrelerin sayısına bağlı olarak, 50 ul bir hacmi içine 3 x 10 6 hücre elde etmek için uygun bir seyreltici ekleyin. 1 (h / h) oranında bir seyreltici 1 serum barındırmayan ortam ve yüksek konsantrasyonu temel matris dokunun bir karışımı olacaktır. </li><li> nazikçe süspansiyon vorteks ve her zaman buz üzerinde tutmak. Süspansiyon enjeksiyon için hazırdır. </li></ol></li><li> cerrahi İmplantasyon Not: Tüm cerrahi malzemeler ve aletler steril olduğundan emin olun. Her zaman aseptik teknikler uygulayın. <ol><li> Masanın üzerinde bir ısıtma yastığı yerleştirin ve steril bir örtü ile kaplayın. Anestezi Makinenizi kurup tüm malzemeleri kol ulaşılabilecek olmasını sağlamak. </li><li> Anestezi maskesi içine hayvanın burun yerleştirin ve oksijen 1 L / dk ve% 2.5 izofluran anestezi kurmak. </li><li> Yavaşça iyot ile hayvanın kanadını fırçalayın ve% 70 etanol ile durulayın. üç kez tekrarlayın. </li><li> onaylamakHayvan tamamen arka pençe kısma anestezi uygulandı. cevap görülmektedir eğer hayvan cerrahisi için tam anestezi ve hazırdır. Ancak, hayvan kaçınmaları halinde, buharlaştırıcı yeterli anestezi olmadığından emin ve hayvana anestezi altında tamamen gitmek için daha fazla zaman tanıyın. </li><li> Yükü yaklaşık 18 G iğne ile bir 1.0 ml TB enjektöre hücre süspansiyonu 200 ul (daha önce soğutulmuş). 27 G iğne ile iğne değiştirin ve Kullanıma hazır olana kadar buz dönün. </li><li> Dalağın genel alan (karnın sol üst kadran) bulun ve kullanan forseps o bölgenin üstünde cilt çimdik. cerrahi makas, yaklaşık 1.0 cm&#39;lik bir kesi yapmak kullanarak bir cep oluşturmak için. Benzer şekilde, dalak üzerine düz kas tutam ve periton boşluğu erişmek için kesilmiştir. </li><li> Yavaşça dalağın kaudal ucunu yakala ve vücudun dışına doğru çekin. Pankreas dalak eklenecektir. ıslak st kullanarak pankreas yaymakerile Q-tip pankreas kuyruk bulun ve. </li><li> pankreas kuyruğunda içine 50 ul enjeksiyon sunun, 10 saniye boyunca içeride iğne bırakın ve yavaş yavaş pankreas dışına iğne döndürün. Başarılı bir implantasyon herhangi bir sızıntı olmadan yüzeysel balonu gibi görünecek. </li><li> periton boşluğuna pankreas ve dalak geri dönün. İlk kas içine ve daha sonra ayrı ayrı cilt içine alın. insizyon kapatmak için 6-0 sütür veya zımba kullanın. Yönetici ketoprofen deri altından (SC) (5 mg / kg) 24 saat boyunca, bir hayvanda ağrı önlemek için. (- 0.1 mg / kg 0.05) 36 saatlik bir süre boyunca her 12 saat Seçenek olarak ise, buprenorfin sc verilmesi. </li><li> anestezi hayvan kurtarmak ve kendi kafesine geri. Ayrıca ağrı için monitör. cerrahi - Hayvanlar (Rüçhan hatta önce) sırasında ağrı kesici sağlanmalıdır. Ek ağrı kesici de öngördüğü şekilde IACCUC-protokole göre veya ağrı hayvanlara sağlanmalıdırveteriner veya designee otlatırken. </li></ol></li><li> İn vivo Not: Görüntü yakalama bir karanlık oda ve GFP görüntüleme için uygun filtreler ile donatılmış bir ticari bir görüntüleme sistemi kullanılarak yapıldı. (: -;: 513-557 nm emisyon 495 nm 455 uyarma) görüntü elde etme, bir CCD kamera ve değiştirilebilir uyarma / emisyon lensten oluşan bir optik sistem kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Parlak alan görüntüleri her zaman noktası için 1 x 1 binning bir filtre olmadan ele geçirildi. GFP Uyarma Xenon bantlı ışık kaynağı kullanılmıştır. Hayvanlar görüntüleme sisteminin karanlık odacıktan entegre bir gaz anestezi manifolduna anestezi makinesi bağlayarak görüntüleme işlemi boyunca anestezi altında muhafaza edilmiştir. <ol><li> 1.5.2 tarif edilen hayvan anestezisi. Bir anestezi maskesi görüntüleme sırasında anestezi altında hayvan tutmak için ticari görüntüleme sisteminin karanlık odanın iç olduğunusüreç. </li><li> Doğru uyarma ve emisyon filtreleri ayarlayın. </li><li> sadece beyaz ışık kullanarak bir başlangıç ​​görüntü alarak başlayın. görüntüleme oturum boyunca hayvanın aynı pozisyonda tutmak ve ikinci bir görüntü almak için GFP filtreler geçin. </li><li> En iyi sonuçları her iki görüntüleri üst üste. Floresan alan ve yoğunluğu görüntüyü analiz. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf">http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf</a> (2014).</li>
<li>Smyth, E., Cunningham, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmyth%2C+E+%22Harrison%27s+Principles+of+Internal+Medicine%22">Harrison's Principles of Internal Medicine</a>. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).</li>
<li>Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+borderline+resectable+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastrointest+Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of borderline resectable pancreatic cancer.</a> World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).</li>
<li>De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of pancreatic cancer.</a> Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).</li>
<li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+mouse+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Maximizing mouse cancer models.</a> Nat Rev Cancer. 7, 645-658 (2007).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts%3A+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multiple+uses+of+fluorescent+proteins+to+visualize+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo.</a> Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).</li>
<li>Jiang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+orthotopic+pancreatic+cancer+mouse+model%3A+cells+suspended+and+injected+in+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel.</a> World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).</li>
<li>Arranz, A., Ripoll, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+optical+imaging+for+pharmacological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Advances in optical imaging for pharmacological studies.</a> Front Pharmacol. 6, 189(2015).</li>
<li>Corning. Corning Matrigel Matrix: Frequently Asked Questions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf">http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf</a> (2013).</li>
<li>Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+serial+selection+of+human+pancreatic+cancer+cells+in+orthotopic+mouse+models+produces+high+metastatic+variants+irrespective+of+Kras+status%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status.</a> J Surg Res. 184, 290-298 (2013).</li>
<li>Kim, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+orthotopic+and+heterotopic+human+pancreatic+cancer+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).</li>
<li>Katz, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+efficacy+of+adjuvant+cytosine-analogue+CS-682+in+a+fluorescent+orthotopic+model+of+human+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer.</a> Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).</li>
<li>Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+optical+imaging+of+primary+tumor+growth+and+multiple+metastatic+events+in+a+pancreatic+cancer+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model.</a> Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Böylece in vivo floresan görüntüleme (Şekil 1) bütün vücudu kullanılarak tümör büyümesinin non-invaziv izleme sağlayan GFP ifade pankreas kanseri ortotopik fare modeli açıklanmaktadır. Bu teknik, gerçek zamanlı olarak tümör gelişimini izlemek için bize izin verir (Şekil 3); araştırmacıların pankreas kanserine karşı yeni ajanların etkinlikleri incelemek için önemli bir araç olabilir. Bu modelin bir diğer önemli yönü, GFP flöresanmm, başarılı bir implantasyon ve pankreas...

