Name: Tedavi Uygulamaları için bir alet olarak RGD-fonksiyonelleştirilmiş Hidrojeller Sentezi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Keşfedin RGD-fonksiyonelleştirilmiş hidrojellerin sentezini; bakır katalizli reaksiyon ve mikrodalga destekli polikondensasyon ile hücre canlılığını artırarak doku mühendisliği ve omurilik yaralanması tedavileri için yenilikçi uygulamalar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar dil düzenleme için verimli bir tartışma Prof. Maurizio Masi ve Miss Chiara Allegretti teşekkür etmek istiyorum. Yazarların araştırma Bando Giovani Ricercatori 2010 (Ministero della Salute GR-2010- 2312573) tarafından desteklenmektedir.

Not: Alınan olarak kimyasallar kullanılmaktadır. Linear RGD satın alınan, ancak standart Fmoc katı faz peptit sentezi 16,19 ile hazırlanabilir. Çözücüler, analitik sınıftadır. Diyaliz kesme eşittir 3,500 Da W M zarın kullanımını gerektirir. Sentezlenen 1 400 MHz spektrometre kullanılarak kloroform kaydedilmiş &#39;H NMR spektrumu (CDCI3) ya da çözücü madde olarak döteryum oksit (D 2 O) ile karakterize edilir, ve kimyasal kaymalar, milyon başına kısımlar olarak δ değerler olarak rapor edilmiştir. Ayrıca, hidrojeller KBr ufak topak tekniği kullanılarak FT-IR analizi tabi tutulur ve fiziksel karakterizasyonu, 37 ° C&#39;de ters test tüpü kullanılarak değerlendirildi jelasyon çalışmaları içerir edilir. 4-Azidobutanoyl 1. sentezi Klorür 1 <ol><li> 10 mL diklorometan ve 0.5 mi dimetilformamid içinde 4-azidobutanoic asit (3.90 mmol), 500 mg eritin. </li><li> 0 ° C&#39;da, çözelti soğutulurBir buz banyosu kullanılarak. </li><li> karıştırılırken, reaksiyon sistemine damla damla ilave yavaş 5 ml diklorometan ile oksalil klorür (5.85 mmol) 505 ul ilave edin ve. </li><li> Bir buz banyosu kullanılarak, 0 ° C&#39;de 1 saat sonra, oda sıcaklığına dönmesi. </li><li> Bir döner buharlaştırıcı kullanılarak indirgenmiş basınç altında çözücüyü çıkarın. </li><li> CDCI3 16 örnek eritilmesi, 1H-NMR spektroskopisi ile elde edilen ürünü karakterize eden. </li></ol> Türev RGD azid 2 2. sentezi <ol><li> 1 M NaOH ile 1 ml RGD 50 mg (0.145 mmol) çözündürülür. </li><li> 2 ml tetrahidrofuran içinde 1 (0.16 mmol) 24 mg eritin. </li><li> Bir buz banyosu kullanılarak, 0 ° C &#39;de çözelti 1 damla damla RGD bir çözüm tüm ekleyin. </li><li> Oda sıcaklığına dönmesi ve gece boyunca karıştırın. </li><li> 1 M HCI 1 ml ilave edilir. </li><li> Bir döner buharlaştırıcı kullanılarak indirgenmiş basınç altında çözücüyü çıkarın. </li><li> OBT karakterizeained 1 &#39;H-NMR spektroskopisi ile ürün D 2 O 16 örnek eritilmesi. </li></ol> 3. PAA Alkin Modifikasyonu 3 <ol><li> damıtılmış su, 15 ml PAA çözeltisi (2.8 mmol) ağ / ağ% 35, 200 mg eritin. </li><li> propargilamin hidroklorür (0.20 mmol), 15.4 mg ekleyin. </li><li> 1 h / h asetonitril: 1 14 ml 1-hidroksibenzotriazol hidrat 42.8 mg (HOBt, 0.28 mmol) çözülür, 50 ° C&#39;de ısıtılarak damıtılmış su çözeltisi. </li><li> oda sıcaklığında PAA çözeltisine HOBt çözümünün tüm ekleyin. </li><li> Reaksiyon karışımına etildimetilamino-propilkarbodiimid 53.6 mg (EDC, 0.28 mmol) eklenir. </li><li> 5.5 pH ayarlamak ve gece boyunca oda sıcaklığında reaksiyon sistemi karışmaya 1 M HCI kullanarak. </li><li> çözüm dialyze. damıtılmış su, 2 L sodyum klorür 11.2 g çözülür ve sonra HCI ağ / ağ% 37, 0.2 ml ekleyin. 3.5 kDa kesme W M olan bir zar kullanılarak çözelti dialyze. </li><li> perfoÜç gün boyunca rm diyaliz. HCI ağ / ağ% 37, 0.2 ml ihtiva eden taze hazırlanmış damıtılmış su, 2 L günlük diyaliz solüsyonunu değiştirin. </li><li> -80 ° C de nihai çözelti saklayın. üreticinin protokollerine göre bir liyofilizer içinde liyofilize edin. </li><li> D 2 O 16 örnek eritilmesi, 1H-NMR spektroskopisi ile işlevselleştirilmiş polimer karakterize. </li></ol> PAA-RGD 4. sentezi Polimer 4 <ol><li> PAA 78 mg damıtılmış su, 10 ml alkin 3 (1.083 mmol) modifiye içinde çözülür. </li><li> 5 ml tetrahidrofuran içinde RGD azid 2 türevi (0,0722 mmol), 25 mg eritin. </li><li> polimerik çözüm RGD çözümün bütün ekleyin. </li><li> bakır iyodür (0.0116 mmol) ve sodyum askorbat 2.2 mg (0,0111 mmol), 2.2 mg ekleyin. </li><li> karıştırılarak 60 ° C de bir gece boyunca elde edilen karışım, geri akış. </li><li> 25 ° C&#39;ye soğutun. </li><li> Dialyzçözelti e. damıtılmış su, 2 L sodyum klorür 11.2 g çözülür ve sonra HCI ağ / ağ% 37, 0.2 ml ekleyin. 