Name: Basit mekanik Prosedür Mouse Limbal Kök Hücre Eksikliği oluşturma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: Öğrenin, farede limbal kök hücre eksikliği modeli oluşturmayı; bu basit mekanik teknik, istenmeyen göz hasarı oluşturmadan sürdürülebilir bir model sağlar ve hücresel moleküler düzeyde uzun vadeli çalışmalara olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar görüntülemede ona cömert yardım için, Ruth Zelkha, MS teşekkür ederim. Bu araştırma ME Klinik Scientist Kalkınma Programı Ödülü K12EY021475 tarafından desteklenen, ARD, Ulusal Göz Enstitüsü, NIH ve Körlük Önlemek için Araştırma sınırsız bağışı çekirdek hibe EY01792 için R01 EY024349-01A1 verin. ARD Araştırma engelle Körlük bir Kariyer Geliştirme Ödülü almıştır.

Hayvanlar üzerinde yapılan tüm işlemler vizyon araştırma hayvan kullanım için Vizyon ve Oftalmoloji tablolarında Araştırma Derneği ile uyumludur. Altı aylık erkek / kadın C57BL / 6J vahşi tip farelere Ondört dört kullanıldı: on yaralanma modeli için fareler ve kontrol hayvanlarına olarak dört (yaralı olmayan korneası). 1. Hayvan hazırlanması <ol><li> Bir 100 mg / kg ketamin intraperitonal enjeksiyon ve 5 mg / kg ksilazin karışımı ile bir fare anestezisi. Anestezi etkisi almıştır sonra, anestezi derinliği onaylamak için ayak tutam; Hayvan tepkimeye girmemelidir. </li><li> herhangi bir önceki kornea hasarı yokluğunu doğrulamak için deneylerini önce bir yarık lamba altında göz kontrol edin. </li><li> gözün üzerine% 1 tetracaine hidroklorür bir damla aşılamak. 60 Sonra - 90 saniye, duyu yokluğunu doğrulamak için kornea refleksi test edin. Proparakain hidroklorür% 0.5 yerine kullanılabilir. </li><li> Ne zaman kornea duyu kaybıBelirli nazikçe göz ve göz çevresinde saç% 5 povidon-iyot bir damla yerleştirin. 1 dakika sonra damla silin ya da araç ipucu müdahale saç önlemek için göz çevresinde saç üzerine yayılır. </li></ol> 2. Kornea epiteli zımpara <ol><li> cerrahi eldivenleri ve bir önlük giyin. Steril dönen çapak ve steril bir cımbız: gerekli araçları hazırlayın. Daha iyi kontrol için, bükülmüş cımbız kullanın. İşlem sırasında steril bir kağıda araçları yerleştirin. </li><li> bükülmüş cımbız kullanarak, burun tarafında kapaklarını kapma ve yavaşça göz proptosing ile göz stabilize. Çok fazla baskı