Fare İzole perfüze Böbrek Tekniği

Bu protokolün genel amacı, ex vivo perfüze fare böbreğinde izole böbrek fonksiyonunu analiz etmektir. Kan basıncının, hormonların veya otonom sinir sisteminin etkisi hariç. Bu yöntem, Nefrolojinin temel sorularını yanıtlamaya yardımcı olabilir.

İzole organ fonksiyonuna iç kısımlar vermek ve akut böbrek hasarını incelemek için zarif bir araç olarak hizmet etmek. IPK'nın temel avantajı, organ fonksiyonunun sistemik etkilerin yokluğunda incelenmesidir. Fareyi ameliyat için hazırladıktan sonra, makas kullanarak, kasık tepesinden sternuma kadar orta bir laparotomi yapın.

Önce cildi, sonra karın kaslarını açın. Daha sonra, bağırsakları çıkarın ve farenin sol tarafına, karından yana yerleştirin. Şimdi, mesaneyi bağ dokusundan kurtarın ve hem üreterleri hem de üretrayı açığa çıkarın.

Bu işlemler için tüm ligatürleri 5-0 dikiş kullanarak yerleştirin. İlk yerleştirilecek ligatür sol üreter civarındadır. Bunu çift cerrahi düğümle sıkıca kapatın.

Ardından, aynı tekniği kullanarak üretranın etrafına bir bağ yerleştirin. Ardından, tüm mesanenin etrafına bir kement ligatürü yerleştirin, ancak çözülmemiş halde bırakın. İlk üç dikiş yerindeyken, mesaneye bir milimetre uzunluğunda bir kesi yapmak için göz makası kullanın.

Bu kesiğin içine iki santimetre PE-50 borudan yapılmış bir kanül yerleştirin. Şimdi mesaneyi kementleyen bağı kapatın ve kanülü sabitleyin. Mesane kanüle edilmişken, şimdi sol üreter ve üretranın distalini ligatürlerden kesin.

Mesane artık sadece sağ üretere bağlı olmalı ve serbestçe hareket etmelidir. Ardından, abdominal aortu çevreleyen bağ dokularını ve yağı çıkarın. Ardından, açıkta kalan aortun orta noktasının etrafına ve üstün mezenterik arter ile çölyak gövdesi arasındaki diyaframın hemen altına ligatürler yerleştirin.

Bunların her birini de gevşek tutun. Ardından, superior mezenterik arterin etrafına bir ligatür yerleştirin. Şimdi, aortun etrafına doğrudan sağ renal arterin altına ve sol renal arterin üzerine üçüncü bir bağ yerleştirin.

Bu yedi numaralı ligatür. Son olarak, kaudal ven paketinin etrafına bir bağ koyun. Şimdi yedi numaralı ligatür ile sol renal arterin dallanması arasına bir kelepçe yerleştirin.

Daha sonra, aortta, kaudalden ligatüre yedi küçük bir kesi yapın, sırt duvarını kesmemeye ve açıklığı bir damar dilatörü ile germemeye dikkat edin. Açıklığa, iki santimetre çekilmiş bir PE-50 kanülü yerleştirin ve ucu sadece kelepçenin içine itin. Ardından kelepçeyi açın.

Daha sonra, iğnenin ucunu sağ böbrek arteri ile aortun birleştiği yere ulaşana kadar kraniyal olarak itin. Şimdi yedinci ligatürü kapatın ve ardından abdominal aortun orta noktasındaki ligatürü kapatın. Diyaframı diseke ederek göğsü makasla açarak ilerleyin.

Daha sonra tek bir kesi ile aort, vena kava, kalp ve vejetatif sinirleri ayırın. Şimdi, perfüzyon pompasının basınç kontrolünü başlatın ve ortalama basıncı 80 ila 100 milimetre cıva arasında tutun. Şimdi, aort ve kaudal ven paketinin etrafındaki kalan üç bağlanmamış ligatürü kapatın.

Makas kullanarak, sağ böbreği çevredeki bağ dokusundan kurtarın ve yağ kapsülünden serbest bırakın. Aortu superior mezenterik arter ile çölyak gövdesi arasındaki bağa proksimal olarak kesin. Daha sonra, superior mezenterik arteri, superior mezenterik arterin etrafındaki ligatüre distal olarak kesin.

Şimdi, böbrek destek damar demetini çıkarın, damarları kesmemeye dikkat edin. Daha sonra, karaciğeri böbreğe olan bağlantıdan kesin, ancak karaciğerin küçük bir kısmını ona bağlı bırakın, böylece vena kava onun tarafından açık tutulur. Bir sonraki adım, böbrek demetini fareden çıkarmaktır.

Şimdi böbreği haznede bırakın ve fareyi çıkarın. Karaciğer ve böbrek arasındaki bağlantıda, bir kement ligatürü yerleştirin. Ardından, vena kava'yı venöz bir çizgi ile kanüle edin ve kement ligatürünü kapatın.

Böbrek şimdi kutuda sabit bir şekilde oturmalıdır. Venöz hattan venöz çıkış hemen başlamalıdır. İdrar çıkışı yaklaşık üç dakika sonra başlayacaktır.

Üreterin peristalsisi hemen başlamalı ve en az bir saat boyunca stabil kalmalıdır. Kutuyu kapatın. Hazırlık şimdi tamamlandı ve en az bir saat boyunca canlı kalmalıdır.

Tarif edilen yöntemi C57 siyah 6 farede kullandıktan sonra, dört böbreğin doku canlılığı bir saatlik sürekli perfüzyondan sonra test edildi. Basınç, sürekli bir 100 milimetre cıvada tutuldu. Dört böbrekte de perfüzat akımı ve vasküler direnç sabit kaldı.

Glomerüler filtrasyon hızı, zamanla artması amaçlanan ancak önemli ölçüde olmayan FITC inülin klerensi kullanılarak değerlendirildi. Sodyum ve potasyumun fraksiyonel atılımı, 55 dakikalık perfüzyondan sonra değerlendirildi. Bu parametreler in vivo duruma göre artmıştır.

55 dakika sonra, pisuar molalitesi venöz çıkışın ozmolalitesinin üzerine çıkmadı. Daha sonra böbrekler tespit edildi ve üst yapıları TEM ile değerlendirildi. Proksimal tübüllerin S1 segmentlerindeki glomerüller büyük ölçüde değişmemiş görünüyordu.

Vasküler demetlere yakın olmayan kalın çıkan ekstremitelerdeki proksimal tübüllerin tümü olmasa da bazı S2, S3 segmentleri organ hasarı belirtileri gösterdi. Daha yakından incelendiğinde, distal kıvrımlı tübüller ve toplama kanalları nekroz belirtileri göstermedi. Genel olarak, böbrekler, sıçan izole perfüze böbrekler için bildirilenleri yansıtıyordu.

Bu prosedürü takiben, daha fazla bilgi elde etmek için doku üzerinde görüntüleme veya protein veya RNA analizi gibi analiz yöntemleri gerçekleştirilebilir.