Name: Hücre Davranış Nanotopographical Modülasyon için nano Substratları kullanma Dikiş Tekniği Genişleyen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Keşfedin dikiş tekniği ile nano desenli substrat üretimini ve hücre davranışlarının nanotopografik modülasyonunu. Bu maliyet etkin yöntem, hücre fenotipi ve fokal adezyon proteinleri üzerine çalışmaları kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen NSF CBET 1227766, NSF CBET 1511759 ve Byars-Tarnay Endowment tarafından desteklenmiştir. Kısmen NSF EPS-1003907 tarafından desteklenen West Virginia Üniversitesi Ortak Araştırma Tesislerinin kullanımını minnetle kabul ediyoruz.

Bir EBL Kalıp PDMS Kalıpları 1. çoğaltma <ol><li> 29 Silikon kalıp fabricate <ol><li> Spin kat 200 ul polimetil metakrilat (PMMA), 1 dakika boyunca 2500 rpm&#39;de 1 x 1 cm, silikon (Si) alt tabaka üzerinde çözelti ince bir film meydana getirmek üzere. </li><li> 2 dakika boyunca 180 ° C&#39;de Si alt-tabaka üzerinde PMMA filmi fırında. </li><li> 300 MCU / cm2 bir alan dozunda odaklanmış bir elektron ışını ile PMMA film tasarlanmıştır nanopattern yaz. </li><li> 80 saniye geliştirici PMMA nanopattern geliştirin. </li><li> 10 kV, 0.5 mA emisyon akımı ve 0.5 a / sn&#39;lik bir depozisyon oranının bir çıkış voltajı bir E-ışın demeti buharlaştırıcı kullanılarak kalınlığı 50 nm bir nikel tabaka ile PMMA nanopattern bırakın. </li><li> 20 dakika boyunca, 80 ° C&#39;de 20 mi çıkarıcı PMMA parçası kaldırın. </li><li> Reaktif iyon aşındırma (RIE) Si substrat içine nanopattern istenen derinlik Si kalıp almak için. NOT: tetraklorohidreks Gaz karışımıafluoromethane (KF 4), 150 W, 400 W ve RIE bir güç indüktif olarak birleştirilmiş plasma (ICP) güçte / oksijen (O2) (% 90 /% 10), 560 nm&#39;lik bir derinliğe kadar Si alt-tabakanın etch için kullanılır. </li></ol></li><li> Silanize Si kalıp <ol><li> 100 mm PS Petri kabı bir cam lamel Si kalıp koyun ve bir çeker ocak içinde bulunan cam bir kurutucuda aktarın. </li><li> lamel 10 ul 1H, 1H, 2H, 2H-Perfluorooctyltrichlorosilane bırakın. Dikkat: 1H, 1H, 2H, 2H-Perfluorooctyltrichlorosilane cilt korozyon ve ciddi göz hasarına neden olabilir. Uygun kişisel koruyucu ekipman (KKE) giyin. </li><li> Kısmen Petri kabı örtün. </li><li> Si kalıp silanizasyondan tamamlamak için bir duman başlığı içinde, 5 saat boyunca vakum altında desikatörde tutun. </li></ol></li><li> PDMS ön-polimerin hazırlanması <ol><li> tek kullanımlık bir tartım kabı 10 gr PDMS reçine ve 1.05 g sertleştirme ajanı tartılır. </li><li> Bir plastik kaşık kullanarak iyice PDMS prepolimeri karıştırın. </li><li> daha berrak bir karışım görülmektedir kadar yaklaşık 20 dakika boyunca vakum altında plastik bir desikatör içinde PDMS prepolimer gaz çıkışına. </li></ol></li><li> PDMS kalıpları çoğaltmak <ol><li> 60 mm Petri kabındaki Silanlanmış Si kalıp koyun. </li><li> Petri kabındaki Si kalıp üzerine PDMS prepolimeri dökün. </li><li> tüm kabarcıklar kaybolur dek yaklaşık 10 dakika süreyle bir plastik desikatörde ve gazını Petri kabı yerleştirin. </li><li> Bir ocak petri aktarın ve 4 saat 70 ° C&#39;de PDMS prepolimeri tedavi. </li><li> dikkatle cımbız kullanarak Si kalıp PDMS kalıp soyulabilir. Not: PDMS kalıplar bir haftaya kadar çevre şartlarında muhafaza edilebilir. Kür sonra, PDMS kalıplar 30 bazı çapraz bağlanmamış PDMS reçine molekülleri ve artık sertleştirme ajanı vardır. düşük molekül ağırlıklı moleküller yavaş yavaş nüfuz ve zaman içinde yüzeyde birikebilir. Bu PDMS yüzeyi 31 topografik ve mekanik özelliklerini etkiler. difFüzyon bir hafta içinde çok önemli değildir. </li></ol></li></ol> Büyük Bir, Tek Kalıp içine PDMS Kalıpları 2. Dikiş <ol><li> Adım 1.4 tekrarlayarak birden PDMS kalıplar hazırlayın. NOT: PDMS karışımın aynı miktarda aynı kalınlıkta PDMS kalıpları elde etmek için her zaman tartın. </li><li> Böyle bir optik mikroskop altında nanogratings olarak anizotropik PDMS nanopatterns yönünü belirlemek ve bir marker kalem ile PDMS kalıp ters işaretleyin. NOT: Bu nanopillars izotrop nanotopography yönünü işaretlemek için gerekli değildir. </li><li> Davlumbaz etanol ile Si substratı temizlemek ve basınçlı hava ile kurutun. </li><li> Bir bıçak ile her PDMS kalıp desensiz alanları keserek. NOT: dikişli kalıp çevresine alınacaktır PDMS kalıplar için, başkaları ile temas halinde sadece desensiz alanlar kapalı kesilmiş olmalıdır. </li><li> üzerinde nanopattern yüzü aşağı ile kesilmiş PDMS kalıp yerleştirinAyna Si substrat yan ve daha sonra yakın ama çevredeki kalıp (ler) temas etmeyen diğer kalıpları hizalayın. </li><li> PDMS yapışkan tabakanın hazırlanması <ol><li> 0.5 mm kalınlıkta bir tabaka oluşturmak için temiz bir cam slayt (2.5 cm x 7.5 cm), 1 g PDMS prepolimer (1.05: 10: PDMS reçine ve sertleştirici oranı) karışımının gazı alınır Dökme. </li><li> 3-5 dakika boyunca bir sıcak plaka üzerinde 100 ° C&#39;de PDMS tabakanın fırında. katmanı dokunun ve katman kısmen değil tamamen tedavi olduğundan emin olmak için bir iğne kullanın. NOT: Kısmen tedavi PDMS sertleşmemiş PDMS prepolimer gibi akamaz, ancak tedavi PDMS ile karşılaştırıldığında yapışkan. </li></ol></li><li> hizalanmış PDMS kalıp ters PDMS katmanı yerleştirin ve hızlı bir şekilde bu derleme ters ve ocak transfer. </li><li> PDMS yapışkan tabaka ve PDMS kalıpların ters arasında iyi bir temas sağlamak, ve 1 saat 100 ° C&#39;de PDMS yapışkan tabakanın tedavi tertibatının üst kısmında bir metal bloğu kullanarak sıkıştırma kuvveti (5 kPa) uygulanır. &lt;br /&gt; Not: dikkatlice montaj eğimini önlemek için, metal bloğun konumunu ayarlamak. </li><li> Metal bloğunu çıkarın ve Si alt tabakadan tek dikişli PDMS kalıp soyulabilir. </li></ol> PS Yüzeyler üzerinde master Kalıp 3. Nesil Not: cam slayt üzerinde immobilize dikişli PDMS kalıp PS plaka ya da çalışma nano substratlar üretilebilir olan PS ince film, bir ana kalıp oluşturmak için de kullanılabilir. <ol><li> PS plaka üzerinde bir ana kalıp oluşturmak <ol><li> PS tabak hazırlayın <ol><li> İki gün süre ile, 80 ° C&#39;de vakumlu bir fırında PS pelet kurutulur. </li><li> 230 ° C&#39;de, bir pres makinesi önceden