Name: Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü 125 I-etiketli Azid Protez Grubu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Öğrenin, bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanarak radyoaktif iyot etiketli altın nanopartiküllerin hızlı sentez yöntemini. Bu teknik, radyokimya ve görüntüleme probu araştırmalarında yüksek verim sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Kore Cumhuriyeti hükümeti tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (Hibe no. 2012M2B2B1055245 ve 2012M2A2A6011335) ve Kore Atom Enerjisi Araştırma Enstitüsü RI-Biyomik Merkezi tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir.

Dikkat: Radyoaktif iyot oksitlenmiş biçimi oldukça uçucu ve yeterli kurşun kalkanlar ve kurşun şişeleri ile ele alınması gerekir. Tüm radyokimyasal adımlar iyi havalandırılan bir kömür filtreli davlumbaz yürütülen ve deneysel prosedürler radyoaktivite tespit cihazları ile izlenmesi gereken yapılmalıdır. 125I-işaretli azid Sentezi için Kimyasallar ve ters fazlı kartuş hazırlanması 1. <ol><li> Çözelti içinde reaktiflerin hazırlanması <ol><li> 150 ul içinde azid ön (2) mutlak etanol (Şekil 1), 1 mg eritin. Not: azid ön için ayrıntılı bir sentez işlemi (2) Daha önceki çalışmada 22 bildirilmiştir. </li><li> 1x fosfat tamponlu salin (pH = 7.4) 20 ul 1 mg kloramin T çözülür. </li><li> 20 ul H2O içinde 2 mg sodyum metabisülfit çözülür </li></ol></li><li> PreparaKartuşun tion <ol><li> 10 mi H2O ve ardından 10 mi mutlak etanol ile TC18 kartuşu yıkayın hava ile kartuşun matrisi kurutmayın. </li></ol></li></ol> 125I-işaretli Azid prostetik grup 2. radiosynthesis <ol><li> Öncüsünün radyoiyodinasyon reaksiyonu <ol><li> 1.5 ml mikrosantrifüj tüpüne azid ön bileşik çözeltisi ve asetik asit (10 ul) (saf etanol, 150 ul 1 mg) ekleyin. </li><li> Reaksiyon kanşımına 0.1 M NaOH (50 ul) [125I] Nal 150 MBq ekleyin. </li><li> Bir kloramin T çözeltisi (1 x fosfat tamponlu salin ile 20 ul 1 mg) ekleyin ve bir mikrosantrfuj tübü ihtiva eden reaksiyon karışımının kapatın. </li><li> radyoiyodinasyon Reaksiyon tamamlanana kadar 15 dakika için oda sıcaklığında reaksiyon karışımı inkübe edin. </li><li> Reaksiyon karışımına sodyum metabisülfit çözeltisi (2 mg 20 ul H2O) ilaveradyoiyodinasyon, reaksiyonun sönmesi için. </li><li> Ham ürün, 0.2 ul çekin ve daha sonra çözelti, 100 ul ile seyreltin (H2O / CH3CN, 1: 1) HPLC analizi için. Not: Tüm HPLC deneyleri için, H2O (solvent A) ihtiva eden% 0.1 formik asit ve saflaştırma maddesi olarak% 0.1 formik asit ihtiva eden asetonitril (solvent B) kullanın. </li><li> Sütun ters faz (ters-faz analitik, radyo-HPLC ile seyreltildi ham ürün C18 analiz; akış hızı: 1 mL / dk; elüan gradyanı: 0-2 dakika% 20 çözücü B,% 20-80 solvent B için 2-22 dakika, 22-23 dakika boyunca% 80-100 çözücü B ve 23-28 dakika için% 100 çözücü B&#39;ye, tutma süresi: 16.4 dakika) (Şekil 2). </li></ol></li><li> Preparatif HPLC ile ham ürünün saflaştırılması, NOT: Bu tür enjektör, kolon, dedektör, toplama şişeleri ve atık toplandığı konteyner olarak HPLC parçaları etrafında yeterli kurşun kalkan sağlayın. <ol><li> th çekinizHPLC şişenin içine bütün reaksiyon karışımı e. asetonitril (0.5 ml) ile reaksiyon tüpü durulayın ve aynı enjeksiyon şişenin içine durulama ekleyin. H2O (1 mi) ile toplandı çözeltisi ile seyreltilir. </li><li> (Hazırlayıcı, radyo-HPLC üzerine enjekte edilir, ham ürün C18 kolonu ters faz; akış hızı: 10 ml / dk; elüan gradyanı: 2-22 dakika için 0-2 dakika,% 20-80 solvent B% 20 solvent B, 22-23 dakika boyunca% 80-100 çözücü B ve 23-28 dakika için% 100 çözücü B). </li><li> 125I-işaretli azid (1) temsil eden radyoaktif tepe toplama, bir cam test tüpü (Şekil 2) (bu HPLC koşulları altında tR 17,8-18,8 dk). </li><li> üreticinin protokolüne göre bir radyoaktivite doz kalibratörü kullanılarak fraksiyonunun radyokimyasal verim ölçün. </li><li> Ürünün radyokimyasal saflığı belirlemek için, aynı HPLC koşulları kullanarak analitik bir radyo-HPLC üzerinde saflaştırılmış ürün enjekte edilir. </li></ol></li><li> Ürünün katı faz ekstraksiyonu <ol><li> 40 ml saf H2O ile istenen ürünü (1) ihtiva eden fraksiyon, seyreltik </li><li> olarak önceden TC18 kartuşuna seyreltilmiş çözeltisi ekleyin. </li><li> Ek bir 15 mi H2O kartuşu yıkayın </li><li> Bir kurşun zırh tarafından korunan bir 10 ml bir cam şişe içinde, 2 ml aseton ile kartuş içinde sıkışıp ürünü (1) yıkayın. üreticinin protokolüne göre bir radyoaktivite doz kalibratörü ile elüt ürünün radyoaktivite ölçülür. Not: Dimetil sülfoksit (DMSO) ya da mutlak etanol, kartuşun elde edilen ürünün elüsyon için kullanılabilir. radyoaktivitenin yaklaşık% 5-10, normal olarak kartuş yapışır ve geriye kalan radyoaktif olarak ürün tamamen organik çözücünün fazla miktarda kullanılarak elüte edilemez. </li><li> nitrojen ya da argon gazı akımı ile aseton buharlaştırın. </li><li> yeniden çözülürBir sonraki radyo işaretli aşamada DMSO (100-200 ul) ile sidue. </li></ol></li></ol> DBCO-grup-konjuge Altın Nanopartiküller 3. Sentezi <ol><li> 13 mil ölçekli altın yüzey modifikasyonu DBCO-grubu-ihtiva eden polietilen glikol ile nanopartikülleri <ol><li> Hazırlama sodyum sitrat kararlı altın nanopartikülleri (3) (ortalama boyutu = 13 nm) bir önceki rapora 24 göre yöntem. </li><li> (10 nM, 15 mi) sitrat stabilize altın nanopartiküllerinin Tween 20 (1 mM, 1.5 mi), sulu bir çözeltisi ilave edilir. bir orbital çalkalayıcı üzerinde 20 dakika boyunca solüsyon çalkalanır. </li><li> DBCO-grubu-ihtiva eden polietilen glikol tiol (ortalama molekül ağırlığı = 5000, 100 uM, 1.5 mi), sulu bir çözeltisi ilave edilir. bir orbital çalkalayıcı üzerinde 2 saat boyunca solüsyon çalkalanır. </li></ol></li><li> DBCO-grubu ile modifiye edilmiş altın nanopartiküllerinin saflaştırılması <ol><li> Arındırmak DBCO-grup-modifiye altın nanopartiküller (4) &lt;/ Ardışık santrifüj (11,400 xg, 15 dakika x 3) ile strong&gt;. </li><li> Süpernatantı Durusu ve altın nanoparçacık pelet tabanda saf su ekleyin. </li></ol></li></ol> 4. Bakır ücretsiz tıklayın Reaksiyon aracılığıyla DBCO-grup-modifiye Altın Nanopartiküller Radyo-etiketlenmesi <ol><li> 125I-işaretli azid kullanılarak 125-etiketli altın nanopartiküllerinin sentezi (1) <ol><li> Santrifüj (11,400 xg, 15 dakika) ile DBCO grubu ile modifiye edilmiş altın nano partiküller bir konsantre çözelti hazırlayın, ve 2 uM altın nano-taneciklerinin konsantrasyonu ayarlanır. </li><li> Altın nano partiküller içeren bir süspansiyona, DMSO (5 ul) 125-etiketli azid (1) 4.1 MBq ekleme (4) (2 uM, 50 ul). </li><li> 60 dakika boyunca 40 ° C &#39;de elde edilen reaksiyon karışımı inkübe edin. </li><li> Ham ürünün bir kısmı (0.2 ul) geri çekilmesi ve bir silis-CO üzerine uygulanırbir-, ince tabaka kromatografisi (TLC) plaka. </li><li> Bir mobil faz olarak etil asetat kullanılarak TLC plakası geliştirmek. </li><li> Bir radyo-TLC tarayıcı üzerinde TLC plakası yerleştirin ve üreticinin protokolüne göre Radyoaktif reaksiyonu (Şekil 3) izlemek için tarayıcıyı çalıştırın. </li></ol></li><li> Ham ürünün saflaştırılması <ol><li> Santrifüj ile 125I-işaretli altın nano parçacıklar (4) (11,400 xg, 15 dakika) ihtiva eden reaksiyon karışımı saflaştınlır. </li><li> Süpernatantı Durusu ve altın nanoparçacık pelet tabanda saf su ekleyin. </li><li> Saflaştırılmış ürünü bir kısım (0.2 ul) geri çekilmesi ve bir silis kaplı TLC plakası üzerine uygulanır. </li><li> mobil faz olarak etil asetat kullanılarak TLC plakası geliştirmek. </li><li> Bir radyo-TLC tarayıcı üzerinde TLC plakası yerleştirin ve 125-işaretli gol radyokimyasal verim ve radyokimyasal saflığı belirlemek için tarayıcıyı çalıştırmaküreticinin protokolüne uygun olarak D nanopartiküller (4) (Şekil 3). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jewett, J. C., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cu-free+Click+Cycloaddition+Reactions+in+Chemical+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Cu-free Click Cycloaddition Reactions in Chemical Biology.</a> Chem. Soc. Rev. 39, 1272-1279 (2010).</li>
<li>Debets, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioconjugation+with+Strained+Alkenes+and+Alkyne%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Bioconjugation with Strained Alkenes and Alkyne.</a> Acc. Chem. Res. 44, 805-815 (2011).</li>
<li>Sletten, E. M., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Mechanism+to+Mouse%3A+A+Tale+of+Two+Bioorthogonal+Reactions%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">From Mechanism to Mouse: A Tale of Two Bioorthogonal Reactions.</a> Acc. Chem. Res. 44, 666-676 (2011).</li>
<li>Koo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+Cu-Free+Click+Chemistry+in+vivo+for+Tumor-Targeted+Delivery+of+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal Cu-Free Click Chemistry in vivo for Tumor-Targeted Delivery of Nanoparticles.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 51, 11836-11840 (2012).</li>
<li>Chang, P. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper-Free+Click+Chemistry+in+Living+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Copper-Free Click Chemistry in Living Animals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 1821-1826 (2010).</li>
<li>Bostic, H. E., Smith, M. D., Poloukhtine, A. A., Popik, V. V., Best, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+Labeling+and+Immobilization+via+copper-free+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Membrane Labeling and Immobilization via copper-free Click Chemistry.</a> Chem. Commun. 48, 1431-1433 (2012).</li>
<li>Someya, T., Ando, A., Kimoto, M., Hirao, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-Specific+Labeling+of+RNA+by+Combining+Genetic+Alphabet+Expansion+Transcription+and+Copper-Free+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Site-Specific Labeling of RNA by Combining Genetic Alphabet Expansion Transcription and Copper-Free Click Chemistry.</a> Nucl. Acids Res. 43, 6665-6676 (2015).</li>
<li>Lee, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesoporous+Silica+Nanoparticle+Pretargeting+for+PET+Imaging+Based+on+a+Rapid+Bioorthogonal+Reaction+in+a+Living+Body%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Mesoporous Silica Nanoparticle Pretargeting for PET Imaging Based on a Rapid Bioorthogonal Reaction in a Living Body.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 52, 10549-10552 (2013).</li>
<li>Sachin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((F-18+Labeling+Protocol+of+Peptides+Based+on+Chemically+Orthogonal+Strain-Promoted+Cycloaddition+under+Physiologically+Friendly+Reaction+Conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">F-18 Labeling Protocol of Peptides Based on Chemically Orthogonal Strain-Promoted Cycloaddition under Physiologically Friendly Reaction Conditions.</a> Bioconjugate Chem. 23, 1680-1686 (2012).</li>
<li>Evans, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper-Free+Click+-+A+Promising+Tool+for+Pre-targeted+PET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Copper-Free Click - A Promising Tool for Pre-targeted PET Imaging.</a> Chem. Commun. 48, 991-993 (2012).</li>
<li>Campbell-Verduyn, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-Promoted+Copper-Free+%26%2334%3BClick%26%2334%3B+Chemistry+for+18F+Radiolabeling+of+Bombesin%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Strain-Promoted Copper-Free &#34;Click&#34; Chemistry for 18F Radiolabeling of Bombesin.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 50, 11117-11120 (2011).</li>
