Name: Biyofilm Kaldırma azotla temizleme karbon dioksiti aerosollerle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Öğrenin, karbondioksit aerosolleriyle biyofilm kaldırma yöntemini. Momentum transferi ve yüzey aktif madde etkisiyle hızlı ve güvenilir temizlik sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Bilim, BİT ve Gelecek Planlama Bakanlığı tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) aracılığıyla Temel Bilim Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir (# 2015R1A2A2A01006446).

Biyofilm Oluşumunun için Yüzeyin hazırlanması 1. <ol><li> Mekanik kesici ile çipleri içine 304 1 mm kalınlığında paslanmaz çelik levhalar (10 × 10 mm 2) kesin. </li><li> 10 dakika her biri için aseton, metanol ve deiyonize (Dİ) su ardışık olarak cips ultrasonik temizleme gerçekleştirin. Organik kirlenmeyi kaldırmak için, cam gibi maddelerden yapılmış bir çözücü dayanıklı kap kullanın. </li><li> 3-5 saniye DI akan su ile cips durulayın. </li><li> 3-5 saniye N2 gaz akışını kullanarak cips kurutun. </li></ol> Bakteriyel kültür 2. Hazırlık <ol><li> Bir P al -80 ° C derin dondurucuda saklanan stokunun (nazikçe Prof. Sung Kuk Lee, unist, Güney Kore tarafından sağlanan) putida KT2440. </li><li> 1 dakika sonra oda sıcaklığında erimeye ve dondurulmuş stok çözeltisi üst tabaka çamur döner. stok solüsyonu erimiş tabaka haline bir döngü daldırın. </li><li> Bir Luria üzerine çizgi bakteri bu döngü kullanmak% 1.5 agar içeren -Bertani (LB) plaka. </li><li> Bakteri kolonileri büyümesi 30 ° C&#39;de gece boyunca inkübasyona bırakılır. </li><li> taze döngüsünü kullanarak plaka tek bir koloni seçin. </li><li> tek bir bakteriyel koloniden ihtiva eden halka ile 50 ml konik bir tüp içinde LB suyu 10 ml inoküle. </li><li> 30 ° C&#39;de 16 saat ve 160 rpm&#39;de sallanan bir kuluçka makinesi içinde suyu inkübe edin. </li></ol> Yüzey 3. Biyofilm Oluşumu <ol><li> Her çip yüzeyi sterilize etmek için, 1-2 saniye her 5 kez cımbız ile hazırlanan cips her Pick up ve% 70 etanol bunları batırın. cips daldırma sırasında cımbız ile yapılan emin olun. </li><li> Geri kalan etanolü çıkarmak için otoklavlanmış DI su ve LB suyu sırayla her bir çip, 1-2 sn her biri için 5 kez, batırın. </li><li> 2 yongaları ve oyuk başına 5 mi LB suyu ile 6 oyuklu kültür plakaları, bu fiş yerleştirin. </li><li> LB suyu ulaştığı konsantrasyon kadar bakteri kültürü sulandırınız8 x 10 8 hücre / ml (600 nm dalga boyunda optik yoğunluk: ~ 0.8). </li><li> Seyreltilmiş bir bakteri kültürü 50 ul her bir inoküle. </li><li> biyofilmlerin oluşturulması için 24 saat boyunca çalkalamadan 30 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol> 4. CO 2 Aerosol Temizleme <ol><li> 10 mM amonyum asetat tamponunda biyofilm oluşan fiş Dip (uçucu) 5 kat gevşek bağlı planktonik bakterilerin çıkması için. </li><li> Hava hafif akan bir biyo-güvenlik kabini, bu yongaları kurutun. </li><li> Hemen kurutulduktan sonra, jet ekseni boyunca CO 2 memeden 20 mm yükleme yerinde, bir çip koyun. 40 ° açı jet ekseni yatırın. </li><li> Gaz basınç regülatörleri kullanılarak, sırasıyla 5.3 MPa ve 0,7 MPa, CO 2 ve N 2 gazı durgunluk basınçları ayarlayın. </li><li> çip orta kesiminde üzerine aerosol jet uygulayın. 2 olmalıdır katı CO dahil beyaz aerosollergörülebilir. 5 saniye CO 2 için solenoid valf &quot;konulu&quot; çevirin ve ardından 3 saniye &quot;kapalı&quot; açın: periyodik elle kontrol anahtarı kullanarak (döngü 8 sn). Azot temizleme kullanılması gerekiyorsa, N2 sürekli bir kaynağı için selenoid vana açın. </li><li> 16, 40 CO 2 aerosoller cips davranın ve ile ve azot tasfiyeler olmadan 88 saniye. Negatif kontrol olarak tedavi olmadan fiş saklayın. </li></ol> Kaldırma Verimliliği için 5. Analiz <ol><li> Kontrol ve aerosol tedavi edilen yongaları üzerinde bakteri hücreleri boyamak için DI su: 1 iM yeşil floresan nükleik asit leke (480/500 nm uyarma / emisyon dalga boyu) hazırlayın. </li><li> boyama çözeltisi içinde cips yerleştirin. </li><li> 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de ışıksız bir kuluçka makinesi içinde fiş inkübe edin. </li><li> inkübasyonu takiben, hafifçe aşırı floresan boya kaldırmak için distile su akan fiş ile durulayın. </li><li> cips wi kurutuninci N2 gaz akışı. </li><li> Bir Epifloresans mikroskop, 40X objektif lens ve CCD kamera kullanarak her çip için görüş 5 rastgele alanlara (321 × 240 mikron 2) mikroskopik görüntüleri floresan atın. </li><li> Böyle ImageJ gibi bir görüntü işleme yazılımı kullanarak her resim için floresan yoğunluğu elde edin. ImageJ, &quot;Süreç&quot; menüsünden &quot;Çıkart Arkaplan&quot; işlevini kullanın ve &quot;Analiz&quot; menüsünden &quot;Set Ölçümleri&quot; penceresinde &quot;Entegre yoğunluğu&quot; seçeneğini seçin. floresan yoğunluğu elde etmek için &quot;Analiz&quot; menüsünden &quot;Ölçüm&quot; yapın. </li><li> Aşağıdaki formüle göre biyofilm çıkarma verimliliğini hesaplama:% 100 x (kontrol fişleri I - muamele edilmiş fiş I) / I hesaplanan floresan yoğunluğu (kontrol fişleri I). </li><li> giderim verimleri ve standart sapmalar ortalama edinin. kullanmakHer iki durum için en az 4 cips. </li></ol>

