Name: kantitatif 3D Siliko Modelleme (q3DISM) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Öğrenin, q3DISM tekniği ile Alzheimer hastalığı fare ve sıçan modellerinde mononükleer fagositlerin amiloid-beta fagositozunu üç boyutlu olarak nasıl niceliksel analiz edeceğinizi. Bu yöntem, terapötik ajanların etkinliğini değerlendirmede kritik bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

M-V. G-S. BrightFocus Vakfı Alzheimer Hastalığı Araştırma Burs Ödülü (A2015309F) ve Alzheimer Derneği, California Southland Bölümü Genç Araştırmacı Ödülü tarafından desteklenmektedir. TMW, bir ARCS Vakfı ve John Douglas Fransız Alzheimer Vakfı Maggie McKnight Russell-JDFAF Memorial Doktora Sonrası Bursu tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar ve İnme Enstitüsü (1R01NS076794-01, T.T.), Alzheimer Derneği Zenith Fellows Ödülü (ZEN-10-174633, T.T.'ye) ve Amerikan Yaşlanma Araştırmaları Federasyonu / Ellison Tıp Vakfı Julie Martin Yaşlanma Araştırmalarında Kariyer Ortası Ödülü (M11472, T.T.). Bu çalışmayı mümkün kılmaya yardımcı olan Zilkha Nörogenetik Enstitüsü'nün başlangıç fonları için minnettarız.

