Name: Çok florlu Safra Asitler ve kullanma İn Vivo Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Öğrenin, canlı hayvanlarda safra asidi taşınmasını değerlendirmek için florlu etiketli safra asitleri ve manyetik rezonans görüntüleme kullanarak kronik ishal tanısı için radyasyonsuz bir yöntem geliştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, Diyabet, Sindirim Ulusal Enstitüsü ve Böbrek Hastalıkları (hibe numaraları JP.R. için R21 DK093406 ve T32 DK067872) ve (JP.R. hibe numarası 1BX002129) bir VA Merit ödülü ile desteklenmiştir.

Aşağıdaki protokol (18 Haziran 2015 onaylı IACUC Protokol # 0415011) Tıp Fakültesi Maryland Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan yönergelere uyar. 19F-Etiketli safra asitlerinin olan 1. Gavaging Fareler <ol><li> 150 mg / kg vücut ağırlığı 19F-işaretli safra asitleri sonda fareler. 19F-işaretli safra asidi stok çözeltisi [kolik asit-trifloro-asetil lisin ile gerekli hacme kadar 1 ml şırınga doldurun (CA-Lys-TFA; 1: 1 polietilen glikol 400: Dulbecco fosfat tamponlu tuzlu su) ya da cholylsarcosine- trifloro-N-metil-asetamid (CA-Sar-TFMA;.% 60 polietilen glikol 400 ve% 40 Dulbecco fosfat tamponlu tuzlu su] ve 20-gauge, 1.5 inç kavisli ampul uçlu mide sondası iğne takılır emin gavaj iğnesi sağlayın iğne hub yemek borusu kadar takılı iken farenin xiphoid kıkırdak seviyesine ulaşmak için yeterince uzun </li><li> sıkıca gbaşparmak ve işaret parmağı arasında boynun arkasındaki gevşek deri ile hayvan törpülemeye ve alt sırt ve kuyruk cilt kavramak kalan parmaklarınızı kullanın. </li><li> dik fare tuşunu basılı tutun ve kenarı boyunca sonda iğne ve yemek borusu içine ve mide içine ağız çatı geçmektedir. dirence karşı itmeyin - direnç farenks karşılaşılan ise hayvan bunu &#39;kırlangıçlar&#39; kadar, iğne yeniden konumlandırmak. </li><li> Anestezi sonda için gerekli ise, 5 ml izofluran ve yakın içeren bir fanus içinde fare yerleştirin. Fare yan düştüğünde, 7 sn bekleyin fareyi kaldırmak ve sonda gerçekleştirin. anestezik buharlar Personeli korumak için, sadece bir davlumbaz çan kavanoz kullanın. </li><li> hayvan birkaç dakika içinde izofluran kurtarmak gözlemleyin. izofluran karaciğerde metabolize olduğundan, bozulmamış ilacın veya metabolitlerinin kaynaklanan bir flor sinyali safra sistemi içine atılır ve safra kesesi fluo bulandırabilir: NOTkaybedilme 19F-işaretli safra asitlerinin 15 gelen sinyalleri alır. Alternatif ketamin artı ksilazin (dozlarda için bölüm 3.1) kullanmaktır. </li></ol> 2. Hasat Safra kesesi, Sıvı Kromatografi / Kütle Spektrometresi Kullanarak Safra Asit Ölçümler için Karaciğer ve Kan <ol><li> organları hasat önce en az 6 saat süreyle maksimum safra kesesi dolum, hızlı fareler elde etmek. fosfat tamponlu tuzlu su içinde ketamin ve ksilazin hazırlama (100 ul ketamin, 62.5 ul ksilazin, 840 ul PBS). </li><li> 1 ml&#39;lik steril bir şırınga kullanılarak, ketamin / ksilazin çözeltisi (150 mg ketamin ve vücut ağırlığındaki her bir kg başına 18 mg ksilazin) 15 ul / g vücut ağırlığı ile önceden organı hasat bir fare deri altından 1 saat enjekte edilir. </li><li> ketamin / ksilazin uygulanmasından sonra bir saat ayak tutam tarafından yeterli anestezi onaylamak ve anestezi fare sırtüstü yerleştirin. </li><li> xiphoid ve fi pubis bir orta hat karın cilt kesi yapmak için 5 ya da 6 inç makas kullanınne makas (4 inç) periton astar kesme ve karın organları açığa çıkarmak için - diyafram delmek yok. </li><li> 5 inç kelepçe ile xiphoid sürecini kavramak ve üst karın boşluğuna maruz göğsünde geri kaldırın. safra kesesi açığa incelemek ve bir kenara karaciğer taşımak için forseps ve künt alet kullanın. NOT: karaciğer lacerate veya eski olarak safra kesesi dokunmayın şiddetli kanamaya neden olur ve ikinci safra kesesi kasılması ve boşalmasını teşvik edebilir. </li><li> Koledokta genelinde 4-inç kelepçe yerleştirin (Şekil 3, okları kesik). diyaframa safra kesesi üstün kutup bağlama ligament kesin ve hafifçe karnın sağ tarafına safra kesesi hareket ettirin. </li></ol><img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54597/54597fig3.jpg" /> Şekil 3: Fare Safra kesesi anatomik ve Proton MR Görüntüleme. Sol panel maruz mutabakat zaptlarından gösterirAbdominal insizyon sonrası orta hat solundaki e safra kesesi. kelepçe xiphoid süreci kavrar. Safra dolu açlık safra kesesi kesik oklarla büyük ok ve kenetlenmiş koledokta ile gösterilir. [Ankastre: eksize koledokun ile sağlam safra kesesi kelepçeli. Cetvel milimetre (mm) işaretlenir.] Sağ panel açlık fare safra kesesi (ok) yüksek çözünürlüklü proton yoğunluğu ağırlıklı MR görüntü gösterir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="7"><li> Safra kesesi, kalp ponksiyon, hasat kan gerçekleştirmek ve ötenazi doğrulamak için hayvan asıl bulbus olfaktoryusları alındı ​​eksize önce. NOT: Kardiyovasküler çöküşü ve yeterli bir kan örneği almak için başarısızlık (≥ 200 ul) neden karaciğer lacerate olabilir ilk safra kesesi Hasat. </li><li> Sol diyaframın alt Açığa vekalp atışı yüzeyini tanımlamak. maksimal kardiyak nabız noktasında bir 1 ml şırınga bağlı bir 23 gauge iğne ile diyafram ve kalp delinerek. <ol><li> aspire ederken yavaşça çek. Kan şırınga doldurmak başladığında, çekme durdurmak ve 0.2 toplamak için emme korumak - 0.6 ml kan. Yavaşça iğneyi dönen ya da durdurması halinde akışını yeniden kurabilir hafifçe çekilmesi. </li><li> 15 dakika boyunca 2,000 x g hızında bir 1.5 ml heparinize tüpe ve santrifüj kan transferi. 