Pankreas kanseri, diğer kanserler göre artan sıklıkta tanı ve ABD&#39;de kansere bağlı ölümlerin 4. önde gelen nedenidir edilir. Tanı zaman, hastaların% 90 üzerinde beş yıl 1,2 içinde ölmektedir. Şu anda, cerrahi tümör çıkarılması pankreas kanseri için tek çare olduğunu, ancak hastaların% 20 den az, çünkü hastalığın ileri bir aşamada olduğunu ve 3,4 metastas yapmış tanı anında başta ameliyat için uygundur. spesifik semptomların olmaması pankreas kanseri sessiz hastalık yapar; bazı belirtilerin karın ağrısı, sırt ağrısı, iştahsızlık, sarılık ve bulantı kaybı arasında; hangi kolayca ortak sindirim hastalıkları 4 olarak yorumlanabilir. Bu nedenle, pankreas kanseri tanı ve tedavisinde yardımcı olmak için yeni farmakolojik araçlar geliştirmek önemlidir. hayvan modellerin kullanımı Pankreas biyolojisinin anlaşılmasında bize izin veriratic kanseri ve insanlara bu bilgiyi uygulayarak içine bir bakış açısı sağlar. Tümörler köken 5 organ büyümesi nedeniyle pankreas kanseri ksenograft ortotopik modelleri, gerçekçi. Hücre çizgileri veya tümör fragmanları deri altından implante heterotopik modelleri, aksine, ortotopik modelleme çevresi 6 tümörün mikro ve taklit tümör hücrelerinin etkileşimini dinlenme sağlar. Burada açıklanan ksenograft modeli, genetik olarak, yeşil floresan proteini (GFP) ifade etmek üzere geliştirilen insan pankreas kanseri hücre çizgisi Panc-1 GFP ile ilgili tümörleri gelmektedir. GFP algılama non-invazif görüntüleme ve tümör büyümesi ve metastaz 7 izlenmesi için olanak sağlar. Tümör gelişimi kendiliğinden hızla oluşur ve yakın insan pankreas kanser hastalarında 8 birincil tümörlerin benzemektedir. Ortotopik model ise, terapötik maddeler karşılık olarak ilaç etkinliğinin daha doğru bir tahmintümör mikro taklit. Yukarıda sözü edildiği gibi, bu hayvan modeli gerçek zamanlı olarak, tümör büyümesi ve metastazın flüoresan tespit edilmesine olanak sağlar. Floresan algılama lüminesans kıyasla daha doğrudan / canlı görüntüleme için izin verir. floresan ile yayılan ışık, bir kısa dalga boylu bir başka ışık tarafından uyarılmasının bir sonucu olduğu; ışıma oysa yayılan ışık bir kimyasal reaksiyon sonucu ve güçlü emisyon 9 olmayabilir. Ayrıca, in vivo flüoresan görüntüleme tüm vücut hayvana zararlı değildir ve araştırmacılar terapötik uygulamaya yanıt olarak, zaman içinde, tümör büyümesini izlemek için olanak sağlar.