Araştırma etiği Beyanı: Burada detaylı hayvanları da içeren tüm deneylerde Southern California Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) Üniversitesi tarafından onaylanmış ve Laboratuar Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği Ulusal Sağlık kılavuzların Enstitüleri ve önerileri ile tam uyum içinde yapıldı hayvan Bakımı Uluslararası. 1. Kemirgen Beyin İzolasyon ve immün için hazırlık 1.GÜN: <ol><li> yaşlı TgF344-AD sıçan yerleştirin (14 aylık) veya sürekli derin izofluran anestezisi (% 4) altında APP / PS1 fareler (12 aylık). ayak tutam anestezi derinliği ve çekme refleksinin yokluğu değerlendirin. </li><li> Göğüs kafesinin her iki tarafında kesti ve kalp maruz kaldırın. kalbin sol ventrikül içine bir 23 G iğne takın ve sağ atrium içine küçük bir kesi yapmak. buz soğukluğunda fosfat tamponlu tuzlu su ile transcardial perfüzyon ile kan kaybından geçinperistaltik bir pompa (fareler için 30 mL, 150 - sıçanlar için 200 mL) ile (PBS). </li><li> deri içine bir kuyruk orta hat kesi yapmak ve bir kenara deri ve kas hareket ettirin. orta hat boyunca kafatasının üst kısmından ve gözler arasında kesin. Kemik plakaları kaldırmak ve kafatası tüm beyin izole eder. </li><li> koronal kemirgen beyin matriks içine beyin yerleştirin ve dörde dilim. 4 ° C&#39;de paraformaldehid sabitleme maddesi (PBS içinde% 4 PFA) ile arka çeyrek O / N (16 saat) inkübe edin. PBS yıkama 3x ve sonra% 70 etanol aktarın. Dikkat: PFA toksik ve uygun kişisel koruyucu ekipman ile kimyasal bir başlık altında ele alınmalıdır. </li></ol> 2. GÜN: <ol start="5"><li> arka arkaya daha konsantre 1H etanol banyolarında (% 70,% 80,% 95 ve% 100 x3) doku dihidrat kademeli gömme kasetlerine beyin çeyrek koyun. </li><li> arka arkaya üç% 100 ksilen banyoları (1 saat her biri) ile dokudan net etanol. Dikkat: Ksilen toksik ve shUygun kişisel koruyucu teçhizat ile kimyasal başlık altında ele ould. </li><li> (- 58 ° C, 90 dakika her 56) iki erimiş parafin banyoları sonra parafin bloklar doku gömün. </li></ol> GÜN 3: <ol start="8"><li> Bir mikrotom kullanılarak parafine gömülü beyinlerin 10 mikron kalınlığında kesitler halinde kesilmiştir. bir su banyosuna (1 dakika için 50 ° C) içine daldırma Bölümler mikroskop lamları için de geçerlidir. slayt doku yapışmasını sağlayarak, O / N kurumaya slaytlar bırakın. </li></ol> 2. immün Not: Antikorların farklı kombinasyonları aşağıda tarif edilen boyama işlemi için de kullanılabilir. Sıçan ve farelerin beyin dokusu ile uyumlu antikor kokteyli, Tablo 1 &#39;de listelenmiştir. 4. GÜN: <ol><li> 2x% 100 ksilen banyoları kullanılarak Deparaffinize beyin bölümleri (12 dk). </li><li> arka arkaya etanol banyoları beyin bölümleri rehidrate -% 100 10 dakikada, 5 dakika boyunca% 95, 10 dakika% 80, 15 dakika boyunca son% 70 - Followe3x PBS yıkar [hafif ajitasyon ile oda sıcaklığında 5 dakika,] tarafından, d. Bu arada, 95 Isı antijen alımı çözeltisi - manyetik çubuk karıştırılarak sıcak bir plaka üzerinde 97 ° C. </li><li> 30 dakika boyunca 97 ° C - 95 antijen alma çözeltisi beyin bölümleri inkübe edin. Daha sonra, PBS içinde 3 kez yıkanır (hafif çalkalama ile oda sıcaklığında 5 dakika). </li><li> Doku kurumasını önlemek ve hidrofobik bir bariyer kalem ile doku alanı çevresinde bir hidrofobik bariyer çizmek için hassas görev silecekleri kullanarak hızlı kuru slaytlar. Ve nemli bir oda içinde oda sıcaklığında 1 saat inkübe [PBS% 0.3 Triton X-100 ve% 10 normal eşek serumu (NDS) ihtiva eden] Blokaj tamponu ile çevrelenmiş doku bölgesini doldurun. </li><li> nemli bir odada 4 ° C&#39;de O / N mononükleer fagositler etiket ve kuluçkalanması (bloke tamponu içinde seyreltilmiş) Iba1 primer antikor ile blokaj tamponu değiştirin. Antikor host ve çalışma dilüsyonları için, Tablo 1 ve Malzemelerin Tabloya bakınız. </li></ol> GÜN 5: <ol start="6"><li> Durulama3x PBS banyoları ile primer antikor (hafif çalkalama ile oda sıcaklığında 5 dakika). 3x PBS banyoları ve ardından (karanlıkta, oda sıcaklığında bloklama tamponu içinde) 1 saat boyunca (594 nm emisyon fluorofor ile konjüge edilmiş) fluorescent sekonder antikor (hafif çalkalama ile oda sıcaklığında 5 dakika) ile inkübe edin. Şu anda, flüoresan sinyal ağartma önlemek için karanlıkta bölümleri muhafaza. </li></ol> GÜN 6 - 7: <ol start="7"><li> Tekrarlayın 2.5 ve CD68 ile 2.6 (sıçan beyin) ya da fagolizozomları etiketlemek için LAMP1 (fare doku) antikorları ve uygun ikincil antikorlar (488 nm emisyon fluorofor ile birleştiğinde) yineleyin. </li></ol> GÜN 7 - 8: <ol start="8"><li> Yineleyin Aβ mevduat etiketlemek için (bir 647 nm flüorofora bağlı) OC (sıçan doku) ya da 4G8 (fare beyinleri) antikorlar ve uygun sekonder antikor ile 2.5 ve 2.6 adımları. Not: Alternatif olarak, 6E10 antikoru, fare ve sıçan dokusu üzerinde başarılı bir şekilde de kullanılabilir. Uygun antikor kombinasyonlar için, Malzeme Tabloya bakınız </str&gt; Ong. </li><li> İzin bölümleri tamamen kuru Ç / karanlıkta oda sıcaklığında N. Ardından, kapak DAPI içeren floresan montaj medya tarafından mühürlenmiş bir kapak kayma ile numune. </li></ol> Büyük Z-yığını Confocal Veri kümeleri 3. kazanılması Not: Bu protokol, 60X objektif ve 405 nm, 488 nm, 594 nm ve 647 nm lazer ile donatılmış bir tam otomatik lazer tarama konfokal mikroskop gerektirir. Tüm ekipman görüntüleme ve lazer kontrol yazılımı tarafından kontrol bilgisayardır. Bilgisayar, epifluorescent lamba, mikroskop, lazerler ve kamera üzerinde görüntüleme protokolü, güç başlamadan önce. GÜN 9: <ol><li> 60X mikroskop hedefi seçin. lens daldırma yağı ekleyin ve mikroskop sahne slayt tutucu üzerine numuneyi yerleştirin. Yağ slayt ile temas edinceye kadar objektif kaldırın. Okülerin aracılığıyla epifluorescent aydınlatma kullanarak hipokampus veya serebral korteks amiloid plaklar bulmak için odak düzlemi ayarlayın. </li><li> konfokal im Edinmehipokamp veya konfokal mikroskopi ile kemirgen korteks amiloid birikimlerinin Çevre aktive