Name: Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Öğrenin portal ven enjeksiyonu yöntemiyle meme kanserinin karaciğer metastazını fare modellerinde incelemeyi. Bu teknik, immün yetkin ortamda metastaz kademelerini araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, video protokolünün çekimi sırasında cerrahi prosedürlere yardımcı olduğu için Alexandra Quackenbush'a, histolojik destek için Hadley Holden'a, yöntem geliştirme sırasında tümör ve karaciğer patolojisi hakkında girdi sağladığı için Sonali Jindal'a ve makalenin eleştirel incelemesi için Breanna Caruso'ya teşekkür eder. D2A1 ve D2.OR meme tümör hücreleri Dr. Ann Chambers'ın hediyesiydi, D2A1-GFP tümör hücreleri Dr. Jeffrey Green'in hediyesiydi ve 4T1 tümör hücreleri Dr. Heide Ford'un hediyesiydi. Görüntüleme için Jungers Center'daki OHSU İleri Işık Mikroskobu Çekirdeği kullanıldı. Bu yazıda yer alan çalışma, NIH/NCI, NRSA F31CA186524 (ETG'ye) ve NIH/NCI 5R01CA169175'ten (PS'ye) sağlanan finansmanı içerir.

Bu makaledeki tüm hayvan prosedürleri gözden geçirilecek ve Oregon Sağlık ve Bilim Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Cerrahi Alan ve Araçların 1. Hazırlık <ol><li> 30 dakika boyunca 124 ° C&#39;de otoklav ile makas, forseps ve hemostat hazırlayın, 1 - planlanmış ameliyatları 2 gün önce. ameliyat sonrası iyileşme için otoklavlanmış ya da steril yatak, kafesleri ve gıda erişimi sağlayın. </li><li> tercihen bir laminer akış kaputu, aseptik cerrahi zemin hazırlayın. <ol><li> o yapılırken ısıtma yastığı, ışık kaynağı, anestezi boru ve burun konisi ve cerrahi işlem yakın olacak cerrahi seti başka bir bölümünde de dahil olmak üzere,% 10 çamaşır suyu ile cerrahi alan tüm yüzeyleri silin . </li><li> aseptik cerrahi alanda, steril örtü, ışık kaynağı, anestezi boru ve roket ucu konisi, insülin şırınga ile temizlenir ısıtma yastığı yerleştirin1 ml şırınga, bupivakain, suni gözyaşı, steril tuzlu su, 2 x 2 &quot;steril gazlı bez sünger, 4 x 4&quot; steril gazlı bez, 0.5 içine hemostatik gazlı bez kesme - 1 cm 2 adet, makas, forseps, hemostat, 4-0 vikril sütür bir otoklava kapta konik bir iğne ve 50 mi% 2 klorheksidin glukonat ile. </li><li> buz üzerinde depolanan hazırlanan tümör hücreleri için bu alanda bir oda var olduğundan emin olun. </li><li> Cerrahi alanına bitişik bankta, steril yatak ile ikinci bir ısıtma yastığı ve temiz kafesleri ile kurtarma alanında hazırlar. NOT: Böyle bir boncuk sterilizatör gibi bu alanda Ayrıca ev öğeler. </li></ol></li></ol> 2. Portal Ven Enjeksiyon <ol><li> ağrı tedavisi için subkutan 0.015 mg / ml buprenorfin, 100 ul ile 15 hafta, - Planlanan enjeksiyonlar One-saat önce, 8 yaşındaki Balb / c dişi fareler davranın. Not: Bu, enjeksiyon protokolü, uygun kullanılarak, herhangi bir yaşta dişi ya da erkek bir fare herhangi bir suşunun tatbik edilebilirsuşu değişiklikler için hücre çizgileri. </li><li> hücre hattı veya seçim tümör eksplant için protokollere dayalı enjeksiyon için tümör hücrelerini hazırlayın. hayvan koloni bu tür patojenlerin sokulması riskini azaltmak için, murin patojenlerin varlığının uygulamadan önce tüm tümör hücre hatları test edin. <ol><li> 3 gün enjeksiyondan önce 10 cm doku kültür plakasına D2A1, D2.OR ve 4T1 tümör hücreleri, çözülme hücreleri de dahil olmak üzere genetik olarak özdeş Balb / c, tümör hücresi hatları için, aşağıdaki