3.5 kDa kesme W M olan bir zar kullanılarak çözelti dialyze. </li><li> Üç gün boyunca diyalize gerçekleştirin. HCI ağ / ağ% 37, 0.2 ml ihtiva eden taze hazırlanmış damıtılmış su, 2 L günlük diyaliz solüsyonunu değiştirin. </li><li> -80 ° C de nihai çözelti saklayın. üreticinin protokollerine göre bir liyofilizer içinde liyofilize edin. </li><li> D 2 O 16 örnek eritilmesi, 1H-NMR spektroskopisi ile elde edilen ürünü karakterize eden. </li></ol> 5. RGD fonksiyonalize Hidrojel sentezi <ol><li> PBS hazırlayın. damıtılmış su, 50 ml PBS tuzu 645 mg çözülür. </li><li> Oda sıcaklığında, karbomer, 40 mg ve PBS (aşama 5.1) 9 ml işlevselleştirilmiş PAA 4, 10 mg Karışım, tamamen çözülünceye (30 dakika kadar). </li><li> çözeltiye PEG 400 mg ekleyin ve 45 dakika boyunca karıştırmaya devam edin. </li><li> karıştırmaya durdurun ve sistem 30 dakika boyunca yerleşmek için izin verir. </li><li> 7.4 pH ayarlamak için 1 N NaOH kullanarak. </li><li> Elde edilen karışım, 5 ml için, agaroz tozu 25 mg ekleyin. </li><li> genellikle 30 saniye ile 1 dakika arasında bir süre boyunca, kaynayana kadar 500 W mikrodalga radyasyon ile sistemin ışın tedavisi ve elektromanyetik olarak 80 ° C&#39;ye kadar ısıtın. </li><li> sıcaklığı 50 ° C&#39;ye düşene kadar oda sıcaklığında maruz beklettikten sonra 1 bir çözelti elde etmek üzere, PBS (aşama 5.1) 5 mL: 1 hacim oranında. </li><li> 1.1 sm bir çapı olan 12 çukurlu levha ihtiva eden çelik silindirler hazırlayın. </li><li> çözelti 500 ul alikotları alın ve her bir çelik silindirlere koyun. </li><li> Sistemin tam jelleşme kadar 45 dakika boyunca geri kalanı bırakın. </li><li> hidrojeller elde etmek için bir paslanmaz çelik silindir forseps kullanılarak çıkarın. </li></ol> Terapötik Aracı 6. Yükleme (İlaç veya Hücreler) <ol><li> st tekrarlayın5.1-5.7 eps. </li><li> 1 hacim oranı: (daha önce sol durumunda) karışımı, 37 ° C&#39;ye ulaştığı zaman, 1 son bir sistem elde etmek için, istenen ilaç çözeltisi ya da hücre kültürü içeren çözeltinin 5 ml. </li><li> Tekrarlayın fiziksel jel içinde sıkışan biocompounds ile polimerik ağlar elde 5.9-5.12 adımları. </li></ol> 7. Hidrojel Karakterizasyonu <ol><li> FT-IR Analizi <ol><li> Jel oluşumunun ardından 24 saat süre ile damıtılmış su içinde 2.5 ml sentezlenmiş hidrojellerin bir bekletin. </li><li> Hidrojel batık sulu ortamları çıkarın ve donma-kuru sıvı N2 ile. </li><li> KBr ufak topak tekniğine göre hidrojel örnek Laminat. <ol><li> bir akik havanda içine KBr dolu bir spatula ekleyin. hidrojel örneği küçük bir miktar alın ve KBr tozu ile karıştırın (KBr miktarı, ya da spatula ucu karşılamak için yeterli yaklaşık% 0.1-2). </li><li> Toz ince ve homojen olana kadar mikserden. &lt;/ Li&gt; <li> IR pelet oluşturmak için KBr pelet kiti kullanın. Manuel bir laboratuar presi kullanılarak toz basın: 10 ton basınç kapasitesi 3 dakika boyunca, sonra 5 ton eşit ve basınç kapasitesi 3 dakika daha karıştırıldı. </li><li> görünüş olarak homojen ve şeffaf nihai pelet elde etmek için baskı bırakın. IR numune tutucu içine pelet yerleştirin ve spektrum 16 çalıştırın. </li></ol></li></ol></li><li> jelleşme Çalışmaları <ol><li> PBS 900 ul 2 ml mikrosantrifüj tüpü doldurmak ve 37 ° C&#39;ye kadar dengeye getirin. </li><li> hidrojel oluşturan ve 37 ° C&#39;de inkübe hazırlanan polimer çözeltisinin 100 ul ekle. </li><li> tüp ters çevirin ve jel, 1, 2, 5, 10 ve 20 dakikada akarsa dikkate alınmalıdır. Jel jelleşme süresi olarak akmayan zaman kaydedilir. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Slaughter, B. V., Khurshid, S. S., Fisher, O. Z., Khademhosseini, A., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+in+Regenerative+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Hydrogels in Regenerative Medicine.</a> Adv. Mater. 21 (32-33), 3307-3329 (2009).</li>
<li>Rossi, F., Perale, G., Papa, S., Forloni, G., Veglianese, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+options+for+drug+delivery+to+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Current options for drug delivery to the spinal cord.</a> Expert Opin. Drug Deliv. 10 (3), 385-396 (2013).</li>
<li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+traction-mediated+manipulation+of+the+cell%2Fmatrix+interface+to+control+stem-cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Harnessing traction-mediated manipulation of the cell/matrix interface to control stem-cell fate.</a> Nat. Mater. 9 (6), 518-526 (2010).</li>
<li>Mothe, A. J., Tam, R. Y., Zahir, T., Tator, C. H., Shoichet, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+the+injured+spinal+cord+by+transplantation+of+neural+stem+cells+in+a+hyaluronan-based+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Repair of the injured spinal cord by transplantation of neural stem cells in a hyaluronan-based hydrogel.</a> Biomaterials. 34 (15), 3775-3783 (2013).</li>
<li>Khetan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation-mediated+cellular+traction+directs+stem+cell+fate+in+covalently+crosslinked+three-dimensional+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Degradation-mediated cellular traction directs stem cell fate in covalently crosslinked three-dimensional hydrogels.</a> Nat. Mater. 12 (5), 458-465 (2013).</li>