mononükleer fagositler yaşları (60X büyütme, z-yığın adımları: 0.25 um &lt;z &lt;0.40 um, adım sayısı 25 &lt;n &lt;35). </li></ol> 4. q3DISM Not: önemli sonuçlar elde etmek amacıyla, ilgi hayvan / bölge başına 3 görüntü en az analiz öneririz. Her bir görüntü için, analiz etmek için hücre bolluğu deneysel paradigmalar bağlı olarak değişebilir. (; - D ve 2C - D Şekil 1C bakın örneğin, uzak veya plaklar ile ilişkili mononükleer fagositler), bu raporda gösterilen temsilcisi sonuçları, biz 3 hücre / durumunu analiz etti. GÜN 10: <ol><li> Bilimsel 3D görüntü işleme ve analiz yazılımı ko (coloc) aynı anda tüm z-düzlemlerde Iba1 / CD68 (sıçan doku) ya da Iba1 / LAMP1 (fare doku) boyanma mekansal yakınlığı modülü ile konfokal veri setlerini analiz edin.Iba + / CD68 + veya aktive mononükleer fagositler içinde fagolizozomları karşılık Iba + / LAMP1 + ko kanalları oluşturun. <ol><li> (CD68 karşı gelen ya da 488 nm fluorofor ile birlikte LAMP1 boyama) b kanalı için (594 nm fluorofor ile birlikte Iba1 boyama karşılık gelir) kanalı için TRITC ve FITC seçin. &#39;Modunda çek,&#39; seçeneğini &#39;eşik&#39; ve &#39;coloc şiddetleri,&#39; seçeneğini &#39;kaynak kanalları&#39; için yazılım penceresinin sağ tarafta. </li><li> yazılım penceresinin sağ taraftaki &#39;coloc renk&#39; öğesini seçmek için &#39;Düzenle&#39;yi tıklayın. </li><li> bağımsız olarak her kanal için, belirli boyama dahil ve arka plan / non-spesifik sinyaller dışlamak için eşik ayarlayın. ayarlanabilir sonra, tarafsız bir analizini sağlamak için görüntüler arasında eşikleri değişmez. kolokalize vokseller (tüm z-yığınlardan alınan piksel) tüm z-yığınları sim adım 4.1.2 seçilen renkte görünecekultaneously. </li><li> &#39;Coloc kanalı inşa tıklayın. oluşturulan ko kanal görüntüleme ayar penceresinde görüntülenir. </li><li> Kanal istatistiklerini açmak için coloc kanalında tıklayın. &#39;Kolokalize eşiğin üzerinde hacim / A maddesinin%&#39; LAMP1 veya CD68 sinyali (488 nm florofor tekabül vokseller) ile kolokalize Iba1 sinyali (594 nm florofor tekabül vokseller) ve% temsil eder. Daha basit, bu fagolizozomları (Şekil 1C ve 2C bakınız) tarafından işgal monosit birimdir. NOT: &#39;kolokalize eşiğin üstünde hacim / malzeme B&#39;nin%&#39; Iba1 ile kolokalize LAMP1 veya CD68 sinyalinin% tekabül etmektedir. fagolizozomları hücre yapılar gibi bu% 100&#39;e yakın olmalıdır. Değerler kolokalize eşiğin üzerinde tüm Z-yığınlarının sinyalin oranına dayanmaktadır. </li></ol></li><li> coloc modülü kullanılarak, OC (sıçan ti ile mekansal yakınlık için adım 4.1 oluşturulan coloc kanalı analizssue) ya da 4G8 (fare doku) Aβ sinyaller. Bu fagolizozomları içinde kapalı Aβ nicelendirilmesi sağlar. <ol><li> kanal (OK veya 647 nm fluorofor ile birlikte 4G8 boyama tekabül eder) b kanalı için ve Cy5 (Iba1 / CD68 veya Iba1 / LAMP1 coloc kanal adım 4.1 oluşturulan karşılık gelen) bir coloc veri kümesi seçin. </li><li> 4.1.5 oluşturma adımları 4.1.2 de tarif edildiği gibi, bir coloc kanal oluşturun. </li><li> Kanal istatistiklerini açmak için coloc kanalında tıklayın. &#39;Kolokalize eşiğin üzerinde hacim / A maddesinin%&#39; Iba1 / LAMP1 veya Iba1 / CD68 (vokseller adım 4.1.5 yerleşik coloc kanala tekabül etmektedir.) OK veya 4G8 sinyali (vokseller 647 karşılık gelen kolokalize ve% temsil nm fluorofor). Bu Aβ (Şekil 1D ve 2D bakınız) tarafından işgal fagolizozomal birimdir. NOT: &#39;kolokalize eşiğin üstünde hacim / malzeme B&#39;nin%&#39; fagolizozomları ile kolokalize toplam Aβ sinyalin% tekabül eder.Bu fagolizozomları (Bu Örnek sonuçlar gösterilmemiştir) içinde kapalı tutulan toplam Aβ yataklarının kısmını değerlendirmek için de kullanılabilir. </li></ol></li><li> konfokal görüntü yığınlarını yeniden ve monosit fagolizozomları içinde kapsüllü Aβ 3D modellerini oluşturmak için aşmak modülünü kullanın. <ol><li> &#39;Ekran ayarı&#39; penceresinde, (sadece Iba1 boyama göstermek için) TRITC seçin. &#39;Hacim gayrimenkullerin penceresinde,&#39; yeni yüzey eklemek tıklayın. </li><li> içinde &#39;1/5 algoritma&#39; adımında &#39;ayarları&#39; yüzey &#39;seçeneğini seçin. Ayrıca &#39;renk&#39; (kırmızı Şekil 1B ve 2B% 60 şeffaflık ayarlanır) paletinde veya RGB renk türünü seçin ve saydamlığını ayarlamak. kutusunu işaretleyin &#39;ilgi bölgeyi seçin&#39;. Bir sonraki tıklayın. </li><li> Adım &#39;ilgi 2/5 bölge,&#39; x, y ayarlayarak ilgi hücre etrafında bir pencere çizin ve z koordinatları (Şekil 1A beyaz kutuları bakın </strong&gt; ve 2A). Bir sonraki tıklayın. </li><li> Adım &#39;3/5 kaynak kanalı&#39; olarak, TRITC kaynak kanalı seçin. 0.4 mikron kutu &#39;yumuşak&#39; ve set yüzey alanı ayrıntı seviyesini kontrol edin. Için &#39;eşikleme,&#39; mutlak yoğunluğunu seçin. Bir sonraki tıklayın. </li><li> oluşturulan birim TRITC kanal sinyali ile mükemmel örtüşür şekilde Adım içinde &#39;4/5 eşik,&#39; eşik ayarlayın. Bir sonraki tıklayın. </li><li> Adım &#39;5/5 yüzeyleri sınıflandırmak,&#39; bölümünde &#39;filtre türü,&#39; dahil veya oluşturulacak miktarlar hariç tutulacak onların büyüklüğüne göre nesneleri seçin. , Bitirmek tıklayın bütün oluşturma adımlarını yürütmek ve sihirbazdan çıkın. </li><li> Yineleyin FITC kanalı (LAMP1 + veya CD68 + fagolizozomları) için 3D yüzey oluşturmak için 4.3.1 4.3.6 için yineleyin. </li><li> Yineleyin Cy5 kanalı için (OC + veya 4G8 + Aβ mevduat) 3D yüzey oluşturmak için 4.3.1 4.3.6 için yineleyin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Brookmeyer, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((National+estimates+of+the+prevalence+of+Alzheimer%27s+disease+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimers+Dement%22%5BJournal%5D)">National estimates of the prevalence of Alzheimer's disease in the United States.</a> Alzheimers Dement. 7 (1), 61-73 (2011).</li>
<li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 3 (7), (2011).</li>