ısıtın. </li><li> alttan üste doğru sırayla bir alüminyum plaka, bir politetrafloroetilen (PTFE) levha ve alüminyum ayırıcı birleştirin. </li><li> 3 cm (L) x 3 cm (W) x 0.3 cm (H) bir kare açılışı ile alüminyum ayırıcı yük 3.5 g PS pelet. NOT: boşluk yaklaşık 0&#39;dır.1 PDMS kalıp daha kalın cm ve bu yüzden son nano PS alt-tabaka, yaklaşık 0.1 cm kalınlığındadır. </li><li> Alüminyum ayırıcı başka PTFE levha ve sonra başka bir alüminyum plaka koyun. </li><li> pres makinesinde aksamını yerleştirin. </li><li> 30 dakika boyunca 230 ° C &#39;de PS pelet ısıtın. </li><li> 5 dakika montaj üzerinde bir sıkıştırma basıncı (0,1 Mpa) uygulayın. </li><li> basıncı bırakın ve daha sonra montaj 0.5 MPa basınç basınç yeniden uygulayın. </li><li> 1.5 MPa istenen basınç kadar 0.5 MPa&#39;lık bir basınç artışı ile tekrarlayın Adım 3.1.1.9 ulaşılır. </li><li> pres makinesinin ısıtıcı kapatın ve 1.5 MPa&#39;lık bir sabit basınçta 70 ° C&#39;nin altında soğumasını. </li><li> takımını çıkarın ve PS levha yeniden nem girmesini önlemek için 80 ° C&#39;de vakumlu bir fırında PS plaka saklayın. </li></ol></li><li> PS levha haline Nanoimprint dikişli PDMS kalıp <ol><li> bir alüminyum aralama PS plaka koyun3-inç Si gofret ayarlanır. Not: ara parçasının iç boyutları PS levha ile aynıdır, böylece PS levha doğru aralama uyar. </li><li> 30 dakika boyunca 250 ° C&#39;de bir sıcak plaka üzerinde PS levha ısıtın. </li><li> Erimiş PS plaka üzerinde nanopatterns yüzü aşağı dikişli PDMS kalıp koyun. Not: PDMS kalıp bir tarafı birinci PS levha yüzeyi ile temas halinde yerleştirilir ve başka bir yan arayüzü, hava kabarcıklarının oluşumunu önlemek için PS yüzey ile temas halinde yavaş yavaş indirilir. Dikkat: ocak yüzeyi sıcak. nanoimprinting işlemi sırasında thermogloves kullanın. </li><li> dikişli PDMS kalıp cam slayt bir alüminyum plaka koyun. </li><li> Alüminyum levha metal bloklar kullanılarak bir sıkıştırma basıncı (12.5 kPa) uygulayın ve 3 dakika boyunca bekleyin. NOT: alüminyum levha eğik olmadığından emin olun. </li><li> Kaldırın ve alüminyum plaka metal bloğunu değiştirin ve ben25 kPa basınç basınç arttırın. </li><li> basınçla Adımı tekrarlayın 3.1.2.6 kPa 50 arttı. Not: Bu adım PDMS kalıp ve PS levha arasında sıkışan havayı kaldırmaktır. </li><li> 15 dakika boyunca 50 kPa tutarlı basınç altında 240 ile 250 ° C arasında sıcak plaka sıcaklığı muhafaza edin. </li><li> ocak gözünü kapatın ve tüm kurulum soğumasını. NOT: Bir fan soğutma sürecini hızlandırmak için kullanılabilir. </li><li> PS levha dikişli PDMS kalıp kalkmasına dikkatle sıcaklığı 50 ° C&#39;nin altında sonra metal blokları kaldırmak ve. NOT: PS alt-tabaka ters nanopatterns sahiptir ve çalışma PDMS tabakaları üretmek için bir mastar kalıp olarak kullanılabilir. </li></ol></li></ol></li><li> PS ince film üzerinde bir ana kalıp oluşturmak <ol><li> PS ince film hazırlayın <ol><li> Bir çeker ocak içinde 10 mi toluen içinde 1 g PS çözülür. Dikkat: Toluen Cilt İrritatio neden olabilirn ve ciddi göz hasarı ve uzun süre veya tekrarlanan maruz kalmalar organlara zarar verebilir. Uygun PPE giyin. </li><li> 1 dakika için 2500 rpm&#39;de bir gofret 2-in spin-kaplama 1 mi PS solüsyon 1 mikron kalınlığında PS ince bir film meydana getirmek üzere. </li><li> 3 gün boyunca bir davlumbaz Si gofret PS filmi ayarlayarak film toluen buharlaşır. </li><li> gece boyunca 80 ° C&#39;de bir vakum fırın içinde PS ince film tavlanması. </li></ol></li><li> Nanoimprint PS ince film üzerinde PDMS kalıp <ol><li> bir ocak yer almaktadır PS ince film üzerinde nanotopography yüzü aşağı dikişli PDMS kalıp koyun. </li><li> PDMS kalıp cam tarafındaki metal blokları kullanarak PDMS kalıp 12 kPa basınç basınç uygulayın. </li><li> 180 ° C sıcak plaka sıcaklığı artırmak ve 15 dakika için muhafaza. Dikkat: Erimiş PS filmi yağlayıcı olarak işlev görebilir. kaymasını metal blokları önlemek için dikkat edin. </li><li> ocak gözünü kapatınve tüm kurulum soğumasını. NOT: Bir fan soğutma sürecini hızlandırmak için kullanılabilir. </li><li> PS filmden dikişli PDMS kalıp kalkmasına dikkatle sıcaklığı 50 ° C&#39;nin altına düştüğünde sonra metal blokları kaldırmak ve. NOT: nano PS filmi çalışma PDMS yüzeyler üretmek için bir ana kalıp olarak görev yapacak. </li></ol></li></ol></li></ol> Hücre Davranış 4. Nanotopographical modülasyonu Not: temsilci nanotopographies hücre yayma nanotopographical modülasyonu göstermek için İnsan epitel hücreleri kültür. <ol><li> Uygulamaya bağlı olarak Adım 3.1 veya 3.2 birinden oluşturulan master kalıp PDMS çalışma substratları Cast. </li><li> Içi boş bir çelik kemer zımbası kullanılarak, belirli bir çok-çukurlu plaka (örneğin, 24-çukurlu plaka) konfigürasyonunu uyacak diskler içine nano PDMS substratlar kesti. </li><li> o kuyuların içine PDMS diskleri yerleştirmek için cımbız kullanınFA çok-yuvalı plaka. </li><li> % 70 etanol ve UV ışınlarına maruz kalma, 30 dakika boyunca, her kullanarak PDMS substratlar sterilize edin. </li><li> 1x steril fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile üç kez PDMS substratlar yıkayın. </li><li> Kat, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca hücre dışı matris proteini (yani, 20 ug / ml fibronektin) PDMS alt-tabakalar. </li><li> 5 dakika boyunca PDMS alt tabakaları steril PBS ile üç kez, her durulama. </li><li> % 10 cenin sığır serumu ile Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı içinde, insan akciğer kanseri hücre A549 askıya alma ve hemasitometre kullanarak hücreleri sayın. </li><li> Bir gün için% 5 CO2 içeren nemli bir atmosferde 37 ° C &#39;de PDMS substratlar ve kültür bunları 2,000 hücre / cm2 bir tohumlama yoğunluğunda hücreler plaka. </li><li> PBS ile üç kez hücreleri yıkayın. </li><li> 4 saat süreyle PBS içinde% 4 paraformaldehid ve% 2 gluteraldehit oluşan bir karışım içinde hücreleri saptamak ve bir CO2 kritik po kullanarak hücrelerin suyunuElektronik mikroskobik gözlem 29 tarama için int kurutma makinası. Dikkat: Paraformaldehyde ve glutaraldehit Ciddi derecede deri yanıkları ve göz hasarına neden olabilir. Bir kimyasal kaput İşlet ve uygun KKE giyerler. </li></ol>