kullanmaktan kaçının. </li><li> Cerrahi mikroskop altında, iki kez steril dönen çapak kullanarak limbal alanı çevresinde 360 ​​° tıraş. Tur başına 6 sn - 5 hızında limbusta etrafında gidin. NOT: çapak bir sabit hıza sahip. Ancak, kurulan hızda döndürmek için, &quot;son fındık&quot; tamamen sıkılmalıdır. </li><li> Dönen çapak ile limbusa limbustan bütün kornea epiteli çıkarın. Daha iyi sonuçlar için, dairesel bir şekilde aracı hareket ettirmek ve kornea yüzeyinin biraz paralel olarak ucunun yan tarafına çalışmak tutun. re-fırçalama tarafından değil epiteli zaten kaldırılmış alanları stroma kesmemeye dikkat edin. göz üzerinde herhangi bir baskı uygulamayın. gerektiği gibi fırça ucu temizleyin. </li><li> korneada steril fosfat tamponlu bir damla serum fizyolojik aşılamak ve yumuşak bir temizlik dokusu ile herhangi bir müstakil epitel sayfaları silin. </li><li> varsa kalan epitel tıraş. </li><li> Ameliyat sırasında fare kuyruğu dikkat edin. NOT: herhangi bir hareket oluşursa, anestezi derinliği soluk ve daha fazla enjeksiyon gereklidir. Birincil enjekte hacminin üçte ikisine üçte biri yeterli olmalıdır. anestetik ilaç ile hayvan aşırı doz etmeyin. </li><li> Başka bir göz bunları kullanmadan önce tüm araçları sterilize edin. </li></ol> 3. Onayla Komple epitel Kaldırma <ol><li> kornea olarak 1 mg / ml floresein sodyum bir damla uygulanır. 30 saniye sonra kornea temizleyin ve epitel tümüyle kaldırılmasını doğrulamak için bir kobalt mavisi filtreli bir mikroskop altında incelemek. NOT: epitel defekti ile Kornea alanlar yeşil görünür hale gelir. </li></ol> 4. Post-işlem Bakımı <ol><li> Bir ısıtma battaniye hayvan koyun ve kurtarma altında iken (kendi kafeste, örneğin) güvenli bir yerde saklayın. bilinçli olanların şirket bilinçsiz bir hayvan tutmayın. </li><li> % 1 eritromisin oftalmik merhem sürün. Bu aynı zamanda göz kuruluğu engelleyecektir. Uygulamayı bir hafta boyunca antibiyotik gazetesine devam edin. </li><li> kg buprenorfin subkutan işlemden sonra tekrar 12 saat sonra / 0.1 mg enjekte edilir. İki gün süre ile günde iki defa enjeksiyon devam edin. </li><li> anesteziden tam iyileşme kadar, 45 dakika - 30 hayvan gözlemleyin. NOT: Ventral yüzeyinde solunum kaslarının hafif hareket kurtarma altında iken hayvan welness gösterir. </li></ol>