<li>Heneka, M. T., Golenbock, D. T., Latz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity in Alzheimer's disease.</a> Nat Immunol. 16 (3), 229-236 (2015).</li>
<li>Mawuenyega,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+clearance+of+CNS+beta-amyloid+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Decreased clearance of CNS beta-amyloid in Alzheimer's disease.</a> Science. 330 (6012), 1774(2010).</li>
<li>Hickman, S. E., Allison, E. K., El Khoury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+dysfunction+and+defective+beta-amyloid+clearance+pathways+in+aging+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial dysfunction and defective beta-amyloid clearance pathways in aging Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 28 (33), 8354-8360 (2008).</li>
<li>Johnston, H., Boutin, H., Allan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+contribution+of+inflammation+in+models+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Assessing the contribution of inflammation in models of Alzheimer's disease.</a> Biochem Soc Trans. 39 (4), 886-890 (2011).</li>
<li>Gjoneska, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+epigenomic+signals+in+mice+and+humans+reveal+immune+basis+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Conserved epigenomic signals in mice and humans reveal immune basis of Alzheimer's disease.</a> Nature. 518 (7539), 365-369 (2015).</li>
<li>Reitz, C., Mayeux, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer+disease%3A+epidemiology%2C+diagnostic+criteria%2C+risk+factors+and+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Alzheimer disease: epidemiology, diagnostic criteria, risk factors and biomarkers.</a> Biochem Pharmacol. 88 (4), 640-651 (2014).</li>
<li>Hazrati, L. -N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+association+of+CR1+with+Alzheimer%27s+disease%3A+a+tentative+disease+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Genetic association of CR1 with Alzheimer's disease: a tentative disease mechanism.</a> Neurobiol Aging. 33 (12), 2949(2012).</li>
<li>Griciuc, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+Disease+Risk+Gene+CD33+Inhibits+Microglial+Uptake+of+Amyloid+Beta%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's Disease Risk Gene CD33 Inhibits Microglial Uptake of Amyloid Beta.</a> Neuron. , 1-13 (2013).</li>
<li>Li, X., Long, J., He, T., Belshaw, R., Scott, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+genomic+approaches+identify+major+pathways+and+upstream+regulators+in+late+onset+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">Integrated genomic approaches identify major pathways and upstream regulators in late onset Alzheimer's disease.</a> Scientific reports. 5, 12393(2015).</li>
<li>Weitz, T. M., Town, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+Alzheimers+Disease%3A+%22Its+All+About+Context%22%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Microglia in Alzheimers Disease: "Its All About Context".</a> Int J Alzheimers Dis. , 314185(2012).</li>
<li>Guillot-Sestier, M. -V., Doty, K. R., Town, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+Immunity+Fights+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Innate Immunity Fights Alzheimer's Disease.</a> Trends Neurosci. 38 (11), 674-681 (2015).</li>
<li>Guillot-Sestier, M. -V., Town, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+in+Alzheimer%27s+disease%3A+a+complex+affair%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurol+Disord+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Innate immunity in Alzheimer's disease: a complex affair.</a> CNS Neurol Disord Drug Targets. 12 (5), 593-607 (2013).</li>
<li>Jankowsky, J. L., Slunt, H. H., Ratovitski, T., Jenkins, N. A., Copeland, N. G., Borchelt, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-expression+of+multiple+transgenes+in+mouse+CNS%3A+a+comparison+of+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomol+Eng%22%5BJournal%5D)">Co-expression of multiple transgenes in mouse CNS: a comparison of strategies.</a> Biomol Eng. 17 (6), 157-165 (2001).</li>
<li>Guillot-Sestier, M. -V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Il10+deficiency+rebalances+innate+immunity+to+mitigate+Alzheimer-like+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Il10 deficiency rebalances innate immunity to mitigate Alzheimer-like pathology.</a> Neuron. 85 (3), 534-548 (2015).</li>
<li>Cohen, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transgenic+Alzheimer+rat+with+plaques%2C+tau+pathology%2C+behavioral+impairment%2C+oligomeric+a%CE%B2%2C+and+frank+neuronal+loss%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A transgenic Alzheimer rat with plaques, tau pathology, behavioral impairment, oligomeric aβ, and frank neuronal loss.</a> J Neurosci. 33 (15), 6245-6256 (2013).</li>
<li>Imai, Y., Ibata, I., Ito, D., Ohsawa, K., Kohsaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+gene+iba1+in+the+major+histocompatibility+complex+class+III+region+encoding+an+EF+hand+protein+expressed+in+a+monocytic+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">A novel gene iba1 in the major histocompatibility complex class III region encoding an EF hand protein expressed in a monocytic lineage.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 224 (3), 855-862 (1996).</li>
<li>Ohsawa, K., Imai, Y., Sasaki, Y., Kohsaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%2Fmacrophage-specific+protein+Iba1+binds+to+fimbrin+and+enhances+its+actin-bundling+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Microglia/macrophage-specific protein Iba1 binds to fimbrin and enhances its actin-bundling activity.</a> J Neurochem. 88 (4), 844-856 (2004).</li>
<li>Bandyopadhyay, U., Nagy, M., Fenton, W. A., Horwich, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+lipofuscin+in+motor+neurons+of+SOD1-linked+ALS+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Absence of lipofuscin in motor neurons of SOD1-linked ALS mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (30), 11055-11060 (2014).</li>