<ol><li>Silva, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+differentiation+of+neural+progenitor+cells+by+high-epitope+density+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Selective differentiation of neural progenitor cells by high-epitope density nanofibers.</a> Science. 303 (5662), 1352-1355 (2004).</li>
<li>Yim, E. K. F., Pang, S. W., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+Nanostructures+Inducing+Differentiation+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Neuronal+Lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Synthetic Nanostructures Inducing Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Neuronal Lineage.</a> Exp. Cell Res. 313 (9), 1820-1829 (2007).</li>
<li>Dalby, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Control+of+Human+Mesenchymal+Cell+Differentiation+Using+Nanoscale+Symmetry+and+Disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">The Control of Human Mesenchymal Cell Differentiation Using Nanoscale Symmetry and Disorder.</a> Nat. Mater. 6 (12), 997-1003 (2007).</li>
<li>Oh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+Cell+Fate+Dictated+Solely+by+Altered+Nanotube+Dimension%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Stem Cell Fate Dictated Solely by Altered Nanotube Dimension.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (7), 2130-2135 (2009).</li>
<li>Brunetti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurons+Sense+Nanoscale+Roughness+with+Nanometer+Sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Neurons Sense Nanoscale Roughness with Nanometer Sensitivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107 (14), 6264-6269 (2010).</li>
<li>McMurray, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+Surfaces+for+the+Long-term+Maintenance+of+Mesenchymal+Stem+Cell+Phenotype+and+Multipotency%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">Nanoscale Surfaces for the Long-term Maintenance of Mesenchymal Stem Cell Phenotype and Multipotency.</a> Nat. Mater. 10 (8), 637-644 (2011).</li>
<li>Yim, E. K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanopattern-induced+changes+in+morphology+and+motility+of+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Nanopattern-induced changes in morphology and motility of smooth muscle cells.</a> Biomaterials. 26 (26), 5405-5413 (2005).</li>
<li>Gerecht, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Actin+Disrupting+Agents+on+Contact+Guidance+of+Human+Embryonic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The Effect of Actin Disrupting Agents on Contact Guidance of Human Embryonic Stem Cells.</a> Biomaterials. 28 (28), 4068-4077 (2007).</li>
<li>Bettinger, C. J., Zhang, Z., Gerecht, S., Borenstein, J. T., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+in+vitro+Capillary+Tube+Formation+by+Substrate+Nanotopography%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Enhancement of in vitro Capillary Tube Formation by Substrate Nanotopography.</a> Adv. Mater. 20 (1), 99-103 (2008).</li>
<li>Thakar, R. G., Ho, F., Huang, N. F., Liepmann, D., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+vascular+smooth+muscle+cells+by+micropatterning%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Regulation of vascular smooth muscle cells by micropatterning.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 307 (4), 883-890 (2003).</li>
<li>Lee, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+selective+neurons+on+nanoscale+ridge%2Fgroove+pattern+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Direct differentiation of human embryonic stem cells into selective neurons on nanoscale ridge/groove pattern arrays.</a> Biomaterials. 31 (15), 4360-4366 (2010).</li>
<li>Moe, A. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+with+micro-+and+nano-topographies+enables+identification+of+the+optimal+topography+for+directing+the+differentiation+of+primary+murine+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Microarray with micro- and nano-topographies enables identification of the optimal topography for directing the differentiation of primary murine neural progenitor cells.</a> Small. 8 (19), 3050-3061 (2012).</li>
<li>Dang, J. M., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenic+induction+of+aligned+mesenchymal+stem+cell+sheets+by+culture+on+thermally+responsive+electrospun+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Myogenic induction of aligned mesenchymal stem cell sheets by culture on thermally responsive electrospun nanofibers.</a> Adv. Mater. 19 (19), 2775-2779 (2007).</li>
<li>Dasgupta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+co-reduction+approach+to+vary+size+of+silver+nanoparticle%3A+its+microbial+and+cellular+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Pollut.+Res%22%5BJournal%5D)">Thermal co-reduction approach to vary size of silver nanoparticle: its microbial and cellular toxicology.</a> Environ. Sci. Pollut. Res. 23 (5), 4149-4163 (2016).</li>
<li>Ranjan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microwave-irradiation-assisted+hybrid+chemical+approach+for+titanium+dioxide+nanoparticle+synthesis%3A+microbial+and+cytotoxicological+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Pollut.+Res%22%5BJournal%5D)">Microwave-irradiation-assisted hybrid chemical approach for titanium dioxide nanoparticle synthesis: microbial and cytotoxicological evaluation.</a> Environ. Sci. Pollut. Res. 23 (12), 12287-12302 (2016).</li>
<li>Deckman, H. W., Dunsmuir, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+lithography%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Lett%22%5BJournal%5D)">Natural lithography.</a> Appl. Phys. Lett. 41 (4), 377-379 (1982).</li>
<li>Dalby, M. J., Riehle, M. O., Johnstone, H., Affrossman, S., Curtis, A. S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Reaction+of+Endothelial+Cells+to+Polymer+Demixed+Nanotopography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">In vitro Reaction of Endothelial Cells to Polymer Demixed Nanotopography.</a> Biomaterials. 23 (14), 2945-2954 (2002).</li>
<li>Gates, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+to+nanofabrication%3A+molding%2C+printing%2C+and+other+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">New approaches to nanofabrication: molding, printing, and other techniques.</a> Chem. Rev. 105 (4), 1171-1196 (2005).</li>
<li>Yin, Y., Lu, Y., Gates, B., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Template-Assisted+Self-Assembly%3A+A+Practical+Route+to+Complex+Aggregates+of+Monodispersed+Colloids+with+Well-Defined+Sizes%2C+Shapes%2C+and+Structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Template-Assisted Self-Assembly: A Practical Route to Complex Aggregates of Monodispersed Colloids with Well-Defined Sizes, Shapes, and Structures.</a> J. Am. Chem. Soc. 123 (36), 8718-8729 (2001).</li>
<li>Tada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+Self-Assembly+of+Diblock+Copolymer+Thin+Films+on+Chemically-Patterned+Substrates+for+Defect-Free+Nano-Patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Directed Self-Assembly of Diblock Copolymer Thin Films on Chemically-Patterned Substrates for Defect-Free Nano-Patterning.</a> Macromolecules. 41 (23), 9267-9276 (2008).</li>
<li>Cheng, J. Y., Rettner, C. T., Sanders, D. P., Kim, H. C., Hinsberg, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dense+self-assembly+on+sparse+chemical+patterns%3A+rectifying+and+multiplying+lithographic+patterns+using+block+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Dense self-assembly on sparse chemical patterns: rectifying and multiplying lithographic patterns using block copolymers.</a> Adv. Mater. 20 (16), 3155-3158 (2008).</li>
<li>Colburn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step+and+flash+imprint+lithography%3A+a+new+approach+to+high-resolution+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+SPIE%22%5BJournal%5D)">Step and flash imprint lithography: a new approach to high-resolution patterning.</a> Proc. SPIE. 3676 ((Pt. 1, Emerging Lithographic Technologies III)), 379-389 (1999).</li>
<li>Ahn, S. H., Guo, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-speed+roll-to-roll+nanoimprint+lithography+on+flexible+plastic+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">High-speed roll-to-roll nanoimprint lithography on flexible plastic substrates.</a> Adv. Mater. 20 (11), 2044-2049 (2008).</li>
<li>Vieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+beam+lithography%3A+resolution+limits+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Surf.+Sci%22%5BJournal%5D)">Electron beam lithography: resolution limits and applications.</a> Appl. Surf. Sci. 164, 111-117 (2000).</li>
<li>Nagase, T., Gamo, K., Kubota, T., Mashiko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+fabrication+of+nano-gap+electrodes+by+focused+ion+beam+etching%5BTitle%5D)+AND+%22Thin+Solid+Films%22%5BJournal%5D)">Direct fabrication of nano-gap electrodes by focused ion beam etching.</a> Thin Solid Films. 499 (1-2), 279-284 (2006).</li>
<li>Juodkazis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+lithography+of+nanorods+in+SU-8+photoresist%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Two-photon lithography of nanorods in SU-8 photoresist.</a> Nanotechnology. 16 (6), 846(2005).</li>
<li>Yang, Y., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+surfacing+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip.+Rev.+Nanomed.+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Nanoscale surfacing for regenerative medicine.</a> Wiley Interdiscip. Rev. Nanomed. Nanobiotechnol. 2 (5), 478-495 (2010).</li>
<li>Yang, Y., Kulangara, K., Sia, J., Wang, L., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+a+Microfluidic+Cell+Culture+Platform+Embedded+with+Nanoscale+Features%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Engineering of a Microfluidic Cell Culture Platform Embedded with Nanoscale Features.</a> Lab Chip. 11 (9), 1638-1646 (2011).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotopographical+modulation+of+cell+function+through+nuclear+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Acs+Appl.+Mater.+Inter%22%5BJournal%5D)">Nanotopographical modulation of cell function through nuclear deformation.</a> Acs Appl. Mater. Inter. 8 (8), 5082-5092 (2016).</li>
<li>Lee, J. N., Park, C., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solvent+Compatibility+of+Poly%28dimethylsiloxane%29-Based+Microfluidic+Devices%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Solvent Compatibility of Poly(dimethylsiloxane)-Based Microfluidic Devices.</a> Anal. Chem. 75 (23), 6544-6554 (2003).</li>
<li>Yang, Y., Kulangara, K., Lam, R. T. S., Dharmawan, R., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Topographical+and+Mechanical+Property+Alterations+Induced+by+Oxygen+Plasma+Modification+on+Stem+Cell+Behavior%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Effects of Topographical and Mechanical Property Alterations Induced by Oxygen Plasma Modification on Stem Cell Behavior.</a> ACS Nano. 6 (10), 8591-8598 (2012).</li>
<li>Hua, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+Imprint+Lithography+with+Molecular-Scale+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Polymer Imprint Lithography with Molecular-Scale Resolution.</a> Nano Lett. 4 (12), 2467-2471 (2004).</li>
<li>Delamarche, E., Schmid, H., Michel, B., Biebuyck, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+molded+polydimethylsiloxane+microstructures%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Stability of molded polydimethylsiloxane microstructures.</a> Adv. Mater. 9 (9), 741-746 (1997).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz nano substratın geniş bir alana oluşturmak için basit, uygun fiyatlı, çok yönlü yöntem mevcut. sadakatle yüksek tanımlı nanopatterns genişletmek için, büyük ilgi birçok kritik adımlar dikkat edilmelidir. İlki birden PDMS kalıp Döşeme etmektir. PDMS kalıp desensiz alanlar kaldırılması gerekir. Ayrıca, kalıp yan duvarları kalıplar arasındaki boşlukları en aza indirmek için mümkün olduğunca dikey olarak mükemmel kesilmelidir. Toplu olarak, son dikiş kalıp içinde desensiz alanlarında kısmı azaltılabilir. İkinci olarak, ...