<li>Ashley, G. W., Henise, J., Reid, R., Santi, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+drug+delivery+system+with+predictable+and+tunable+drug+release+and+degradation+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hydrogel drug delivery system with predictable and tunable drug release and degradation rates.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110 (6), 2318-2323 (2013).</li>
<li>Rossi, F., van Griensven, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+Functionalization+as+a+Powerful+Tool+to+Improve+Scaffold+Performances%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Polymer Functionalization as a Powerful Tool to Improve Scaffold Performances.</a> Tissue Eng. Part A. 20 (15-16), 2043-2051 (2014).</li>
<li>Gould, S. T., Darling, N. J., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+peptide+functionalized+thiol-ene+hydrogels+as+culture+substrates+for+understanding+valvular+interstitial+cell+activation+and+de+novo+tissue+deposition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Small peptide functionalized thiol-ene hydrogels as culture substrates for understanding valvular interstitial cell activation and de novo tissue deposition.</a> Acta Biomater. 8 (9), 3201-3209 (2012).</li>
<li>Azagarsamy, M. A., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wavelength-Controlled+Photocleavage+for+the+Orthogonal+and+Sequential+Release+of+Multiple+Proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Edit%22%5BJournal%5D)">Wavelength-Controlled Photocleavage for the Orthogonal and Sequential Release of Multiple Proteins.</a> Angew. Chem. Int. Edit. 52 (51), 13803-13807 (2013).</li>
<li>Larrañeta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwave-Assisted+Preparation+of+Hydrogel-Forming+Microneedle+Arrays+for+Transdermal+Drug+Delivery+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Mater.+Eng%22%5BJournal%5D)">Microwave-Assisted Preparation of Hydrogel-Forming Microneedle Arrays for Transdermal Drug Delivery Applications.</a> Macromol. Mater. Eng. 300 (6), 586-595 (2015).</li>
<li>Cook, J. P., Goodall, G. W., Khutoryanskaya, O. V., Khutoryanskiy, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwave-Assisted+Hydrogel+Synthesis%3A+A+New+Method+for+Crosslinking+Polymers+in+Aqueous+Solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Rapid+Comm%22%5BJournal%5D)">Microwave-Assisted Hydrogel Synthesis: A New Method for Crosslinking Polymers in Aqueous Solutions.</a> Macromol. Rapid Comm. 33 (4), 332-336 (2012).</li>
<li>Perale, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+drug+delivery+hydrogel+system+for+spinal+cord+injury+repair+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Multiple drug delivery hydrogel system for spinal cord injury repair strategies.</a> J. Control. Release. 159 (2), 271-280 (2012).</li>
<li>Rossi, F., Perale, G., Storti, G., Masi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Library+of+Tunable+Agarose+Carbomer-Based+Hydrogels+for+Tissue+Engineering+Applications%3A+The+Role+of+Cross-Linkers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">A Library of Tunable Agarose Carbomer-Based Hydrogels for Tissue Engineering Applications: The Role of Cross-Linkers.</a> J. Appl. Polym. Sci. 123 (4), 2211-2221 (2012).</li>
<li>Frith, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+injectable+hydrogel+incorporating+mesenchymal+precursor+cells+and+pentosan+polysulphate+for+intervertebral+disc+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An injectable hydrogel incorporating mesenchymal precursor cells and pentosan polysulphate for intervertebral disc regeneration.</a> Biomaterials. 34 (37), 9430-9440 (2013).</li>
<li>Kolb, H. C., Finn, M. G., Sharpless, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Click+chemistry%3A+Diverse+chemical+function+from+a+few+good+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Edit%22%5BJournal%5D)">Click chemistry: Diverse chemical function from a few good reactions.</a> Angew. Chem. Int. Edit. 40 (11), (2001).</li>
<li>Sacchetti, A., Mauri, E., Sani, M., Masi, M., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwave-assisted+synthesis+and+click+chemistry+as+simple+and+efficient+strategy+for+RGD+functionalized+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Tetrahedron+Lett%22%5BJournal%5D)">Microwave-assisted synthesis and click chemistry as simple and efficient strategy for RGD functionalized hydrogels.</a> Tetrahedron Lett. 55 (50), 6817-6820 (2014).</li>
<li>Ossipov, D. A., Hilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28vinyl+alcohol%29-based+hydrogels+formed+by+%26%2334%3Bclick+chemistry%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(vinyl alcohol)-based hydrogels formed by &#34;click chemistry&#34.</a> Macromolecules. 39 (5), 1709-1718 (2006).</li>