<li>Arumugam, S., Chin, J., Schirrmacher, R., Popik, V. V., Kostikov, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((18F%5DAzadibenzocyclooctyne+%28%5B18F%5DADIBO%29%3A+A+Biocompatible+Radioactive+Labeling+Synthon+for+Peptides+using+Catalyst+Free+%5B3%2B2%5D+Cycloaddition%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem.+Lett%22%5BJournal%5D)">18F]Azadibenzocyclooctyne ([18F]ADIBO): A Biocompatible Radioactive Labeling Synthon for Peptides using Catalyst Free [3+2] Cycloaddition.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 21, 6987-6991 (2011).</li>
<li>Bouvet, V., Wuest, M., Wuest, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper-Free+Click+Chemistry+with+the+Short-Lived+Positron+Emitter+Fluorine-18%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Copper-Free Click Chemistry with the Short-Lived Positron Emitter Fluorine-18.</a> Org. Biomol. Chem. 9, 7393-7399 (2011).</li>
<li>Satpati, D., Bauer, N., Hausner, S. H., Sutcliffe, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%5B64Cu%5DDOTA-ADIBON3-Ala-PEG28-A20FMDV2+via+Copper-Free+Click+Chemistry+for+PET+Imaging+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B26%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Radioanal.+Nucl.+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis of [64Cu]DOTA-ADIBON3-Ala-PEG28-A20FMDV2 via Copper-Free Click Chemistry for PET Imaging of Integrin αvβ6.</a> J. Radioanal. Nucl. Chem. 302, 765-771 (2014).</li>
<li>Lee, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+Method+To+Radiolabel+Glycol+Chitosan+Nanoparticles+with+64Cu+via+Copper-Free+Click+Chemistry+for+MicroPET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Facile Method To Radiolabel Glycol Chitosan Nanoparticles with 64Cu via Copper-Free Click Chemistry for MicroPET Imaging.</a> Mol. Pharmaceutics. 10, 2190-2198 (2013).</li>
<li>Zeng, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((64Cu+Core-Labeled+Nanoparticles+with+High+Specific+Activity+via+Metal-Free+Click+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">64Cu Core-Labeled Nanoparticles with High Specific Activity via Metal-Free Click Chemistry.</a> ACS Nano. 6, 5209-5219 (2012).</li>
<li>Jeon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosynthesis+and+in+vivo+Evaluation+of+%5B125I%5D2-4%28iodophenethyl%29-2-Methylmalonic+Acid+as+a+Potential+Radiotracer+for+Detection+of+Apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Radioanal.+Nucl.+Chem%22%5BJournal%5D)">Radiosynthesis and in vivo Evaluation of [125I]2-4(iodophenethyl)-2-Methylmalonic Acid as a Potential Radiotracer for Detection of Apoptosis.</a> J. Radioanal. Nucl. Chem. 308, 23-29 (2016).</li>
<li>Adam, M. J., Wilbur, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiohalogens+for+Imaging+and+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Radiohalogens for Imaging and Therapy.</a> Chem. Soc. Rev. 34, 153-163 (2005).</li>
<li>Jeon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosynthesis+of+123I-Labeld+Hesperetin+for+Biodistribution+Study+of+Orally+Administered+Hesperetin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Radioanal.+Nucl.+Chem%22%5BJournal%5D)">Radiosynthesis of 123I-Labeld Hesperetin for Biodistribution Study of Orally Administered Hesperetin.</a> J. Radioanal. Nucl. Chem. 306, 437-443 (2015).</li>
<li>Kil, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+%5B123I%5DIPEB+and+%5B123I%5DIMPEB+as+SPECT+Radioligands+for+Metabotropic+Glutamate+Receptor+Subtype%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Med.+Chem.+Lett%22%5BJournal%5D)">Development of [123I]IPEB and [123I]IMPEB as SPECT Radioligands for Metabotropic Glutamate Receptor Subtype.</a> ACS Med. Chem. Lett. 5, 652-656 (2014).</li>
<li>Chen, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Utility+of+I-123+Pretherapy+Scan+in+I-131+Radioiodine+Therapy+for+Thyroid+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The Utility of I-123 Pretherapy Scan in I-131 Radioiodine Therapy for Thyroid Cancer.</a> Thyroid. 22, 304-309 (2012).</li>
<li>Jeon, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Method+for+Iodine+Radioisotope+Labeling+of+Cyclooctyne-Containing+Molecules+using+Strain-Promoted+Copper-Free+Click+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Efficient Method for Iodine Radioisotope Labeling of Cyclooctyne-Containing Molecules using Strain-Promoted Copper-Free Click Reaction.</a> Bioorg. Med. Chem. 23, 3303-3308 (2015).</li>
<li>Choi, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Evaluation+of+an+125I-Labeled+Azide+Prosthetic+Group+for+Efficient+and+Bioorthogonal+Radiolabeling+of+Cyclooctyne-Group+Containing+Molecules+using+Copper-Free+Click+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem.+Lett%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Evaluation of an 125I-Labeled Azide Prosthetic Group for Efficient and Bioorthogonal Radiolabeling of Cyclooctyne-Group Containing Molecules using Copper-Free Click Reaction.</a> Bioorg. Med. Chem. Lett. 26, 875-878 (2016).</li>
<li>Kim, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+and+Imaging+Using+Cyclic+RGD-PEGylated+Gold+Nanoparticle+Probes+with+Directly+Conjugated+Iodine-125%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting and Imaging Using Cyclic RGD-PEGylated Gold Nanoparticle Probes with Directly Conjugated Iodine-125.</a> Small. 7, 2052-2060 (2011).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Genel olarak, saflaştınlmış 125I-işaretli azid (1) gözlenen radyokimyasal verim 75 ± 10% (n = 8). Radyoaktif radyoaktivite 50-150 MBq ile gerçekleştirildi ve radyokimyasal sonuçlar oldukça tutarlıdır. [125I] Nal (t 1/2 = 59.4 D) radyoiyodinasyon reaksiyonda kullanıldı fazla bir ay radyoaktif bozunma uygulandı, 1 radyokimyasal verim olduğu gözlenmiştir ise biraz (53-65%) azalmıştır. Nedenle, [125I] Nal da üretildiği anda hemen kullanıl...

