Name: Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Öğrenin farelerde orta serebral arter tıkanıklığı ile iskemik inme indüksiyonu ve görselleştirme tekniğini. Bu yöntem, dış serebral arteri koruyarak tedavi infüzyonu için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Laboratuvarımızda bu modeli ilk kez kuran Dr. Lei Chen'e (Mount Sinai, NY'deki Icahn Tıp Okulu) teşekkür ederiz. Kısmen HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 ve NSC 2015/17/B/NZ7/02985 tarafından desteklenmektedir. Dr. Luc Bertrand, kısmen Amerikan Kalp Derneği'nden (16POST31170002) doktora sonrası bir burs ile desteklenmektedir.

Tüm işlemler Sağlık (NIH) kurallar National Institutes uyarınca Miami Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır. Steril ekipman ve aseptik teknikler kullanılması gerekmektedir. 1. Oklüzyon Sütür Hazırlanması <ol><li> 25 g ile 25 arasında fareler için 0.23 mm - - vücut ağırlığı 35 g, 20 ila fareler için 0.21 mm çapında bir dikiş kullanın. MCAO prosedürü için dikiş tipi seçimi, hayvan ağırlığına bağlıdır. </li><li> Bir gümüş kalem kullanarak, silikon kaplı ucundan başlayarak 9 mm dikiş işaretleyin. Bu ekleme uzunluğu için bir rehber olarak hizmet edecektir. </li></ol> Cerrahi 2. Hazırlık <ol><li> Bir laboratuvar anestezi sistemi kullanılarak, oksijen ile karışık izofluran ile fare anestezisi. Ticari makinede 2&#39;de 5 ve oksijen akışını ayarlama izofluran kullanın (Malzeme Tablosu bakınız). surger hayvan aktarıny yüzeyi ve bir burun konisi kullanılarak anestezi sürdürmek (1.5 ayarı kullanım izofluran - 2 2.5 ve oksijen akışını). <ol><li> saniyede 2 solunum nefes nefese kalmadan - fare solunum hızı yaklaşık 1 olduğundan emin olun. Buna ek olarak, hayvan bıyıkları stimülasyon reaksiyonu ve pedal refleks (ayak tutam) gösteren değil emin olun. Ameliyat sırasında en az her 5 dk solunum hızı ve çaba izleyin. </li></ol></li><li> İşlem sırasında kurumasını önlemek için steril bir bez kullanarak her göze göz kayganlaştırıcı bir damla koyun. Seçenek olarak ise, steril bir farmasötik borusundan göze oftalmik merhem uygulanır. </li><li> Sırtında hayvan çevirmek ve kesi alanı tıraş. Daha sonra, iyice% 70 Klorheksidin ardından etanol, ve% 70 etanol ile son bez kullanarak cerrahi alan dezenfekte. Bir stereomikroskop altında sıcak cerrahi bir yüzeye hayvan yerleştirin. </li></ol> 3. Ortak Karotis Arter diseksiyonu ve İç / External dallanma <ol><li> (- 4 cm yaklaşık 3) cerrahi makas ve forseps kullanarak, çene altına kadar göğüs kemiği yukarıdan, boyun sığ bir ensizyon gerçekleştirin. Cerrahi örtü steril olmayan yüzeylerle temas etmesini önlemek için araçlar cerrahi alanı çevresinde yerleştirilmelidir. cerrahi drape filme yardımcı olmak için geçerli video ihmal edilmiştir. </li><li> forseps dikkatle ayrı yağlı ve bağ dokusu kullanılarak trakea ortaya çıkarmak. Doku kolayca ve doğal olarak her iki taraf için ayrı olmalıdır. </li><li> ayrıca ameliyat için bölgeyi açığa boyun uzatmak için farelerin ensesine bir yastık (yuvarlak nesneyi, çapı yaklaşık 0.5 cm) yerleştirin. </li><li> Bir doku retraktörü veya kanca kullanarak kesi açın. </li><li> trakea hayvanın sol tarafında dikkatle sol karotis arter (CCA) açığa çıkarmak için bağ dokusu ayrı tweeze. CCA ile birlikte sinirler ve büyük damarları zarar vermemek için dikkatli olun. </li><li> Altta yatan dokudan ayırmak için dikkatli olmak, CCA açığa devam edin ve iç serebral arter (ICA) ve dış serebral arter (ECA) dallanma top &quot;Y&quot; maruz kalmaktadır. CCA ayrılmakta yardımcı olmak için, bağ dokusu delmek için CCA altında kavisli bir forseps yerleştirin ve sonra yavaş yavaş onları açmak için izin verir. </li></ol> MCAO Dikiş Ekleme için CCA 4. hazırlanması <ol><li> CCA altında uzunluğu yaklaşık 4 cm, naylon sütür 3 segmenti yerleştirin. Bu büyük ölçüde sütür ekleme karmaşık hale getireceği olarak CCA bükülmüş olmadığından emin olun. </li><li> en alçak noktası mümkünse, kalıcı bir düğüm kullanarak alt dikiş kapatın. </li><li> sadece ICA altında üst dikiş kravat / ECA çıkarılabilir kayma düğüm kullanarak dallanma. </li><li> Çıkarılabilir kayma düğüm kullanarak orta dikiş kravat, ama geniş açık tutmak. dikiş ekleme engel değil gibi bol bırakmak için önemlidir. </li><li> mikrodiseksiyon bahar sci kullanarakssors, alt ve orta dikiş arasında CCA bir kesi yapmak. alt sütür yakın 0.2 mm kesi gerçekleştirin. </li></ol> 5. Orta Serebral Arter Tıkanıklığı <ol><li> forseps kullanarak, üstüne o kadar yol gösterici, CCA kesi içine MCAO dikiş yerleştirin. CCA açılış pıhtılaşmayı ve kapanış önlemek için adım 4.5 sonra hızlı bir şekilde bu adımı gerçekleştirin. dikiş ekleme bloke edilmesi halinde, kesi yeniden açmak için forseps ipuçlarını kullanın. </li><li> Yavaşça etrafında kan akışını kısıtlamak için bir kayma düğüm kullanarak MCAO sütür silikon parçası üzerinde orta dikiş kravat aşağı, ama serbestçe hareket etmesine izin verecek kadar gevşek. </li><li> Dikkatle MCAO dikiş dışarı kayma yok emin olun, üst dikiş geri. </li><li> milimetrelik bir çift tarafından ICA MCAO sütür yerleştirin ve adım 5.2&#39;de tarif edildiği gibi aynı şekilde, üst dikiş tekrar kapama. </li><li> tıkanma alana MCAO dikiş Kılavuzu. Başarılı ekleme göstergesidirGümüş 9 mm işareti CCA kesi kan geri akışının düşük miktarda ve belirgin CCA insizyon ve ICA / ECA çatallanma arasında yer almaktadır. Başarılı bir oklüzyon başka bir onay da, böyle bir lazer Doppler kan akışı izleme sistemi 15, 16 ve izleme yöntemleri kullanılarak elde edilebilir. NOT: tıkalı alan tarafında orta beyin bölgesinde kan akışının% 90 bir damla başarılı tıkanıklığı gösterir. </li><li> Başarılı oklüzyon sonra sıkıca orta ve üst dikiş aşağı kravat. sahte ekleme yapmadan Eğer dikişler tekrar kapama yerine hemen 7.3 adıma geçin yok. </li></ol> 6. Kesi Kapanış ve Post-operatif Bakım <ol><li> kesi alanı içine dikişler sokmak. </li><li> toplayıcı veya doku kanca ve yastık çıkarın. </li><li> steril tuzlu su ve bir pamuklu çubuk kullanarak temizleyin dikiş alanı. </li><li> naylon sütür / iğne ve forseps kullanarak kesi kapatın. </li> &lt;li&gt; yönetme anti-inflamatuar (örneğin, karprofen, 10 mg / kg, sc) ve analjezik (örneğin, Buprenorfin, 0.1 mg / kg sc, günde iki kez) ilaçlar, ameliyat sonrası rahatsızlığı azaltmak için. hipotermi önlemek ve su ve yumuşatılmış gıda reklam labium erişim sağlamak için ısıtılmış bir pad üzerinde yerleştirilen bir kafes fareler yerleştirin. </li><li> (- 10 dk 5) ve inme belirtileri hayvanların kurtarma izleyin. Onlar hafif yanal felç değişir ve karşı kanadını ve haddeleme şiddetli kasılması çizerek yapabilirsiniz. Çeşitli değerlendirme noktaları tartışma listelenir. solunum sıkıntısı veya şiddetli nöbetler belirtisi sergileyen hayvanlar ötenazi edilmelidir. </li><li> iskemi reperfüzyon protokolüne bağlı olarak, 120 dakika veya daha fazla, 30 dakika arasında yer MCAO dikiş bırakın. tıkanma süresini azaltmak mortalite önler. </li><li> Kalıcı