<li>Truong, V., Blakey, I., Whittaker, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrophilic+and+Amphiphilic+Polyethylene+Glycol-Based+Hydrogels+with+Tunable+Degradability+Prepared+by+%26%2334%3BClick%26%2334%3B+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Hydrophilic and Amphiphilic Polyethylene Glycol-Based Hydrogels with Tunable Degradability Prepared by &#34;Click&#34; Chemistry.</a> Biomacromolecules. 13 (12), 4012-4021 (2012).</li>
<li>Hou, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+synthetic+route+for+RGD+tripeptide%5BTitle%5D)+AND+%22Prep.+Biochem.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">New synthetic route for RGD tripeptide.</a> Prep. Biochem. Biotechnol. 36 (3), 243-252 (2006).</li>
<li>Rossi, F., Chatzistavrou, X., Perale, G., Boccaccini, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Degradation+of+Agar-Carbomer+Based+Hydrogels+for+Tissue+Engineering+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Polym.+Sci%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Degradation of Agar-Carbomer Based Hydrogels for Tissue Engineering Applications.</a> J. Appl. Polym. Sci. 123 (1), 398-408 (2012).</li>
<li>Mauri, E., Rossi, F., Sacchetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+drug+delivery+using+chemoselective+functionalization+of+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Mater.+Sci.+Eng.+C%22%5BJournal%5D)">Tunable drug delivery using chemoselective functionalization of hydrogels.</a> Mater. Sci. Eng. C. 61, 851-857 (2016).</li>
<li>Joaquin, A., Peppas, N. A., Zoldan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+Polymer+Library+for+Developing+Induced+Pluripotent+Stem+Cell+Derived+Cardiac+Patches%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Hydrogel Polymer Library for Developing Induced Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Patches.</a> Tissue Eng. Part A. 20, S55-S55 (2014).</li>
<li>Rossi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunable+hydrogel-Nanoparticles+release+system+for+sustained+combination+therapies+in+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf.+B+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Tunable hydrogel-Nanoparticles release system for sustained combination therapies in the spinal cord.</a> Colloids Surf. B Biointerfaces. 108, 169-177 (2013).</li>
<li>Kolb, H. C., Sharpless, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growing+impact+of+click+chemistry+on+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discov.+Today%22%5BJournal%5D)">The growing impact of click chemistry on drug discovery.</a> Drug Discov. Today. 8 (24), 1128-1137 (2003).</li>
<li>Ossipov, D. A., Yang, X., Varghese, O., Kootala, S., Hilborn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+approach+to+functional+hyaluronic+acid+hydrogels+using+orthogonal+chemical+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Modular approach to functional hyaluronic acid hydrogels using orthogonal chemical reactions.</a> Chem. Commun. 46 (44), 8368-8370 (2010).</li>
<li>Anderson, S. B., Lin, C. C., Kuntzler, D. V., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+performance+of+human+mesenchymal+stem+cells+encapsulated+in+cell-degradable+polymer-peptide+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The performance of human mesenchymal stem cells encapsulated in cell-degradable polymer-peptide hydrogels.</a> Biomaterials. 32 (14), 3564-3574 (2011).</li>
<li>Caron, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+three+dimensional+biomimetic+hydrogel+to+deliver+factors+secreted+by+human+mesenchymal+stem+cells+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A new three dimensional biomimetic hydrogel to deliver factors secreted by human mesenchymal stem cells in spinal cord injury.</a> Biomaterials. 75, 135-147 (2016).</li>
<li>Lee, J. W., Kim, H., Lee, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+spacer+arm+length+between+adhesion+ligand+and+alginate+hydrogel+on+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohyd.+Polym%22%5BJournal%5D)">Effect of spacer arm length between adhesion ligand and alginate hydrogel on stem cell differentiation.</a> Carbohyd. Polym. 139, 82-89 (2016).</li>
<li>Liu, Y., Fan, Z., Wang, Y., Yu, L. Controlled Release of Low Molecular Protein Insulin-like Growth Factor-1 through Self-Assembling Peptide Hydrogel with Biotin Sandwich Approach. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLiu%2C+Y+%22J.Biomed.+Eng%22">J.Biomed. Eng</a>. 32 (2), 387-392 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması belirtmemektedirler ve bu makalenin hazırlanmasında herhangi bir ödeme almamışlardır.