Azidler ve siklooktinler arasındaki gerinim destekli bakırsız tıklama reaksiyonu, çok çeşitli biyomoleküllerin, nanomalzemelerin ve canlı deneklerin1-7 verimli biyoortogonal etiketlemesine kapsamlı bir şekilde uygulanmıştır. Bu konjugasyon reaksiyonunun mükemmel bölge özgüllüğü ve hızlı reaksiyon hızı nedeniyle, radyoaktif işaretli izleyicilerin sentezlenmesi için de kullanılmıştır. Peptitleri ve antikorları hedef alan çeşitli kanserlerin in vitro etiketlenmesinin yanı sıratümörlerin 8-13 in vivo önceden hedeflenmiş görüntülenmesi için birkaç 18F etiketli azid veya DBCO protez grubu hazırlanmıştır. Bu örneklere ek olarak, pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme çalışmaları14-16 için nanomalzemelerin metal-radyoizotop etiketlemesine de aynı konjugasyon reaksiyonu uygulandı.
Birkaç on yıl boyunca, radyoaktif iyotlar PET görüntüleme (124I), tek foton emisyonlu bilgisayarlı tomografi (SPECT) görüntüleme (123I, 125I) ve tiroid kanseri tedavisi (131I) yoluyla biyomedikal araştırmalar ve klinik deneyler için kullanılmıştır17-21. Bu nedenle, radyoaktif iyot etiketleme için etkili bir yöntem, moleküler görüntüleme çalışmaları, biyomoleküllerin organ dağılımının analizi, biyobelirteç tanımlama ve ilaç geliştirme dahil olmak üzere çeşitli araştırmalar için temel olarak önemlidir. Radyoaktif iyot etiketlemede bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu stratejisi kullanılabilir. Bununla birlikte, bu uygulama 18F etiketli biyomolekül22-23 kadar kapsamlı bir şekilde araştırılmamıştır. Burada, DBCO grubundan türetilmiş moleküllerin radyo-etiketlemesi için 125I etiketli bir azidin sentezi için adım adım bir protokol sağlayacağız. Bu rapordaki prosedürler, stanillenmiş öncüsün radyoiyodinasyonunu, HPLC ile saflaştırma adımlarını ve katı faz ekstraksiyonunu içerecektir. Ayrıca, 125I etiketli azid kullanarak DBCO grubu ile modifiye edilmiş 13 nm boyutlu altın nanopartiküllerin verimli radyo-etiketlemesini de gösteriyoruz. Bu rapordaki ayrıntılı protokol, sentetik kimyagerlerin radyoaktif işaretli ürünlerin sentezi için yeni bir radyoetiketleme metodolojisini anlamalarına yardımcı olacaktır.