<ol><li>Jain, A., Gupta, Y., Agrawal, R., Khare, P., Jain, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+-+A+microbial+life+perspective%3A+A+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Ther.+Drug%22%5BJournal%5D)">Biofilms - A microbial life perspective: A critical review.</a> Crit. Rev. Ther. Drug. 24 (5), 393-443 (2007).</li>
<li>Bott, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofouling+control+with+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22Heat+Transfer+Eng%22%5BJournal%5D)">Biofouling control with ultrasound.</a> Heat Transfer Eng. 21 (3), 43-49 (2000).</li>
<li>Meyer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approaches+to+prevention%2C+removal+and+killing+of+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Biodeterior.+Biodegradation%22%5BJournal%5D)">Approaches to prevention, removal and killing of biofilms.</a> Int. Biodeterior. Biodegradation. 51 (4), 249-253 (2003).</li>
<li>Hong, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+electric+currents+on+bacterial+detachment+and+inactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Effect of electric currents on bacterial detachment and inactivation.</a> Biotechnol. Bioeng. 100 (2), 379-386 (2008).</li>
<li>Nandakumar, K., Obika, H., Utsumi, A., Ooie, T., Yano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+laser+ablation+of+laboratory+developed+biofilms+using+an+Nd%3AYAG+laser+of+532+nm+wavelength%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">In vitro laser ablation of laboratory developed biofilms using an Nd:YAG laser of 532 nm wavelength.</a> Biotechnol. Bioeng. 86 (7), 729-736 (2004).</li>
<li>Gibson, H., Taylor, J. H., Hall, K. E., Holah, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+cleaning+techniques+used+in+the+food+industry+in+terms+of+the+removal+of+bacterial+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of cleaning techniques used in the food industry in terms of the removal of bacterial biofilms.</a> J. Appl. Microbiol. 87 (1), 41-48 (1999).</li>
<li>Kang, M. Y., Jeong, H. W., Kim, J., Lee, J. W., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+biofilms+using+carbon+dioxide+aerosols%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Aerosol+Sci%22%5BJournal%5D)">Removal of biofilms using carbon dioxide aerosols.</a> J. Aerosol Sci. 41 (11), 1044-1051 (2010).</li>
<li>Cha, M., Hong, S., Kang, M. Y., Lee, J. W., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gas-phase+removal+of+biofilms+from+various+surfaces+using+carbon+dioxide+aerosols%5BTitle%5D)+AND+%22Biofouling%22%5BJournal%5D)">Gas-phase removal of biofilms from various surfaces using carbon dioxide aerosols.</a> Biofouling. 28 (7), 681-686 (2012).</li>
<li>Dwidar, M., Hong, S., Cha, M., Jang, J., Mitchell, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+application+of+bacterial+predation+and+carbon+dioxide+aerosols+to+effectively+remove+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Biofouling%22%5BJournal%5D)">Combined application of bacterial predation and carbon dioxide aerosols to effectively remove biofilms.</a> Biofouling. 28 (7), 671-680 (2012).</li>
<li>Cha, M., Hong, S., Lee, S. Y., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+different-age+biofilms+using+carbon+dioxide+aerosols%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioprocess+Eng%22%5BJournal%5D)">Removal of different-age biofilms using carbon dioxide aerosols.</a> Biotechnol. Bioprocess Eng. 19 (3), 503-509 (2014).</li>
<li>Singh, R., Monnappa, A. K., Hong, S., Mitchell, R. J., Jang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Carbon+Dioxide+Aerosols+on+the+Viability+of+Escherichia+coli+during+Biofilm+Dispersal%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Effects of Carbon Dioxide Aerosols on the Viability of Escherichia coli during Biofilm Dispersal.</a> Sci. Rep. 5, 13766(2015).</li>
<li>Sherman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+Dioxide+Snow+Cleaning%5BTitle%5D)+AND+%22Particul.+Sci.Technol%22%5BJournal%5D)">Carbon Dioxide Snow Cleaning.</a> Particul. Sci.Technol. 25 (1), 37-57 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Daha önce CO 2aerosol temizliğinde CO2 gaz basıncı, jet açısı ve katı yüzeye olan mesafe üzerinde optimizasyon çalışmaları yapmıştık7. Önceki çalışmalarımızdan farklı olarak, bu çalışmada aerosole nitrojen tahliyesi dahil edilmemiştir (Şekil 1). Ayrıca en yaygın paslanmaz çeliklerden biri olması ve gıda endüstrisinde yaygın olarak kullanılması nedeniyle bu protokolde 304 paslanmaz çelik kullanılmıştır. Cilalı yüzey, düzgün odak uzaklığı ve azaltılmış ışık saçılımı nedeniy...