<table><tbody><tr><td>RPMI media 1640</td><td>Caisson Labs</td><td>RPL03-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10437-077</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin ve nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC bazal membran, yüksek konsantrasyonlu</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>SutureVet PGA 6-0 PGA</td><td>Henry Schein</td><td>39010</td><td></td></tr><tr><td>Alcare veya Köpüklü Antiseptik El</td><td>Ovucu Steris</td><td>639680</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dubelcco'nun Fosfat Tamponlu tuzlu suyu)&nbsp;</td><td>Thermo Ficher Sci 21300025</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TB Şırınga 27 G 1/2</td><td>Becton Dickinson</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Blutler Schein</td><td>50562</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Hayvan Sağlığı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Makası, 5.5" düz mayonez&nbsp;</td><td>Henry Schein</td><td>22-1600</td><td></td></tr><tr><td>PANC-1 GFP hücre hattı&nbsp;</td><td>Anticancer, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Görüntüleme Sistemi: iBox Scientia</td><td>UVP, LLC. Upland, CA.</td><td></td><td>Canlı hayvanlarda floresan tümörü gözlemlemek için Küçük Hayvan Görüntüleme Sistemi</td></tr></tbody></table>

pankreas kanseri floresan ortotopik fare modeli



Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pankreas kanseri sağkalım son birkaç on yıl içinde önemli ölçüde artmadı hangi kanser biridir. Sadece tanısı alan hastaların% 7&#39;si beş yıldan daha uzun yaşayacak. anlamak ve pankreas tümörlerinin mikro-taklit etmek için, gerçek zamanlı olarak, tümör ilerlemesinin invazif olmayan görüntüleme sağlar pankreas kanseri bir murin ortotopik bir model kullanılabilir. Yeşil floresan proteini (Panc-1 GFP) ifade Pankreas kanseri hücrelerinin (örneğin, Matrigel HC) serumsuz ortam ile ve daha sonra hastaya da pankreas kuyruk enjekte bazal membran matrisi yüksek konsantrasyon içinde süspansiyon haline getirildi. bu sırada oda sıcaklığına ulaştıktan sonra yüksek konsantrasyonda bazal membran matris içinde hücre süspansiyonu, jel benzeri bir madde olur; Enjeksiyon bölgesinde bir sızdırmazlık oluşturmak ve herhangi bir hücre sızıntısını önlemek, pankreas ile temas, bu nedenle, bu jelleri. diğer organlara tümör büyümesi ve metastaz canlı izlenirfloresan kullanılarak hayvanlar. GFP uyarma ve emisyon için uygun bir filtre kullanımı için çok önemlidir. Araştırmacılar kolayca çıplak farelerde prosedürü çoğaltmak böylece ortotopik implantasyon için adımlar Bu makalede ayrıntılı olarak verilmiştir. Bu protokol ana adımları in vivo görüntüleme hücre süspansiyonu hazırlanması, cerrahi implantasyon ve tüm vücut floresan. Bu ortotopik model, primer ve metastatik tümörler üzerinde yeni tedavilerin etkinliğini araştırmak üzere tasarlanmıştır.