Son zamanlarda elde edilen bir dizi bulgu, substrat nanotopografisinin, hücre yapışması, yayılması ve göçünden proliferasyon ve farklılaşmaya kadar hücre davranışı üzerinde belirgin bir etkiye sahip olduğunu ortaya koymaktadır1-6. Örneğin, derin nanogratingler üzerinde kültürlenen hücrelerde daha küçük bir hücre boyutu ve daha düşük proliferasyon hızı gözlenmiştir, hatta hücre hizalaması, uzaması ve göçü artmış olmasına rağmen apoptoza yol açmıştır, düz kontrollere kıyasla2,7-10. Ayrıca, nanotopografinin kök hücrelerin nöron2,11,12, kas13 ve kemik3,4 gibi belirli soylara farklılaşmasını kolaylaştırdığı gösterilmiştir. Ek olarak, mühendislik nanomalzemelerinin14,15 toksisitesi ile ilgili artan endişeler nedeniyle, nanomalzemelerin doğru risk değerlendirmesi için nanotopografinin fizyolojik olarak ilgili in vitro modellere dahil edilmesine ihtiyaç vardır. Biyokimyasal ve moleküler biyoloji analizlerini yerine getirmek için, nanodesenli substratın geniş bir alanında büyütülecek kadar hücreye ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, geleneksel nanofabrikasyon tekniklerinin, geniş bir alanda yüksek düzeyde tanımlanmış nanodesenler oluşturmak için sınırlamaları vardır.
Kolloid litografi16 ve polimer karıştırma17 dahil olmak üzere kendi kendine montaj, düşük maliyetlerle kolayca geniş alanlı nanoyapılar üretebilir. Kendi kendine montaj, kolloidal parçacıklar ve makromoleküller gibi bir araya gelen elemanlar arasındaki etkileşimlere ve bu elementler ile substrat arasındaki olası etkileşimlere dayandığından, hassas uzamsal konumlandırma ve keyfi şekillere sahip nanoyapılar üretmek için tek başına bir yöntem olamaz18. Eşlik eden yüksek kusur yoğunluğu da bir dezavantajdır. Nanodesenlerin hassas uzamsal kontrolü, montaj elemanlarının19-21 aşağıdan yukarıya montajına rehberlik etmek için topografik ve/veya kimyasal şablonu sağlamak için yukarıdan aşağıya litografik yaklaşımları kullanan şablonlu kendi kendine montaj kullanılarak elde edilebilir. Adım ve flaş litografi22 ve rulodan ruloya nanoimprinting litografi23 gibi alternatif nanofabrikasyon teknikleri geliştirilmiştir, ancak karmaşık süreçleri veya özel ekipman gereksinimleri nedeniyle sınırlı kullanıma sahiptir. Bununla birlikte, şablonlu veya alternatif nanofabrikasyon teknikleri için tanımlanmış nano ölçekli desenlere sahip bir şablon veya ana kalıp gereklidir. 
Bu tür şablonlar ve ana kalıplar geleneksel olarak odaklanmış elektron, iyon veya foton ışını litografisi kullanılarak oluşturulur. Örneğin, elektron demeti litografisi (EBL)24 ve odaklanmış iyon demeti litografisi25, 5 nm'nin altında bir çözünürlükle tanımlanmış desenler oluşturabilir. İki fotonlu litografi, 30 nm26 kadar küçük bir özellik boyutu göstermiştir. Odaklanmış ışın litografi teknikleri, iyi tanımlanmış nano ölçekli yapıların oluşturulmasını mümkün kılsa da, sermaye yatırımı ve zaman alıcı, maliyetli süreç, akademik araştırmalarda yaygın kullanımlarını kısıtlamaktadır27. Bu nedenle, yüksek sadakate sahip geniş bir nanodesenli yüzey alanı üretmek için mümkün kılan ancak uygun fiyatlı tekniklerin geliştirilmesi oldukça arzu edilir.
Küçük, iyi tanımlanmış bir kalıptan geniş bir nanodesenli yüzey alanı oluşturmak için basit, uygun maliyetli bir dikiş tekniği bildirdik28. Bu protokol, EBL ile yazılmış bir model kullanılarak poli (dimetilsiloksan) (PDMS) kalıpların çoğaltılmasından, birden fazla PDMS kalıbının tek bir büyük kalıba birleştirilmesine, polistiren (PS) substratlar gibi polimerik üzerinde bir ana kalıp oluşturulmasına, çalışma substratlarının üretimine kadar adım adım prosedür sağlar. Genişletilmiş nanodesenli substratlarla, hücre yayılmasının nanotopografik modülasyonunu gösterdik.