Biyofilmler, bakteri hücrelerinin hücre dışı polimerik maddelerin kendi ürettiği matrisler içine gömüldüğü, bir arada tutulduğu ve dış ortamdan korunduğu karmaşık bakteri topluluğu yapılarıdır. Biyofilmler, tıbbi implant malzemeleri ve cihazları, gıda işleme ekipmanları ve ısı eşanjörleri dahil olmak üzere çeşitli yüzeylerde oluşabildikleri için halk sağlığı riski oluşturabilir ve ekonomik kayıplara neden olabilir. Aslında, Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezlerine göre, biyofilmlerin insanlardaki tüm bakteriyel bulaşıcı hastalıkların% 65'i ile ilişkili olduğu bulunmuştur1.
Biyofilmlerin inaktivasyonu için genellikle otoklavlar ve klor gibi dezenfektanlar kullanılmıştır. Bununla birlikte, otoklav kullanımı, ne yüksek sıcaklıktaki buhara dayanabilen ne de otoklava yerleştirilemeyen yüzeyler için sınırlıdır. Dezenfektanlar, kimyasal işleme duyarlı veya toksik oksidasyon ürünleri toplamaya eğilimli yüzeyler için uygun değildir2. Ek olarak, biyofilm sadece inaktive edilmemeli, aynı zamanda yeni hücrelerin yüzeye yapışmasını önlemek için çıkarılmalı, böylece yeni bir biyofilm3 oluşturulmalıdır. Bununla birlikte, viskoz sıvı kesmeye dayalı yöntemler kullanılarak biyofilmlerin çıkarılması zordur, çünkü yüzeye yakın akış hızı neredeyse sıfırdır ve kesme kuvveti genellikle mikron ve mikron altı boyutlu maddelerin yapışma kuvvetlerinin üstesinden gelemez. Ayrıca, biyofilm matrisinin fiziksel ve kimyasal bir bariyer görevi gördüğü bilinmektedir1.
Yüzeylerden biyofilmleri çıkarmak için ultrasonik titreşim1, elektrik akımları4, lazer ışınlaması5 ve yüksek basınçlı su spreyleri6 dahil olmak üzere birçok fiziksel ve mekanik teknik geliştirilmiştir. Her tekniğin kendine özgü artıları ve eksileri vardır. Biyofilm oluşumunu kontrol etmek için ultrasonik titreşim ve elektrik akımı kullanılabilir; Bununla birlikte, sırasıyla belirli bir konfigürasyon ve iletken yüzeyler gerektirirler ve ek kesme gerilimigerektirirler 1, 4. Lazer ışınlaması sınırlı bir alana ve sert yüzeylere uygulanabilir; Bununla birlikte, bazı canlı ve ölü hücreler yüzeyde kalır5. Yüksek basınçlı su spreyleri biyofilmleri etkili bir şekilde giderir; Bununla birlikte, yüksek momentumları yumuşak yüzeylerezarar verebilir 6.
CO2 aerosolleri kullanılarak biyofilm çıkarılması daha önce önerilmiştir. 7-11 gibi kısa bir sürede yüksek kaldırma verimliliği ile umut verici sonuçlar göstermiştir. CO2 aerosolleri, yüksek basınçlı bir CO2 gazının bir nozuldan adyabatik genleşmesiyle üretilir ve bir biyofilm ile kontamine olmuş yüzeylere uygulanır. Bu temizleme tekniği, katı CO2 parçacıklarının momentum transferini ve erimiş CO2 sıvılarının çözücü etkisini ve ardından CO2 gazının12 aerodinamik kesme kuvvetini kullanır. Yüksek basınçlıN2 gaz jetleri ile karşılaştırıldığında, aynı durgunluk basıncındaki CO2 aerosol jetleri, E. coli biyofilmlerininçıkarılmasında çok daha etkilidir 7. Ayrıca, bakterilere iletilen katı CO2'nin momentumu oldukça yüksek olmasına rağmen, katı yüzeye uygulanan toplam aerosol jetinin momentumu, su jetlerininkinden önemli ölçüde daha düşüktür. Bu nedenle, bu CO2 aerosol tekniği kullanılarak hasarsız temizlik mümkündür.
Bu protokolde, Pseudomonas putida biyofilmlerini cilalı paslanmaz çelik bir yüzeyden çıkarmak için nitrojen tasfiyeleri olmadan periyodik CO2 aerosol jetleri kullanıldı. Aslında, nitrojen tahliyeleri, sıcak bir plaka veya kızılötesi lambalarla ısıtma ve kuru kutular kullanma da benimsenmiş olsa da, temizlik sırasında oluşan nem yoğunlaşmasını azaltarak giderme verimliliğini artırmak için birçok CO2 aerosol çalışmasında kullanılmıştır12. Yüzey biyofilm oluşumu ve optimize edilmiş temizleme prosedürleri aşağıda açıklanmıştır. Uzaklaştırma verimliliği, yüzeydeki biyofilmin floresan yoğunluğu ölçülerek değerlendirildi.

