Name: Kitle Histoloji nörodejenerasyon belirlememize Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: Öğrenin, Drosophila beyinlerinde nörodejenerasyonu vakuol oluşumunu ölçerek nicelendirmeyi. Bu yöntem, kontrol ve deney sineklerini tek örnek olarak işleyerek sistematik hataları en aza indirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Oregon Tıbbi Araştırma Vakfı'ndan ve NIH/NINDS'den (NS047663) D.K.'ye verilen hibelerle desteklenmiştir. E.S., NIH (T32AG023477) tarafından bir eğitim bursu ile desteklenmiştir.

1. tasmalar üzerinde Başkanı Tespit ve Parafin katıştırma Not: tespite tüm adımları, bir çeker ocak içinde yapılmalıdır. sağlık riski olduğu halde değil ise metilbenzoat, bir çeker ocak içinde ele takdirde çok zor olabilir, son derece belirgin bir koku vardır. <ol><li> sinekler anestezi önce, 15 ml kloroform ve% 99 etanol, 30 mL glasiyel asetik asit (5 mi kloroform ve asetik asit karışmaz) eklenerek Carnoy çözeltisi 50 mL oluşturur. yaka düz koymak ve tamamen çözelti ile kaplıdır emin olmak için, böyle bir kristalleştirme tabak gibi düz alt, bir cam kap içinde dökün. </li><li> CO 2 veya eter ile sinek anestezisi. </li><li> forseps kullanarak yaka içine boyunlarına Konu sinekler (yukarı çoğu yaka 20). Şekil 1A görüldüğü gibi, aynı yönde başkanları tüm hizalayın ve herhangi bir hasar ya da kafasına gözlerine meydana sağlamak için nazik olmayı unutmayın. </li><li> Sinekler sırası kolayca bölümleri tespit edilebilir, böylece herhangi bir konumda olmazsa oculis sinekler (oklar, Şekil 1A) içerir. Deneysel sinekler hafif ya da beyaz göz rengi varsa ek olarak, bu tür vahşi türü olarak bazı kırmızı gözlü sinekler, iplik aralarında yeterli pigment slayt leke mevcut olduğundan emin olmak için. Birden fazla yaka kullanıyorsanız yaka numarası ile birlikte bir protokol kağıda sinekler sırasını kaydedin. </li><li> 4 saat - yaka tamamlandıktan sonra, 3.5 için hazırlanan Carnoy çözeltisi içine koyun. </li><li> Uygun bertaraf kabına Carnoy çözüm dökümü ve etanol yıkar başlar. kapta yaka yerleşimini rahatsız etmeyecek şekilde yavaşça dökün emin olun. </li><li> iki kez% 99 etanol içinde 30 dakika boyunca halkalar yıkayın. </li><li> 1 saat boyunca% 100 etanol içinde yaka yıkayın. overdehydration önlemek için zamanında yıkar değiştirmek emin olun. </li><li> metilbenzoat içinde yaka koyunO / oda sıcaklığında N. metilbenzoat buharlaşmasını önlemek için parafilm kabı mühür. </li><li> davlumbaz uygun tek kullanımlık kap içine methylbenozate dökün. (- 57 ° C 56) parafın balmumu ve metilbenzoat 1 düşük erime noktası: 1, daha önceden hazırlanmış karışımı ekleyin. Bu noktadan itibaren, yaka parafın sertleşmesine olmadığından emin olmak için, 65 ° C&#39;de bir kuluçka tutulması gerekir. </li><li> Uygun tek kap içine methylbenozate parafin karışımı üzerinden dökün ve erimiş saf parafin dökün, bilezik üzerine, 65 ° C&#39;de tutuldu. </li><li> 30 dakika sonra parafin değiştirin ve bu en az 5 kez tekrarlayın. en az 6-8 yıkama yapılmalıdır. </li><li> yıkar tamamlandıktan sonra, yaklaşık yuvalara yaka boyutu ile bir lastik buz küpü tepsiye yaka yerleştirin. tamamen kapalı kadar onlar üzerinde erimiş parafin dökün ve O sertleşmesini sağlayan / N (hava kabarcıklarını önlemek için deneyin). </li><li> parafin blokları contai kaldırning buz küpü tepsisinden yaka. yavaşça yaka kopması, bir jilet kullanarak yaka parafin blok ayırın. organları yaka kalacak ise kafaları parafin blok olacak. blok, oda sıcaklığında muhafaza edilebilir. </li><li> yakaları temizlemek için, hafif fırçalama ile temiz parafin, kaldırmak ve tekrar kullanmadan önce etanol içinde yıkamak için 65 ° C&#39;de deparafinization ajan onları