Alkin kısımları ile PAA polimerizasyon sonrası modifikasyonu ve azid grubu ile RGD işlevselleştirmesi, polimer ve peptit arasında stabil bir bağ oluşumunu garanti eder. Gerçekten de triazol, 1,2,3-triazol halkasının 1,4 pozisyonuna bağlı karbon atomları arasında sert bir bağlantı birimi görevi görür ve hidrolitik olarak veya başka bir şekilde bölünemez. Ek olarak, benzenoidler ve ilgili aromatik heterosikller24 gibi diğer siklik yapıların aksine, triazolün oksitlenmesi ve indirgenmesi son derece zordur. Bu şek...

Hidrojeller, doğal ya da sentetik, ve ayırt edici bir üç boyutlu bir yapı ile karakterize olan, hidrofilik, çapraz-bağlanmış polimerler, ile oluşturulan üç boyutlu ağlardır. Bu cihazlar, ilaç dağıtım, doku mühendisliği, gen taşıyıcıları ve akıllı sensörler 1,2 biyomedikal alanlarında giderek daha caziptir. Gerçekten de, yüksek su içeriği, aynı zamanda bunların reolojik ve mekanik özellikleri onları yumuşak doku mikroçevrelerde taklit eden ve suda çözünür sitokin ya da büyüme faktörü verilmesi için onları etkili araçlar yapmak için uygun bir aday yapar. En umut verici bir kullanım hücreleri ve biyoaktif bileşikler taşıyan bir enjektabl biyomateryal gibidir. In vitro ve in vivo deneyler 3,4 de görüldüğü gibi Hidrojeller, tutma ve hassas fizyolojik ilgili bir şekilde kök hücre düzenleyici sinyallerini sağlayan hücre hayatta kalma ve kontrol kök hücre kaderine iyileştirebilir. Bu lider avantajı olasılıktırvücudun her yerinde göç ve hedef gol 5 kaybetme, dolaşım torrent içine alan ve extravasates bırakır hücrelerin miktarını en aza indirerek, (in situ) aşılama bölgesi içinde enjekte hücreleri korumak için. Üç boyutlu hidrojel ağların stabilite polimer zincirleri 6 arasındaki kovalent bağ ya da bir arada tutma kuvvetlerinden oluşan olan çapraz-bağlama yerleri, kaynaklanmaktadır. Bu çerçevede, ortogonal seçici kimya polimer zincirleri uygulanan hidrojel performanslarını 7 geliştirmek mümkün çok yönlü bir araçtır. Gerçekten de, uygun bir kimyasal grup ile polimerlerin modifikasyonu hücre canlılığı ve doku oluşumu kullanımlarını artırmak için, uygun kimyasal, fiziksel ve mekanik özellikleri sağlamak için yardımcı olabilir. Aynı şekilde, teknikler arasında RGD peptidin kullanımı hücre yapışması ve hayatta kalma mümkün kılmaktadır, jel matris, hücreler ya da büyüme faktörleri yükleyin. RGD oluşan bir tripeptidegereğidir arginin, glisin ve aspartik asit, en etkili ve çoğu zaman, birden fazla hücre yapışma reseptörüne yönelik kabiliyetini ve hücre ankraj, davranış ve hayatta kalma 8,9 ilgili biyolojik etkisi tripeptid kullanılabilir. Bu çalışmada, RGD işlevselleştirilmiş hidrojellerin sentezi dostça bir hücre mikro için yeterli biyokimyasal karakterize ağları bir amacı ile incelenmiştir. Hidrojel sentezinde mikrodalga radyasyonunun kullanımı yan reaksiyonların en aza indirmek ve konvansiyonel termal proseslerin 10 ile karşılaştırıldığında daha kısa bir süre içinde daha yüksek reaksiyon verimleri ve oranları elde etmek için basit bir prosedür sunmaktadır. Bu yöntem, polimer etkileşimleri ve reaksiyon sisteminde 11 bir organik çözücü olmaması nedeniyle saflaştırma adımları ve verimi, steril hidrojeller gerektirmez. Bu nedenle, hiçbir mod çünkü polimerik ağ bağlantılı RGD yüksek oranlarda sağlarifications jel oluşumunda rol oynayan bir polimer kimyasal gruplara gerekmektedir. Karboksil grupları, PAA ve karbomer ve hidroksil grupları, PEG ile ilgili ve agaroz, bir polikondensasyon reaksiyonu yoluyla hidrojel üç boyutlu bir yapıya yol açar. Bahsedilen polimerler, omurilik hasarı tamir tedavileri 12 hidrojellerin sentezi için kullanılır. Bu cihazlar, bir önceki bildirilen yüksek biyo-uyumluluk gibi birçok canlı dokular kişilerce tiksotropik doğada benzer mekanik ve fiziksel özellikleri gösteren, 13,14 çalışır. Ayrıca, enjeksiyon bölgesinde yerinde lokalize kalır. Bu çalışmada, PAA karboksil grupları bir alkin grubu ile (Şekil 1) değiştirilir ve RGD azit bileşiği yapı (CH2) n ile hazırlanan bir kimyasal bileşik ile