<table><tbody><tr><td>304 paslanmaz çelik</td><td>Steelni (Güney Kore)</td><td></td><td>Cilalı ve doğranmış olanlar</td></tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici</td><td>Branson (ABD)</td><td>5510E-DTH</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani (LB)</td><td>Becton, Dickinson and Company (ABD)</td><td>244620</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Becton, Dickinson and Company (ABD)</td><td>214010</td><td>500 g</td></tr><tr><td>6 kuyulu kültür plakası</td><td>SPL Yaşam Bilimleri (Güney Kore)</td><td>32006</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum asetat tamponu</td><td>Sigma-Aldrich (ABD)</td><td>667404</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Çift gaz ünitesi</td><td>Uygulamalı Yüzey Teknolojileri (ABD)</td><td>K6-10DG</td><td>CO2 gaz için bir nozul ve N2 gazı için 8 nozul</td></tr><tr><td>SYTO9</td><td>Termo Fissher Scientific (ABD)</td><td>İnvitrojen</td><td>Eksiyonu: 480 nm Emisyon: 500 nm</td></tr><tr><td>Epifloresan mikroskobu&nbsp;</td><td>Nikon (Japonya)</td><td>Eclipse 80i</td><td></td></tr><tr><td>40X objektif objektif Nikon</td><td> (Japonya)</td><td>Plan Fluor</td><td>NA: 0.75</td></tr><tr><td>CCD kamera&nbsp;</td><td>Photometrics (ABD)</td><td>Cool SNAP HQ2</td><td>Monokrom</td></tr></tbody></table>