10 dakika boyunca 12.000 xg&#39;de dört parça asetonitril ve santrifüj ile plazma hızlandırabilir. Sıvı kromatografisi / kütle spektroskopisi (LC / MS / MS) 11-1312-1412-1412-1412-14 süpernatantı analiz edin. Gerekirse, analizden önce o C -80 ° C&#39;de plazma saklayın. </li></ol></li><li> Künt diseksiyon kullanarak, karaciğer safra kesesi ücretsiz. , Kelepçe altında koledok transect kaldırmak ve safra kesesi tartmak ve bir 1.5 ml microcen yerleştirintrifuge tüp. karaciğer Hasat. </li><li> yaklaşık 100 karaciğer mg ve boyut-21 cam doku homojenleştirici buz üzerinde tüm safra kesesi homojenize. 10 dakika boyunca 12.000 x g&#39;de 75% asetonitril ve 25% su (karaciğer 800 ul, safra kesesi 300 ul) ve santrifüj ile ekstrakte edin. Gerekli ekstraktlar seyreltik ve LC / MS / MS 11-13 kullanılarak safra asidi içeriğini ölçmek. </li></ol> 3. Canlı hayvan Proton (1H) ve fluor (19F), Manyetik Rezonans Görüntüleme <ol><li> görüntüleme önce en az 6 saat süreyle maksimum safra kesesi dolum, hızlı fareler elde etmek. Ketamin ve ksilazin kullanarak, MRI tarayıcı hareketini önlemek için fareler uyutmak. fosfat tamponlu tuzlu su (130 ul ketamin, 42.5 ul ksilizin, 827 ul PBS) ketamin artı ksilizin bir stok çözeltisi hazırlayın. MR önce bir saat bu çözeltinin 5 ul / g vücut ağırlığı (65 mg ketamin ve 4.25 mg xylaz olan bir fare deri altına enjekte etmek için 1 ml&#39;lik steril bir şırınga kullanınkg vücut ağırlığı başına in). anestezi altında kuruluk hayvanın gözlerine veteriner merhem uygulamak önlemek için. </li><li> Yukarıdaki ketamin / ksilazin ile indüksiyon sonrası, # 40 veya daha ince elektrik kesme bıçakları kullanılarak karın farenin sol alt yarısında 1.5 cm 2 alan klibi. kürk çıkarılmasından sonra, 8 alanı hazırlık -% 12 seyreltilmiş iyot cerrahi fırçalama solüsyonu ve% 70 alkol ile durulayın - Her iki adımları tekrarlayın. karın boşluğuna 0.75 inç iğne / kateter deri altından ve tünel ile 24 ölçü yerleştirin. Emin kateter pistonu geri çekerek çekum veya diğer abdominal organ olmadığından emin olun - kateter hiçbir kan veya dışkı maddesi olmalıdır. </li><li> İğneyi çıkarın ve periton kateteri bırakın. MRI tarayıcı hayvan odasında sıcaklık kontrollü termal pad üzerinde fare yerleştirin. </li><li> fosfat tamponlu tuzlu su içinde ketamin ve ksilazin içeren 1 ml&#39;lik steril bir şırınga (1.000 ul ketamin, 300 ul ksilazin hazırlanması, 6700 ul PBS) ve 72-inç steril boru istenilen uzunlukta doldurun. önceden doldurulmuş steril tüp için intraperitoneal kateter bağlayın ve uzak MRG tarayıcıdan uzatın. Farenin vital bulguları stabil olup olmadığını anestezi bu çözümün her 20 dakikada 50 ul enjekte korumak için. NOT: görüntüleme önce hiçbir metal MRI tarayıcısı yakın emin olun. </li><li> 1 H için 300,283 MHz ve 19 F çekirdekleri için 282,524 MHz radyo frekans sinyalleri göndermek ve almak için bir 19 F / 1H çift ayarlı doğrusal hacmi MR bobin kullanın. <ol><li> Hızlı, düşük açılı vurdu dizisi (FLASH) kullanarak üç dilim (eksenel, mid-sagital ve koronal) izci görüntüleri ile sistem kalibrasyonu 11, 13 ve hayvan yerelleştirme gerçekleştirebilir. Denemeyi başlatmak için, yazılım konsolunda Tarama Kontrol penceresindeki &#39;trafik ışığı&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> Gevşeme ile hızlı kazanım geliştirmek kullanarak kesitli 1H MR görüntüleri elde etmeknumune veya tekrarlama süresi 2.200 msn ile hayvanın vücudunda, eko zamanı 8.9 msn çapraz görünümünde ment (NADİR) dizisi NADİR faktör 8, görünüm 4 x 4 cm 2 alan, kalınlığı 1,0 mm, matris boyutu 266 dilim x 266, düzlem çözünürlüğü 150 x 150 mm 2 ve deney başlatmak için ortalamalar 6. sayısı, yazılım konsolunda Tarama Kontrol penceresindeki &#39;trafik ışığı&#39; düğmesine tıklayın. </li><li> Tekrarlama süresi 1 H MRG aynı bölgede bir FLASH sırası kullanılarak 19 F görüntüleri Edinme 220 ms, çevirme açısı = 30 °, eko zamanı 3,078 ms, matris boyutu 32 x 32, düzlem çözünürlüğü 1.25 x 1.25 mm 2, &#39;GOP&#39; yazılım konsolunda Spektrometre Kontrol Aracı penceresinde (G o- O n P ipeline) düğmesini tıklatın, kalınlığı 4.0 mm dilim ve ortalamalar 768. sayısı deney başlatmak için. </li></ol></li><li> MR sonrası intraperitoneal Injecti ile fare euthanizeG / 15 ul vücut ağırlığı ketamin / kan kaybından için kardiyak delme ve ardından ksilazin çözeltisi (kg vücut ağırlığı başına 150 mg ketamin / 18 ksilazin). </li><li> anestezi fare kurtarmak için periton kateteri çıkarmak ancak sternal yatma korumak için yeterli bilinç kavuşur kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. </li><li> Yukarıda açıklandığı gibi, organ hasadından 19 F-etiketli safra asidi konsantrasyonlarını 11-13 ölçmek için ketamin artı ksilizin ile anestezi korumak. </li></ol>