ıslatın. </li></ol> 2. Kesit ve Montaj <ol><li> 50 ° C&#39;ye kadar bir ısıtma plakası ısıtın. plaka üzerinde nesne tutucular (ya da metal montaj blokları) ve jilet yerleştirin ve onları ısınmasına izin verin. </li><li> kesit için istenen yönde bağlı olarak, parafin (yatay bölümler için) tarafına doğru başkanları ile ya blok veya (kısaca temas tarafında blok erime) ısıtılmış montaj bloğuna (frontal kesitler için) yukarı bakacak ekleyin. ısıtma plakası blok çıkarın ve en az 10 mil soğumasını bekleyinn, parafın montaj bloğu üzerine bir sızdırmazlık için yeterli sertleştirilmiş olduğundan emin olmak için. engebeler bilmek mümkün olduğu kadar bloğun yüzeyi ile paralel yerleştirilmiş kafalarının satır tutun. </li><li> Bir jilet alın ve gömülü başları sadece küçük bir satır kalacak şekilde uzak sinek kafaları aşırı parafin Döşeme (jilet daha kolay düzeltme için ısındı olabilir). parafin (kesit sırasında yapılabilir fazla kırpma) kesit sırasında sonu yok ki çok fazla süs için değil emin olun. </li><li> mikrotom amacı tutucu içine yerleştirme bloğu yerleştirin ve kafaları sırasının hizalama kanadın kenarı mümkün olduğu kadar paralel olduğundan emin olun. </li><li> poli-L-Lizin (PLL) solüsyonu ince bir tabaka ile kaplayarak mikroskop slaytlar hazırlayın ve 5 dakika boyunca kurumaya bırakın. kısa bir süre önce kullandığınız su ile bunları kapatın. </li><li> 7 mikron bölümleri kesmek ve su üzerinde yüzen slayt bölümlerin şerit aktarın. &lt;br /&gt; Not: Yatay bölümler için tüm beyin elde etmek için, biz baş tamamen kesilene kadar (beyine burnumun kesme) göz içine kesmek için başlarken gelen kurdele toplamak. Birden fazla slayt tüm kafa için gerekli olabilir. </li><li> 37 ° C&#39;de bir ısı plakasında slayt yerleştirin ve şerit 1 dakika için genişletilmesine izin verir. </li><li> (Kapalı dökme veya doku kullanılarak) aşırı su çıkarmak ve slaytlar O / N kurutun. </li><li> Bir deparafinization ajan (tamamen bölümlerini kapsayan) ile dolu uzun boylu, dik slayt boyama kavanoz slaytlar yerleştirerek slayt parafin çıkarın. 60 dakika - her 30 dakika 3 yıkar gerçekleştirin. </li><li> Nihai yıkama slayt çıkarın. slayt üzerine gömme medya 2 damla koyun ve büyük bir lamel ile örtün. </li></ol> 3. Bölümler Fotoğrafçılık ve Analizi <ol><li> 2 d - Hazırlanan slaytlar 1 kurumasını bekleyin. Sonra, bir floresan Microsc bunları incelemekmavi ışık altında ope. </li><li> Sineklerin yönünü belirlemek ve belirli bir bölge üzerinde odaklanarak, eğer ilgi bölgeyi bulmak için daha düşük bir büyütme kullanın. NOT: sws sinekler (Şekil 2) için, biz büyük komissürü içeren bölümünü bulun ve (genellikle 40X büyütme) bir görüntü alır. (Şekil 3&#39;te olduğu gibi), tüm beyin analiz ederken, bir kafa tüm bölümleri ilerlemek ve en ağır fenotip veya vakuoller göstermek tüm bölümleri ile bölüm fotoğraf ya. </li><li> Bir çift-kör analizi için, almak ve sayı görüntüleri genotipi bilmeden ve daha sonra onları tanımlamak için üst üste yaka numarasını ve başın pozisyonunu kaydedin. </li><li> görüntüler alınmıştır sonra bir görüntüleme yazılımı kullanarak bunları analiz eder. </li><li> Bölüm başına veya başına vakuol sayısını. , Vakuol boyutunu ölçmek bir yazılım programında görüntüleri açın ve çok bir seçim ile vakuoller seçmek içinl. Seçilen vakuoller piksellerin miktarını belirlemek. </li><li> Um 2 dönüşüm için, fotoğraf elde etmek için kullanılan büyütme bir sahne mikrometre kalibrasyonu slayt fotoğraf çekmek. Dönüşüm faktörünü hesaplamak için 100 um 2 piksel miktarını belirler. </li><li> Yukarıdaki adımda hesaplanan dönüşüm faktörü ile piksel sayısına bölünmesiyle mikron 2 içine toplam piksel sayısını dönüştürün. </li></ol>