<li>Holness, C. L., Simmons, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+of+CD68%2C+a+human+macrophage+marker+related+to+lysosomal+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins.</a> Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).</li>
<li>Connor, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+of+the+translation+initiation+factor+eIF2alpha+increases+BACE1+levels+and+promotes+amyloidogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation of the translation initiation factor eIF2alpha increases BACE1 levels and promotes amyloidogenesis.</a> Neuron. 60 (6), 988-1009 (2008).</li>
<li>Cai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipase+D1+corrects+impaired+betaAPP+trafficking+and+neurite+outgrowth+in+familial+Alzheimer%27s+disease-linked+presenilin-1+mutant+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Phospholipase D1 corrects impaired betaAPP trafficking and neurite outgrowth in familial Alzheimer's disease-linked presenilin-1 mutant neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (6), 1936-1940 (2006).</li>
<li>Marsh, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adaptive+immune+system+restrains+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+modulating+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The adaptive immune system restrains Alzheimer's disease pathogenesis by modulating microglial function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (9), 1316-1325 (2016).</li>
<li>Lefterov, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+A-I+deficiency+increases+cerebral+amyloid+angiopathy+and+cognitive+deficits+in+APP%2FPS1DeltaE9+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein A-I deficiency increases cerebral amyloid angiopathy and cognitive deficits in APP/PS1DeltaE9 mice.</a> J Biol. Chem. 285 (47), 36945-36957 (2010).</li>
<li>Blurton-Jones, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+improve+cognition+via+BDNF+in+a+transgenic+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells improve cognition via BDNF in a transgenic model of Alzheimer disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (32), 13594-13599 (2009).</li>
<li>Stalder, M., Deller, T., Staufenbiel, M., Jucker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D-Reconstruction+of+microglia+and+amyloid+in+APP23+transgenic+mice%3A+no+evidence+of+intracellular+amyloid%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">3D-Reconstruction of microglia and amyloid in APP23 transgenic mice: no evidence of intracellular amyloid.</a> Neurobiol Aging. 22 (3), 427-434 (2001).</li>
<li>Leinenga, G., Götz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+ultrasound+removes+amyloid-%CE%B2+and+restores+memory+in+an+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Scanning ultrasound removes amyloid-β and restores memory in an Alzheimer's disease mouse model.</a> Sci Transl Med. 7 (278), 33(2015).</li>
<li>Liarski, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+distance+mapping+identifies+functional+T+follicular+helper+cells+in+inflamed+human+renal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Cell distance mapping identifies functional T follicular helper cells in inflamed human renal tissue.</a> Sci Transl Med. 6 (230), 46(2014).</li>
<li>Nichols, L., Pike, V. W., Cai, L., Innis, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+in+vivo+quantitation+of+beta-amyloid%3A+an+exemplary+biomarker+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Imaging and in vivo quantitation of beta-amyloid: an exemplary biomarker for Alzheimer's disease.</a> Biol Psychiatry. 59 (10), 940-947 (2006).</li>
<li>Skovronsky, D. M., Zhang, B., Kung, M. P., Kung, H. F., Trojanowski, J. Q., Lee, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+detection+of+amyloid+plaques+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In vivo detection of amyloid plaques in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (13), 7609-7614 (2000).</li>
<li>Lian, H., Litvinchuk, A., Chiang, A. C. -A., Aithmitti, N., Jankowsky, J. L., Zheng, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte-Microglia+Cross+Talk+through+Complement+Activation+Modulates+Amyloid+Pathology+in+Mouse+Models+of+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocyte-Microglia Cross Talk through Complement Activation Modulates Amyloid Pathology in Mouse Models of Alzheimer's Disease.</a> J Neurosci. 36 (2), 577-589 (2016).</li>
<li>Novotny, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+Synthetic+A%CE%B2+to+In+Vivo+Active+Seeds+and+Amyloid+Plaque+Formation+in+a+Hippocampal+Slice+Culture+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Conversion of Synthetic Aβ to In Vivo Active Seeds and Amyloid Plaque Formation in a Hippocampal Slice Culture Model.</a> J Neurosci. 36 (18), 5084-5093 (2016).</li>
<li>Tartaro, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fluorescence-based+in+vivo+phagocytosis+assay+to+measure+mononuclear+phagocyte+system+function+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">Development of a fluorescence-based in vivo phagocytosis assay to measure mononuclear phagocyte system function in the rat.</a> J Immunotoxicol. 12 (3), 239-246 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Biz mononükleer fagositler tarafından in vivo Aβ fagositoz gerçek 3D kantitatif için bu raporda tarif protokol spesifik hücresel ve hücre içi bölmelerin etiketleme yanı sıra Aβ mevduat dayanmaktadır. Özellikle, Iba1 (İyonize kalsiyum Adaptör molekülü 1. Bağlayıcı), hücre aktivasyonunun 18, 19 üzerine doğrudan membran kırışması oluşur ve fagositoz dahil olan bir proteinin, serebral mononükleer fagositler leke için kullanın. Iba1 + hücreleri, genellikle beyin ikamet mik...