<ol><li>Thomas, C., Pellicciari, R., Pruzanski, M., Auwerx, J., Schoonjans, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+bile-acid+signalling+for+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Targeting bile-acid signalling for metabolic diseases.</a> Nat Rev Drug Discov. 7, 678-693 (2008).</li>
<li>Vallim, T. Q., Edwards, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acids+have+the+gall+to+function+as+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Bile acids have the gall to function as hormones.</a> Cell Metab. 10, 162-164 (2009).</li>
<li>Dawson, P. A., Karpen, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+Review+Series%3A+Intestinal+Lipid+Metabolism%3A+New+Developments+and+Current+Insights+Intestinal+transport+and+metabolism+of+bile+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Thematic Review Series: Intestinal Lipid Metabolism: New Developments and Current Insights Intestinal transport and metabolism of bile acids.</a> Journal of Lipid Research. 56, 1085-1099 (2015).</li>
<li>Dawson, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+deletion+of+the+ileal+bile+acid+transporter+eliminates+enterohepatic+cycling+of+bile+acids+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Targeted deletion of the ileal bile acid transporter eliminates enterohepatic cycling of bile acids in mice.</a> J Biol Chem. 278, 33920-33927 (2003).</li>
<li>Pattni, S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+understanding+of+bile+acid+malabsorption%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the understanding of bile acid malabsorption.</a> Br Med Bull. 92, 79-93 (2009).</li>
<li>Walters, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mechanism+for+bile+acid+diarrhea%3A+defective+feedback+inhibition+of+bile+acid+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">A new mechanism for bile acid diarrhea: defective feedback inhibition of bile acid biosynthesis.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1189-1194 (2009).</li>
<li>Hofmann, A. F., Mangelsdorf, D. J., Kliewer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+diarrhea+due+to+excessive+bile+acid+synthesis+and+not+defective+ileal+transport%3A+a+new+syndrome+of+defective+fibroblast+growth+factor+19+release%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Chronic diarrhea due to excessive bile acid synthesis and not defective ileal transport: a new syndrome of defective fibroblast growth factor 19 release.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 7, 1151-1154 (2009).</li>
<li>Flynn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deoxycholic+acid+promotes+the+growth+of+colonic+aberrant+crypt+foci%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Deoxycholic acid promotes the growth of colonic aberrant crypt foci.</a> Mol Carcinog. 46, 60-70 (2007).</li>
<li>Glinghammar, B., Rafter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenesis+in+the+colon%3A+interaction+between+luminal+factors+and+genetic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">Carcinogenesis in the colon: interaction between luminal factors and genetic factors.</a> Eur J Cancer Prev. 8, S87-S94 (1999).</li>
<li>Bernstein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carcinogenicity+of+deoxycholate%2C+a+secondary+bile+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Carcinogenicity of deoxycholate, a secondary bile acid.</a> Arch Toxicol. 85, 863-871 (2011).</li>
<li>Zheng, X., Ekins, S., Raufman, J. P., Polli, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+models+for+drug+inhibition+of+the+human+apical+sodium-dependent+bile+acid+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Computational models for drug inhibition of the human apical sodium-dependent bile acid transporter.</a> Mol Pharm. 6, 1591-1603 (2009).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+characterization+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+Acid+transporter+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Design and characterization of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile Acid transporter activity.</a> Pharm Res. 30, 1240-1251 (2013).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+evaluation+of+a+novel+trifluorinated+imaging+agent+for+assessment+of+bile+acid+transport+using+fluorine+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Design and evaluation of a novel trifluorinated imaging agent for assessment of bile acid transport using fluorine magnetic resonance imaging.</a> J Pharm Sci. 103, 3782-3792 (2014).</li>
<li>Vivian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+performance+of+a+novel+fluorinated+magnetic+resonance+imaging+agent+for+functional+analysis+of+bile+acid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">In vivo performance of a novel fluorinated magnetic resonance imaging agent for functional analysis of bile acid transport.</a> Mol Pharm. 11, 1575-1582 (2014).</li>
<li>Raufman, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Magnetic+Resonance+Imaging+to+Detect+Biliary+Excretion+of+19F-Labeled+Drug+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Metab+Dispos%22%5BJournal%5D)">In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Detect Biliary Excretion of 19F-Labeled Drug in Mice.</a> Drug Metab Dispos. 39, 736-739 (2011).</li>
<li>Ridlon, J. M., Kang, D. J., Hylemon, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+salt+biotransformations+by+human+intestinal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Bile salt biotransformations by human intestinal bacteria.</a> J Lipid Res. 47, 241-259 (2006).</li>
<li>Frisch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-methyl-11C%5Dcholylsarcosine%2C+a+novel+bile+acid+tracer+for+PET%2FCT+of+hepatic+excretory+function%3A+radiosynthesis+and+proof-of-concept+studies+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">N-methyl-11C]cholylsarcosine, a novel bile acid tracer for PET/CT of hepatic excretory function: radiosynthesis and proof-of-concept studies in pigs.</a> J Nucl Med. 53, 772-778 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