<table><tbody><tr><td>Kloramin T trihidrat</td><td>Sigma</td><td>402869</td><td></td></tr> <tr><td>[125I] NaI, aq. NaOH</td><td>Perkin-Elmer</td><td>NEZ033A010MC</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum metabisülfit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S9000</td><td></td></tr><tr><td>Formik asit</td><td>Sigma</td><td>251364</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak tC18 plus kartuş</td><td>Sular</td><td>WAT036800</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Sigma</td><td>650501</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>Altın (III) klorür trihidrat</td><td>Sigma</td><td>520918</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>DBCO PEG SH (MW 5,000)</td><td>NANOCS</td><td>PG2-DBTH-5k</td><td></td></tr><tr><td>TLC silika jel 60 F254</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analitik HPLC</td><td>Agilent</td><td>1290 Infinity</td><td>Model numarası</td></tr><tr><td>Hazırlayıcı HPLC</td><td>Agilent</td><td>1260 Infinity</td><td>Model numarası</td></tr><tr><td>Analitik C18 ters fazlı kolon</td><td>Agilent</td><td>Zorbax Eclipse XDB-C18</td><td></td></tr><tr><td>Hazırlayıcı C18 ters fazlı kolon</td><td>Agilent</td><td>PrepHT XDB-C18</td><td></td></tr><tr><td>Radyo TLC tarayıcı</td><td>Bioscan</td><td>AR-2000</td><td>Model numarası</td></tr><tr><td>Radyoizotop doz kalibratörü</td><td>Capintec, Inc</td><td>CRC -25R doz kalibratörü</td><td>Model numarası</td></tr></tbody></table>