tıkanıklığı, ancak önemli mortalite oranı beklenebilir, 24 saat yerinde MCAO sütür bırakın. Bu süre geçtikten sonra, STE geçins 7. <ol><li> Kalıcı oklüzyon modeli kullanıyorsanız, son noktasına kadar kafeste fareler tutmak. O zaman, (7.8 7.1 adımlar) dikiş çıkarın. Bu prosedür, aynı zamanda kurban edildikten sonra gerçekleştirilebilir. </li></ol></li></ol> 7. reperfüzyon <ol><li> (2.1 yönergeleri izleyin) tekrar hayvan anestezisi ve yara kapama sütür kaldırın. </li><li> forseps ve doku ayırıcılar, kesi yeniden açın ve CCA maruz kullanma. </li><li> Dikkatli bir şekilde üst dikiş kaldırmak ve silikon kaplı bölümü orta düğüm bulunmaktadır kadar yavaşça MCAO sütür çekin. </li><li> (Bir kayma düğüm olmak zorunda değildir) sütür geçiş akan kan önlemek için sütür üst düğüm yineler. </li><li> Dikkatle orta düğüm geri almak ve üst düğüm geçmiş dikiş çekin, ama CCA içinde tutun. </li><li> Sıkıca arter kan akımını engellemek için üst düğüm kapatın. </li><li> tamamen MCAO dikiş çekin ve sıkıca orta düğüm kapatın. </li><li> MCAO dikiş olabilirdefalarca yeniden kullanılabilir. Her kullanımdan sonra, steril bir gazlı bez ile kirletici madde (örneğin, kan veya doku) çıkarmak için% 70 etanol içinde dikkatli bir şekilde dikiş temizleyin. Daha sonra, bir sterilizasyon kese içinde sütür koyun ve sterilize. </li><li> 6.4 ve hayvan ayilmanizi - Tekrar 6.1 adımları. </li></ol> 8. Doku Analizi <ol><li> Atım volümü izlemek beynini incelemek için. <ol><li> iki adımlı bir işlem kullanılarak fare Euthanize. İlk olarak, durur nefes kadar izofluran aşırı dozda hayvan maruz bırakmaktadır. TTC boyama, hemen fare başını kesmek ve beyin çıkarımı geçin. Kesit beyin (immün analizleri, örneğin, için), baş kesme öncesinde kalp ponksiyonu ile perfüzyon gerçekleştirin. </li><li> Kafatasının dibinde kafa kesti ve gözler arasında kadar kafatasının üst boyun açıklığından saç derisini kesti. kafatası maruz ile, kafa tabanı açıklığından başlayarak her iki yanı boyunca kemik kesmegöz çukurlarının kadar. Kafatasının geniş kısmı boyunca bu kesim olun. beyin zarar görmesini önlemek için makas ile çok derin ulaşmak için dikkatli olun. </li><li> Daha sonra, iki göz çukurları arasındaki kemiği kesti. </li></ol></li><li> forseps kullanarak, beyin ortaya çıkarmak için kafatasının üst yukarı kaldırın. Sadece küçük bir direnç olmalıdır. kolayca kaldırmak etmezse, kafatası kesiler eksik olabilir. nazikçe künt kavisli bir forseps kullanarak beyin dışarı kaldırın. Beyin hala birkaç sinirler tarafından takılı olabilir. Yol boyunca ekleri kaldırarak, yavaş yavaş devam edin. </li><li> , 1 mm beyin matris içinde taze beyin yerleştirin PBS birkaç damla ekleyin ve jilet veya kriyostat bıçak kullanarak matrisin boyunca dilim. </li><li> 100 mm çanak beyin transferi ve çanağın alt kapak boyama çözeltisi (% 2 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür [TTC] PBS içinde çözülmüş) ilave edilir. İki forseps kullanarak, ayrı tüm beyin dilimleri (ön aşağı bakan) ve çanak alt sırayla koyun. NOT: Boyama cansız doku beyaz kalan kırmızı canlı doku, dönecek. 37 ° C&#39;ye kadar bir çözüm Isıtma boyama hızlandıracaktır. inme alanı (beyaz) belirtileri 90 dakika sonrası inme olduğunca çabuk görülür ve fazla 7 gün boyunca görünür kalmasını olabilir. Görüntüleme atım hacmi hesaplama izin veren bir cetvel ile birlikte yapılmalıdır. </li><li> Kesit için işlem kesilir beyinleri, immüno-boyama, protein izolasyon veya diğer işlemleri 17, çeşitli 18, 19. </li></ol>