CA-Lys-TFA ve CA-Sar-TFMA ve sodyum / taurokolat eş taşıma polipeptidi eksprese ASBT ve insan embriyosu böbrek hücrelerini, eksprese eden stabil olarak aktarılmış Madin-Darby köpek böbrek hücreleri kullanılarak taşıma in vitro analizi sentezi (NTCP) Başka bir yerde 13,14 ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Burada odak canlı hayvan MRG ile safra kesesinde MFBA görüntüleme, özellikle, MFBA içeriğinin analizi için safra kesesi, karaciğer ve kan hasat ardından hayvanlar, yaşamak için sonda ile MFBA oral uygu...

Bağırsaktan yağ emilimini kolaylaştıran deterjanlar olarak klasik rolüyle birlikte, safra asitleri kendi enterohepatik sirkülasyon 1,2 ile ilişkili ek olarak birden fazla organı etkileyen güçlü sinyal molekülleri olarak ortaya çıkmıştır. Kendi metabolizmasını kontrol etmeye ek olarak, safra asitleri, gastrointestinal fizyoloji (örneğin, bağırsak hareketleri ve inkretin hormon üretimi, kolon fizyolojisi ve kanser yatkınlık) çeşitli yönlerini modüle ve damar tonusu, glukoz ve lipid metabolizması ve enerji kullanımının sistemik etkileri vardır. Bu etkilerin bazıları bağırsağında aracılık ederken obez hastalarda gastrik by-pass ameliyatı sonrasında belirtildiği gibi, diğerleri, sistemik safra asidi seviyelerinde postprandiyal değişikliklere bağlıdır. gastrointestinal sistem ve meta farklı anatomik bölmeleri içindeki safra asidi seviyelerini eş zamanlı olarak izlenmesini sağlar yeni teknoloji gerekli safra asitlerinin karmaşık metabolik işlemleri, aydınlatmak içinmetabolik dokudan (karaciğer, pankreas, iskelet kası ve yağ). Böyle zamansal ve uzamsal bilgi edinme yenilikçi teknoloji gerektiren - in vivo görüntüleme Burada anlatılan böyle yeni bir yaklaşım olarak yeni safra asidi izleyiciler kullanarak. anatomik bölümlerinde safra asidi kompozisyonu ve dağıtım hepatik sentezini ve diyet, cerrahi, antibiyotik kullanımı ve bağırsak florasında değişiklikler dahil olmak üzere ileal alımını, modüle faktörler tarafından düzenlenir. Bunların enterohepatik dolaşımın 3 (Şekil 1) bağırsak safra asidi alım anahtar düzenleyicisi ileal Apikal sodyuma bağlı safra asidi taşıyıcısı (; SLC10A2 ASBT) &#39;dir. Pasif absorpsiyon bağırsak içinde meydana gelmesine rağmen, ASBT böylece normal dışkı içine Safra asitlerinin sınırlı bir dökülme bağırsak safra asitlerinin% 95 alımını aracılık eder. ASBT-eksikli (Slc10a2 - / -) farelerde dışkı safra asidi ve safra azalmış ACI artmıştırd havuzu 4. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54597/54597fig1.jpg" /> Şekil 1: safra asitlerinin enterohepatik dolaşımının. Safra kesesi depolanan safra Ağacı, içine ifrazatı Safra Asitler karaciğerde sentezlenen sayede Enterohepatik Dolaşım, çizimi, yemekler ile Proksimal İnce Barsak içine Çıkış ve Aktif Distal ileumda ASBT aracılığıyla alınır. Safra asitlerinin küçük miktarlarda, gut ile pasif olarak absorbe edilirken, bağırsak safra asitlerinin yaklaşık olarak% 95 yeni bir safra asidi sentezi benzer miktarda kompanse edilir dışkıda az (yaklaşık% 5) kaybı ile sonuçlanan ASBT aktif olarak taşınmaktadır karaciğer, böylece bir kalıcı-hal safra asidi havuzu muhafaza. Sağdaki oklar, mide asidi, pankreas, bağırsak mukoza enzimler ve en importantl dahil nativ ve fluor-etiketli safra asidi stabilitesini etkileyebilecek faktörler, tespitDistal ince bağırsak ve kolon kolonize Clostridial türlerinin tarafından yayımlanan y hidrolitik enzimler. (Izni 16 Modifiye) <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Safra asidi malabsorpsiyon böylece aralıklı veya kronik ishale neden fekal dihidroksi safra asitlerini arttırır her biri üç tip, kategorize edilebilir. Brüt İleal patoloji (örn rezeksiyon, Crohn hastalığı) 5 1 sonuçları yazın. kolesistektomi, vagotomi, çölyak hastalığı, bakteriyel aşırı çoğalma ve pankreas yetmezliği 3 sonuç yazın. böyle önceki koşulları eksikliği ve ileumda patoloji kanıt yok çünkü aksine, &#39;primer&#39; (Tip 2) safra asidi malabsorpsiyonu olan kişiler zorlu bir tanısal teşkil etmektedir. Bu nedenle, birincil safra asidi malabsorpsiyon yaygın ishal-p gibi yanlış teşhisredominant irritabl bağırsak sendromu (IBS-D), gastroenteroloji ile ilgili ayaktan hasta ziyaretleri için belki de en yaygın nedeni. IBS-D olan hastaların üçte biri birincil safra asidi malabsorbsiyon