<ol><li>Alexander, A. G., Marfil, V., Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Caenorhabditis+elegans+as+a+model+to+study+Alzheimer%27s+disease+and+other+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Use of Caenorhabditis elegans as a model to study Alzheimer's disease and other neurodegenerative diseases.</a> Front Genet. 5, 279(2014).</li>
<li>Bonini, N. M., Fortini, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neurodegenerative+disease+modeling+using+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Human neurodegenerative disease modeling using Drosophila.</a> Annu Rev Neurosci. 26, 627-656 (2003).</li>
<li>Calahorro, F., Ruiz-Rubio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+an+experimental+tool+for+the+study+of+complex+neurological+diseases%3A+Parkinson%27s+disease%2C+Alzheimer%27s+disease+and+autism+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as an experimental tool for the study of complex neurological diseases: Parkinson's disease, Alzheimer's disease and autism spectrum disorder.</a> Invert Neurosci. 11, 73-83 (2011).</li>
<li>Chen, X., Barclay, J. W., Burgoyne, R. D., Morgan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+C.+elegans+to+discover+therapeutic+compounds+for+ageing-associated+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Central+Journal%22%5BJournal%5D)">Using C. elegans to discover therapeutic compounds for ageing-associated neurodegenerative diseases.</a> Chemistry Central Journal. 9, 65(2015).</li>
<li>Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R., Elder, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+human+neurodegenerative+diseases+in+transgenic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Modeling human neurodegenerative diseases in transgenic systems.</a> Hum Genet. 131, 535-563 (2012).</li>
<li>Jaiswal, M., Sandoval, H., Zhang, K., Bayat, V., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+mechanisms+that+underlie+human+neurodegenerative+diseases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Probing mechanisms that underlie human neurodegenerative diseases in Drosophila.</a> Annu Rev Genet. 46, 371-396 (2012).</li>
<li>Konsolaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruitful+research%3A+drug+target+discovery+for+neurodegenerative+diseases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Fruitful research: drug target discovery for neurodegenerative diseases in Drosophila.</a> Expert Opin Drug Discov. 8, 1503-1513 (2013).</li>
<li>Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurodegenerative+mutants+in+Drosophila%3A+a+means+to+identify+genes+and+mechanisms+involved+in+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurodegenerative mutants in Drosophila: a means to identify genes and mechanisms involved in human diseases.</a> Invert Neurosci. 5, 97-109 (2005).</li>
<li>Kretzschmar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swiss+cheese+et+allii%2C+some+of+the+first+neurodegenerative+mutants+isolated+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Swiss cheese et allii, some of the first neurodegenerative mutants isolated in Drosophila.</a> J Neurogenet. 23, 34-41 (2009).</li>
<li>Li, J., Le, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+neurodegenerative+diseases+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Modeling neurodegenerative diseases in Caenorhabditis elegans.</a> Exp Neurol. 250, 94-103 (2013).</li>
<li>Prussing, K., Voigt, A., Schulz, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism for Alzheimer's disease.</a> Mol Neurodegener. 8, (2013).</li>
<li>Wentzell, J., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+and+tauopathy+studies+in+flies+and+worms%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease and tauopathy studies in flies and worms.</a> Neurobiol Dis. 40, 21-28 (2010).</li>
<li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
<li>Barone, M. C., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+neurodegenerative+phenotypes+in+Drosophila+dopaminergic+neurons+by+climbing+assays+and+whole+brain+immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessing neurodegenerative phenotypes in Drosophila dopaminergic neurons by climbing assays and whole brain immunostaining.</a> J Vis Exp. , e50339(2013).</li>
<li>Dutta, S., Rieche, F., Eckl, N., Duch, C., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+expression+of+Swiss-cheese+%28SWS%29%2C+the+Drosophila+orthologue+of+Neuropathy+Target+Esterase%2C+is+required+for+neuronal+ensheathment+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Glial expression of Swiss-cheese (SWS), the Drosophila orthologue of Neuropathy Target Esterase, is required for neuronal ensheathment and function.</a> Dis Model Mech. , (2015).</li>
<li>Iijima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abeta42+mutants+with+different+aggregation+profiles+induce+distinct+pathologies+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Abeta42 mutants with different aggregation profiles induce distinct pathologies in Drosophila.</a> PLoS One. 3, e1703(2008).</li>
<li>Krishnan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+circadian+clock+accelerates+aging+in+neurodegeneration-prone+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Loss of circadian clock accelerates aging in neurodegeneration-prone mutants.</a> Neurobiol Dis. 45, 1129-1135 (2012).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+rapid+iterative+negative+geotaxis+assay+and+its+use+in+a+genetic+screen+for+modifiers+of+Abeta%2842%29-induced+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila.</a> Neurosci Bull. 31, 541-549 (2015).</li>
<li>Papanikolopoulou, K., Skoulakis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporally+distinct+phosphorylations+differentiate+Tau-dependent+learning+deficits+and+premature+mortality+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Temporally distinct phosphorylations differentiate Tau-dependent learning deficits and premature mortality in Drosophila.</a> Hum Mol Genet. 24, 2065-2077 (2015).</li>
<li>Ping, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+abeta42-induced+hyperexcitability+to+neurodegeneration%2C+learning+and+motor+deficits%2C+and+a+shorter+lifespan+in+an+Alzheimer%27s+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Linking abeta42-induced hyperexcitability to neurodegeneration, learning and motor deficits, and a shorter lifespan in an Alzheimer's model.</a> PLoS Genet. 11, e1005025(2015).</li>
<li>Sujkowski, A., Rainier, S., Fink, J. K., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+Induction+of+Human+NTE+%28PNPLA6%29+Rescues+Neurodegeneration+and+Mobility+Defects+of+Drosophila+swiss+cheese+%28sws%29+Mutants%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Delayed Induction of Human NTE (PNPLA6) Rescues Neurodegeneration and Mobility Defects of Drosophila swiss cheese (sws) Mutants.</a> PLoS One. 10, e0145356(2015).</li>
<li>Barone, M. C., Sykiotis, G. P., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+activation+of+Nrf2+signaling+is+sufficient+to+ameliorate+neurodegenerative+phenotypes+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Genetic activation of Nrf2 signaling is sufficient to ameliorate neurodegenerative phenotypes in a Drosophila model of Parkinson's disease.</a> Dis Model Mech. 4, 701-707 (2011).</li>