Bu yöntem, enjeksiyon, kemirgenler için uygun anestezi laparotomi ile hücre süspansiyonu verilmesi için, hücre süspansiyonunun hazırlanması odaklanarak, floresan insan pankreas kanser hücrelerinin cerrahi ortotopik implantasyon tarif eder ve floresan in vitro küçük hayvan görüntüleme kullanımı. Iki ve üç hafta arasında bir yeşil floresan sinyali (GFP sinyali) implantasyon sonrası tespiti, gelişmekte olan pankreas kanseri tümörünün (Şekil 1) varlığını doğrulamak ...

Tümör ilerlemesini ve metastazı değerlendirmek için yeşil floresan protein eksprese eden pankreas kanseri hücrelerini (PANC-1 GFP) Ortotopik olarak Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinin pankreasına implante etmek için bir prosedür burada sunulmaktadır.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Bu prosedürün genel amacı, canlı bir hayvanda non-invaziv olarak izlenebilen floresan pankreas kanserinin bir fare ortotopik modelini geliştirmektir. Bu model, ilgilenilen spesifik bir ilacın etkilerinin, canlı bir hayvandaki primer tümör ve metastazı üzerinde non-invaziv olarak incelenmesine olanak tanır. Bu tekniğin temel avantajı, tedavilerin etkilerinin in situ olarak kolayca gözlemlenebilmesidir.Üretici talimatlarına uygun olarak yüksek konsantrasyonlu Matrigel'in bir aliquotunu çözerek başlayın. Ardından, hücrelerin bulunduğu her bir flaskı beş mililitre DPBS ile yıkayın ve kültürleri tripsin ile hasat edin. RPMI ortamı ekledikten sonra, elde edilen hücre süspansiyonlarını 15 mililitrelik tüplere aktarın ve hücreleri çöktürmek için santrifüjleyin.Santrifüj işlemi bittiğinde hücreleri biyogüvenlik kabinine aktarın ve peletleri, nazikçe pipetleme yaparak 10 mililitre taze DPBS içinde yeniden süspande edin. Sayım işleminden sonra hücreleri tekrar santrifüjleyin ve hücre süspansiyonlarını, buz gibi soğuk, serumsuz ortam ve yüksek konsantrasyonlu bazal membran matrisi olan Matrigel karışımı kullanılarak 50 mikrolitrede üç x 10⁶ hücre konsantrasyonuna seyreltin. Ardından, numuneler

fluorescent-orthotopic-mouse-model-of-pancreatic-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Video, pankreas kanseri gelişimi için kanserli bir donörden kanserli olmayan bir alıcı farenin pankreasına bir tümör parçasının ortotopik implantasyonu için aşamalı bir cerrahi yöntemi açıklamaktadır. Ortopedik olarak implante edilen PDAC, insan pankreas kanserlerinin doku mikroçevresini geleneksel deri altı (SC) modellere göre daha doğru bir şekilde yeniden yakalayabilir.

Ortotopik Homogreft Tümör Transplantasyonu: Pankreas Tümörü Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Bu video, yeşil floresan proteini eksprese eden pankreas kanseri hücrelerinin farenin pankreasına ortotopik olarak implante edilmesi için protokolü göstermektedir. Ortotopik fare modeli, yeni terapötiklerin primer ve metastatik tümörler üzerindeki etkinliğinin araştırılmasına yardımcı olur.