tripeptid terminal grubu -NH2 reaktivitesini istismar sentezlenir - N 3 (&lt;strong&gt; Şekil 2). Daha sonra, tadil edilmiş PAA CuAAC Click reaksiyonu 15-17 (Şekil 3) ile RGD azid türevi ile reaksiyona girer. bakır (I) &#39;in bir katalizörün kullanımı, reaksiyon hızı ve regio selektivite her iki büyük değer gelişmelere yol açmaktadır. CuAAC Reaksiyon organik sentezlerde yaygın olarak, polimer bilimi kullanılır. Bu fonksiyonel gruplar, yüksek verim ve yüksek tolerans birleştirir ve organik çözücülerin kullanımı ile etkilenmez. Yüksek seçicilik, hızlı reaksiyon süresi ve basit bir saflaştırma işlemi istenen kısımları 18 aşılama yıldız polimerler, blok kopolimerleri veya zincirlerin alınmasını sağlar. Bu tıklama stratejisi mümkün nihai biyokimyasal uygulamaya göre fizikokimyasal özellikleri özelleştirmek için polimerizasyon sonra polimerlerin değiştirmek için yapar. CuAAC deneysel koşullar kolayca (bakır oksidasyon minimal oluşabilir oysa reaksiyon, su duyarsızdır) tekrarlanabilir ve doğa vardıroluşan triazol ürünün stabilitesini sağlar. Bakır metali kullanımı nedeniyle hücrelerine karşı potansiyel toksik etkisi ve biyolojik mikro olarak, kritik bir nokta olarak kabul edilebilir, fakat diyaliz katalitik kalıntıları tamamen çıkarılmasına olanak sağlayan bir saflaştırma yöntemi olarak kullanılır. Son olarak, PAA RGD hücre ya da ilaç taşıyıcılar olarak bu sistemlerin potansiyel özelliğe kontrol etmek için, incelenmiştir hidrojel sentezi (Şekil 4) ve elde edilen ağların fizikokimyasal özellikleri kullanılır modifiye. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54445/54445fig1.jpg" /> Şekil 1: PAA alkin sentezi modifiye alkin grubuyla PAA işlevsellik şemasıdır;. &quot;n&quot; karboksil grubu propargilamin ile reaksiyona ile monomerler gösterir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54445/54445fig1large.jpg" target="_blank">görüntülemek için tıklayınız</a>Bu rakamın daha büyük bir versiyonu. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54445/54445fig2.jpg" /> Şekil 2:.. RGD-azid sentezi RGD-Azid türevi sentezi <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54445/54445fig2large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54445/54445fig3.jpg" /> Şekil 3: reaksiyonu tıklayın Şema RGD-azid türevi ve alkin-PAA arasındaki tıklama reaksiyonun.. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54445/54445fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54445/54445fig4.jpg" /> Şekil 4: Hidrojel syntnüklerde. RGD işlevselleştirilmiş hidrojel sentezi prosedür. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54445/54445fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<table><tbody><tr><td>Poli (akrilik asit) çözelti ortalaması M < alt > w ~ 100.000, ağırlıkça %35 H 2 O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>523925</td><td>CAS 9003-01-4</td></tr><tr><td>Poli (etilen glikol) 2.000</td><td>Sigma Aldrich</td><td>84797</td><td>CAS 25322-68-3</td></tr><tr><td>Carbomeer 974P</td><td>Fagron</td><td>1387083</td><td></td></tr><tr><td>Agaroz&nbsp;</td><td>Invitrogen A.Ş.</td><td>16500-500</td><td>UltraPure</td></tr><tr><td>Agaroz RGD peptit</td><td>abcam</td><td>ab142698</td><td></td></tr><tr><td>4-azidobutanoik asit</td><td>Aurum Pharmatech</td><td>Z-2421</td> <td>& nbsp; CAS 54447-68-6</td></tr><tr><td>Oksalil klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>O8801</td><td>CAS 79-37-8</td></tr><tr><td>Proparjilamin hidroklorür% 95</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P50919</td><td>CAS 15430-52-1</td></tr><tr><td>Bakır (I) iyodür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3140</td><td>CAS 7681-65-4</td></tr><tr><td>Sodyum askorbat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Y0000039</td><td>CAS 134-03-2</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Diyaliz Membran</td><td>Spektrum Laboratuvarları, Inc.</td><td>132725</td><td>Spectra/Por 3 Diyaliz Membranı&nbsp; Standart RC Boru MWCO: 3.5 kD</td></tr></tbody></table>