<li>Coulom, H., Birman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+exposure+to+rotenone+models+sporadic+Parkinson%27s+disease+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Chronic exposure to rotenone models sporadic Parkinson's disease in Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 24, 10993-10998 (2004).</li>
<li>Navarro, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+dopaminergic+neuronal+dysfunction+in+genetic+and+toxin-induced+models+of+Parkinson%27s+disease+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Analysis of dopaminergic neuronal dysfunction in genetic and toxin-induced models of Parkinson's disease in Drosophila.</a> J Neurochem. 131, 369-382 (2014).</li>
<li>Heisenberg, M., Böhl, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+anatomical+brain+mutants+of+Drosophila+by+histological+means%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung+C%22%5BJournal%5D)">Isolation of anatomical brain mutants of Drosophila by histological means.</a> Zeitschrift für Naturforschung C. 34, 143(1979).</li>
<li>Han, P. L., Meller, V., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+brain+revisited+by+enhancer+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila brain revisited by enhancer detection.</a> J Neurobiol. 31, 88-102 (1996).</li>
<li>Lin, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+in+situ+brain+imaging+for+mapping+the+Drosophila+connectome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogenet%22%5BJournal%5D)">Automated in situ brain imaging for mapping the Drosophila connectome.</a> J Neurogenet. 29, 157-168 (2015).</li>
<li>Strausfeld, N. J., Sinakevitch, I., Vilinsky, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mushroom+bodies+of+Drosophila+melanogaster%3A+an+immunocytological+and+golgi+study+of+Kenyon+cell+organization+in+the+calyces+and+lobes%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">The mushroom bodies of Drosophila melanogaster: an immunocytological and golgi study of Kenyon cell organization in the calyces and lobes.</a> Microsc Res Tech. 62, 151-169 (2003).</li>
<li>Bettencourt da Cruz, A., Wentzell, J., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swiss+Cheese%2C+a+protein+involved+in+progressive+neurodegeneration%2C+acts+as+a+noncanonical+regulatory+subunit+for+PKA-C3%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Swiss Cheese, a protein involved in progressive neurodegeneration, acts as a noncanonical regulatory subunit for PKA-C3.</a> J Neurosci. 28, 10885-10892 (2008).</li>
<li>Bolkan, B. J., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+Tau+results+in+defects+in+photoreceptor+development+and+progressive+neuronal+degeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Loss of Tau results in defects in photoreceptor development and progressive neuronal degeneration in Drosophila.</a> Dev Neurobiol. 74, 1210-1225 (2014).</li>
<li>Cook, M., Mani, P., Wentzell, J. S., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+RhoA+prenylation+in+the+loechrig+%28loe%29+mutant+leads+to+progressive+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Increased RhoA prenylation in the loechrig (loe) mutant leads to progressive neurodegeneration.</a> PLoS One. 7, e44440(2012).</li>
<li>Wittmann, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tauopathy+in+Drosophila%3A+neurodegeneration+without+neurofibrillary+tangles%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tauopathy in Drosophila: neurodegeneration without neurofibrillary tangles.</a> Science. 293, 711-714 (2001).</li>
<li>Rasmuson, B., Green, M. M., Ewertson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QUALITATIVE+AND+QUANTITATIVE+ANALYSES+OF+EYE+PIGMENTS+AND+PTERIDINES+IN+BACK-MUTATIONS+OF+THE+MUTANT+wa+IN+DROSOPHILA+MELANOGASTER%5BTitle%5D)+AND+%22Hereditas%22%5BJournal%5D)">QUALITATIVE AND QUANTITATIVE ANALYSES OF EYE PIGMENTS AND PTERIDINES IN BACK-MUTATIONS OF THE MUTANT wa IN DROSOPHILA MELANOGASTER.</a> Hereditas. 46, 635-650 (1960).</li>
<li>Bettencourt da Cruz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+MAP1B-related+protein+FUTSCH+leads+to+changes+in+the+neuronal+cytoskeleton%2C+axonal+transport+defects%2C+and+progressive+neurodegeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Disruption of the MAP1B-related protein FUTSCH leads to changes in the neuronal cytoskeleton, axonal transport defects, and progressive neurodegeneration in Drosophila.</a> Mol Biol Cell. 16, 2433-2442 (2005).</li>
<li>Kretzschmar, D., Hasan, G., Sharma, S., Heisenberg, M., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+swiss+cheese+mutant+causes+glial+hyperwrapping+and+brain+degeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The swiss cheese mutant causes glial hyperwrapping and brain degeneration in Drosophila.</a> J Neurosci. 17, 7425-7432 (1997).</li>
<li>Dutta, S., Rieche, F., Eckl, N., Duch, C., Kretzschmar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+expression+of+Swiss+cheese+%28SWS%29%2C+the+Drosophila+orthologue+of+neuropathy+target+esterase+%28NTE%29%2C+is+required+for+neuronal+ensheathment+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Glial expression of Swiss cheese (SWS), the Drosophila orthologue of neuropathy target esterase (NTE), is required for neuronal ensheathment and function.</a> Dis Model Mech. 9, 283-294 (2016).</li>
<li>Davis, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocerebrosidase+Deficiency+in+Drosophila+Results+in+alpha-Synuclein-Independent+Protein+Aggregation+and+Neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Glucocerebrosidase Deficiency in Drosophila Results in alpha-Synuclein-Independent Protein Aggregation and Neurodegeneration.</a> PLoS Genet. 12, e1005944(2016).</li>
<li>Dias-Santagata, D., Fulga, T. A., Duttaroy, A., Feany, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+mediates+tau-induced+neurodegeneration+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress mediates tau-induced neurodegeneration in Drosophila.</a> J Clin Invest. 117, 236-245 (2007).</li>
<li>Kretzschmar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+and+neuronal+expression+of+polyglutamine+proteins+induce+behavioral+changes+and+aggregate+formation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Glial and neuronal expression of polyglutamine proteins induce behavioral changes and aggregate formation in Drosophila.</a> Glia. 49, 59-72 (2005).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+for+TDP-43+proteinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model for TDP-43 proteinopathy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 3169-3174 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Tarif edilen yöntem, Drosophila beyinde nörodejenerasyonu ölçmek için bir araç sağlar. Belirli bir hücre tipi sayımı gibi diğer yöntemler, nörodejenerasyon tanımlamak için kullanılabilir, ancak bu yöntemin avantajı daha genel olarak uygulanabilir olmasıdır. hücrelerin sayılması bu hücrelerin güvenilir bir şekilde belirli bir antikor ya da her zaman mevcut değildir, bir hücreye özel markörün ekspresyonunu kullanarak tespit edilebilir olmasını gerektirir. Bundan başka, önemli ölçüde farklı sonuçlar aktivasyonu ne...