sahip olduğu tahmin edilmektedir; ABD&#39;de, bu birkaç milyon kişi 5 temsil edebilir. Yeni yaklaşımlar primer BAM düşürülebildiği ekspresyon veya ASBT fonksiyonu ile ilgili bağırsak fibroblast büyüme faktörü-19 (FGF19) ile safra asidi sentezinin bozulmuş geri besleme inhibisyonu nedeniyle ortaya çıktığını göstermektedir. ASBT dahil bağırsak safra asitlerinin sonuçlanan artış doyurur safra asidi taşıyıcıları, ve dışkı içine safra asitlerinin artar dökülme ishal 6 neden - birincil safra asidi emilim bozukluğu içinde, FGF19 düşük plazma seviyeleri karaciğer safra asidi sentezini kapatmak için başarısız (Şekil 2). Fgf15 (murin FGF19) eksik fareler, bir safra asidi havuzu genişletilmiş ve dışkı safra asitleri 7 artmıştır. Şekil 2: Bağırsak Safra Asit malabsorbsiyonun mekanizmaları. Panel A&#39;da gösterildiği gibi, normal olarak, bağırsak safra asitlerinin yaklaşık% 95 ASBT ile uzak ileumun aktif taşıma vasıtası ile emilir. ASBT ifade veya aktivite (panel B), kolona safra asitlerinin dökülme olarak bozuk intestinal safra asidi alım sonuçlarını azaldığı zaman. Bozulmuş FGF19 sinyalizasyonu (panel C) ile, kolon içine safra asitlerinin dökülmesinden ile ASBT taşıma kapasitesi bastıran bağırsak safra asitlerinin artmasına konsantrasyonlarda karaciğer safra asidi sentezi sonuçlarının feedback inhibisyon eksikliği. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54597/54597fig2large.jpg" target="_blank">Büyük halini görmek için tıklayınız bu figür.</a> Uzun vadeli, fekal safra aci kronik yükseklikds kolon neoplazi teşvik edebilir. Kolon neoplazi somatik gen mutasyonları, ama hızlandırmak ve bu süreci arttırsınlar fekal safra asitlerini arttırmak çevresel faktörlerle ilişkili progresif mukozal displazi kaynaklanmaktadır. Kemirgenlerde ya dışarıdan uygulanması ya ASBT eksikliğinin bir sonucu olarak, kolon displazi ve tümör oluşumunu 8-10 teşvik dışkı safra asitlerini artmıştır. Özellikle, kışkırtıcı bulgular Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından onaylanmış yaygın olarak kullanılan ilaçlar kuvvetli in vitro 11 ASBT tarafından safra asidi taşıma önlediğini göstermektedir. Bu ilaçlar in vivo ince bağırsak safra asidi taşıma azaltmak ve fekal safra asidi düzeylerini artırmak durumunda, kolon patolojisi üzerindeki potansiyel etkisi konusunda olacaktır. kolon patoloji bile küçük bir artış önemli bir sağlık etkiye sahip olabilir, böyle bir ilacın kullanımı atfedilen. In vitro bulgular ve epidemiyolojik ob bunların inandırıcılığını değerlendirmek Bir araççekincelerin konulması pazarlama sonrası güvenlik çalışmaları dahil olmak üzere ek araştırmalar, teşvik ediyorum. ihtiyacı rağmen, pratik deneyler safra asidi malabsorpsiyonu insanlar eksik tanımlamak için. Fekal safra asitlerinin direkt ölçümü, hantal pratik ve 5 güvenilmez olarak yıllar önce reddedildi. Alternatif yaklaşımlar, bir radyoaktif selenyum-işaretli kolik asit türevi (75 SeHCAT) ve 7α-hidroksi-4-kolesten-3-on (C4), veya safra asidi bağlayıcı bir terapötik değerlendirme plazma seviyelerinin tutma ölçülmesi yer alır. 75 SeHCAT test vardır tanısal test gelen Üstelik ABD&#39;de kullanım için sınırlı Avrupa&#39;da kullanılabilirliği ve FDA onaylı değil veya mevcut, hatta mütevazı radyasyona maruz kalma (0.26 mSv / 75 SeHCAT testi) kaygı uyandırmaktadır ve bakteriyel aşırı çoğalma ve ilerlemiş karaciğer hastalığı 75 SeHCAT sonuçlarını yanıltabilecek. C4 test sadece plazma gerekli olduğundan potansiyel olarak cazip olmakla birlikte, düşük pozitif öngörü val vardırue ve test yaygın olarak mevcut değildir. FGF19 serum seviyelerini ölçerek benzer sınırlamalar vardır. Sıkça klinisyenler safra asidi tutucuları terapötik deneme başvurmak, ancak bu yaklaşım safra asidi emilim bozukluğu 5 kesin bir tanı sağlayamaz. Bu nedenlerden dolayı, yeni bir MR yaklaşımı yenilikçi bir çoklu flüorinlenmiş safra asitleri (MFBA-MRI) kullanılarak in vivo olarak safra asidi taşıma ve dağıtım ölçmek için tasarlanmıştır. Florin (19F),% 100 doğal bir bolluk izotop üç atom içeren MFBA, yerli safra asitlerinin 12 benzer şekilde taşınır, ve proton (1 H) ve flor (bir kombinasyonu ile safra asidi taşınma görselleştirmek için kullanılabilmektedir 19 F) MRG, radyasyon maruziyeti 13,14 iyonlaştırıcı olmayan hassas, güvenli bir yöntemdir.