tedavi uygulamaları için bir alet olarak rgd-fonksiyonelleştirilmiş hidrojeller sentezi

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

Polimerlerin biyomateryal olarak kullanılması, terapötik uygulamalarda önemli avantajlar sağlamıştır. Özellikle, polimer zincirlerini biyouyumluluğu, mekanik özellikleri veya hücre canlılığını iyileştirebilen bileşiklerle değiştirme ve işlevselleştirme olasılığı, yeni malzemelerin tasarımının biyomedikal alandaki yeni zorlukların üstesinden gelmesine olanak tanır. Polimer işlevselleştirme stratejileri ile tıklama kimyası, polimerik cihazların hücre uyumluluğunu ve ilaç verme özelliklerini geliştirmek için güçlü bir araçtır. Benzer şekilde, biyolojik çevrenin toksisitesi veya kontaminasyonu gibi potansiyel olumsuz yan etkilerden kaçınmak için biyotıbbın steril araçlar kullanma konusundaki temel ihtiyacı, mikrodalga destekli stratejiye olan ilginin artmasına neden olmaktadır.
Tıklama kimyası ve mikrodalga destekli yöntemin kombinasyonu, biyomedikal uygulamalarda istenen işlevlere ve gelişmiş performanslara sahip biyouyumlu hidrojeller üretmek için uygundur. Bu çalışma, RGD ile işlevselleştirilmiş hidrojelleri sentezlemeyi amaçlamaktadır. RGD (arginilglisilaspartik asit), hücre yapışma proteinlerini taklit edebilen ve hücre yüzeyi reseptörlerine bağlanabilen, hidrojellerin 3D polimerik ağı içindeki hücreler için misafirperver bir mikro ortam yaratan bir tripeptittir. RGD işlevselleştirmesi, Huisgen 1,3-dipolar siklo ilavesi yoluyla gerçekleşir. Bazı PAA karboksil grupları, bir alkin parçası ile modifiye edilirken, RGD, peptit dizisinin terminal kalıntısı olarak azido asit ile işlevselleştirilir. Son olarak, her iki ürün de peptidi kalıcı olarak PAA'ya bağlamak için bakır katalizli bir tıklama reaksiyonunda kullanılır. Bu modifiye polimer, bir hidrojel matrisi sentezlemek için karbomer, agaroz ve polietilen glikol (PEG) ile birlikte kullanılır. 3D yapı, mikrodalga destekli polikondensasyon yoluyla PAA ve karbomerden karboksil gruplarını ve agaroz ve PEG'den hidroksil gruplarını içeren bir esterleştirme reaksiyonu nedeniyle oluşur. Jelleşme mekanizmasının verimliliği, yüksek derecede RGD işlevselleştirmesi sağlar. Ek olarak, bu işlevselleştirilmiş ağ içinde terapötik bileşikleri veya biyolojik araçları yükleme prosedürü çok basit ve tekrarlanabilir.

N, karboksil grupları amin ile reaksiyona monomerler etiketler, Şekil 1 &#39;de gösterdi PAA alkin türevi etkili bir poliakrilik asit ve propargilamin sentezlenir. Ürünün kimliği 1H-NMR spektroskopisi ile doğrulanmıştır. 5 üçlü bağ ile modifiye PAA 1H-NMR spektrumunu göstermektedir. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/54445/54445fig5.jpg" /> Şekil 5:...

Hücre ve ilaç iletimi için cihazlar olarak RGD ile işlevselleştirilmiş hidrojellerin sentezi için bir protokol sunuyoruz. Prosedür, alkin ile modifiye edilmiş poliakrilik asit (PAA) ile bir RGD-azid türevi arasında bakır katalizli alkin-azid siklo ilavesini (CuAAC) içerir. Hidrojeller, mikrodalga destekli polikondensasyon kullanılarak oluşturulur ve fizikokimyasal özellikleri araştırılır.

Tedavi Uygulamaları için bir alet olarak RGD-fonksiyonelleştirilmiş Hidrojeller Sentezi

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and ...

Bu metodolojinin genel amacı, doku mühendisliği uygulamaları için hidrojelleri çok kolay bir şekilde sentezlemektir. Bu yöntem, üç boyutlu hücre kültürü sistemlerinde yüksek hücre canlılığının korunma olasılığı gibi doku mühendisliği alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hızlı bir reaksiyon kullanarak, hücre canlılığını koruma yeteneklerini artırmak amacıyla hidrojel sistemlerini kolayca modifiye edebilmemizdir.İskelet içine yerleştirilen hücrelerin hasarlı dokuyu yeniden yapılandırabilmesi nedeniyle, bu tekniğin etkileri omurilik yaralanması tedavisine kadar uzanmaktadır. Bu yöntem, rejeneratif tıp kapsamındaki hücre tedavileri ve bunların birçok metodolojideki uygulamaları hakkında önemli bilgiler sağlayabilir. Ayrıca kemik, kalp ve kıkırdak gibi diğer çeşitli sistemlerde de uygulanabilir.RGD-azid türevini sentezlemek için, 50 miligram RGD'yi bir mililitre bir molar sodyum hidroksitte çözün. Ardından, 24 miligram 4-azidobütanoil klorürü iki mililitre tetrahidrofüranda çözün. RGD çözeltisinin tamamını sıfır derece santigrat sıcaklıkta, damla damla 4-azidobütanoil klorür çözeltisine ekleyin.Oda sıcaklığına geri getirin ve gece boyu

the-synthesis-rgd-functionalized-hydrogels-as-tool-for-therapeutic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bir bioprinter bir kurban kalıp dayalı desenli hidrojeller oluşturmak için kullanıldı. Poloksamer kalıp ikinci bir hidrojel ile dolduruldu ve daha sonra üçüncü bir hidrojel ile doldurulmuş boşluklar bırakarak elüt edilmiştir. Bu yöntem Biyopolimerlerin karmaşık mimarileri oluşturmak için hızlı sağım ve poloksamerin iyi baskı kullanır.