<table><tbody><tr><td>JEOL alan emisyonu SEM</td><td>JEOL</td><td>JSM-7600F</td><td>EBL</td></tr><tr><td>E-kirişli evaporatör</td><td>Kurt J. Lesker</td><td>Model: LAB 18 e-profil evaporatör</td><td>nikel biriktirme</td></tr><tr><td>Trion Minilock III ICP/RIE</td><td>Trion teknolojisi</td><td>Model: Minilock-phantom III</td><td></td></tr><tr><td>Pres makinesi</td><td>PHI Hidrolik Pres</td><td>Molde: SQ-230H</td><td></td></tr><tr><td>Spin kaplayıcı</td><td>Laurell Teknolojiler</td><td>Modle: WS-400A-6NPP-LITE</td><td></td></tr><tr><td>CO2 kritik kurutucu</td><td>Tousimis</td><td>Modle: Autosamdri-815</td><td></td></tr><tr><td>Silikon gofret</td><td>Üniversitesi Gofret</td><td>1080</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum levhalar</td><td>McMaster-carr</td><td>9057K123</td><td></td></tr><tr><td>Teflon levhalar</td><td>McMaster-carr</td><td>8711K92</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Petri kabı</td><td>FALCON</td><td></td><td></td>353003</tr><tr><td>60 mm Petri kabı</td><td>FALCON</td><td>353004</td><td></td></tr><tr><td>Cam lamel</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Cam kaydırak</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-34</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık tartı tekneleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-735-743</td><td></td></tr><tr><td>Cam kurutucu</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-913-360</td><td></td></tr><tr><td>Plastik kurutucu</td><td>Bel-Art Ürünleri</td><td>F42025-000</td><td></td></tr><tr><td>Ocak Gözü</td><td>Fisher Scientific</td><td>1110049SH</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>5726</td><td></td></tr><tr><td>Blade</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17302</td><td></td></tr><tr><td>Metal bloklar</td><td>McMaster-carr</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Punch</td><td>Brettuns Village Deri El Sanatları Malzemeleri</td><td>Kemer yumruk</td><td></td></tr><tr><td>Poli (metil metakrilat)</td> <td>MicroChem</td><td>495 PMMA A4</td><td></td></tr><tr><td>PDMS</td><td>Dow Corning</td><td>Sylgard 184 kiti</td><td></td></tr><tr><td>Polistiren</td><td>Dow Kimyasal</td><td>Styron 685D</td><td></td></tr><tr><td>1H, 1H, 2H, 2H-perflorooktilmetildiklorosilan</td><td>Meşe Ağacı Kimyasal</td><td>7142</td><td></td></tr><tr><td>Geliştirici</td><td>MicroChem</td><td>MIBK/IPA 1: 3 oranında</td><td></td></tr><tr><td>Sökücü</td><td>MicroChem</td><td>Sökücü PG</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Toluen</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>T324-500</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifiye kartal ortamı</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır</td><td>serumu Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Elektron Mikrosopisi Bilimi</td><td>15712-S</td><td></td></tr><tr><td>Gluteraldehit&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>G151-1</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Corning</td><td>356008</td><td></td></tr><tr><td>A549 hücreleri</td><td>ATCC</td><td>ATCC CCL-185</td><td></td></tr></tbody></table>