<table><tbody><tr><td>Duall size-21 tüm cam doku öğütücü</td><td>Kimble Chase Life Science, Vineland, NJ</td><td>885351-0022</td><td></td></tr><tr><td>Bruker BioSpec 70/30USR Avance III 7T yatay delikli MR Tarayıcı</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, Almanya</td><td></td><td>Yardımcı Paravision Sürüm 5.1 yazılımını kullanın (bkz. adım 3.5)</td></tr><tr><td>Bruker 40 mm 19F/1H çift ayarlı linerar hacim bobini</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH, Almanya</td><td></td><td>Yardımcı Paravision Sürüm 5.1 yazılımını kullanın (bkz. adım 3.5)</td></tr> <tr><td>Dört Kutuplu Dedektörlü Waters Acquity UPLC Sistemi</td><td>Waters Corporation, Milford, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Waters Acquity UPLC etilen köprülü hibrit C8 1.7 & mu; m 2.1 x 50 mm sütun</td><td>Waters Corporation, Milford, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gavage İğnesi</td><td>Braintree Scientific, INC.</td><td>N-010</td><td>20 G-1.5" kavisli 2.25 mm top</td></tr><tr><td>2 Paslanmaz Çelik Kanama Durdurucu&nbsp;</td><td>VWR</td><td>10755-018</td><td>4 ve 5 inç, düz</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>MWI Veteriner Tedarik</td><td>501090</td><td>Ketamin zetamin 100 mg / ml</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>İntraperitoneal Kateter</td><td>Abbott</td><td>AbbocathTM-T.I.V. G720-A01 4535-42</td><td>24 G x 0,75 inç</td></tr></tbody></table>