<ol><li>Afsharkhamseh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+limbal+stem+cell+deficiency+after+mechanical+and+thermal+injuries+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Stability of limbal stem cell deficiency after mechanical and thermal injuries in mice.</a> Exp. Eye Res. 145, 88-92 (2015).</li>
<li>Dorà, N. J., Hill, R. E., Collinson, J. M., West, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+tracing+in+the+adult+mouse+corneal+epithelium+supports+the+limbal+epithelial+stem+cell+hypothesis+with+intermittent+periods+of+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Lineage tracing in the adult mouse corneal epithelium supports the limbal epithelial stem cell hypothesis with intermittent periods of stem cell quiescence.</a> Stem Cell Res. 15 (3), 665-677 (2015).</li>
<li>Ahmad, S., Osei-Bempong, C., Dana, R., Jurkunas, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+and+transplantation+of+human+limbal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">The culture and transplantation of human limbal stem cells.</a> J. Cell Physiol. 225 (1), 15-19 (2010).</li>
<li>Kolli, S., Ahmad, S., Lako, M., Figueiredo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+clinical+implementation+of+corneal+epithelial+stem+cell+therapy+for+treatment+of+unilateral+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Successful clinical implementation of corneal epithelial stem cell therapy for treatment of unilateral limbal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 28 (3), 597-610 (2010).</li>
<li>Ahmad, S., Figueiredo, F., Lako, M. Corneal epithelial stem cells: characterization, culture and transplantation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhmad%2C+S+%22Regen.+Med%22">Regen. Med</a>. 1 (1), 29-44 (2006).</li>
<li>He, H., Yiu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+therapy+for+treating+limbal+stem+cells+deficiency%3A+A+review+of+different+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based therapy for treating limbal stem cells deficiency: A review of different strategies.</a> Saudi J. Ophthalmol. 28 (3), 188-194 (2014).</li>
<li>Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+the+basement+membrane+enhances+corneal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing.</a> Exp Eye Res. 93 (6), 927-936 (2011).</li>
<li>Stepp, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wounding+the+cornea+to+learn+how+it+heals%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Wounding the cornea to learn how it heals.</a> Exp. Eye Res. 121, 178-193 (2014).</li>
<li>Amirjamshidi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+fibroblast+conditioned+media%3A+a+non-invasive+treatment+for+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Limbal fibroblast conditioned media: a non-invasive treatment for limbal stem cell deficiency.</a> Mol. Vis. 17, 658-666 (2011).</li>
<li>Li, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+AlgerBrush+II+rotating+burr+as+a+tool+for+inducing+ocular+surface+failure+in+the+New+Zealand+White+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the AlgerBrush II rotating burr as a tool for inducing ocular surface failure in the New Zealand White rabbit.</a> Exp. Eye Res. 147, 1-11 (2016).</li>
<li>Ti, S. E., Anderson, D., Touhami, A., Kim, C., Tseng, S. C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+outcome+following+transplantation+of+ex+vivo+expanded+limbal+epithelium+on+amniotic+membrane+for+total+limbal+deficiency+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Factors affecting outcome following transplantation of ex vivo expanded limbal epithelium on amniotic membrane for total limbal deficiency in rabbits.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 43 (8), 2584-2592 (2002).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+chemically+burned+rat+corneal+surface+by+bone+marrow-derived+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of chemically burned rat corneal surface by bone marrow-derived human mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 24 (2), 315-321 (2006).</li>
<li>Bu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+activated+omental+cells+on+rat+limbal+corneal+alkali+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of activated omental cells on rat limbal corneal alkali injury.</a> Exp. Eye Res. 121, 143-146 (2014).</li>
<li>Luengo Gimeno, F., Lavigne, V., Gatto, S., Croxatto, J. O., Correa, L., Gallo, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+corneal+stem-cell+transplantation+in+rabbits+with+severe+ocular+alkali+burns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Advances in corneal stem-cell transplantation in rabbits with severe ocular alkali burns.</a> J. Cataract Refract. Surg. 33 (11), 1958-1965 (2007).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+limbal+stem+cell+deficiency+induced+by+topical+medication+with+the+preservative+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of limbal stem cell deficiency induced by topical medication with the preservative benzalkonium chloride.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6314-6325 (2013).</li>
<li>Huang, A. J., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+epithelial+wound+healing+in+the+absence+of+limbal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Corneal epithelial wound healing in the absence of limbal epithelium.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32 (1), 96-105 (1991).</li>
<li>Liu, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cornea-specific+expression+of+K12+keratin+during+mouse+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Cornea-specific expression of K12 keratin during mouse development.</a> Curr. Eye Res. 12 (11), 963-974 (1993).</li>
<li>Nakatsu, M. N., González, S., Mei, H., Deng, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+limbal+mesenchymal+cells+support+the+growth+of+human+corneal+epithelial+stem%2Fprogenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Human limbal mesenchymal cells support the growth of human corneal epithelial stem/progenitor cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 55 (10), 6953-6959 (2014).</li>
<li>Pajoohesh-Ganji, A., Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+goblet+cells+and+their+niche%3A+implications+for+corneal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Corneal goblet cells and their niche: implications for corneal stem cell deficiency.</a> Stem Cells. 30 (9), 2032-2043 (2012).</li>
<li>McCloy, R. A., Rogers, S., Caldon, C. E., Lorca, T., Castro, A., Burgess, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13, 1400-1412 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını beyan ederler.