hücre davranış nanotopographical modülasyon için nano substratları kullanma dikiş tekniği genişleyen

Expanding Nanopatterned Substrates Using Stitch Technique for Nanotopographical Modulation of Cell Behavior

Substrat nanotopografisinin hücre fenotipi ve fonksiyonunun güçlü bir modülatörü olduğu gösterilmiştir. Hücre davranışının nanotopografi modülasyonunu incelemek için, sonraki biyokimyasal ve moleküler biyoloji analizleri için nanotopografi üzerinde yeterli hücrenin kültürlenebilmesi için geniş bir nanodesenli substrat alanı arzu edilir. Bununla birlikte, mevcut nanofabrikasyon tekniklerinin, geniş bir alanda yüksek düzeyde tanımlanmış nanodesenler oluşturmak için sınırlamaları vardır. Burada, nanodesenli substratları küçük, yüksek derecede tanımlanmış bir nanodesenden dikiş tekniği kullanarak geniş bir alana genişletmek için bir yöntem sunuyoruz. Yöntem, iyi tanımlanmış bir kalıptan poli(dimetilsiloksan) (PDMS) kalıpları çoğaltmak için yumuşak litografi, birden fazla PDMS kalıbını tek bir büyük kalıba monte etmek için dikiş tekniği ve polistiren (PS) substratlar üzerinde bir ana kalıp oluşturmak için nanoimprinting içeren çoklu teknikleri birleştirir. PS ana kalıbı ile PDMS çalışma substratları üretiyoruz ve hücre yayılmasının nanotopografik modülasyonunu gösteriyoruz. Bu yöntem, geniş alanlarda iyi tanımlanmış nano desenler oluşturmak için basit, uygun fiyatlı ancak çok yönlü bir yol sağlar ve potansiyel olarak hibrit bileşenlere sahip mikro / nano ölçekli cihazlar oluşturmak için genişletilir.

<html> dikiş tekniği yüksek sadakat ile nano yüzeylerde geniş bir alanda üretebilir. Şekil 1a ve sırasıyla Si substrat PS plaka ve PS ince film dikişli PDMS kalıp aktarılan nanopatterns büyük alanı görüntülemek 1b. Orijinal EBL yazılı kalıbın (Şekil 1c) ve alt tabaka (Şekil 1d) çalışma nihai PDMS arasında karşılaştırma EBL yazılmış nanopatterns sadakatle çalışan alt tabakaya transfer edilebilir doğrulamaktadır. Çeşitli ge...

Hücre davranışının nanotopografik modülasyonunun incelenmesi için küçük nanodesenli kalıplardan geniş bir nanodesenli substrat alanı üretmek için bir protokol sunulmuştur.

Hücre Davranış Nanotopographical Modülasyon için nano Substratları kullanma Dikiş Tekniği Genişleyen

Substrate nanotopography has been shown to be a potent modulator of cell phenotype and function. To dissect nanotopography modulation of cell behavior, a ...