gün hücreler, 90 olduğu -% 100 konfluansa. </li><li> bir kez 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ve 5 dakika için 37 ° C &#39;de% 0.05 tripsin 2 ml kullanılarak konfluent tümör hücrelerini trypsinize ile 1 gün, aşağıdaki tümör hücresi çözülme yıkama hücreleri. tam ortam 10 ml taze 10 cm tabak içine 8 tam ortam ml (DMEM yüksek glükoz,% 10 fetal bovin serumu, 2 mM L-glutamin, ve 1 x penisilin / streptomisin) ve geçiş 01:10 ekleyin. </li><li> enjeksiyonu gününde, 1 x PBS ve t ile bir kez yıkama hücreleriyukarıda tarif edildiği gibi rypsinize. </li><li> 1500 xg&#39;de tam ortam, 5 dakika boyunca bir dönüş 8 ml tripsinize hücrelerin tekrar PBS 1X 5 ml ortam ve tekrar süspansiyon çıkarın. </li><li> canlılık değerlendirmesi için tripan mavisi dışlama kullanarak hemasitometre hücreleri saymak. önceden belirlenmiş bir konsantrasyon ve hacimde 1x PBS içinde enjeksiyon için tekrar süspansiyon hücreleri. NOT: 5 - küçük enjeksiyon hacimleri karaciğer gereksiz zarar görmesini önlemek olarak 10 ul tavsiye edilir. </li><li> enjeksiyonlar süresince hücreleri buz üzerinde tutun. enjeksiyonu tamamlandıktan sonra, canlılığı sağlamak için 1 gün için tam ortam kültür içinde laboratuara hücre örneği dönüp yerleştirin. </li></ol></li><li> oksijen içinde verilen% 2.5 izofluran (2-kloro-2- (diflorometoksi) -1,1,1-trifloro-etan) - 2 anestezi altında fare yerleştirin. ısıtma yastığı kullanılarak vücut ısısını korumak. Bir ayak tutam bir tepki değerlendirerek tam anesthetization olun ve ardından anestezi bakımı% 2.5 izofluran - 2 de sia. NOT: oranını nefes hayvanları izlemek ve prosedür boyunca buna göre izofluran akış hızını ayarlamak için önemlidir. </li><li> cerrahi işlem sırasında gözlerin aşırı kurumasını önlemek için her gözün üzerinde yapay gözyaşı ya da veteriner merhem küçük bir miktar koyun. </li><li> maruz karın ile sırt üstü, bir yatar pozisyonda fare yerleştirin. </li><li> Kimyasal tüy dökücü ile bölgeyi silerek 4. inguinal meme bezi meme başı aşağı, ikinci kaburga uzaydan kemirgen ventral sol tarafındaki saç çıkarın. 2 dakika sonra gazlı bez ve H 2 O Bu adım 1 yapılabilir tamamen kaldırmak - - sayısız ameliyatları planlanan eğer zaman kazanmak için 2 gün önceden epilasyon 1 için oturup bekleyin. </li><li> (% 2 klorheksidin emdirilmiş) bir 2 x 2 &quot;steril gazlı bez sünger alın ve epilasyon yerinde fare silin. Tüm çevredeki sterilize, kuyruk dahil, bakteri cont en aza indirmek içinaraçların aminasyon. </li><li> epilasyon siteyi ve alkol hazırlık ped ile aşağı çevredeki silin. </li><li> Üç% 2 klorheksidin ve iki alkol hazırlık pad yıkar toplam aşağı silin% 2 klorheksidin ve alkol adımlarını bir kez daha tekrarlayın ve bir final klorheksidin ile bitirmek. Nihai Klorheksidin kimyasal iç organlara alma klorheksidin önlemek için cerrahi site çevresinde damlayan olmadığını böyle silme etmeyin. NOT: klorheksidin ve alkol cilde ve çevresindeki kürk büyük miktarda Uygulama vücut sıcaklığında önemli bir düşüşe neden olabilir. adımlarda 2.7-2.9 sırasında aşırı hacmi ile silmeyin. bir ısıtma yastığı ile vücut ısısını korumak. </li><li> steril eldiven ve steril bıçak ile bir steril neşter kullanılarak, farenin sol tarafındaki medyan ve sagital düzlemleri arasındaki deri içine tek bir 1-inç kesi yapmak, kaburgaların alt başlayan ve sadece dördüncü inguinal düzlemi üzerinde