Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, dış serebral arteri sağlam bırakırken İskemik inmeyi resmi ve güvenilir bir şekilde indüklemektir. Bu yöntem, tedavinin inme şiddeti üzerindeki etkisi gibi inme araştırması alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, inme indüksiyonunu takiben, dış serebral arterin tedaviyi doğrudan etkilenen hemisfere infüze etmek için kullanılabilir durumda kalmasıdır.

Hazırlanan ameliyat yüzeyine izofluran ile anestezi uygulanmış bir fare yerleştirin ve oksijenle karıştırılmış izofluranı uygulamak için bir burun konisi yerleştirin. Solunum hızının nefes nefese kalmadan saniyede bir ila iki solunum mesafesinde olduğundan emin olun. Ek olarak, hayvanın bıyık stimülasyonuna veya pedal refleksine tepki göstermediğinden emin olun.

İşlem sırasında kurumasını önlemek için steril bir bez kullanarak her göze bir damla oftalmik kayganlaştırıcı sürün. Kesi bölgesini tıraş ettikten sonra, ameliyat bölgesini %70 etanol ve klorheksidin bazlı bir solüsyon kullanarak iyice dezenfekte edin. Hayvanı stereo mikroskop altında sıcak bir cerrahi yüzeyde tutun.

Daha sonra, cerrahi makas ve forseps kullanarak, boyunda göğüs kemiğinin üstünden çenenin altına kadar sığ bir orta hat kesisi yapın. Forseps kullanarak, trakeayı ortaya çıkarmak için yağ ve bağ dokularını dikkatlice ayırın. Dokular her iki tarafa da kolayca ve doğal olarak ayrılmalıdır.

Ardından, boynu uzatmak ve ameliyat alanını daha da açığa çıkarmak için boynun arkasına yaklaşık 0,5 santimetre çapında bir yastık veya başka bir yuvarlak nesne yerleştirin. Bir doku ekartörü veya kanca kullanarak kesiği açın. Daha sonra trakeanın sol tarafında, yakındaki sinirlere ve ana damarlara zarar vermeden sol ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için bağ dokusunu dikkatlice cımbızlayın.

Ardından, bağ dokusunu delmek için kavisli forsepsleri CCA'nın altına yerleştirin ve ardından CCA'yı serbest bırakmak için yavaşça açılmalarına izin verin. CCA'yı alttaki dokudan ayırın ve iç serebral arter ve dış serebral arterin üst y dallanmasını ortaya çıkarın. CCA açığa çıktığında, CCA'nın altına üç segment naylon sütür yerleştirin.

CCA'nın bükülmediğinden emin olun, çünkü bu, sütürün yerleştirilmesini büyük ölçüde zorlaştıracaktır. Daha sonra mümkün olan en düşük noktada, kalıcı bir düğüm kullanarak alt dikişi kapatın. Çıkarılabilir bir düğüm kullanarak üst dikişi, ICA ve ECA'nın dallanmasının hemen altına bağlayın.

Ardından, orta dikişi çıkarılabilir bir düğüm kullanarak bağlayın, ancak tamamen açık tutun. Daha sonra, mikro diseksiyon yaylı makas kullanarak, alt dikişe daha yakın olan alt ve orta dikişler arasında CCA'da 0,2 milimetrelik bir boşluk oluşturun. Forseps kullanarak, MCAO sütürünü CCA insizyonuna yerleştirin ve üst dikişe doğru yönlendirin.

Daha sonra CCA üzerindeki orta sütürün kayma düğümünü nazikçe sıkın, böylece MCAO sütürünün etrafındaki kan akışını kısıtlar, ancak MCAO sütürünün serbestçe hareket etmesine izin verecek kadar gevşek olur. Şimdi üst dikişi dikkatlice çözün ve MCAO dikişin kaymadığından emin olun. MCAO sütürünü ICA'ya birkaç milimetre yerleştirin ve ardından üst sütürü daha önce olduğu gibi bir kayma düğümü ile tekrar kapatın.