Alzheimer hastalığı (AD), en sık yaşa bağlı dementia, 1 &quot;senil&quot; β-amiloid plaklarının kronik düşük seviyeli nöroenflamasyonun, tauopathy, nöronal kayıp, ve bilişsel bozukluk 2 gibi serebral amiloid-β (Aβ) birikimi ile karakterize edilir . AD hasta beyinlerinde, Nöroenflamasyon astrositler ve mononükleer fagositler reaktif tarafından tahsis edilir çevreleyen Aβ mevduat 3 (onların periferik kökenli belirsizdir vs merkezi olmasına rağmen, mikroglia olarak anılacaktır). MSS doğuştan gelen bağışıklık gözcüler olarak, mikroglia merkezi beyin Aβ temizlemek için konumlandırılmış. Bununla birlikte, Aβ plaklara mikrogliyal alımları, eğer varsa, çok az Aβ fagositoz 4,5 eşlik eder. Bir hipotez mikroglia Aβ küçük meclisleri phagocytozing başlangıçta nöro-koruyucu olmasıdır. Ancak, sonunda bu hücrelerin ezici Aβ yükü ve / veya yaşa bağlı fonksiyonel d gibi nörotoksik haleecline, nörotoksisite ve bilişsel gerileme 6 katkıda işlevsiz bir proinflamatuar fenotip içine mikroglia kışkırtır. Son genom Derneği Çalışmaları (GWAS) fagositoz 8-11 modüle çekirdek doğuştan gelen bağışıklık yolların 7 ait AD risk allelleri bir küme belirledik. Sonuç olarak, serebral amiloid birikimi bağışıklık tepkisi AD etiyolojisinin daha iyi anlaşılması açısından ve yeni tedavi yaklaşımları 12-14 geliştirmek için hem ilgi önemli bir alan haline gelmiştir. Bununla birlikte, in vivo koşullarında Aβ fagositoz değerlendirmek için yöntem için önemli bir ihtiyaç vardır. Bu karşılanmamış gereksinimi karşılamak için, Alzheimer-benzeri hastalığının kemirgen modellerinde mononükleer fagositler tarafından serebral Aβ fagositoz gerçek 3D kantitatif sağlamak için silikon modelleme (q3DISM) &#39;de niceliksel 3D geliştirdik. Onlar, hayvan modelleri hastalığı recapitulate ölçüde sadece sınırlıAD pathoetiology anlaşılması için ve deneysel terapötik maddelerin değerlendirilmesi için çok değerli kanıtlanmıştır. Presenilin (PS) ve Amiloid Prekürsör Protein (APP) genlerindeki mutasyonlar, bağımsız bir otozomal baskın AH nedeni olduğu gerçeği nedeniyle, bu mutan transgenler yoğun transjenik rodent modelleri oluşturmak için kullanılmıştır. Transgenik APP / PS1 fareler aynı anda &quot;İsveç&quot; mutant insan APP (APPswe) ve hızlandırılmış serebral amiloidoz ve nöro 15,16 ile mevcut Δ ekson 9 mutant insan presenilin 1 (PS1ΔE9) coexpressing. Ayrıca, biz (bir Fischer 344 arka plan üzerinde çizgi TgF344-AD) APP swe ve PS1ΔE9 yapıları ile birlikte enjekte bi-transgenik fareler yarattı. Serebral amiloidoz transgenik fare modellerinde farklı olarak, TgF344-AD sıçan tauopathy, nöronların apoptotik kaybı ve davranış bozukluğu 17 önce gelen serebral amiloid geliştirme. Bu yazıda imm için bir protokol açıklarAPP / PS1 fareler ve TgF344-AD sıçan ve büyük z boyutlu eş odaklı görüntü edinme beyin bölümlerinde mikroglia fagolizozomları ve Aβ mevduat unostaining. Siliko üretimi ve mikroglial fagolizozomları içine Aβ alımının kantitatif izin konfokal veri setlerinden gerçek 3D rekonstrüksiyon analizinde Biz ayrıntı. Daha genel olarak, burada ayrıntılı metodoloji in vivo fagositoz hemen hemen herhangi bir şekilde ölçmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Isofluran</td><td>Abbott</td><td>NDC 0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makası</td><td>VWR</td><td>82027-582</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon makası Künt uç</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>VWR</td><td>94024-408</td><td></td></tr><tr><td>23 G iğne</td><td>VWR</td><td>BD305145</td><td></td></tr><tr><td>peristaltik pompa FH10</td><td>Thermo Scientific</td><td>72-310-010</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>Bioland Scientific</td><td>PBS01-02</td><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Tuz; Çalışma konsantrasyonu 1x</td></tr><tr><td>Yetişkin Fare Beyin Matrisi, Koronal dilimler, Paslanmaz Çelik 1 mm &nbsp;</td><td>Kent Scientific</td><td>RBMS-200C</td><td></td></tr><tr><td>Yetişkin Sıçan Beyin Matrisi, Koronal dilimler, Paslanmaz Çelik 1 mm&nbsp;</td><td>Kent Bilimsel</td><td>RBMS-305C&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>%32 Paraformaldehit sulu çözelti (PFA)</td><td>EMS</td><td>15714-S</td><td>Dikkat: Toksik. Çalışma konsantrasyonu: PBS</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>89125-188'de</td>% 4 <td>Çeşitli konsantrasyonlar, protokole bakınız</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Uni-kasetler Sakura</td><td>VWR</td><td>25608-774</td><td></td></tr><tr><td>Gömme ve Sızma Parafin</td><td>VWR</td><td>15147-839</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom Leica RM2125</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Mikrotom Bıçakları&nbsp;</td><td>VWR</td><td>25608-964</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu Leica HI 1210</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro slayt Superfrost plus</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056-4X4L</td><td>Dikkat: Toksik&nbsp;</td></tr><tr><td>Hedef Alma Çözümü 10x</td><td>DAKO</td><td>S1699</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1x</td></tr><tr><td>KimWipes</td><td>VWR</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>Hidrofobik PAP kalemi</td><td>VWR</td><td>95025-252</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97062-208</td><td></td></tr><tr><td>Normal Eşek Serumu (NDS)</td><td>Jackson Immuno</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>VWR</td><td>48393081</td><td></td></tr><tr>DAPI <td>Life Technologies</td><td>P36935</td><td></td>Cam Sürgülü Raf VWR 100492-942<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Iba1 antikoru (poliklonal, tavşan)</td><td></td> ile Altın antifade reaktifini uzatın<td>;</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>Iba1 antikoru (poliklonal, keçi)</td><td>LifeSpan Bioscience</td><td>LS-B2645</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>sıçan CD68 [KP1] antikoru (monoklonal, fare)</td><td>Abcam</td><td>ab955</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>fare CD68 [FA-11] antikor (monoklonal, sıçan)</td><td>Abcam</td><td>ab53444</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>fare CD107a (LAMP1) antikoru (monoklonal, sıçan)</td><td>Affymetrix</td><td>14-1071</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:100</td></tr><tr><td>Beta-Amiloid, 17 - 24 (4G8) antikor (monoklonal, fare)</td><td>Covance</td><td>SIG-39220</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>Beta-Amiloid, 1 - 16 (6E10) antikor (monoklonal, fare)</td><td>Covance</td><td>SIG-39320</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:200</td></tr><tr><td>OC antikoru (poliklonal, tavşan)</td><td>D. H. Cribbs ve C. G. Glabe (UC Irvine) tarafından hediye edildiÇalışma</td> <td>konsantrasyonu 1:200</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 fare ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-11001</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1: 1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 sıçan ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-11006</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1: 1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 tavşan ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-11037</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1: 1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 keçi ikincil antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-11080</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 fare sekonder antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-21235</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:1.000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 tavşan sekonder antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A-21443</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:1.000</td></tr><tr><td>Daldırma yağı</td><td>Nikon&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A1 Konfokal mikroskop</td><td>Nikon&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements Gelişmiş Araştırma yazılımı</td><td>Nikon&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris:Bitplane yazılım versiyonu 7.6</td><td>Bitplane</td><td></td><td>"coloc" ve "supass" modülleri kullanılmaktadır. Alternatif olarak, açık kaynaklı ücretsiz yazılım&nbsp; ImageJ birlikte yerelleştirme için kullanılabilir&nbsp; Konfokal Z-Stacks veri kümelerinin analizi.</td></tr></tbody></table>