Bu makalede, LSCD olan bir fare modeli oluşturmak için yeniden üretilebilir ve nispeten basit bir teknik açıklanmaktadır. fazlalaştı olan bu modelin bazı önemli yönleri vardır. İlk olarak, kimyasal madde 11, 12 kullanımı farklı modeller, yaralanma esas olarak altta yatan kornea stroma veya başka göz içi yapıların en az zararla yüzey epiteli (ve bazal zar) içerir. Böylece, prosedürü komplike ve daha zor limbal kök hücrelerin yönelik herhangi bir müdahalelerin sonucunu değerlendirmek için yapabileceğiniz her ik...

kornea epitel kornea netlik ve bütünlüğünü korumak için gereklidir. Sürekli kornea ve konjonktiva kavşağında Limbustan-dar bir bölgede yaşayan epitel kök hücreleri tarafından yaşamı boyunca yenilenir. Bunlar kendini sürekli yenileyen limbal kök hücreler hem normal ve yaralanma sonrası, kornea epitel rejenere önemli bir rol oynamaktadır. Bu kök hücrelerin kısmen ya da tamamen tükenmesi tekrarlayan kornea erozyonlar, ağrı, kornea yara ve neovaskülarizasyon, goblet hücre görünümü neden olacak ve tedavi edilmezse, korneal körlük bırakılırsa. Bu durum limbal kök hücre eksikliği (LSCD) olarak da bilinir ve idiyopatik olabilir; kalıtsal; veya bağlı kimyasal veya termal yaralanmalar, uzun süreli kontak lens takmak ve kronik inflamasyon 1-6 kazandı. LSCD üzerine yapılan araştırmalar, uygun bir hayvan modeli gerektirir, sadece taklit insanlarda hastalık, ancak en az olan, tekrarlanabilir ve sürdürülebilirdiğer kornea ve oküler yapıların yaralanma montaj. Bu model tedavileri değerlendirmek ve moleküler ve hücresel düzeyde hastalık mekanizmalarını açıklamak gereklidir. Dönen bir çapak kullanımı ile, 1 Daha önce anlatıldığı gibi, kolayca bahsedilen avantajlara sahiptir ve en az üç ay boyunca devam LSCD bir fare modeli geliştirebilir. Bu çalışmanın amacı LSCD basit, tekrarlanabilir ve sürdürülebilir fare modeli sunmaktır. Dönen çapak eşit altta yatan stroma 1 zarar vermeden epitel kaldıran bir araçtır. Yara iyileştirici çalışmalarda kornea erozyon 7, 8 uyarılması için kullanılmıştır. Bir fare LSCD oluşturmak için vesile-sunulan teknik daha önce rapor edilmemiştir. Daha önce daha fazla restorasyon o ile, daha az homojen yaralanma-özellikle limbus-ve daha değişken bir fenotip 1, 9 bir künt spatula sonucu epitel kazıma yöntemleri tanıttıf Normal kornea epitel 1. Kör kazıyıcı farklı olarak, döner çapak oyuk 7, 8, 10 gibi epitelyal bazal membran kaldırır. kök hücreleri ayırmak için bildirilen diğer metotlar, altta yatan göz yapılarına istenmeyen yaralanmalara neden olabilir, aynı zamanda önemli enflamasyon ve daha sonra kornea opasitesi ya yol açabilir, sadece sodyum hidroksit, n-heptanol, ve benzalkonyum klorür gibi kimyasal kullanılmasını içerir epitel skuamöz metaplazi 11-15. Dönen çapak bu ciddi komplikasyonlar ile ilişkili değildir. Cerrahi, tek başına ya da kimyasal maddelerin 10, 11, 16 kullanımı ile, limbal epitel kaldırma gerçekleştirmek için daha zordur ve küçük gözler ve (fare gibi) ince limbal epitel hayvanlarda en iyi seçenek değildir. Buna ek olarak, şaşırtıcı, limbectomy hala 10 gerisinde limbal epitel bazı bırakabilir. Aşağıda tarif edilen teknik, neovaskülarizasyon AN LSCD neden olurhastada tam LSCD sunumunu taklit ve en az üç ay 1 sürer D konjonktiva. Bu farelerde LSCD veya yara iyileşmesi patofizyolojisi, immünoloji ve potansiyel tedavi çalışma amacı olanlar için uygundur. Muhtemelen, bazı değişikliklerle, bu prosedür sıçan ya da tavşan 10 gerçekleştirilebilir. Dönen çapak verimli epitel kaldırır gibi, korneal epitel aşınma / yaralama ve herhangi bir ilgili tedavi ya da moleküler biyoloji çalışmalarında ilgili herhangi bir araştırma kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Döner çapak: AlgerBrush II pas halkası sökücü&nbsp;</td><td>Rumex International Co, Clearwater, FL</td><td>16-141</td><td>0,5 mm çapak. Ayrıca diğer şirketlerden de temin edilebilir.</td></tr><tr><td>Cerrahi mikroskop</td><td>Wild Heerbrugg, İsviçre</td><td>Wild M691</td><td></td></tr><tr><td>Dijital kamera</td><td>Nikon, Tayland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon FS-2 yarık lamba</td><td>Nikon, Japonya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Poliklonal anti-CK12 antikoru</td><td>Santa Cruz Blotechnology, CA,SC-17101</td><td></td> <td>1:100 konsantrasyon</td></tr><tr><td>Monoklonal anti-CK8 antikoru</td><td>TROMA-I-s, Iowa City, IA</td><td>AB_531826</td><td>1:50 konsantrasyon</td></tr></tbody></table>