biyofilm kaldırma azotla temizleme karbon dioksiti aerosollerle

Biofilm Removal Using Carbon Dioxide Aerosols without Nitrogen Purge

Biyofilmler birçok uygulamada ciddi endişelere neden olabilir. Sadece ekonomik kayıplara neden olmakla kalmaz, aynı zamanda halk sağlığı tehlikesi de oluşturabilirler. Bu nedenle, biyofilmlerin yüzeylerden uzaklaştırılması oldukça arzu edilir. CO2 aerosol temizliği ile ilgili birçok çalışma, temizlik sırasında oluşan nem yoğunlaşmasını azaltarak biyofilm giderme verimliliğini artırmak için nitrojen tahliyeleri kullanmıştır. Bununla birlikte, bu çalışmada, cilalı paslanmaz çelik yüzeylerden Pseudomonas putida biyofilmlerini çıkarmak için nitrojen tahliyeleri olmayan periyodik CO 2 aerosol jetleri kullanılmıştır. CO2 aerosolleri, katı ve gaz halindeki CO2 karışımlarıdır ve yüksek basınçlı CO2 gazı bir nozuldan adyabatik olarak genişletildiğinde üretilir. Bu yüksek hızlı aerosoller, 24 saat boyunca büyütülmüş bir biyofilme uygulandı. Uzaklaştırma etkinliği %90.36 ile %98.29 arasında değişmekte olup, tedavi süresi 16 saniye ile 88 saniye arasında değiştiği için biyofilmin floresan yoğunluğu ölçülerek değerlendirilmiştir. Ayrıca, nitrojen tahliyeleri olan ve olmayan uzaklaştırma verimliliklerini karşılaştırmak için deneyler yaptık; Ölçülen biyofilm giderme etkinlikleri birbirinden anlamlı olarak farklı değildi (t-testi, p > 0.55). Bu nedenle, bu teknik, biyolojik olarak kontamine olmuş çeşitli yüzeyleri bir dakika içinde temizlemek için kullanılabilir.

CO2 aerosoller P çıkarmak için kullanıldı putida SUS304 yüzeyler (Şekil 1) den Biyofilmlererde. yüzeylerin çoğu büyüme 24 saat sonra biyofilm ile kaplanmıştır. Biyofilm çoğu CO 2 aerosoller (Şekil 2) kullanılarak çıkarıldı. Beklendiği gibi, Şekil 3 artmış CO2 aerosol tedavi süresi olarak biyofilm giderme veriminde bir artış gösterir. 88 saniye tedavi süresi için, çıkarma verimi 97.74 ve% ile, sırasıyla, bir nitrojen akı...

Yüzeylerdeki biyofilmler, nitrojen tahliyesi olmadan periyodik bir karbondioksit aerosol jeti kullanılarak etkili ve hızlı bir şekilde çıkarılabilir.