biten meme bezi emzik. </li><li> otoklav veya boncuk sterilize makas ve forseps kullanarak, periton içine benzer bir 1-inç kesi yapmak. meme yağ yastığı içine kesme önlemek ve bağırsaklar, karaciğer, ya da diyafram kesmek için değil emin olun. </li><li> iç organlar gazlı bez yerleştirilir ve çevresindeki deri veya cerrahi alana temas edilemeyeceğine şekilde kesi yapıldı fare, sol tarafında steril serum fizyolojik ile ıslatılmış 4 x 4 &quot;gazlı bez yerleştirin. </li><li> Tümör hücreleri, fare hazırlanması sırasında yerleşmek gibi yukarı pipetleme ve birkaç kez aşağı tümör hücrelerini hazırlayın. Tümör hücreleri ile bir 25 ul çıkarılabilir bir iğne şırınga ve 32-gauge iğne hazırlayın. Tümör hücreleri, iğnenin ucunda ve piston enjeksiyon için uygun bir hacimde kadar şırınga itin; hava kabarcıklarının enjekte etmekten kaçınmak. </li><li> Herhangi bir harici tümör hücreleri çıkarmak için steril alkol ped iğnenin dışında silin. iğne batmasından kaçınmak için dikkatli kullanın. </li><li> medyan sid tutunkenara forseps ile cilt ve periton astar dahil kesi, e ve dikkatle steril tuzlu su ile ıslatılmış steril gazlı bez üzerine yerleştirerek, büyük ve küçük bağırsakları dışarı çekmek için steril bir pamuklu bir bez kullanın. portal ven görülünceye kadar büyük ve küçük bağırsakları dışarı çekin. </li><li> İç nem ve sterilite korumak için tuzlu batırılmış gazlı bez iç organları örtün. </li><li> Ayrıca, steril eldiven giyme, bir asistan var steril bir pamuk ile yolumdan hafifçe tuzlu batırılmış gazlı bez sarılmış bağırsak tutun tam portal ven ortaya çıkarmak için bez uçlu. Ayrıca, kesi ortalama tarafında bir kenara doku tutmak için otoklava hemostat veya forseps kullanmak gerekli olabilir. </li><li> konik yukarı bakacak şekilde, bir açı &lt;ven 5 ° ~ karaciğer altına 10 mm portal ven içine 5 mm - tümör hücreleri ~ 3 yüklü iğne takın. Yavaşça tümör hücrelerini içeren tam bir hacim enjekte. Kan iğne h geçmiş akmasına izinbirkaç saniye boyunca ead damar dışına tümör hücrelerinin akışını geri önlemek için. Enjeksiyon sırasında damarda iğne hareket en aza indirir. Yine, iğne sopa önlemek için dikkatli kullanın. NOT: portal vende Görselleştirme tercih eğer ancak stereo mikroskop kullanılabilir, büyütme olmadan yapılır. </li><li> Aynı anda basınçla ven steril bir pamuk uçlu aplikatör yerleştirerek iğneyi çıkartın. Ven enjeksiyon sitesi üzerinden 1 cm 2 hemostatik gazlı bez - asistan hala bağırsak tutan bir kenara 0,5 tek parça yerleştirin. Not: Hemostatik tozu da protokol Bu adım için teşebbüs, ancak enjeksiyondan sonra venöz kan kaybını durdurulmasında etkili değildi. </li><li> 5 dakika boyunca steril bir pamuk uçlu aplikatör baskısı ile enjeksiyon yerinde hemostatik gazlı bez tutun. </li><li> dikkatle gazlı bez sopa eğer çevreleyen doku, steril küçük bir miktar için, hemostatik gazlı bez kaldırarak ven kapatılmasına değerlendirmeke salin emmek ve gazlı kaldırmak için kullanılabilir. </li><li> Kan kaybı, şu anda ortaya çıkarsa, ilave bir 5 dakika boyunca basıncı ile yerinde hemostatik gazlı bez ek parçası eklenir. kan akımı tamamen bittikten sonra, fare gazlı bez çıkarın. NOT: cerrahi işlem sırasında kan kaybı dikkatle fare ise kardiyak perfüzyon ile anestezi altında ötenazi gerekir değerlendirilir ve toplam izin verilen kan kaybı hacmi sağlanana veya aşıldığında (araştırmacının kurumsal