bir kullanarak altın nanopartiküller verimli radyoaktif bir optimize protokolü<sup&gt; 125</sup&gt; i-etiketli azid protez grubu

An Optimized Protocol for the Efficient Radiolabeling of Gold Nanoparticles by Using a 125I-labeled Azide Prosthetic Group

Burada, 125I etiketli bir azid protez grubunun radyosentezi için ayrıntılı bir protokol ve bunun bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu kullanılarak DBCO grubu işlevselleştirilmiş altın nanopartiküllerinin verimli radyo-etiketlenmesine uygulanması için ayrıntılı bir protokol gösteriyoruz. Stannisillenmiş öncünün (2) radyoiyodinasyonu, oda sıcaklığında 15 dakika boyunca oksidan olarak [125I]NaI ve kloramin T kullanılarak gerçekleştirildi. Ham ürünün HPLC saflaştırılmasından sonra, saflaştırılmış 125I-etiketli azit (1), yüksek radyokimyasal verim (% 75 ± 10, n = 8) ve mükemmel radyokimyasal saflık (% >99) ile elde edilmiştir. Radyoaktif işaretli 13 nm boyutlu altın nanopartiküllerin sentezi için, DBCO ile işlevselleştirilmiş altın nanopartiküller (3), tiyollenmiş bir polietilen glikol polimeri kullanılarak hazırlandı. 1 ile 3 arasında bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu, 125I etiketli altın nanopartiküllere (4), radyo-ince tabaka kromatografisi (radyo-TLC) ile belirlendiği gibi% 95'ten fazla radyokimyasal verim verdi. Bu sonuçlar, suş destekli bakır içermeyen bir tıklama reaksiyonu kullanan mevcut radyoetiketleme yönteminin, DBCO grubu içeren nanomalzemelerin verimli ve uygun radyo-etiketlemesi için yararlı olacağını açıkça göstermektedir.

Stannylated ön (2) ve radyoiyodinasyon Reaksiyon radyo-etiketli ürünü temin etmek üzere 15 dakika için oda sıcaklığında [125I] Nal, asetik asit ve kloramin T 150 MBq kullanılarak gerçekleştirildi (1). Ham karışımın, hazırlamalı HPLC ile saflaştırma işleminden sonra, istenen ürün, radyokimyasal verim 75 ± 10% (n = 8) ile elde edilmiştir. Analitik HPLC 125I-işaretli ürünün radyokimyasal saflığı% 99&#39;dan fazla (Şekil 2)</str...

125-etiketli azid sentezi ve bir bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanılarak dibenzocyclooctyne (DBCO) -grubu ile konjüge edilmiş 13-mil ölçekli altın nanopartiküllerinin radyo-etiketlenmesi için ayrıntılı bir işlem tarif edilmektedir.

Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü<sup&gt; 125</sup&gt; I-etiketli Azid Protez Grubu

Here, we demonstrate a detailed protocol for the radiosynthesis of a 125I-labeled azide prosthetic group and its application to the efficient ...