<ol><li>Cuomo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+reduces+ischemic+volume%2C+ameliorates+neurologic+deficits%2C+and+prolongs+animal+survival+in+both+transient+and+permanent+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia.</a> Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).</li>
<li>Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+neurological+assessment+of+the+post-resuscitative+effects+of+flunarizine%2C+verapamil+and+nimodipine+in+a+new+model+of+global+complete+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Long-term neurological assessment of the post-resuscitative effects of flunarizine, verapamil and nimodipine in a new model of global complete ischaemia.</a> Neuropharmacology. 28 (8), 837-846 (1989).</li>
<li>Liu, F., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+rodents%3A+methods+and+potential+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 464701(2011).</li>
<li>Chiu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+tissue+plasminogen+activator+for+acute+ischemic+stroke%3A+feasibility%2C+safety%2C+and+efficacy+in+the+first+year+of+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Intravenous tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke: feasibility, safety, and efficacy in the first year of clinical practice.</a> Stroke. 29 (1), 18-22 (1998).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="https://www.jstage.jst.go.jp/article/jstroke1979/8/1/8_1_1/_article">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Liu, F., Schafer, D. P., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTC%2C+fluoro-Jade+B+and+NeuN+staining+confirm+evolving+phases+of+infarction+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TTC, fluoro-Jade B and NeuN staining confirm evolving phases of infarction induced by middle cerebral artery occlusion.</a> J Neurosci Methods. 179 (1), 1-8 (2009).</li>
<li>Liu, F., Yuan, R., Benashski, S. E., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+experimental+stroke+outcome+across+the+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Changes in experimental stroke outcome across the life span.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 29 (4), 792-802 (2009).</li>
<li>Wang, R. Y., Wang, P. S., Yang, Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+age+in+rats+following+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Gerontology%22%5BJournal%5D)">Effect of age in rats following middle cerebral artery occlusion.</a> Gerontology. 49 (1), 27-32 (2003).</li>
<li>Baskerville, T. A., Macrae, I. M., Holmes, W. M., McCabe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+gender+on+%27tissue+at+risk%27+in+acute+stroke%3A+A+diffusion-weighted+magnetic+resonance+imaging+study+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">The influence of gender on 'tissue at risk' in acute stroke: A diffusion-weighted magnetic resonance imaging study in a rat model of focal cerebral ischaemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (2), 381-386 (2016).</li>
<li>Cai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-transplantation+of+hippocampal+neural+stem+cells+and+astrocytes+and+microvascular+endothelial+cells+improve+the+memory+in+ischemic+stroke+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Co-transplantation of hippocampal neural stem cells and astrocytes and microvascular endothelial cells improve the memory in ischemic stroke rat.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (8), 13109-13117 (2015).</li>
<li>Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenously+delivered+neural+stem+cells+migrate+into+ischemic+brain%2C+differentiate+and+improve+functional+recovery+after+transient+ischemic+stroke+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">Intravenously delivered neural stem cells migrate into ischemic brain, differentiate and improve functional recovery after transient ischemic stroke in adult rats.</a> Int J Clin Exp Pathol. 8 (3), 2928-2936 (2015).</li>
<li>Nagai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+Administration+of+Cilostazol+Nanoparticles+Ameliorates+Acute+Ischemic+Stroke+in+a+Cerebral+Ischemia%2FReperfusion-Induced+Injury+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intravenous Administration of Cilostazol Nanoparticles Ameliorates Acute Ischemic Stroke in a Cerebral Ischemia/Reperfusion-Induced Injury Model.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 29329-29344 (2015).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+PEP-1-GDNF+is+protective+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Intravenous PEP-1-GDNF is protective after focal cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 617, 150-155 (2016).</li>
<li>Hedna, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+Laser+Doppler+Flowmetry+in+Predicting+Outcome+in+Murine+Intraluminal+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Interv+Neurol%22%5BJournal%5D)">Validity of Laser Doppler Flowmetry in Predicting Outcome in Murine Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion Stroke.</a> J Vasc Interv Neurol. 8 (3), 74-82 (2015).</li>
<li>Tajima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+measuring+cerebral+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Elite+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of measuring cerebral blood flow by laser-Doppler flowmetry in mice.</a> Front Biosci (Elite Ed). 6, 62-68 (2014).</li>
<li>Fang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scutellarin+regulates+microglia-mediated+TNC1+astrocytic+reaction+and+astrogliosis+in+cerebral+ischemia+in+the+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Scutellarin regulates microglia-mediated TNC1 astrocytic reaction and astrogliosis in cerebral ischemia in the adult rats.</a> BMC Neurosci. 16, 84(2015).</li>
<li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+for+immunohistochemistry+on+cryosectioned+rat+brain+tissue%3A+example+staining+for+microglia+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293(2015).</li>
<li>Kramer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TTC+staining+of+damaged+brain+areas+after+MCA+occlusion+in+the+rat+does+not+constrict+quantitative+gene+and+protein+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">TTC staining of damaged brain areas after MCA occlusion in the rat does not constrict quantitative gene and protein analyses.</a> J Neurosci Methods. 187 (1), 84-89 (2010).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keep+warm+and+get+success%3A+the+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Keep warm and get success: the role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Res Bull. 101, 12-17 (2014).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+Preclinical+Stroke+Trials+%281st+Edition%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Stroke+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition).</a> J Exp Stroke Transl Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li>
<li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970 (1-2), 131-139 (2003).</li>
<li>Wolff, G., Davidson, S. J., Wrobel, J. K., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+maintains+blood-brain+barrier+integrity+during+early+stages+of+brain+metastasis+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Exercise maintains blood-brain barrier integrity during early stages of brain metastasis formation.</a> Biochem Biophys Res Commun. 463 (4), 811-817 (2015).</li>
<li>Wrobel, J. K., Wolff, G., Xiao, R., Power, R. F., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Selenium+Supplementation+Modulates+Growth+of+Brain+Metastatic+Tumors+and+Changes+the+Expression+of+Adhesion+Molecules+in+Brain+Microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Dietary Selenium Supplementation Modulates Growth of Brain Metastatic Tumors and Changes the Expression of Adhesion Molecules in Brain Microvessels.</a> Biol Trace Elem Res. , (2015).</li>
<li>Chen, L., Swartz, K. R., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+microport+technique+for+applications+in+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Vessel microport technique for applications in cerebrovascular research.</a> J Neurosci Res. 87 (7), 1718-1727 (2009).</li>
</ol>