Biyofilm Kaldırma azotla temizleme karbon dioksiti aerosollerle

Biofilms can cause serious concerns in many applications. Not only can they cause economic losses, but they can also present a public health hazard. ...

Bu deneyin genel amacı, azot süpürmesi olmadan karbondioksit aerosolleri kullanılarak biyofilm uzaklaştırmanın etkinliğini değerlendirmektir. Karbondioksit aerosolleri, momentum transferi ve aerosollerin sürfaktan etkisini kullanarak biyofilmleri temizlemek için kullanılabilir. Bu, biyofilmleri kısa sürede temizlemek için etkili ve güvenilir bir yöntemdir ve aynı zamanda bir biyofilm gaz fazı temizleme tekniğidir.Deneye başlamak için, iç kısmı 10 x 10 kare milimetre olan, mekanik olarak kesilmiş 1 milimetre kalınlığında 304 paslanmaz çelik talaşlar kullanın. Ardından, talaşları sırasıyla aseton, metanol ve deiyonize veya DI su içerisinde ultrasonik olarak temizleyin. Talaşları dört saniye boyunca akan DI su ile durulayın, ardından dört saniye boyunca nitrojen gaz akışı kullanarak talaşları kurutun.-80 °C'de saklanan bir Pseudomonas putida KT2440 stok kültürü çıkarın. Dondurulmuş stok çözeltisinin üst tabakası yumuşayana kadar kültürü oda sıcaklığında bir dakika boyunca çözdürün. Bir öze stok çözeltisinin erimiş tabakasına daldırın ve bakterileri %1,5 agar içeren Luria Broth veya LB plakasına ekim yapın.Plakayı 30 °C'de gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, 50 mL'lik konik bir tüpe 10 mL LB ekleyin. Plaktaki tek bir koloniyi seçmek için steril bir öze kullanın ve LB'ye inoküle edin. Besiyerini çalkalamalı bir inkübatörde inkübe edin.Hazırlanan çiplerin her birini cımbızla alın ve her bir çipin yüzeyini sterilize etmek için 70% etanol içinde beş kez, her seferinde 1-2 saniye boyunca daldırın. Ardından, her bir çipi otoklavlanmış deiyonize veya DI su ile durulayın. Son olarak, kalan etanolü uzaklaştırmak için sırasıyla LB içinde durulayın.Çipleri, kuyuk başına 5 ml LB besiyerine iki çip gelecek şekilde altı kuyuklu kültür plaklarına yerleştirin. Ardından, LB besiyerindeki konsantrasyon 8 x 10⁸ hücre/ml seviyesine ulaşana kadar bakteri kültürünü seyreltin. Her bir kuyuğa 50 µL seyreltilmiş bakteri kültürü ile inokülasyon yapın.Ardından, plakaları inkübe edin. Gevşekçe tutunmuş ve planktonik bakterileri uzaklaştırmak için biyofilmle kaplı form çiplerini 10 millimolar amonyum asetat tamponuna beş kez daldırın. Daha sonra, çipleri hava akışının hafif olduğu bir biyogüvenlik kabininde kurutun.Kurutma işleminin hemen ardından, bir çipi yükleme noktasına, karbon dioksit nozülünün jet ekseni boyunca 20 mililitre uzağa yerleştirin. Jet eksenini 40 derecelik bir açıya eğin. Ardından, gaz basınç regülatörlerini kullanarak karbon dioksit ve nitrojen gazının durgunluk basınçlarını ayarlayın.Aerosol jetini çipin orta kısmına uygulayın. Manuel kontrollü bir anahtar kullanarak, karbondioksit için solenoid valfi beş saniye boyunca açın ve ardından üç saniye boyunca periyodik olarak kapatın. Eğer bir nitrojen temizleme işlemi gerekliyse, sürekli nitrojen beslemesi için solenoid valfi açın.Kurulum tamamlandıktan sonra, çipleri azotla temizleme işlemi yapılmış ve yapılmamış karbon dioksit aerosolleri ile işleme tabi tutun ve farklı aerosol uygulama sürelerine sahip çipleri karşılaştırın. İşlem görmemiş çipleri negatif kontrol olarak saklayın. Kontrol ve aerosolle işlenmiş çipler üzerindeki bakteriyel hücreleri boyamak için deiyonize suda bir mikromolar konsantrasyonunda yeşil floresan nükleik asit boyası hazırlayın.Boyama çözeltisini çiplerin bulunduğu kuyucuklara ekleyin ve inkübe edin. İnkübasyonun ardından, fazla floresan boyayı uzaklaştırmak için çipleri akan DI su ile nazikçe durulayın. Ardından, çipleri nitrojen gaz akışı ile kurutun.Bir epifloresan mikroskop kullanarak her bir çip için beş rastgele görüş alanının floresan mikroskobik görüntülerini alın. Son olarak, hesaplamalara geçin. 24 saat boyunca büyütülen Pseudomonas putida biyofilmlerine ait floresan mikroskobik görüntüler; azot temizliği yapılmadan sıfır, 16, 40 ve 88 saniye boyunca karbondioksit aerosolleri ile işleme tabi tutulmuştur.Azot temizliği yapılmayan biyofilmlerin floresan yoğunluklarına dayanarak hesaplanan giderim verimleri, azot temizliği yapılanlara göre daha yüksekti. Bu videoda gördüğünüz üzere, üç aşamalı temizleme tekniği biyofilm tabakasını kısa bir süre içinde etkili bir şekilde temizler. Bu yöntem, biyolojik olarak kontamine olmuş çok çeşitli yüzeylere uygulanabilir.