Bu protokolün genel amacı, gerinim destekli bakır içermeyen klik reaksiyonunu kullanarak radyoaktif iyot işaretli altın nanopartiküller için verimli ve hızlı bir sentetik yöntem sağlamaktır. Bu yöntem, radyoizotop işaretli sentetiklerin sentezi ile PET veya SPECT görüntüleme çalışmaları için standart görüntüleme probları gibi radyokimya alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, mükemmel radyokimyasal verim ve radyokimyasal saflıkla, azid protez grubu kullanılarak iyot işaretli altın partiküllerinin verimli bir şekilde sentezlenebilmesidir.Radyo değerlendirme adımlarının öğrenilmesinin zor olması nedeniyle, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır. Bu tür prosedürler uygun bir tesis ve radyolabelleme deneyimi gerektirmektedir. Çalışma ile birlikte, radyoloji öğrencisi Ha Eun Shim prosedürü uygulamalı olarak gösterecektir.Radyo-iyodlama reaksiyonunu gerçekleştirmek için, 1,5 mL'lik bir tüpe öncül çözelti ekleyin. Oda sıcaklığında öncül çözeltiye 10 µL asetik asit ekleyin. Ardından, reaksiyon karışımına 50 µL 0,1 M sodyum hidroksit içindeki 150 MBq iyot 125 ekleyin.Kloramin T çözeltisi ekleyin ve reaksiyon karışımını içeren mikro santrifüj tüpünü kapatın. Radyo-iyodlama reaksiyonu tamamlanana kadar reaksiyon karışımını oda sıcaklığında on beş dakika inkübe edin. Ardından, radyo-iyodlama reaksiyonunu durdurmak için reaksiyon karışımına sodyum metabisülfit çözeltisi ekleyin.Ham ürünün 0.2 µL'sini çekin ve ardından yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya HPLC analizi için suyla seyreltilmiş %50 asetonitril ile 100 µL'ye tamamlayın. Seyreltilmiş ham ürünü ters faz analitik radyo HPLC kullanarak analiz edin. Tüm reaksiyon karışımını bir HPLC şişesine aktarın.Reaksiyon tüpünü 0,5 mL asetonitril ile durulayın ve durulama sıvısını aynı enjeksiyon şişesine ekleyin. Toplanan çözeltiyi bir mL su ile seyreltin. Ham ürünü preparatif HPLC ile saflaştırmak için, ham ürünü preparatif radyo HPLC cihazına enjekte edin.İyot 125 ile işaretlenmiş azidi temsil eden radyoaktif piki cam bir test tüpüne toplayın. Fraksiyonun radyokimyasal verimini, üretici protokolüne uygun olarak bir radyoaktivite doz kalibratörü kullanarak ölçün. Ardından, ürünün radyokimyasal saflığını belirlemek için aynı HPLC koşullarını kullanarak saflaştırılmış ürünü analitik bir radyo HPLC cihazına enjekte edin.Ürünün katı faz ekstraksiyonunu gerçekleştirmek için, istenen ürünü içeren fraksiyonu 40 mL saf su ile seyreltin. Seyreltilmiş çözeltiyi ön işlemden geçirilmiş bir TC18 kartuşuna ekleyin. Kartuşu 15 mL daha su ile yıkayın.Kartuşta tutulan ürünü 2 mL aseton ile kurşun zırh ile korunan 10 mL'lik bir cam şişeye elüe edin. Elüe edilen ürünün radyoaktivitesini, üretici protokolüne uygun olarak radyoaktivite doz kalibratörü kullanarak ölçün. Asetonu uçurduktan sonra, bir sonraki radyolabelleme adımı için kalıntıyı 100 ila 200 µL DMSO ile çözün.Metin protokolünde açıklandığı şekilde DBCO grubu modifiyeli altın nanoparçacıkların sentezini gerçekleştirin. Santrifüjleme kullanarak DBCO grubu modifiyeli altın nanoparçacıkların konsantre bir çözeltisini hazırlayın. Ardından, altın nanoparçacıkların konsantrasyonunu iki µM değerine ayarlayın.5 µL DMSO içinde 4.1 MBq iyot 125 işaretli azidi, 50 µL 2 µM altın nanopartikül süspansiyonuna ekleyin. Oluşan reaksiyon karışımını 40 °C'de 60 dakika inkübe edin. Ham üründen 0.2 µL'lik bir alikot alın ve bunu silika kaplı ince tabaka kromatografisi veya TLC plakasına uygulayın.Mobil faz olarak etil asetat kullanarak TLC plakasını geliştirin. TLC plakasını bir radyo TLC tarayıcıya yerleştirin ve üretici protokolüne uygun olarak radyo etiketleme reaksiyonunu izlemek için tarayıcıyı çalıştırın. İyot 125 etiketli altın nanopartiküllerini içeren reaksiyon karışımını santrifüjleme yoluyla saflaştırın.Süpernatantı boşaltın ve altın nanoparçacık peletlerini yeniden süspanse etmek için saf su ekleyin. Saflaştırılmış üründen 0.2 µL'lik bir alikot alın ve bunu silika kaplı bir TLC plakasına uygulayın. Mobil faz olarak etil asetat kullanarak TLC plakasını geliştirin.TLC plakasını bir radyo TLC tarayıcıya yerleştirin ve üreticinin protokolüne uygun olarak iyot 125 ile işaretlenmiş altın nanopartiküllerin radyokimyasal verimini ve radyokimyasal saflığını belirlemek için tarayıcıyı çalıştırın. İyot 125 ile işaretlenmiş azid protez grubuna ait temsili sonuçlar burada gösterilmiştir. Radyoaktivite doz kalibratörü kullanılarak %75 radyokimyasal verim belirlenmiştir.Analitik radyo HPLC sonucu, ürünün mükemmel radyokimyasal saflığını göstermektedir. İyot 125 ile işaretlenmiş altın nanoparçacığa ait temsili sonuçlar burada sunulmuştur. Radyo TLC analizi, saflaştırılmış altın nanoparçacığın hem radyokimyasal veriminin hem de saflığının %95'ten fazla olduğunu ortaya koymaktadır. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, işlem düzgün bir şekilde yürütülürse üç saat içinde tamamlanabilir.Mevcut yöntemdeki işaretleme kimyası oldukça verimli ve basit olduğundan, bu tekniğin etkileri nükleer görüntüleme terapötik amaçları için çeşitli moleküler probların hazırlanmasına kadar uzanmıştır. Radyoaktif iyot ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedür gerçekleştirilirken daha hafif tuğlalar veya daha hafif ayakkabılar gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

an-optimized-protocol-for-efficient-radiolabeling-gold-nanoparticles

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu video, tümörleri tedavi etmek için immünokonjugatların ve ardından radyoligandların uygulandığı önceden hedeflenmiş radyoimmünoterapi veya PRIT tekniğini açıklar. Bu radyoimmünoterapi, sağlıklı dokulara radyasyon dozlarını azaltır ve antikor bazlı vektörlerle uyumlu olmayan çok düşük yarı ömre sahip radyonüklidleri kullanır.

Önceden Hedeflenmiş Radyoimmünoterapi: Terapötik Radyonüklidlerin Tümörlere Hedefe Yönelik Verilmesi İçin Bir Yöntem

Biyoortogonal ters elektron talebi Diels-Alder sikloilavesi, kanser için etkili ve modüler önceden hedeflenmiş bir PET görüntüleme stratejisi oluşturmak için kullanılmıştır. Bu protokolde, bu metodolojinin adımları, kolorektal kanser hedefli antikor huA33 ve 64Cu etiketli bir radyoligand kullanan bir model sistem bağlamında açıklanmaktadır.