Çok florlu safra asitler ve kullanma<em&gt; İn vivo</em&gt; manyetik rezonans görüntüleme tedbir safra asit ulaşım

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

yağ emilimini kolaylaştıran deterjan gibi geleneksel rolleriyle birlikte, edebiyat ortaya çıkan safra asitleri çoklu organları etkileyebilir güçlü sinyal molekülleri olduğunu gösterir; bunlar bağırsak motilitesi ve hormon üretimini modüle eden ve vasküler tonus, glikoz metabolizması, lipid metabolizması ve enerji kullanımını değiştirebilir. fekal safra asitlerinin değişiklikler bağırsak mikrobiyomları değiştirebilir ve cholerrheic ishal ve kolon kanseri de dahil olmak üzere kolon patolojisi teşvik edebilir. dışkı safra asidi bileşiminin anahtar regülatörleri ince bağırsak Apikal sodyuma bağlı safra asidi taşıyıcısı (ASBT) ve fibroblast büyüme faktörü-19 (FGF19) vardır. ASBT azalma ifadesi ve fonksiyon bağırsak safra asidi yukarı çekmek azalır. Ayrıca, in vitro veriler, bazı FDA onaylı ilaçlar ASBT fonksiyonunu inhibe olduğunu göstermektedir. Eksik FGF19 bırakma hepatik safra asidi sentezini artırır ve ASBT bastıran seviyelere bağırsak içine bırakın. Ya ASBT işlev bozukluğu veya FGF19 eksikliği f artırırECAL safra asitleri ve kronik ishale neden ve kolon neoplazi teşvik edebilir. Ne yazık ki, aletler safra asidi malabsorpsiyon ve in vivo olarak safra asidi taşıma ilaçların etkilerini ölçmek için sınırlıdır. Safra asitlerinin karmaşık işlemler anlamak için, teknik gut ve metabolik dokularda safra asitlerinin eş zamanlı izleme izin verdiği gerekmektedir. Bu proton (1H) ve flor (19 F) manyetik rezonans görüntüleme (MRG) bir kombinasyonu kullanılarak, canlı hayvanlarda safra asidi taşıma ölçmek için yenilikçi bir yöntem gebe götürdü. Florin (19F) yönelik yeni izleyiciler, in vitro ve in vivo olarak, canlı bir hayvan MR hazırlandı ve test edildi tabanlı. Bu yaklaşımın Güçlü Yönler, klinik araştırma ve uygulama için radyasyon ve translasyonel potansiyelini iyonize maruz kalma eksikliği sayılabilir.

Gerçek zamanlı in vivo MR için MFBA kullanımı görmek &#39;safra asidi taşıma araştırma ve klinik kullanım açısından büyük bir potansiyele sahiptir. Ayrıca, safra kesesi rezeksiyonu ve sıvı kromatografisi ve kütle spektrometrisi kullanılarak, içeriğinin biyokimyasal analiz için burada açıklanan yöntemler, görüntüleme sonuçları teyit için bir yol sağlar. Bununla birlikte, bu yöntemlerin geçerliliği hassas doz, tahliller zamanlamasını ve görüntüleme veya cerrahi olarak çıkarılması ...

Araçlar sınırlıdır safra asidi malabsorpsiyon teşhis ve in vivo olarak safra asidi taşınma ölçülür. Canlı hayvanların yenilikçi bir yaklaşım kombine proton (1H) artı flor (19 F) manyetik rezonans görüntüleme kullanır tarif edilmektedir; Bu yeni yöntem, klinik uygulamada safra asidi malabsorbsiyona taranması için öteleme potansiyele sahiptir.

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma<em&gt; İn Vivo</em&gt; Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Bu prosedürün genel amacı, canlı hayvanlarda safra asidi transportunu incelemek için safra kesesindeki konsantrasyonlarının MRI ile ölçülmesini sağlamak amacıyla, safra asitlerini doğal olarak oluşan, radyoaktif olmayan flor ile işaretlemektir. Bu yaklaşım, safra asidi malabsorpsiyonu nedeniyle tedavi edilmesi gereken kronik ishal hastalarının belirlenmesi potansiyeline sahiptir. Bu yöntemin temel avantajları, iyonize radyasyona maruz kalma gerektirmemesi ve hem klinik araştırma hem de uygulama için yüksek translasyonal potansiyele sahip olmasıdır.Bu yöntemle ilgili ilk fikrimiz, Amerika Birleşik Devletleri'nde bozulmuş bağırsak safra asidi transportunu tespit etmek için pratik klinik testlerin bulunmadığını fark ettiğimizde oluştu. Bir mililitrelik şırıngayı uygun hacimdeki flor işaretli safra asidi stok çözeltisiyle doldurarak başlayın ve 20 gauge, 1,5 inçlik, kavisli, ucu yuvarlak gastrik gavage iğnesi takın. Ardından, başparmak ve işaret parmağınızı kullanarak fareyi ensesindeki gevşek deriden sıkıca kavrayın ve kalan parmaklarınızla alt sırt ve kuyruk bölgesindeki deriyi tutun.Hayvanı dik tutarak, gavage iğnesini ağzın yan tarafı ve tavanı boyunca yemek borusundanle mideye doğ

using-multi-fluorinated-bile-acids-vivo-magnetic-resonance-imaging-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Ex vivo olarak etiketlenmiş hücreler ile bir fare modelinde, MRI kullanılarak in vivo hücre takibi için genel bir protokol açıklar. Hücre etiketleme, görüntü alma ve işleme ölçümü için tipik bir protokol dahildir.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