biofilm-removal-using-carbon-dioxide-aerosols-without-nitrogen-purge

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Biz kimyasal buhar biriktirme, asit oksidasyon ve prob ucu sonikasyon dahil olmak üzere bir dizi teknik kullanarak tek tek grafit nanocups sentezini ele. HAuCl sitrat...

Mantar Tıpa olarak Altın Nanopartiküller ile Azot-katkılı Karbon Nanotube Bardaklar sentezi ve fonksiyonlandırmalar

Burada bu tür bunların kararlılığını ve hidrofobikliğini geliştirmek için metal-organik çerçeveler gibi mikro gözenekli malzemeler üzerinde perfluorobütanlar plazma geliştirilmiş kimyasal buhar biriktirme için işlemler açıklanmaktadır. Ayrıca, numune miligram miktarları atılım test ayrıntılı olarak anlatılmıştır.

Plazma ile Hidrofobik Metal-Organik Altyapıları hazırlanması Amonyak Kaldırma için perfluorobütanlar Kimyasal Buhar Kaplama Geliştirilmiş

Çekirdek giderici enzimler, antibiyotik direnci ve biyofilm oluşumu ile ilişkili virülans faktörlerinin ve genlerin ekspresyonunu önleyerek, direnç oluşma riski olmadan patogenezi hafifletebilen anti-virülan ve anti-bakteriyel seçeneklerdir. Bu çalışmada, bakteriyel biyofilm bozulmasında çekirdek söndürücü enzimlerin etkinliğini gösteren bir yöntem bildirilmiştir.

Engineered Nisabı giderici Lactonases kullanarak Patojen Biyofilmler Anti-öldürücü bozulması

Bu prosedür bioaerogels oluşturulması için (SiO2), sol-jel, işlemi, bu jelleri silis sitokrom c (cyt. C) kapsül haline getirilmesi ve hızlı bir şekilde bir gaz-fazlı reaksiyon ile nitrik oksit (NO) tanımak için bu bioaerogels kullanımı açıklamaktadır. protokol Bu tip biyosensörlerde veya diğer biyoanalitik cihazlar gelecekteki gelişimi yardımcı olabilir.

Sitokrom Kapsüllenen<em&gt; C</em&gt; Metal Nanopartiküller olmadan Silika Aerojel Nanoarchitectures Gaz faz biyoaktivitesinin İstinat ederken

Karbondioksit (CO2) ile indüklenen jelleşme ile biyopolimer bazlı aerojellerin üretimi için yeni bir yol gösterilmiştir. Teknik, biyopolimer hidrojellerin üretimi için basınçlı karbondioksit (5 MPa) ve jelleri aerojellere dönüştürmek için süperkritik CO2 (12 MPa) kullanır. CO2 dışında ihtiyaç duyulan tek çözücü su ve etanoldür.