beklenen yaşam süresinin artmasıyla birlikte, Alzheimer veya Parkinson gibi nörodejeneratif hastalıklar genel nüfus için artan bir sağlık tehdidi haline gelmiştir. Ulusal Sağlık Enstitüleri göre, 115 milyon insan, dünya çapında, altta yatan önemli bir ilerleme birçoğu için, bu hastalıkların en azından bazı rol oynayan genleri ve risk faktörlerini tanımlamada yapılmış olmasına rağmen 2050 yılında bunama etkilenecek tahmin edilmektedir moleküler mekanizmalar hala bilinmeyen ya da iyi anlaşılmış bulunmaktadır. Caenorhabditis elegans ve Drosophila melanogaster gibi basit omurgasız model organizma kısa bir yaşam döngüsü, döl çok sayıda ve köklü ve bazen de eşsiz genetik ve moleküler yöntemlerin 1 kullanılabilirliği de dahil olmak üzere nörodejeneratif hastalıkların mekanizmaları incelemek için deneysel avantajlar sunuyoruz -12. Ayrıca, bu organizmaların tarafsız mükellef bulunmaktadırnörodejeneratif fenotipleri üzerine ağırlaştırıcı veya iyileştirmede etkileri ile bu hastalıklara katkıda bulunan faktörleri belirleyebilir etkileşim ekranlar. Böyle genetik etkileşimleri analiz ve yaşlanma etkilerini değerlendiren nörodejenerasyonu tespit etmek ve şiddetini ölçmek için nicel protokolleri gerektirir. Sayısal performans değeri 13-21 sağlamak gibi koku öğrenme, olumsuz geotaxis, ya da hızlı phototaxis olarak Drosophila davranış yönlerini, ölçerken Bu değerlendirme nispeten kolayca yapılabilir. Nöronlarının sayılması ile nöronal hayatta kalma etkileri belirlemek de mümkündür. PD etkilendiğini ve o zaman bile, sonuçları 22-24 tartışmalı olmuştur dopaminerjik nöronlar gibi, açıkça tanımlanabilir belirli bir nüfus odaklanarak Ancak, bu mümkündür. Burada açıklanan protokol parafin seri bölümleri gerçekleştirmek için yaka yöntemini kullanan bir yöntemBu aslında Drosophila 25 anatomik beyin mutantlar tecrit etmek için kullanılan Heisenberg ve Böhl, tarafından geliştirilmiştir. Yaka yönteminin kullanımı, daha sonra cryosections, vibratome bölümleri, ve plastik bölümlerin 26-28 de dahil olmak üzere, adapte edilmiştir. Burada, bu yöntem, daha sonra nörodejeneratif fenotipleri 16,21,29-32 olan sinekler gelişen hücre arası boşluklar ölçmek için kullanılabilir, tüm uçucu kafası seri bölümleri elde etmek için kullanılır. Bu ölçümler belirli beyin bölgelerinde yapılabilir ya da tüm beyin kapağı olabilir; İkinci yaklaşım yaşlanma sırasında gözlemlediği gibi biri bile zayıf dejeneratif fenotipleri tanımlamak için izin verir. yaka kullanıldığında, son olarak, 20 sinekler olan bir preparasyon olarak işlenebilir, sadece daha az zaman alan, ancak, aynı zamanda hafif değişikliklere eserler minimize, kumanda aynı hazırlanmasında deney sinekler analiz sağlar hazırlık.