Desenli ve Yaratılış 3D Hücre Kültürü için iki bileşenli Hidrojeller için Thermoresponsive Ters Kalıpları Baskı

Bu video zincir polimerizasyonların gizlenmemesi ve hidrojel sentezini sağlayan, poli (etilen glikol), metakrilat, hızlı, verimli bir yöntem gösterecektir. Bu benzer, fonksiyonlandırmalar verimliliğini değerlendirmek giderme ve gelişmiş değişiklikler için öneriler sunmak ve tipik hidrojel karakterizasyon teknikleri göstermek için peptidler, detay ortak analitik yöntemler içine metakrilamit işlevlerini tanıtmak için nasıl gösterecektir.

Mikrodalga destekli Poli işlevselleştirilmesi (etilen glikol) ve zincir polimerizasyonu ve Hidrojel formasyonunda kullanılan On-reçine Peptides

Üç boyutlu hücre kültürü uygulamaları için sentetik hidrojel matrislerinin ışık aracılı oluşumu ve ardından biyokimyasal modellemesi için sıralı bir süreci tanımlıyoruz. Hidrojellerin sitouyumlu fototıklama kimyası ile yapımı ve modifikasyonu gösterilmiştir. Ek olarak, bu hidrojeller içindeki kalıpları ölçmek ve gözlemlemek ve hücre canlılığını belirlemek için basit teknikler sunulmaktadır.

Hücre Kültürü Uygulamaları için Hidrojeller Işık aracılı Oluşumu ve Desenlendirme

İletişim kuralları hydrazone toplu ölçek, microscale ve Nano, ikincisi jel nano tanecikleri ve nanofibers hazırlanması için polimer reaksiyonlar, cross-linking göre parçalanabilir thermoresponsive hydrogels imalatı için açıklanmıştır.

Parçalanabilir Thermoresponsive Hydrogels birden fazla uzunluğu ölçeklerde yolu ile reaktif ekstrüzyon, havacilik, kendinden montajlı imalatı ve Electrospinning

Protein bazlı hydrogels üç boyutlu mimarisinde işlemek için farklı yöntemler burada malzeme özellikleri ile ilgili olarak değerlendirilir. Macroporous ağlar ile bir hücre yapışkanlı peptid functionalized ve onların fizibilite hücre kültüründe iki farklı model hücre hatları kullanılarak hesaplandı.

Protein bazlı Hydrogels mimarilerde kolayca idare hücre kültür uygulamaları için

Bu yöntemde, photopolymerization kullanıyoruz ve polietilen glikol (PEG) hydrogels, sağlayan yüzeyinde protein veya peptid desen oluşturmak için tıklatın kimya teknikleri biyoaktif sinyaller hücresel yanıt vitro incelenmesi için immobilize .

Biyoaktif proteinler veya peptidler hidrojel Photochemistry biyolojik uygulamalarda kullanarak üzerinde desenlendirme

Geçerli bilayer kültür modelleri içinde vivo microenvironments taklit fonksiyonel vitro çalışmalar için izin vermez. Polietilen glikol ve çinko oksit şablon oluşturma yöntemi kullanarak, bu iletişim kuralını geliştirme, bir ultrathin biomimetic membran tunable sertlik, porozite ve yakından vivo içinde taklit eden biyokimyasal kompozisyonu ile açıklanır hücre dışı matrisler.

Kültür Ultrathin Porated elastik Hydrogels bir Biomimetic membran için çift olarak hücre

Bu protokol enjekte edilebilir, supramoleküler polimer-nanopartikül (PNP) hidrojel biyomalzemelerin sentezini ve formülasyonlarını açıklar. Bu malzemelerin ilaç dağıtımı, biyofarmasötik stabilizasyon ve hücre kapsülleme ve teslimi için uygulamaları gösterilmiştir.

Hücre ve İlaç Dağıtım Uygulamaları için Enjekte Edilebilir Supramoleküler Polimer-Nanopartikül Hidrojelleri

Burada sunulan protokol, güçlü bir yapışkan hidrojel jelatin o-nitrosobenzaldehitin (jelatin-NB) sentezini göstermektedir. Jelatin-NB, yara yüzeylerini korumak için güçlü bir fiziksel bariyer oluşturabilen hızlı ve etkili doku yapışma yeteneğine sahiptir, bu nedenle yaralanma onarımı biyoteknolojisi alanına uygulanması beklenmektedir.

Güçlü yapışkan hidrojel, jelatin o-nitrosobenzaldehit sentezi

Burada, hücresiz protein sentezi reaksiyonlarını harici bir sıvı faza ihtiyaç duymadan makro ölçekli hidrojel matrislerine gömmek için iki protokol sunuyoruz.

Hücresiz Protein Sentezi Reaksiyonlarını Makro Ölçekli Hidrojellere Gömme Yöntemleri

Keşfedin RGD-fonksiyonelleştirilmiş hidrojellerin sentezini; bakır katalizli reaksiyon ve mikrodalga destekli polikondensasyon ile hücre canlılığını artırarak doku mühendisliği ve omurilik yaralanması tedavileri için yenilikçi uygulamalar sunar.

Tedavi Uygulamaları için bir alet olarak RGD-fonksiyonelleştirilmiş Hidrojeller Sentezi

Daha fazla video keşfet