Yeşil Solventler kullanma Biyopolimer Aerogels Hazırlanması

Bu çalışma, biyofilm inhibitörlerini ve bunların Bacillus subtilis çok hücrelilik üzerindeki etkilerini incelemek için tekrarlanabilir metodolojilerin geliştirilmesini sunmaktadır.

Araştırma yöntemleri<em&gt; B. subtilis</emKüçük Molekül Biyofilm İnhibitörleri Karakterizasyonu için Bir Model Olarak&gt; Biyofilmler

Bu makale, CO 2 , N 2 ve CH 4 gibi kararlı moleküllerin dönüştürülmesi / etkinleştirilmesi için etkin olmayan denge kimyası oluşturmak için kullanılan akıcı bir mikrodalga reaktörü anlatıyor. Burada açıklanan prosedürün amacı, yerinde gaz sıcaklığı ve gaz dönüşümünü ölçmektir.

Verimli Yüksek Sıcaklık Kimyası İçin Denge Dışı Mikrodalga Plazma

Bu makalede, yüksek basınç koşullarına uygun iki mikroakışkan üretim tekniğinin karşılaştırmalı bir çalışması olan fotolitografi/ıslak gravür/termal yapıştırma ve Seçici Lazer kaynaklı Gravür (SLE) gibi karşılaştırmalı bir çalışma anlatılmaktadır. Bu teknikler, rezervuar koşullarında taşıyıcı anne ve kırık sistemlerde sıvı akışının doğrudan gözlemi için platformları oluşturmaktadır.

Kırık Konvansiyonel Olmayan Rezervuarlarda Mikroölçekli Süperkritik CO2 Köpük Taşımanın Yüksek Basınçlı Testlerinde Mikroakışkan Üretim Teknikleri

Bu yazıda, iki yüzey tipinde üç yaygın biyofilm toplama ve ayrıştırma tekniğini gösteren yöntemler, bir hasat yönteminin sağlamlık testi ve tekrarlanabilirliği artırmak için hasat ve ayrıştırma tekniklerini seçerken ve optimize ederken göz önünde bulundurulması gereken minimum bilgiler açıklanmaktadır.

Hasat ve Ayrıştırma: Biyofilm Yöntemleri Araştırmalarında Gözden Kaçan Bir Adım

Bu protokol, süt endüstrisinde biyofilmlerin eradikasyonunda organik peroksiasitlerin etkinliğini değerlendirmek için statik ve dinamik yöntemleri birleştiren bir yaklaşımı açıklamaktadır. Bu yaklaşım, biyofilmleri kontrol etmek için yeni biyolojik veya kimyasal formülasyonların etkinliğini test etmek için de kullanılabilir.

Organik Peroksiasitlerin Süt Biyofilmlerinin Eradikasyonunda Etkinliğinin Statik ve Dinamik Yöntemleri Birleştiren Bir Yaklaşım Kullanılarak Değerlendirilmesi

Bu protokol, akıllı hastane bağlantısı sağlayan yeni kuru aerozol hidrojen peroksit (aHP) sisleme dezenfeksiyon teknolojisinin kullanım yöntemlerini açıklar; veri platformları içinde entegre edilerek ekipman kullanımı, aHP dozajlarının doğrulanması, oda kapsamı, dezenfeksiyon süreleri ve sağlık hizmetleriyle ilişkili enfeksiyonların (HAI) azaltılması için konumların tarihsel verilerini sağlar.

Yeni bir aerozol hidrojen peroksit mikrodamla dağıtım teknolojisi kullanılarak otomatik hastane odası dezenfeksiyonu

Öğrenin, karbondioksit aerosolleriyle biyofilm kaldırma yöntemini. Momentum transferi ve yüzey aktif madde etkisiyle hızlı ve güvenilir temizlik sağlar.

Biyofilm Kaldırma azotla temizleme karbon dioksiti aerosollerle

Daha fazla video keşfet