Pretargeted PET Görüntüleme Bioorthogonal Ters Elektron Talep Diels-Alder Katılma Harnessing

Çok günlük radyoaktif yarılanma ömrü ve uygun bozunma özellikleri nedeniyle, pozitron yayan radyometal 89Zr, PET görüntüleme için antikor bazlı radyofarmasötiklerde kullanım için son derece uygundur. Bu protokolde, 89Zr işaretli antikorun biyokonjugasyonu, radyosentezi ve klinik öncesi uygulaması anlatılacaktır.

Bioconjugation ve radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt;, Zr-DFO-etiketli antikorlar

Burada, genetik olarak azid içeren bir amino asidi dahil ederek ve ardından azidi, suş destekli azid-alkin siklo ilavesi (SPAAC) ile kimyasal bir prob ile birleştirerek bir antikor fragmanına kimyasal probları bölgeye spesifik olarak sokmak için bir protokol sunuyoruz.

Verimli ve Siteye özgü Gerilme-terfi Azid-alkin Siklokatılma tarafından Antikor Etiketleme

Bu çalışmada, sinyal enhancement-in nanoprobe tabanlı biosensing için bir protokol sunulmuştur. Protokol chloroauric asit, altın, gümüş, Silis veya demir-oksit nano tanecikleri oluşan mevcut nano-sondalar yüzeyinin azaltılması temel alır.

Hızlı Nanoprobe sinyal geliştirme içinde in Situ altın nanoparçacık sentezi tarafından

Sentez ve karakterizasyonu bir trans- cyclooctene (TCO) bu protokolünü açıklar-modifiye antikor ve 177Lu etiketli tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT) için. Buna ek olarak, bu iki yapıları kullanımı vivo içinde biodistribution ve boyuna terapi çalışmaları kolorektal kanser, bir fare modeli için ayrıntıları.

Pretargeted Radioimmunotherapy ters elektron talep Diels-Alder reaksiyonu üzerinde dayalı

İşlevselleştirilebilir, yakın kızılötesi yayan fotolüminesan altın nanokümelerin hazırlanması ve bunların hela hücrelerinin içinde akış sitometrisi ve konfokal lazer tarama mikroskopisi ile doğrudan saptanması için güvenilir ve kolay tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Biyolojik Uygulamalar için Yakın Kızılötesi Yayan Altın Nanokümelerin Sentezi

Burada sunulan, kullanıma hazır bir radyoetiketleme synthonu, [89 Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89 Zr]Zr-DBN) kullanılarak bir pozitron emisyon tomografisi (PET) radyoizotopu, 89Zr (t1/2 78.4 h) ile radyoetiket hücrelerine yönelik bir protokoldür. [89Zr] Zr-DBN ile radyo-etiketleme hücreleri, uygulamadan sonra 7 güne kadar PET ile vücutta uygulanan radyoaktif işaretli hücrelerin invaziv olmayan izlenmesine ve görüntülenmesine izin...

Hücre Kaçakçılığının Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi: Bir Hücre Radyo-Etiketleme Yöntemi

Bu makale, yeni bir radyoaktif işaretli probun (yani, 68Ga etiketli nanobody NM-02) radyosentezini, formülasyonunu, kalite kontrolünü ve bir ksenogreft modelinde küçük hayvan PET/BT görüntülemesi için kullanımını açıklamaktadır.

68Ga Etiketli Nano Molekülün Radyosentezi, Kalite Kontrolü ve Küçük Hayvan Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi

Bu protokol, "döngü yöntemi" [11 C] metilasyonu yoluyla dört karbon-11radyoizleyici hazırlamak için ayrıntılı bir prosedür sunar. [11C]ER-176'yı sentezleme prosedürünü, üç ek radyoizleyici için verilerle açıklıyoruz: [11C]MRB, [11C]mHED ve [11C]PiB. Döngü yöntemi, geleneksel reaksiyon kabı [11C] metilasyonuna karşı artan radyokimyasal verimlerle verimli bir sentez sağlar.

Döngü Yöntemini Kullanarak Klinik Araştırmalar için Karbon-11 Radyoligandlarının Verimliliğini ve Radyoetiketleme Verimlerini Artırma

Bu araştırma, fibroblast aktivasyon proteininin PET görüntülemesi için GAIA V2 sentezleyici ile [68Ga] Ga-3BP-3940 üretimi için otomatik süreci açıklamaktadır. Üç test partisi üzerinde gerçekleştirilen kalite kontrol testlerinin sonuçları da sunulmaktadır.

Tümör Mikroçevresinin PET Görüntülemesi için Bir Sentez Modülünde [68Ga] Ga-3BP-3940'ın Otomatik Hazırlanması

Öğrenin, bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanarak radyoaktif iyot etiketli altın nanopartiküllerin hızlı sentez yöntemini. Bu teknik, radyokimya ve görüntüleme probu araştırmalarında yüksek verim sağlar.

Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü

Daha fazla video keşfet