<table><tbody><tr><td>Reaktif/Ekipman Firma Adı,</td><td></td><td>Katalog Numarası</td><td></td></tr>: <tr><td>Yaka</td><td>Genesee</td><td>Scientific TS 48-100</td><td>Genesee'nin olduğu gibi katmanlar yerine tek parça metalden yapılmış özel yapım yakalar kullanıyoruz. Tasmaların nasıl yapılacağına dair bir açıklama http://flybrain.neurobio.arizona.edu/Flybrain/html/atlas/fluorescent/index.html&nbsp adresinde bulunabilir;</td></tr><tr><td>Gömmek için kauçuk buz küpü tepsisi</td><td>Ev mağazası</td><td></td><td>Boyut, ek duvarlara yapıştırılarak sığacak şekilde yapılabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Kristalleştirici çanak</td><td>Fisher Scientific şirketi</td><td>08-762-3</td><td></td></tr><tr><td>Ether</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>E138-1</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Laboratories Inc.</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>Choloroform</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>C298-500</td><td></td></tr><tr><td>Buzul Asetik Asit</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Metilbenzoat</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>M205-500</td><td>Farklı Koku - Çeker ocakta kullanın!</td></tr><tr><td>Düşük Erime Noktalı Parafin Balmumu</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>T565</td><td>65 ° C'de fazladan eritilmiş tuttuğunuzdan emin olun; C su banyosu</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td>Reichert Jung 2040 Autocut</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slayt</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-550D</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Kapağı Cam</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>12-545-M</td><td></td></tr><tr><td>SafeClear</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>314-629</td><td>Yıkamak için üç farklı kap</td></tr><tr><td>Dikey Boyama Kavanozu Kapak</td><td>Ted Pella Inc.&nbsp;</td><td>432-1</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific Company</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin Çözeltisi (PLL)</td><td>Sigma Yaşam Bilimleri</td><td>P8290-500</td><td></td></tr></tbody></table>