Yazarların herhangi bir rekabeti veya çıkar çatışması yoktur.

açıklanan MCAO yöntemin başarılı kullanımı serebral kan akımı anatomisinin bir anlayış büyük ölçüde bağlıdır. sütür doğru yerleştirilmesi nedeniyle doğrudan görsel ipuçları eksikliği ayırt etmek zor olduğundan, tekrarlanan uygulama araştırmacı çalışmalar için kullanmadan önce prosedür ustalaşmak önemlidir. Atım hacmi tutarlı sonuçlar sağlanması için analiz edilmelidir. bir lazer Doppler sisteminin eklenmesi kan akışının başarılı bir oklüzyon belirlemek için yardımcı olabilir ve prosedür doğru yapılır sağlamak için periy...

Kardiyovasküler hastalık çalışması, felç gibi, in vivo modellerin kullanılması ile ilgilidir. iskemi, toksisite ve / veya tedavinin olası ima anlamak için, tedavi grupları arasındaki karşılaştırmalı incelemeler sağlayan hastalık, bir uygun standart, güvenilir ve yeniden üretilebilir bir modelini kullanmak için bir ihtiyaç vardır. Bu yazıda, transgenik fareler ve standardize değerlendirme modellerinin çok sayıda varlığı göz önüne alındığında, fareler kullanıyor. Deneysel iskemik inme ve aşağıdaki kurtarma aşağıdaki motor ve davranış açıkları değerlendirmek için puanlar yan yatan, 2 1 geliştirilmiştir. Birkaç iskemik inme modelleri, tam global serebral iskemi, eksik global iskemi, multifokal serebral iskemi ve fokal serebral iskemi gibi, mevcuttur. ikinci grup da hastalarda en sık inme kategorisidir. arifesinde çoğunluğunts veya orta serebral arter (MCA) yakınındaki embolik veya trombotik tıkanma oluşumunda tarafından başlatılmaktadır. Bu parametreler göz önüne alındığında, yakından sunulan model insan inme hastalığı etyolojisi taklit ve son derece alakalı 3 elde edilen sonuçları yapar. Bununla birlikte, insanlarda hastalık tedavisine hayvan modellerinde elde edilen bulgular için zor olduğu kanıtlanmıştır. Şimdiye kadar, trombolitik doku plazminojen aktivatörü, sadece kullanımı akut iskemik felç 4 tedavisi için onaylanmıştır. Fare fokal serebral iskemi, posterior serebral dolaşım inme modeli ve serebral venöz tromboz modeli modelleri arasında uygulanabilirliğini azalan ve yapılabilir analizlerin aralığını kısıtlayan, son derece invaziv. Bununla birlikte, bu embolik modeli Fototromboz modeli, endotelin-1 kaynaklı inme modelinde ve lümen içi ameliyat dikiş ipliği, orta serebral arter oklüzyonu (M gibi diğer teknikler,CAO) modeli, bu sınırlamalar olarak kullanılmak için kullanılabilir. MCAO modeli bu protokolü açıklanan bir tekniktir. Bu hali hazırda uygulandı ve yüksek verimli bir şekilde gerçekleştirilebilir, fokal serebral iskemi uyarılması için güvenilir bir yöntem sunar. Bu modelde, yani Zea-Longa ve Koizumi yöntemlerine iki yaklaşım vardır. Onlar tıkanıklığı sütür damarsal takılı şekilde biraz farklıdır. Zea-Longa teknikte, dikiş eksternal karotid arter 5 üzerinden sokulur. Burada sunulan teknik, tıkayıcı ameliyat dikiş ipliği karotis arter 6 üzerinden sokulduğu Koizumi yöntemi değiştirilir. MCAO modeli başarıyla iskemik inme sırasında meydana gelen farklı etkinlikler değerlendirmek için uygulanmıştır. reperfüzyonu takiben beyin ödemi, kan-beyin bariyerinin bozulması ile birlikte görülmektedir. Tepe nöronal ölüm genellikle 24 saatte görülmektedir; Bununla birlikte, bu yeniden7 gün 7 sonra bazal düzeylere döner. İnsanlarda, cinsiyet ve yaş inme sonucu belirlenirken, bu da fareler ve sıçanlar 8, 9, 10 görülmektedir önemli değişkenlerdir. Birkaç yayın, tedavi etkinliği, 11, 12, 13, 14 göstermek için MCAO-modelindeki kullandık.