Bu prosedürün genel amacı, basit, uygun maliyetli ancak çok yönlü bir dikiş tekniği kullanarak, küçük nanodesenli kalıplardan geniş alanlı nanodesenli altlıklar üretmektir. Bu yöntem; fokal adezyon proteinlerinin ekspresyonu gibi, altlık nanotopografyasının hücre fenotipi ve fonksiyonu üzerindeki modülasyonunun hücresel ve moleküler düzeylerde incelenmesine yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, basit ve maliyet etkin olmasıdır.Başlamak için, metin protokolünde açıklandığı gibi, silanize edilmiş silikon kalıbı PDMS prepolimeri içinde hazırlayın. Silanize edilmiş silikon kalıbı 60 milimetrelik bir Petri kabına yerleştirin. PDMS prepolimerini Petri kabındaki silikon kalıbın üzerine dökün.Petri kabını plastik bir desikatöre yerleştirin ve tüm kabarcıklar kaybolana kadar yaklaşık 10 dakika boyunca gazını alın. Petri kabını bir ısıtıcıya aktarın ve PDMS prepolimerini 70 °C'de dört saat boyunca kürleyin. PDMS kalıbını, cımbız kullanarak silikon kalıptan dikkatlice soyun.Nanogratings gibi anizotropik PDMS nanodesenlerin yönelimini bir optik mikroskop altında belirleyin ve bunu PDMS kalıpların arka yüzüne bir markör kalemle işaretleyin. Silikon altlığı bir çeker ocak içinde etanol ile temizleyin ve ardından basınçlı hava ile kurulayın. Her bir PDMS kalıbın desenlenmemiş alanlarını bir bıçakla kesin.Desenlenmemiş alanı minimize etmek ve kompresör kuvveti uygulandığında nanopattern deformasyonu ile temas etmeyi önlemek için PDMS kalıplar, çevreleyen kalıba değmeyecek şekilde ancak mümkün olduğunca yakın hizalanmalıdır. Kırpılmış PDMS kalıbı, nanopattern yüzeyi aşağı bakacak şekilde silikon substratın ayna tarafına yerleştirin ve ardından diğer kalıpları çevreleyen kalıplara değmeyecek şekilde yakınına hizalayın. PDMS'i bazal tabakada kürlemeye çalışmak kritiktir; çünkü kürlenmemiş PDMS, birden fazla kalıp arasındaki boşluktan akabilir ve nanopatternlere zarar verebilir.Bununla birlikte, tamamen kürlenmiş PDMS çoklu kalıpları birbirine bağlayamaz. Bir PDMS yapıştırıcı tabakası hazırlamak için, 0,5 milimetre kalınlığında bir tabaka oluşturacak şekilde bir gram gazı alınmış PDMS prepolimerini temiz bir lam üzerine dökün. PDMS tabakasını bir ısıtıcı plaka üzerinde 100 °C'de üç ila beş dakika boyunca pişirin.Tabakaya bir iğne ile dokunarak tabakanın kısmen kürlendiğinden ancak tamamen kürlenmediğinden emin olun. PDMS tabakasını hizalanmış PDMS kalıplarının arka yüzüne yerleştirin, bu düzeneği hızlıca ters çevirin ve sıcak plakaya aktarın. PDMS yapışkan tabakası ile PDMS kalıplarının arka yüzü arasında iyi bir temas sağlandığından emin olmak için düzeneğin üzerine metal bir blok kullanarak sıkıştırma kuvveti uygulayın.PDMS yapıştırıcı tabakasını 100 °C'de bir saat boyunca kürleyin. Isıtıcı plakayı kapatın, metal bloğu çıkarın ve tek dikişli PDMS kalıbı silikon alt tabakadan soyarak ayırın. Dikişli PDMS kalıbı PS plakaya nano baskı ile aktarmak için, PS plakayı üç inçlik bir silikon gofret üzerine yerleştirilmiş bir alüminyum ara parçaya yerleştirin.PS plakayı bir ısıtıcı tabla üzerinde 250 °C'de 30 dakika boyunca ısıtın. Ardından, nano desenleri aşağı bakacak şekilde dikilmiş PDMS kalıbı, erimiş PS plakanın üzerine yerleştirin. Sonrasında, dikilmiş PDMS kalıbın cam lamı üzerine bir alüminyum plaka yerleştirin.Alüminyum plaka üzerindeki metal blokları kullanarak basma basıncı uygulayın ve üç dakika bekleyin. Metal bloğu alüminyum plakadan kaldırıp yerine yerleştirin ve basma basıncını 25 kilopascals değerine yükseltin. Ardından, bu adımı basınç 50 kilopascals değerine çıkarılarak tekrarlayın.Sıcak plakanın sıcaklığını 50 kilopascal tutarlı basınç altında 15 dakika boyunca 240 ile 250 santigrat derece arasında tutun. Sıcak plakayı kapatın ve tüm düzeneği soğutun. Sıcaklık 50 santigrat derecenin altına düştükten sonra metal blokları çıkarın ve dikilmiş PDMS kalıbını PS plakadan dikkatlice soyun.PDMS kalıbı bir PS ince film üzerine nano baskılamak için, nanotopografya yüzeyi aşağıya gelecek şekilde birleştirilmiş PDMS kalıbını, bir ısıtıcı tabla üzerine yerleştirilmiş PS ince filmin üzerine yerleştirin. PDMS kalıbının cam lamı üzerine metal bloklar kullanarak PDMS kalıbına 12 kilopascals sıkıştırma basıncı uygulayın. Isıtıcı tablanın sıcaklığını 180 degrees Celsius dereceye yükseltin ve bu sıcaklığı 15 dakika boyunca koruyun.Isıtıcı plakayı kapatın ve tüm düzeneğin soğumasını bekleyin. Sıcaklık 50 °C'nin altına düştüğünde metal blokları çıkarın ve dikilmiş PDMS kalıbı PS filmden dikkatlice soyun. İçi boş bir çelik yay şeklinde punch kullanarak, nanodesenli PDMS substratları belirli bir çok kuyucuklu plaka konfigürasyonuna uygun diskler şeklinde kesin.Ardından, PDMS diskleri çok kuyucuklu plakanın kuyucuklarına yerleştirmek için cımbız kullanın. PDMS altlıkları %70 ethanol kullanarak 30 dakika boyunca sterilize edin. Sonrasında, ethanolu aspire edin ve bunu 30 dakikalık UV maruziyeti ile takip edin.PDMS substratları 1X steril fosfat tamponlu salin ile üç kez yıkayın. Ardından, PDMS substratlarını oda sıcaklığında 30 dakika boyunca hücre dışı matris proteini ile kaplayın. PDMS substratlarını steril PBS ile her biri beş dakika sürecek şekilde üç kez durulayın.İnsan A549 akciğer kanseri hücrelerini %10 fetal bovine serum içeren Dulbecco's Modified Eagle Medium içinde süspande edin ve hücreleri bir hemositometre kullanarak sayın. Hücreleri, santimetrekare başına 2,000 hücre ekim yoğunluğunda PDMS alt tabakalara ekin. Hücreleri %5 carbon dioxide içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 degrees Celsius'ta bir gün boyunca kültüre edin ve ardından gözlemleyin.PS plaka ve ince film üzerinde oluşturulan nanodesen burada gösterilmiştir. Oklar, birbirine eklenen PDMS kalıpların ara boşluklarındaki polimer yükseltilerini belirtmektedir. Bu SEM görüntüleri, ekleme tekniği uygulanarak, elektron demeti litografisi ile yazılan nanodesenin PDMS çalışma altlıklarına aslına uygun şekilde aktarıldığını kanıtlamaktadır.Nanogratinkler ve nanopillarlar üzerinde büyütülen A549 hücrelerinin temsilci SEM görüntüleri burada gösterilmiştir. Hücreler, nanogratinkler üzerinde hizalanmış hücre morfolojisi sergilerken, nanopillarlar üzerinde rastgele yayılmışlardır. Bu videoyu izledikten sonra, birden fazla küçük ve tanımlanmış nanodesenli kalıbı birleştirerek geniş alanlı bir nanodesenli substratın nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız.Toluen ve paraformaldehit ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın ve prosedürleri uygularken her zaman uygun kişisel koruyucu donanım kullanın.