kitle histoloji nörodejenerasyon belirlememize<em&gt; drosophila</em

Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila

Alzheimer hastalığı (AH) veya Parkinson hastalığı (PH) gibi ilerici nörodejeneratif hastalıklar dünya çapında insan sağlığı için artan bir tehdit vardır. Memeli modeller patojenite altında yatan mekanizmaların önemli bilgiler vermiş olsa da, birlikte maliyeti yüksek olan memeli sistemlerin karmaşıklığı kullanımını sınırlayan. Bu nedenle, basit ama köklü Drosophila modeli sistemi bu hastalıklarda etkilenen moleküler yolları araştırmak için bir alternatif sunuyor. Davranış bozukluklarla birlikte, nörodejeneratif hastalıklar, nöron ölümü ve axonopathy Histolojik fenotip ile karakterize edilir. nöronal dejenerasyonu ölçmek için ve genetik ve çevresel faktörlerden nasıl etkilendiğini belirlemek için, erişkin sinek beyinlerinde vakuoller ölçme dayalı bir histolojik yaklaşım kullanın. sistematik hata etkilerini en aza indirmek için doğrudan kontrol ve exp bölümler karşılaştırmak içinbir hazırlık erimental sinekler, biz parafin kesitler için &#39;yaka&#39; yöntemini kullanın. Nörodejenerasyon daha sonra uçucu beyin gelişmiştir vakuollerin boyutu ve / veya sayısı ölçülerek değerlendirilir. Bu da ilgi belirli bir bölgeye odaklanarak ya da tam kafa yayılan seri bölümleri alarak, tüm beyin analiz yapılabilir. Normal yaşlanma sırasında oluşur Bu nedenle, bu yöntem, bir ağır dejenerasyon değil, aynı zamanda bir kaç bölümlerde sadece saptanabilir nispeten hafif fenotipleri sadece ölçmek için sağlar.

Tüm sinek kafasını kapsayacak göz pigmenti 33 ile boyanan seri bölümlerde açıklanan yöntem sonuçları kullanarak. Bunun bir kısmı tek bir kafa bölümleri üstten alta gösterilir Şekil 1B, &#39;de gösterilmiştir. Farklı sineklerden bölümleri bu örnekte soldan sağa görülür. Yönlendirme ve sineklerin tanımlanmasını kolaylaştırmak için, bir gözsüz sinek (sinüs oculis) konumuna 3 (ok, Şekil 1B) bir belirteç olarak eklenir. <p class="jove_...

Drosophila yaygın nörodejenerasyonu incelemek için bir model sistem olarak kullanılmaktadır. Bu protokol, beyinde vakuol oluşumu ile tespit edildiği üzere, sayısal edilebilir dejenerasyonu bir yöntemi tarif etmektedir. Aynı zamanda dolayı bir örnek olarak işleme ve kesit kontrol ve deney sinekler tarafından deneysel prosedüre etkileri en aza indirir.

Kitle Histoloji nörodejenerasyon belirlememize<em&gt; Drosophila</em

Progressive neurodegenerative diseases like Alzheimer&#39;s disease (AD) or Parkinson&#39;s disease (PD) are an increasing threat to human health ...

Bu prosedürün genel amacı, yaş, genetik modifikasyonlar veya çevresel etkiler dahil olmak üzere çeşitli faktörlerin neden olduğu Drosophila beynindeki nörodejenerasyonu, spesifik boyama gerektirmeden nicel olarak belirlemektir. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıklar alanındaki temel soruların analizinde oldukça faydalıdır; örneğin, hangi genlerin veya çevresel faktörlerin bu hastalıklara yol açtığı veya bu hastalıklara katkıda bulunduğu gibi soruların yanıtlanmasında kullanılır.Bu yöntemin temel avantajı, kontrol sinekleri ve deney sinekleri tek bir örnek olarak işlendiği için sistematik hataların önlenmesi veya minimize edilmesidir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler zorluk çekebilirler; çünkü beynin doğru bölgesinin lam üzerinde olduğundan emin olmak ve kesme işlemi sırasında oluşabilecek hasarları önlemek pratik gerektirir. Başlamak için, önce pens kullanarak denek sinekleri boyunlarından yakalayıp yakalara yerleştirin.Tüm başları aynı yöne bakacak şekilde hizalayın ve başa veya gözlere herhangi bir zarar verilmediğinden emin olun. Sineklerin sırasının kesitlerde kolayca tanımlanabilmesi için, rastgele ve bilinen konumlara Gözsüz Senoculus Sinekleri ekleyin. Ayrıca, ilg

mass-histology-to-quantify-neurodegeneration-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Davranış testleri, lokomotor fonksiyonları ölçme öğrenme ve hafıza...