<table><tbody><tr><td>MCAO sütür 0.23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>MCAO sütür 0.21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş kalem</td><td>zımba</td><td>503205</td><td></td></tr><tr><td>Anestezi makinesi</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Güzel bilim aracı</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi forseps düz uçlu</td><td>İnce bilim aracı</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi forseps açılı uç</td><td>Güzel bilim aracı</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Güzel bilim aracı</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Naylon sütür</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Kapanış sütürü</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5- Trifeniltetrazolyum klorür</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Beyin bloğu</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat bıçağı</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>İsteğe bağlı:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Periflux Lazer doppler sistemi</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>İzleme ünitesi</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

enfarktüs bölgesi orta arter tıkanıklığı tekniği ve görselleştirme kullanma fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Serebrovasküler hastalık küresel popülasyonda oldukça yaygındır ve inme de dahil olmak üzere çeşitli durum türlerini kapsar. İnmenin doku hasarı üzerindeki etkisini incelemek ve terapötik müdahalelerin etkinliğini değerlendirmek için çeşitli türlerde çeşitli deneysel modeller geliştirilmiştir. Bunlar arasında tam global serebral iskemi, inkomplet global iskemi, fokal serebral iskemi ve multifokal serebral iskemi bulunur. Bu protokolde açıklanan model, orta serebral arter tıkanıklığına (MCAO) dayanmaktadır ve fokal iskemi kategorisi ile ilgilidir. Bu teknik, hemisferin kesin olarak tanımlanmış bir bölgesinde tutarlı fokal iskemi üretir ve diğer yöntemlerden daha az invazivdir. Açıklanan prosedür, çeşitli genetik varyantların mevcudiyeti ve davranışsal ve nörodefisit değerlendirmesine yardımcı olmak için fareler için standartlaştırılmış çok sayıda test göz önüne alındığında fareler üzerinde gerçekleştirilir.

Oklüzyon dikiş için yerleştirme yolu Şekil 1 'de gösterilmiştir. MCAO sütür ICA çatallanan, tıkanma alanına yönlendirilmesi gerekmektedir. MCA Başarılı tıkanma TTC boyama ile görünür doku yaralanması, yol açacaktır. Şekil 2, (90 dakika veya 24 saat sonra-oklüzyonu, Şekil 2B de boyama) plasebo tedavi gören bir hayvandan (Şekil 2A) ve 60 dakika MCAO iskemi reperfüzyon hayvandan gelen lekelenme görüntüler sunar. strok hacmi...