basit mekanik prosedür mouse limbal kök hücre eksikliği oluşturma

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

Limbal kök hücre eksikliği (LSCD) arıza veya kornea epitel konjonktiva ile değiştirilir sonra limbal epitel kök hücrelerin, kaybı durumudur. Hastalar tekrarlayan kornea defektleri, ağrı, enflamasyon ve görme kaybı muzdarip. Daha önce, LSCD bir fare modeli tarif ve diğer iki model ile karşılaştırılmıştır. amaç hem taklit insanlarda fenotip ve hastalık patofizyolojisini incelemek için ve yeni tedaviler değerlendirmek mümkün kılmak için yeterince uzun sürer LSCD tutarlı bir fare modeli üretmek oldu. Burada, tekniğin daha ayrıntılı olarak tarif edilmektedir. Dönen bir çapak ile bir motorlu araç kornea yüzeyinden pas halkaları çıkarmak için ya da hastaların pterjium yatak düzeltmek için tasarlanmıştır. İstenen LSCD model oluşturmak için uygun bir cihazdır. Sanki, küçük gözleri üzerinde çalışmak için uygun kılan bir ince ucu ile bir hazır, kolay kullanımlı bir araçtırFarelerde. Bu uygulama, göze gereksiz travma önler ve genellikle kimyasal yaralanma modellerinde olduğu gibi, istenmeyen yaralanmalara neden olmaz. künt kazıyıcı aksine, bu bazal membran ile epitel kaldırır. Bu protokolde, limbal alan iki kez aşınmış ve daha sonra bütün kornea epitel limbustan limbusa tıraş edildi. Stroma yaralanmasını önlemek için, bakım epiteli zaten kaldırıldı kez kornea yüzeyi fırça değil alındı.

Bu tekniği gerçekleştirdikten sonra bir ay içinde, kornealar% 100 yüzeyel neovaskülarizasyon gelişti (Şekil 1A. Fotoğraflar parlak alan ve kobalt mavisi filtrenin altına bir yarık lamba bağlı bir kamera ile çekildi). Gözün 18/20 (% 90) &#39;de, yeni damar oluşumu, kornea bütün yüzeyi (Şekil 1A) içeriyordu. 2/20 (% 10), neovaskülarizasyon üç dört kornea kadranlarda gözlendi, ama yine de kornea merkezine ulaştı. <p class="jove_content" fo:keep-together...

aşağıdaki makale etkin bir limbal kök hücre yetmezliği (LSCD) sürdürülebilir bir fare modeli oluşturmak için kolay, tekrarlanabilir teknik sağlar. Bu hayvan modeli test ve limbal kök hücre hastalıkları için tedavi etkinliğini karşılaştıran yararlıdır.

Basit mekanik Prosedür Mouse Limbal Kök Hücre Eksikliği oluşturma

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

Bu prosedürün genel amacı; tekrarlanabilir, sürdürülebilir ve kalıcı bir limbal kök hücre eksikliği fare modeli oluşturmaktır. Bu basit teknik, standart kimyasal yaralanma modelleriyle başarılması zor olan, göze istenmeyen hasarlar vermeksizin tutarlı bir limbal kök hücre eksikliği hayvan modeli sağlar. Bu model, hastalık sürecinin hücresel ve moleküler düzeyde uzun vadeli incelenmesi için kullanışlıdır.Ve yeni tedavilerin etkinliğini test etmek veya karşılaştırmak için. Fareyi anestezi altına aldıktan sonra, anestezinin yeterli derinlikte olduğundan emin olmak için parmağını sıkın. Daha önceden herhangi bir kornea yaralanması olmadığını doğrulamak için gözü biyomikroskop (slit lamp) altında inceleyin.Göze bir damla %1 tetracaine hydrochloride damlatın ve 60 saniye bekleyin. Ardından, göze ve çevresindeki tüylere nazikçe %5 povidone iodine uygulayın. Bir dakika sonra, damlayı silin veya tüylerin aletin ucuna müdahale etmesini önlemek için damlayı göz çevresindeki tüylere yayın.Steril bir döner frez ve bir çift steril eğri pens hazırlayın ve bunları işlem boyunca steril bir örtü üzerinde tutun. Şimdi, eğri pens kullanarak göz kapaklarını nazal taraftan kavrayıp gözü sabitleyin ve gö

a-simple-mechanical-procedure-to-create-limbal-stem-cell-deficiency

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Insan retinoblastom farelerde tümörlerin yaymak için bir yöntem açıklanmıştır. Tümör hücreleri bağışıklık eksikliği olan farelerde gözlerinin içine doğrudan enjekte edilir. İkincil tümörlerin başarıyla doğrudan insan tümörleri ve kültürlü tumorspheres hasat hücreler kullanılarak kurulmuştur.