Floresan Ortotopik Fare Modeli: İn Vivo Tümör İlerlemesini Değerlendirmek için GFP İfade Eden Kanser Hücrelerinin Fareye İmplante Edilmesi

Bu video, lokalize hücre iletimi için Matrigel ve tümör ilerlemesinin non-invaziv izlenmesi için in vivo biyolüminesans görüntüleme kullanan ortotopik bir pankreas kanseri modelini göstermektedir. Ortotopik model hem sinjeneik hem de ksenogreft modelleri için uygundur ve yeni anti-kanser terapötiklerinin primer pankreas tümörü ve metastazı üzerindeki etkisini araştırmak için klinik öncesi çalışmalarda kullanılabilir.

Biyolüminesan Ortotopik Pankreas Kanseri Fare Modeli: Farelerde Kanser İlerlemesini İzlemek İçin İnvaziv Olmayan Bir Teknik

Pankreas kanseri biyoloji Geliştirilmiş anlayış eleştirel pankreas kanseri tedavisi için daha iyi tedavi seçeneklerinin gelişimi için gereklidir. Bu ihtiyacı karşılamak için, bizim kullandığımız kanser ilerlemesi non-invazif izleme izin pankreas kanseri ortotopik modeli...

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Bu protokolün amacı, farelerde ortotopik pankreas tümörü ksenogreftleri için dinamik kontrastlı manyetik rezonans görüntüleme (DCE-MRG) uygulamaktır. DCE-MRG, hedef dokudaki mikrovasküler sistemi analiz etmek için invaziv olmayan bir yöntemdir ve yeni bir tedaviyi takiben bir tümörde vasküler yanıtı değerlendirmek için yararlıdır.

Ortotopik Pankreas Kanseri Fare Modeli Dinamik Kontrast Geliştirilmiş Manyetik Rezonans Görüntüleme

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Biz doğrudan yerli tümör bölgesine mürin türetilmiş pankreas duktal adenokarsinom hücre hatlarının ultrason güdümlü implantasyonu için bir protokol açıklar. Bu yaklaşım, enjeksiyondan sonraki 2-4 hafta içinde ultrason taraması ile saptanabilen pankreas tümörlerinin saptanmasıyla sonuçlandı ve cerrahi ortotopik implantasyona kıyasla periton duvarındaki tümör hücre tohumlama oranını önemli ölçüde azalttı.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

Klinik bağlamda lokalize pankreas kanseri olan hastalar pankreastektomi ve ardından adjuvan tedavi görecektir. Burada bildirilen bu protokol, pankreas kanserinin ortotopik implantasyonu ve ardından distal pankreasektomi ve splenektomi yoluyla çıplak farelerde bu klinik senaryoyu modellemek için güvenli ve etkili bir yöntem oluşturmayı amaçlamaktadır.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

Pankreasın in vivo yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi pankreas intravital görüntüleme penceresi ile kolaylaştırıldı.

Pankreas intravital görüntüleme penceresine sahip bir Murine Modelinde Pankreasın Stabilize Boyuna In Vivo Hücresel Düzey Görselleştirmesi

Pankreatik duktal adenokarsinomun (PDAC) sinjenik fare ortotopik allogreftleri, hastalık alt tiplerinin biyolojisini, fenotiplerini ve terapötik yanıtlarını özetler. Hızlı, tekrarlanabilir tümör progresyonları nedeniyle, preklinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadırlar. Burada, pankreasa sinjenik murin PDAC kültürleri enjekte ederek bu modelleri oluşturmak için ortak uygulamalar gösteriyoruz.

Pankreas Kanserini Modellemek için Sinjenik Fare Ortotopik Allogreftleri

Evlat edinen hücre transferi için farelerden alınan tümör infiltre lenfositleri (TIL'ler) akış sitometrisi yoluyla kullanmak için bir yöntem tanımladık. Bu protokol, sinjeneik pankreas kanseri fare modelinde tümörlere karşı TIL'lerin spesifik sitotoksisitesini doğrulamayı ve pankreas kanseri için evlat edinen hücre tedavilerinin geliştirilmesine ilişkin içgörüler sağlamayı amaçlamaktadır.

Pankreas Kanserinin Bir Fare Modelinde Tümör İnfiltre Eden Lenfositlerin Flow Sitometri Tabanlı İzolasyonu ve Terapötik Değerlendirmesi

Öğrenin, Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinde GFP eksprese eden pankreas kanseri hücrelerinin ortotopik implantasyonunu. Bu model, canlı hayvanlarda tümör ilerlemesinin invaziv olmayan görüntülenmesini sağlar.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Daha fazla video keşfet