Silikon kaplı bir sütür kullanılarak orta serebral arterin tıkanmasıyla inen bir fare inme modelini tarif ediyoruz. Protokol, kalıcı oklüzyon veya geçici bir iskemiyi indüklemek için uygulanabilir ve ardından reperfüzyon uygulanabilir.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, dış serebral arteri sağlam bırakırken İskemik inmeyi resmi ve güvenilir bir şekilde indüklemektir. Bu yöntem, tedavinin inme şiddeti üzerindeki etkisi gibi inme araştırması alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, inme indüksiyonunu takiben, dış serebral arterin tedaviyi doğrudan etkilenen hemisfere infüze etmek için kullanılabilir durumda kalmasıdır.Hazırlanan ameliyat yüzeyine izofluran ile anestezi uygulanmış bir fare yerleştirin ve oksijenle karıştırılmış izofluranı uygulamak için bir burun konisi yerleştirin. Solunum hızının nefes nefese kalmadan saniyede bir ila iki solunum mesafesinde olduğundan emin olun. Ek olarak, hayvanın bıyık stimülasyonuna veya pedal refleksine tepki göstermediğinden emin olun.İşlem sırasında kurumasını önlemek için steril bir bez kullanarak her göze bir damla oftalmik kayganlaştırıcı sürün. Kesi bölgesini tıraş ettikten sonra, ameliyat bölgesini %70 etanol ve klorheksidin bazlı bir solüsyon kullanarak iyice dezenfekte edin. Hayvanı stereo mikroskop altında sıcak bir cerrahi yüzeyde tutun.Daha sonra, cerrahi makas ve forseps kullanarak, boyunda göğüs kemiğinin üstünden çenenin altına kadar sığ bir orta hat kesisi yapın. Forseps kullanarak, trakeayı ortaya çıkarmak için yağ ve bağ dokularını dikkatlice ayırın. Dokular her iki tarafa da kolayca ve doğal olarak ayrılmalıdır.Ardından, boynu uzatmak ve ameliyat alanını daha da açığa çıkarmak için boynun arkasına yaklaşık 0,5 santimetre çapında bir yastık veya başka bir yuvarlak nesne yerleştirin. Bir doku ekartörü veya kanca kullanarak kesiği açın. Daha sonra trakeanın sol tarafında, yakındaki sinirlere ve ana damarlara zarar vermeden sol ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için bağ dokusunu dikkatlice cımbızlayın.Ardından, bağ dokusunu delmek için kavisli forsepsleri CCA'nın altına yerleştirin ve ardından CCA'yı serbest bırakmak için yavaşça açılmalarına izin verin. CCA'yı alttaki dokudan ayırın ve iç serebral arter ve dış serebral arterin üst y dallanmasını ortaya çıkarın. CCA açığa çıktığında, CCA'nın altına üç segment naylon sütür yerleştirin.CCA'nın bükülmediğinden emin olun, çünkü bu, sütürün yerleştirilmesini büyük ölçüde zorlaştıracaktır. Daha sonra mümkün olan en düşük noktada, kalıcı bir düğüm kullanarak alt dikişi kapatın. Çıkarılabilir bir düğüm kullanarak üst dikişi, ICA ve ECA'nın dallanmasının hemen altına bağlayın.Ardından, orta dikişi çıkarılabilir bir düğüm kullanarak bağlayın, ancak tamamen açık tutun. Daha sonra, mikro diseksiyon yaylı makas kullanarak, alt dikişe daha yakın olan alt ve orta dikişler arasında CCA'da 0,2 milimetrelik bir boşluk oluşturun. Forseps kullanarak, MCAO sütürünü CCA insizyonuna yerleştirin ve üst dikişe doğru yönlendirin.Daha sonra CCA üzerindeki orta sütürün kayma düğümünü nazikçe sıkın, böylece MCAO sütürünün etrafındaki kan akışını kısıtlar, ancak MCAO sütürünün serbestçe hareket etmesine izin verecek kadar gevşek olur. Şimdi üst dikişi dikkatlice çözün ve MCAO dikişin kaymadığından emin olun. MCAO sütürünü ICA'ya birkaç milimetre yerleştirin ve ardından üst sütürü daha önce olduğu gibi bir kayma düğümü ile tekrar kapatın.Daha sonra, MCAO sütürünü önce ECA'yı geçerek ICA'ya yönlendirerek, ardından pterygopalatin arteri atlayarak sütürün ICA'da kalmasını sağlayarak oklüzyon alanına yönlendirin. CCA insizyonundan çok az kan geri akışı varsa ve CCA insizyonu ile ICA ve ECA'nın çatallanması arasında gümüş dokuz milimetre işareti bulunuyorsa, yerleştirme başarılıdır. Başarılı bir oklüzyondan sonra, orta ve üst dikişi sıkıca bağlayın ve dikişleri kesi alanına sokun.Ekartör veya doku kancalarını ve yastığı çıkardıktan sonra, pamuklu çubuk üzerinde steril salin kullanarak dikiş bölgesini temizleyin. Daha sonra cildi naylon sütür ile kapatın. Hipotermiyi önlemek ve ad libitum'un suya ve yumuşatılmış yiyeceklere erişmesine izin vermek için fareyi ısıtılmış bir ped üzerinde bulunan temiz bir kafese yerleştirin.Hayvanı en az beş ila 10 dakika boyunca inme belirtileri açısından izleyin. İskemi reperfüzyon protokolüne bağlı olarak, MCAO sütürünü 30 dakika ila 120 dakika veya daha fazla arasında bırakın. Hayvanı daha önce olduğu gibi uyuşturduktan ve yara kapatma dikişlerini çıkardıktan sonra, insizyonu yeniden açmak ve CCA'yı ortaya çıkarmak için forseps ve doku ayırıcılar kullanın.Daha sonra üst dikişi dikkatlice çıkarın ve silikon kaplı kısım orta düğüme yerleşene kadar MCAO dikişi yavaşça çekin. Kanın akmasını önlemek için üst düğüm sütürünü yeniden yapın, MCAO sütürünü geçin. Daha sonra orta düğümü dikkatlice çözün ve MCAO sütürünü CCA'nın içinde tutarak üst düğümü geçecek şekilde çekin.Arter kan akışını engellemek için üst düğümü sıkıca kapatın. Ardından, MCAO sütürünü tamamen dışarı çekin ve orta düğümü sıkıca kapatın. Yarayı kapatın ve ameliyat sonrası bakımı daha önce olduğu gibi uygulayın.Bu şema, bu videoda gösterilen prosedürden kaynaklanan oklüzyon alanını mavi renkle göstermektedir. Ameliyat alanı, oval şekil ile gösterilen şeklin alt kısmında yer alır ve dikiş yerleşimi siyah çizgilerle gösterilir. Aşağıdaki resimler beyin bölümlerinin TTC duruşunu göstermektedir.Bu görüntü, sahte yerleştirmeyi takiben tipik lekelenmeyi temsil eder. Görüntü, 60 dakikalık bir MCAO'nun neden olduğu doku hasarını ve ardından 90 dakikalık reperfüzyonu temsil eder. 60 dakikalık bir MCAO'yu takiben 24 saatlik reperfüzyondan sonra daha büyük doku hasarı görülür.Nöronal belirteç MAP2 için immünofloresan boyama, 60 dakikalık oklüzyondan nöronal kayba ve ardından 23 saatlik reperfüzyonun sağdaki resimde net bir şekilde görüntülenmesine izin verir. Astrogliozis, GFAP ile immünofloresan boyamadan sonra görülebilir. Sağdaki resimde, astroglia, iskemi reperfüzyon beynindeki doku hasarına bitişik alanda yoğunlaşırken, utanç ile çalıştırılan kontrolde dağınık bir lekelenme pıtırtısı görülmektedir.Bu prosedürü denerken, hayvan refahını ve oklüzyon süresini izlemek önemlidir. Bu prosedürü takiben, doku hasarı ve iyileşmesi ile ilgili ek soruları yanıtlamak için garip davranış analizi ve immünofloresan gibi diğer teknikler uygulanabilir.