Daha sonra, MCAO sütürünü önce ECA'yı geçerek ICA'ya yönlendirerek, ardından pterygopalatin arteri atlayarak sütürün ICA'da kalmasını sağlayarak oklüzyon alanına yönlendirin. CCA insizyonundan çok az kan geri akışı varsa ve CCA insizyonu ile ICA ve ECA'nın çatallanması arasında gümüş dokuz milimetre işareti bulunuyorsa, yerleştirme başarılıdır. Başarılı bir oklüzyondan sonra, orta ve üst dikişi sıkıca bağlayın ve dikişleri kesi alanına sokun.

Ekartör veya doku kancalarını ve yastığı çıkardıktan sonra, pamuklu çubuk üzerinde steril salin kullanarak dikiş bölgesini temizleyin. Daha sonra cildi naylon sütür ile kapatın. Hipotermiyi önlemek ve ad libitum'un suya ve yumuşatılmış yiyeceklere erişmesine izin vermek için fareyi ısıtılmış bir ped üzerinde bulunan temiz bir kafese yerleştirin.

Hayvanı en az beş ila 10 dakika boyunca inme belirtileri açısından izleyin. İskemi reperfüzyon protokolüne bağlı olarak, MCAO sütürünü 30 dakika ila 120 dakika veya daha fazla arasında bırakın. Hayvanı daha önce olduğu gibi uyuşturduktan ve yara kapatma dikişlerini çıkardıktan sonra, insizyonu yeniden açmak ve CCA'yı ortaya çıkarmak için forseps ve doku ayırıcılar kullanın.

Daha sonra üst dikişi dikkatlice çıkarın ve silikon kaplı kısım orta düğüme yerleşene kadar MCAO dikişi yavaşça çekin. Kanın akmasını önlemek için üst düğüm sütürünü yeniden yapın, MCAO sütürünü geçin. Daha sonra orta düğümü dikkatlice çözün ve MCAO sütürünü CCA'nın içinde tutarak üst düğümü geçecek şekilde çekin.

Arter kan akışını engellemek için üst düğümü sıkıca kapatın. Ardından, MCAO sütürünü tamamen dışarı çekin ve orta düğümü sıkıca kapatın. Yarayı kapatın ve ameliyat sonrası bakımı daha önce olduğu gibi uygulayın.

Bu şema, bu videoda gösterilen prosedürden kaynaklanan oklüzyon alanını mavi renkle göstermektedir. Ameliyat alanı, oval şekil ile gösterilen şeklin alt kısmında yer alır ve dikiş yerleşimi siyah çizgilerle gösterilir. Aşağıdaki resimler beyin bölümlerinin TTC duruşunu göstermektedir.

Bu görüntü, sahte yerleştirmeyi takiben tipik lekelenmeyi temsil eder. Görüntü, 60 dakikalık bir MCAO'nun neden olduğu doku hasarını ve ardından 90 dakikalık reperfüzyonu temsil eder. 60 dakikalık bir MCAO'yu takiben 24 saatlik reperfüzyondan sonra daha büyük doku hasarı görülür.

Nöronal belirteç MAP2 için immünofloresan boyama, 60 dakikalık oklüzyondan nöronal kayba ve ardından 23 saatlik reperfüzyonun sağdaki resimde net bir şekilde görüntülenmesine izin verir. Astrogliozis, GFAP ile immünofloresan boyamadan sonra görülebilir. Sağdaki resimde, astroglia, iskemi reperfüzyon beynindeki doku hasarına bitişik alanda yoğunlaşırken, utanç ile çalıştırılan kontrolde dağınık bir lekelenme pıtırtısı görülmektedir.

Bu prosedürü denerken, hayvan refahını ve oklüzyon süresini izlemek önemlidir. Bu prosedürü takiben, doku hasarı ve iyileşmesi ile ilgili ek soruları yanıtlamak için garip davranış analizi ve immünofloresan gibi diğer teknikler uygulanabilir.