Assaying Lokomotor, Öğrenme ve Hafıza Açıkları. Drosophila Nörodejenerasyon, modeller

Tek Drosophila Ommatidium Diseksiyon ve Görüntüleme

Burada dopaminerjik (DA) nöronların yaşa bağlı nörodejenerasyon incelemek için kurulmuştur iki deneyleri...

Içinde Nörodejeneratif fenotipleri değerlendirilmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Tırmanma Tahliller tarafından Dopaminerjik nöronlar ve Tüm Beyin immün

Burada, Drosophila larva'daki segmental sinirlere zarar vermek için basit ve yaygın olarak erişilebilen bir yöntem tarif ediyor ve üçüncü instar larva nöromüsküler kavşakta (NMJ) motor nöronların nörodejenerasyonunu görselleştirip sayısallaştırıyor.

Çalışmak İçin Basit Bir Nöronal Mekanik Yaralanma Metodolojisi<em&gt; Drosophila</em&gt; Motor Nöron Dejenerasyonu

Bu iletişim kuralı diseksiyon ve yetişkin Drosophila melanogaster immunostaining açıklar beyin dokuları. Özellikle, bu iletişim kuralı doğru nöronal gelişim birçok yönlerini temel genel prensipler ortaya çıkarmak için kullanılabilecek örnek nöronal alt kümeleri olarak Drosophila mantar beden ve photoreceptor nöronlar kullanımı vurgulamaktadır.

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Protein toplama ve merkezi sinir sistemi Drosophila modellerinin autophagic akı floresan-görüntüleme tabanlı cep biyolojik çalışmalar nicel veri ayıklamak için bir basit ve uyarlanabilir iş akışı geliştirdiğimiz ateş.

Ateş Drosophila ImageJ kullanarak Fluorescently Tagged proteinlerin tarafsız analizi ile yılında niceliksel hücre biyolojisi

Drosophila melanogaster'da nörodejenerasyon gösteren mutantlar için ekrana ileri genetik bir yaklaşım kullanarak bir protokol sunuyoruz. Bu bir tırmanma tahlil, Histoloji analizi, gen haritalama ve sonuçta nörokoruma süreci ile ilgili yeni genler belirlemek için DNA sıralaması içerir.

In vivo Ileri genetik ekran Drosophila melanogaster yeni Nörokoruyucu genler tanımlamak için

Burada, Drosophila melanogaster'de üç basit yaralanmaya bağlı akson dejenerasyonu (akson ölüm) tahlilleri yaparak kopmuş aksonların ve sinapslarının morfolojik ve fonksiyonel korunmasını değerlendirmek için protokoller salıyoruz.

Drosophila melanogaster'de Akson Ölümü Sırasında Aksonların ve Sinapslarının Morfolojik ve Fonksiyonel Değerlendirilmesi

Bu işlemin amacı Drosophila melanogasterkullanarak nörodejeneratif hastalık modellerinde DLM nöromüsküler kavşaklar (NMJs) yapısal bütünlüğünü değerlendirmek için dorsal uzunlatanal kas (DLM) doku incelemektir.

Nörodejenerasyon ile Birlikte Erişkin Drosophila'da Sinaptik Dejenerasyonun Görselleştirilmesi

Bu çalışma, dekapitasyon, fiksasyon, kriyoseksiyon, floresan boyama, immün boyama ve görüntülemeyi içeren, konfokal ve multifoton görüntülemeye genişletilebilen basitleştirilmiş bir doku işleme protokolü sunmaktadır. Yöntem, gelişmiş motor becerilere olan ihtiyacı atlayarak karmaşık diseksiyonlarla karşılaştırılabilir etkinliği korur. Kantitatif görüntü analizi, kapsamlı bir araştırma potansiyeli sağlar.

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Öğrenin, Drosophila beyinlerinde nörodejenerasyonu vakuol oluşumunu ölçerek nicelendirmeyi. Bu yöntem, kontrol ve deney sineklerini tek örnek olarak işleyerek sistematik hataları en aza indirir.

Kitle Histoloji nörodejenerasyon belirlememize

Daha fazla video keşfet