induction-ischemic-stroke-ischemia-reperfusion-mice-using-middle

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

İpliksi Orta serebral arter oklüzyonu farelerde iskemik inme eğitimi için ortak bir model.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Intraluminal filaman tıkanıklığı orta serebral arter deneysel kontur rodents en sık kullanılan vivo içinde modeldir. Ortak karotid arter onarım izin vermek için başka bir cerrahi yaklaşım burada, reperfüzyon ortak karotid arter ve orta serebral arter bölge tam bir reperfüzyon veren gerçekleştirilir.

Orta serebral arter tıkanıklığı ortak karotid arter onarım ile reperfüzyon farelerde izin

Serebral iskemi-reperfüzyon bir fare modeli kontur Patofizyoloji araştırmak için kuruldu. Klemple sağ orta serebral arter ve şu ortak Karotid arter ligate ve kan akımı iskemi 10-40 dakika sonra geri yükleme.

Serebral iskemi-reperfüzyon iki damar tıkanıklığı fare modeli

Burada, mikromanipülasyon yoluyla sol ön inen koroner arterin hassas ligasyonu ile farelerde miyokard enfarktüsü veya miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını indükleyebilen basit ve tekrarlanabilir bir yöntem tanımlanmıştır.

Farelerde Miyokard Enfarktüsü ve Miyokard İskemi-Reperfüzyon Hasarının İndüksiyonu

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Öğrenin farelerde orta serebral arter tıkanıklığı ile iskemik inme indüksiyonu ve görselleştirme tekniğini. Bu yöntem, dış serebral arteri koruyarak tedavi infüzyonu için değerli bir model sunar.

Enfarktüs Bölgesi Orta Arter Tıkanıklığı Tekniği ve Görselleştirme kullanma Fare İskemik İnme ve İskemi-reperfüzyon indüksiyon

Daha fazla video keşfet