kantitatif 3d siliko modelleme (q3dism)

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

Nöroenflamasyon şimdi nörodejeneratif hastalık önemli bir etyolojik faktör olarak kabul edilmektedir. Mononükleer fagositler fagositoz ve enkaz ve döküntü temizlenmesi için sorumlu doğuştan gelen bağışıklık hücreleridir. Bu hücreler, çevreden süzücü mikroglia olarak bilinen merkezi sinir sistemi yerleşik makrofajlar ve mononükleer fagositler bulunmaktadır. Işık mikroskobu genellikle kemirgen ya da insan beyni örneklerinde fagositoz görselleştirmek için kullanılır olmuştur. Ancak, kalitatif yöntemler in vivo fagositoz kesin delil değil. Burada, silikon modelleme (q3DISM), kemirgen Alzheimer hastalığı (AD), bir model mononükleer fagositler tarafından amiloid-β (Aβ) fagositoz gerçek 3D niceliğinin belirlenmesine olanak sağlam bir yöntem kantitatif 3D açıklar. yöntem, floresan Aβ kemirgen beyin bölümlerinde fagolizozomları içinde kapsüllenmiş visualising içerir. Büyük z-boyutlu konfokal veri setleri daha sonra 3D A &amp; miktarının belirlenmesi için yeniden inşa edilir# 946; mekansal phagolysosome içinde kolokalize. Bu fare ve sıçan beynine q3DISM başarılı bir uygulama göstermektedir, ancak bu yöntem herhangi bir dokuda hemen hemen herhangi bir fagositik etkinlik için uzatılabilir.

Q3DISM yukarıda ayrıntıları için çok-aşamalı bir yöntem kullanarak, APP / PS1 farelerde (Şekil 1) ve TgF344 AD farelerde (Şekil 2) beyinlerinde monosit fagolizozomları halinde Aβ alımını ölçmek mümkündür. Bu nedenle, q3DISM yöntemi AD fare ve sıçan modellerinde mononükleer fagositler analizi sağladı. İlginç bir şekilde, CD68 + fagolizozomları tarafından işgal edilen hacim miktarı hem APP / PS1 fareleri (Şekil 1B, C) ve TgF344 ...

Alzheimer hastalığı, kemirgen modellerinde mononükleer fagositler tarafından serebral amiloid-β (Aβ) fagositoz silikon modelleme (q3DISM) nicel 3D için bir yöntem geliştirdi. Bu yöntem, in vivo olarak hemen her fagositik olayın kantitatif için genelleştirilebilir.

kantitatif 3D Siliko Modelleme (q3DISM)

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

Bu kantitatif 3 boyutlu in silico modellemenin veya q3DISM tekniğinin genel amacı, Alzheimer hastalığının kemirgen modellerinin beyinlerindeki mononükleer fagositler tarafından amiloid-beta alımını ölçmektir. Bu yöntem, Alzheimer hastalarının beyinlerinde biriken ve yaşlılık plakları oluşturan amiloid-beta'nın klirensini ölçmek için Alzheimer araştırmaları alanında acil bir ihtiyacı karşılamaktadır. İlk kez, bu teknik, in vivo makrofajlar tarafından amiloid-beta'nın gerçek 3 boyutlu rekonstrüksiyonunu ve kantitasyonunu mümkün kılıyor Amiloid-beta birikimini incelemek için işaretli 3-Dism'yi kullanmaya başladık çünkü mikrofaj fagositozunu in vivo olarak görselleştirmek ve ölçmek için sağlam bir araca ihtiyacımız vardı.Bu teknik, hangi ilaçların amiloid-beta'nın etkili bir şekilde temizlenmesi için makrofajları uyardığını değerlendirmek için deneysel Alzheimer hastalığı terapötiklerinin test edilmesinde yararlı olabilir. Doku örnekleri immün boyama için hazır olduğunda, hidrofobik bariyer kalemle çevrili doku bölgesini, nemlendirilmiş bir odada oda sıcaklığında bir saatlik bir inkübasyon için bloke edici tampon ile doldurun. İnkübasyonun sonunda, blokaj tamponunu, nemlendirilmiş odad

quantitative-3d-silico-modeling-q3dism-cerebral-amyloid-beta

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

AD patolojik özelliklerinden biri Amiloid β proteini pozitif nöritik plakların oluşumu. Immünohistokimyasal algılama thioflavin G boyama yöntemi kullanılarak ABC ve DAB yöntem ve floresan tespiti: Bu protokolde, transgenik AD modeli fareler nöritik plaklar tespit etmek için iki yöntem açıklanmaktadır.

Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama

Bu video, Alzheimer hastalığının bir fare modelini oluşturmak için amiloid beta'nın dentat girusa kesin stereotaksik infüzyonunu göstermektedir. Amiloid beta proteinlerinin doğru koordinat tayini ve kontrollü iletimi, nöronal bozulmaya neden olur, hafıza işlemeyi bozar ve Alzheimer hastalığının gelişimine katkıda bulunur.

Bir Alzheimer Hastalığı Modeli için Amiloid-Beta Proteinlerinin Doğrudan Stereotaksik Beyin İnfüzyonu

Kaynak: Arango-Lievano, M. et. al., Serebrovasküler Sistemin Uzunlamasına İn Vivo Görüntülemesi: CNS Hastalıklarıyla İlgisi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, floresan etiketli amiloid plaklarını ve serebral vaskülatürü görselleştirmek için in vivo iki fotonlu görüntülemeyi göstermektedir. Mavi floresan plakları işaretlerken, yeşil floresan serebral kan damarlarını vurgular. İlgilenilen bölgenin 3 boyutlu haritası ve yüksek çözünürlüklü mozaik görüntüleme, amiloid plaklarının beyin damarları ile...

Alzheimer Hastalığı Fare Modelinde Serebral Damarların ve Amiloid Plaklarının İn Vivo Görüntülenmesi

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Bu makalede, kan-beyin bariyerini geçer ve seçici olarak p-kıvrımh için yoğun bir çekirdek Aβ plaklarda bulunan yaprak bağlanan metoksi-x04 kullanarak Alzheimer hastalığı fare modellerinde amiloid Aβ plaklar görselleştirmek için bir protokol açıklamaktadır. Bu elektron mikroskobu için immün ve işleme öncesinde plak içeren doku kesitlerinde önceden tarama sağlar.

Bağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu β-amiloid plaklarının ile Mikroglial Etkileşimleri Eğitim için

Moleküler görüntüleme matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma tabanlı görüntüleme kütle spektrometresi (maldı-IMS) ile birden çok analitler eş zamanlı haritalama biyolojik örnekleri sağlar. Burada, Alzheimer hastalığı ve serebral amiloid angiopathy örnekleri maldı-IMS kullanarak beyin dokuları algılama ve görselleştirme amiloid β protein için bir iletişim kuralı mevcut.

Amiloid β mevduat matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi Imaging ile insan beynindeki görselleştirme

Bu protokol, hücreleri hareketsiz etmek için aljinat hızlı fiziksel jelleşme tarafından bir hücre kapsülleme yöntemi gösterilmektedir. Elde edilen mikroboncuk zaman içinde amiloid-β kontrollü ve sürekli salgılanmasını sağlar ve salgılanan amiloid-β in vitro ve in vivo modellerde etkilerini incelemek için kullanılabilir.

Alzheimer hastalığının modellenmesi için amiloid-β-salgıcı alginat Mikroboncuk imalatı

Mevcut protokol, Alzheimer hastalığının APP / PS1 transgenik fare modelinde amiloid-beta yükünü ölçmek için sagital fare beyin bölümlerinin tam bölge veya alt bölge analizini gerçekleştirme prosedürünü açıklar ve karşılaştırır.

Fare Beyin Bölümlerinde Amiloid-Beta Yükünün Tam ve Alt Bölgesel Nicelleştirilmesi

Burada, mitokondri ile ilişkili endoplazmik retikulum (ER) membranlarının (MAM'lar) yapısal stabilizatörlerinin aksonal taşıma hızını, Alzheimer hastalığı (AD) nöronlarından nörotoksik β-amiloid (Aβ) üretimini gerçek zamanlı olarak artırarak veya sürdürerek MAM stabilizasyonunu ölçmek ve AD terapötiklerinin geliştirilmesine yardımcı olmak için doğrudan ve kantitatif bir metrik olarak hizmet etmeyi açıklıyoruz.

Alzheimer Hastalığının (AD) Nöral Modelinde Mitokondri ile İlişkili Endoplazmik Retikulum Membranı (MAM) Stabilizasyonunun Kantitatif Analizi 

Alzheimer hastalığı olan hastalarda tanıma belleği görev yaparken, yüksek yoğunluklu bir olay ile ilgili olası veri toplanması için metodolojinin gözden geçirilir. Bu protokol konu hazırlama, kalite güvencesi, veri toplama ve veri analizi içerecektir.

Alzheimer hastalığı olan hastalarda olaya ilişkin potansiyeller kullanarak Episodik Bellek Özellikleri incelenmesi

Öğrenin, q3DISM tekniği ile Alzheimer hastalığı fare ve sıçan modellerinde mononükleer fagositlerin amiloid-beta fagositozunu üç boyutlu olarak nasıl niceliksel analiz edeceğinizi. Bu yöntem, terapötik ajanların etkinliğini değerlendirmede kritik bir araç sunar.

kantitatif 3D Siliko Modelleme (q3DISM)

Daha fazla video keşfet