expanding-nanopatterned-substrates-using-stitch-technique-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Uzun zincirli altın Alkan tiyoller oluşan Kendinden monte mono tabakaları (SAMs), protein desen ve hücre hapsi oluşumu için iyi tanımlanmış substratları sağlar. Microcontact baskı ile dolgu takip polidimetilsiloksan (PDMS) damga kullanarak hexadecanethiol glikol-sonlandırılır Alkan tiyol monomer damgalı hexadecanethiol bölgede sadece protein ve hücreler adsorbe bir desen üretir.

Protein ve hücre Etrafının İki Boyutlu Desenli Yüzeyler Oluşturma

Biz şablon baskı ve fotolitografi, hem de microfabricated desenleri kültür hücreleri yöntemleri ile micropattern nano altın ince filmler için teknikler hakkında rapor. Buna ek olarak, malzeme ve taramalı elektron ve floresan mikroskobu teknikleri kullanılarak kültürlenmiş hücrelerin morfolojisi karakterize etmek için görüntü analiz yöntemleri açıklanmaktadır.

Hücre-malzeme Etkileşim Araştırmalar Nanogözenekli Altın Patterns mikroimalat

Bu protokol, SiO 2 hücre modelleme için bir mikroimalat uyumlu bir yöntemi tarif etmektedir. Önceden tanımlanmış bir parylene C dizayn photolithographically SiO 2 gofret yazdırılır. Serum (veya başka bir etkinleştirme solüsyonu) ile inkübasyondan sonra hücreler için özel olarak uygun (ve uygun göre gelişir) SiO 2 bölgeleri ile püskürtüldü olmak iken esas parylene,-C,.

Photolithographically Tanımlı Parylene-C hücre Desenlendirme: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Yüzeyleri

Bu el yazması tek yönlü germe kullanarak yapışık hücreler ve dokular üzerindeki kuvvetleri uygulamak ya da serbest bırakmak için bir teknik sunuyor.

PDMS Zarında Micropatterned Hücreler germe

Insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) farklılaştırmak ve farklı doku kalıpları içine kendini organize içsel yeteneği var; Bu mekansal çevre geçişlerini sunulmasını gerektirir rağmen. Biz hPSC farklılaşma desenleri kontrol etmek için biyokimyasal ve mekanik geçişlerini oluşturmak için basit ve sağlam bir yöntem olarak şablon micropatterning sunuyoruz.

Farklılaşma Fates Mekansal Organizasyonu Probing İnsan pluripotent kök hücrelerin Stencil micropatterning

Bu rapor, biyolojik araştırmalar için mikroakışkan kanalları hücreler ve substratlarla doldurmak için düşük basınçlı vakum kullanan basit, uygulaması kolay bir tekniği açıklamaktadır.

Desenlendirme Proteinlerin ve Hücreleri Çok Yönlü Yöntemi

Burada, degrade nanopattern plakaları termal nanoimprinting ile imalat ve insan endotelyal progenitor hücreler yanıt taşınımı için eleme yöntemi için bir iletişim kuralı mevcut. Açıklanan teknolojisini kullanan, hücre davranış fiziksel uyaranlara tarafından işleyebilirsiniz bir iskele üretmek mümkündür.

Termal Nanoimprinting teknik ve insan endotel hücreleri koloni oluşturan yanıt testi ile taranması degrade Nanopattern imalatı

Bu protokol, sınırlı biyomühendislik geçmişi olanlar için basit ve erişilebilir bir litografi içermeyen mikrodesenleme yöntemini tanıtır. Bu yöntem, hücre morfolojilerini modüle etmek için ilgi çekici bir şekilde hücre dışı matris proteinleri mikrodesen için özelleştirilmiş lazer kesim şablonlar kullanır. Mikro desenleme prosedürü indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler kullanılarak gösterilmiştir.

Lazer Kesim Şablonlar Kullanılarak Basit Litografisiz Tek Hücreli Mikrodesenleme

Burada sunulan protokol, memeli hücrelerindeki sitoskeletal yapıları incelemek için hücre şeklini standartlaştıran mikropatternlerin otomatik olarak üretilmesini sağlar. Bu kullanıcı dostu teknik, piyasada bulunan görüntüleme sistemleri ile kurulabilir ve standart hücre biyolojisi laboratuvarlarına erişilemeyen özel ekipman gerektirmez.

Kızılötesi Lazer Destekli Mikropatterning ile Hücre Geometrisinin Kontrolü

Yumuşak hidrojeller üzerindeki hücre dışı matris proteinlerinin nokta dizilerinin tek bir çıkarma modelleme adımıyla mikrotemaslı baskıya dayanan hücresel çekiş kuvvetlerini ölçmek için standart bir yöntemdeki iyileştirmeleri açıklıyoruz. Bu yöntem, hücre kümesi şeklini kontrol etmek için gerekli olan ada desenlerinin daha basit ve daha tutarlı bir şekilde üretilmesini sağlar.

Mikrodesen Traksiyon Mikroskobu için Desen Oluşturma

Geleneksel olarak, hücre kültürü, hücrelerin doğal ortamını in vivo olarak zayıf bir şekilde taklit eden düzlemsel substratlar üzerinde gerçekleştirilir. Burada, fizyolojik olarak ilgili kavisli geometrilere ve mikro desenli hücre dışı proteinlere sahip hücre kültürü substratları üretmek için bir yöntem tanımladık ve bu hücre dışı ipuçlarının hücresel olarak algılanmasına sistematik araştırmalara izin veriyoruz.

Üç Boyutlu Hücre Kültürü Substratlarının UV-Fotodesenlenmesi ile Multicue Hücresel Mikro Ortamların Oluşturulması

Keşfedin dikiş tekniği ile nano desenli substrat üretimini ve hücre davranışlarının nanotopografik modülasyonunu. Bu maliyet etkin yöntem, hücre fenotipi ve fokal adezyon proteinleri üzerine çalışmaları kolaylaştırır.

Hücre Davranış Nanotopographical Modülasyon için nano Substratları kullanma Dikiş Tekniği Genişleyen

Daha fazla video keşfet