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

Hümanize fareler kullanılarak tümör spesifik T hücrelerin oluşturulması ve karakterizasyonu burada tanımlanmıştır. İnsan timik doku ve genetiği değiştirilmiş insan hematopoietik kök hücrelerin bağışıklığı baskılanmış farelere nakledilmektedir. Anti-tümör bağışıklık yanıtı in vivo incelenmesi için izin veren bir mühendislik insan bağışıklık sisteminin sulandırma ile sonuçlanır.

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Subretinal enjeksiyon, fare gözündeki retina pigment epiteline etkili gen iletimi için kullanılan cerrahi bir tekniktir.  Burada, deneysel farelerde viral vektörlerin retina pigment epiteline subretinal enjeksiyonu için kolay ve tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Fareler Retina Pigment Epitel Gen Tedavisi için Viral Vektörler Limbal Yaklaşım-Subretinal Enjeksiyon

Bu makalede, R26R-Confetti fareleri kullanarak çok renkli bir soy izleme deneyi tasarlama ve gerçekleştirme ilkelerini açıklıyoruz. İlgilenilen diğer dokular için modifiye edilebilen kornea epitel hücrelerinin izlenmesi için özel bir protokol sunuyoruz.

Çok renkli Floresan Reporter Fare kullanma Kornea Hücre Lineage İzleme Bir Yöntem

Bu protokol, bir fare modelinde doğru ve tekrarlanabilir bir kornea ve limbal alkali hasarını indüklemek için bir yöntemi açıklar. Protokol, oldukça kavisli fare korneası ve limbusunda eşit olarak dağılmış bir yaralanmaya izin verdiği için avantajlıdır.

Bir fare modelinde punch-trephine tekniği kullanılarak kornea ve limbal alkali yaralanma indüksiyonu

Burada, insan limbal niş hücrelerini izole etmek ve tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.

Limbal Niş Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Kriyoprezervasyon sonrası hESC kaynaklı fotoreseptör progenitör hücrelerin hazırlanması ve bu hücrelerin rd10 farelerde retina altı verilmesi için ayrıntılı bir protokol tanımladık.

Rd10 Farelerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Fotoreseptör Progenitörlerinin Sub-Retinal Verilmesi

Bu yöntem, katarakt ameliyatını modeller: in vivo yetişkin farelerden lens lifi hücrelerini çıkararak ve bağlı lens epitel hücreleri (LEC'ler) ile kapsül torbasını geride bırakarak. Yaralanma yanıtı daha sonra cerrahi sonrası moleküler ve morfolojik kriterler kullanılarak çeşitli zamanlarda değerlendirilir.

Farelerde Katarakt Cerrahisinin Modellenmesi

Kornea sütürleri ile birlikte kornea epitel küretajı yoluyla şiddetli kornea iltihabının bir sıçan modeli geliştirdik. Çalışma, enflamatuar koşullar altında kornea iltihabı paternlerini, epitel proliferasyonunu ve limbal kök hücrelerdeki değişiklikleri değerlendirdi.

Kornea Sütürleri ile Kombine Kornea Epitel Küretajına Dayalı Sıçanlarda Şiddetli Kornea İnflamasyonu Modelinin Oluşturulması

Burada, kollajenaz A ve tripsin ile ardışık sindirim yoluyla tüm fare kornealarından yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonlar elde etmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, yüksek RNA bütünlüğüne sahip geçerli tek hücreler sağlar ve bu da onları tek hücreli RNA dizileme ve akış sitometriy gibi sonraki uygulamalarla uyumlu kılar.

Fare Kornealarından Tek Hücreli Süspansiyonun Hasat İçin Bir Protokol

Öğrenin, farede limbal kök hücre eksikliği modeli oluşturmayı; bu basit mekanik teknik, istenmeyen göz hasarı oluşturmadan sürdürülebilir bir model sağlar ve hücresel moleküler düzeyde uzun vadeli çalışmalara olanak tanır.

Basit mekanik Prosedür Mouse Limbal Kök Hücre Eksikliği oluşturma

Daha fazla video keşfet