Burada, sıçanlarda mezenterik lenf kanalını kanüle etmek için bir tekniği tarif ediyoruz, bu da bağırsak doğumunu takiben lenfatik sistem yoluyla lipid ve ilaç taşınmasının nicelikini sağlar. Teknik, mezenterik lenf konsantrasyonlarını ve/veya sıvının, bağışıklık hücrelerinin, peptitlerin, proteinlerin ve lipofilik moleküllerin taşınmasını değerlendirmek için uyarlanabilir.

Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

Genetik olarak kodlanmış bir BAS FRET sensörü kullanarak canlı hücrelerde safra asidi dinamiklerini incelemek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu Safra Asidi Sensörü, çok çeşitli hücre tiplerinde safra asidi taşınmasını ve FXR aktivasyonunu incelemek (düzenlemek) için benzersiz bir araçtır.

Genetik olarak kodlanmış FRET tabanlı Safra Asit Sensor Kullanımı Hücre içi Safra Asit Dynamics Gerçek Zamanlı İzleme

Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Erişimi besinler, microbiota metabolitleri ve dolaşım için ilaçlar, gut-kan bariyerini (GBB) tarafından denetlenir. Biz hangi sık kullanılan dolaylı yöntemler aksine, karaciğer ve böbrek işlevleri tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği vivo içindeölçmek için doğrudan bir yöntem açıklanmaktadır.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

Bu protokol, multipl sklerozun bir hayvan modelinde pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme ile in vivo miyelin değişikliklerini (demiyelinasyon ve remiyelinasyon) izlemeyi amaçlamaktadır.

Multipl Sklerozun Lysolecithin Rat Modelinde Miyelin İçeriğinin In Vivo Ölçümü için Pozitron Emisyon Tomografi Görüntüleme

Diyete bağlı alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) fare modeli kullanarak, NAFLD'nin progresyon aşamalarını değerlendirmek için non-invaziv bir yöntem olarak yeni in vivo mikro-bilgisayarlı tomografi görüntüleme tekniklerinin kullanımını, ağırlıklı olarak hepatik vasküler ağa odaklanarak tanımladık.

Alkole Bağlı Olmayan Yağlı Karaciğer Hastalığının Progresyonunu Değerlendirmek İçin Yeni In Vivo Mikrobilgisayarlı Tomografi Görüntüleme Teknikleri

Burada, aynı biyolojik kökeni ve doğal hücre dışı veziküllerin (EV'ler) benzer yapısını, morfolojisini ve protein bileşimini paylaşan yeni bir tür eksozom taklitleri (EM'ler) olarak endozomdan türetilmiş nanoveziküllerin büyük ölçekli üretimi için manyetik ayırma destekli yüksek hızlı bir homojenizasyon yöntemini açıklıyoruz.

Endozom kaynaklı veziküllerin büyük ölçekli üretimi için manyetik ayırma destekli yüksek hızlı homojenizasyon yöntemi

Bu protokol, genetik olarak tasarlanmış fare modellerinde pankreas adenokarsinom tümörlerini tespit etmek için dört hayvana kadar paralel manyetik rezonans görüntüleme (MR) için çok odalı bir yatak kullanır. Bu çok hayvanlı MRI protokolü, tümörlerin tespit edilmesi ve ölçülmesi için hızlı ve maliyet etkilidir; preklinik çalışmalar için hayvan seçimini kolaylaştırır ve tümör büyümesinin uzunlamasına izlenmesini kolaylaştırır.

Pankreas Kanseri Fare Modellerinde Tümör Ölçümleri İçin Çok Hayvanlı Manyetik Rezonans Görüntüleme

Miyokard dokusunda gerginlik gibi parametreleri ölçmek için doğru ve pratik bir yöntem gösterilmiştir beri, bu zorlanma, sık kullanılan parametre EF daha kontraktil disfonksiyon için daha duyarlı ve daha önceki bir belirteçtir, büyük klinik değeri.

Özellik Takibi Manyetik Rezonans Türetilmiş Miyokard Gerinim Değerlendirmesi

Öğrenin, canlı hayvanlarda safra asidi taşınmasını değerlendirmek için florlu etiketli safra asitleri ve manyetik rezonans görüntüleme kullanarak kronik ishal tanısı için radyasyonsuz bir yöntem geliştirin.

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma

Daha fazla video keşfet