inceleme kurulları için düzenleyici standart operasyon prosedürlerine göre) olmalıdır. </li><li> enjeksiyon bölgesinde enjeksiyon siteden ayrılmadan hiçbir kan, bozulmamış sayılır kez yavaşça karın boşluğuna iç organları yerleştirin. </li><li> periton astar ve sonra basit sürekli veya kesintili dikiş desen kullanarak steril 4-0 vicryl ve konik iğne ile cilt dikin. Tipik olarak, kesik kapatma 10-15 sütür gerektirir. </li><li> BUPI 100 ul enjektebir insülin şırıngası kullanılarak lokal ağrı yönetimi için kesi boyunca vacaine (5 mg / ml). Hidrasyon 26 gauge iğne ile 1 ml hava ile steril tuzlu su deri altından 0.5 mL enjekte edilir. tamamlamak için 25 dakika - Ameliyatlar 15 alır. </li><li> ameliyat boyunca steril koşullar korumak için, tüm araç ve gereçler eldivenli elleriyle de dahil olmak üzere fare ile temas sağlamak, temas önce uygun temizlenir. Mümkün kullanımlık steril malzemeler ve eldiven veya minimal kullanmak Nerede% 70 etanol solüsyonu veya% 10 çamaşır suyu çözümü temizlemek için. </li><li> Birden ameliyatları tek bir oturum için planlanmış ise steril gazlı bez, hemostatik tül 0.5 oyulmuş &quot;4 x 4, steril gazlı bez sünger&quot;, 2 x 2 taze steril örtü, insülin şırınga, 1 ml şırınga, steril serum fizyolojik ile ilk cerrahi alan yeniden - 1 cm 2 adet, konik iğne ile 4-0 vikril sütür ve% 2 Klorheksidin. ameliyatlar arasında makas, forseps ve hemostat boncuk sterilize ve izinyeterince önce yeniden kullanımı soğutmak için. </li></ol> Kemirgen Sağlık ve Bitiş noktası Analizleri İzleme 3. Kurtarma, <ol><li> cerrahi işlem tamamlandıktan sonra, 20 dakika en az yatak içermeyen, temiz kafeslerde kurtarma için bir ısıtma pedi üzerinde fareler korumak. anestezi uyanmak için 4 dakika - Fareler tipik olarak 2 alır. </li><li> tamamen anestezi iyileşene kadar diğer hayvanlarla-yerleşime co ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin. Hayvan sternum yatma kendini korumak için yeteneği kazanmış kadar bu bilinç kazanmak ise gözetimsiz bir hayvan bırakmak ve monitör yok. </li><li> ağrı yönetimi için en fazla 72 saat boyunca her 6-12 saatte aşağıdaki cerrahi, 0.1 mg / kg buprenorfini - farelere 0.05 ver. </li><li> onlar iyileşme sırasında bozulmadan kalmasını sağlamak için her gün sütürler kontrol edin. dikişler yalanlandı durumunda, kalan sütür kaldırmak ve yerine, anestezi altında fare yerleştirin. enfeksiyon ya da Inflamm halindetirme veteriner kadrosuna danışın. NOT: Enfeksiyon veya iltihaplanma bu protokol ile karşılaştı olmamıştır. </li><li> metastaz çalışmaları için, metastatik hastalığın dışa belirtileri de dahil olmak üzere gözlenen, ancak bunlarla sınırlı değildir kadar günlük sağlık kontrolleri gerçekleştirin: soluk gözleri ve kulakları&gt;% 10 kilo kaybı / kazancı, scruffiness, çevreye dikkat kaybı, karın ödem / assit, ya da bir kambur pozisyon. NOT: metastaz zaman çizelgesi iyi anlaşılmıştır kadar yeni bir hücre hattı veya hücre konsantrasyonu ile kullanım için bir model geliştirilirken Günlük kalp kontrolleri, özellikle önemlidir. </li><li> Çalışma son noktada, CO servikal dislokasyon 2 inhalasyon fareler euthanize. Not: araştırmacının gözetim komitesi tarafından onaylandı ötenazi alternatif yöntemler anestezi altında iken 1X PBS ile perfüzyon de dahil olmak üzere kullanılabilir. Karaciğer Perfüzyon 1x PBS th, portal ven cannulating inferior vena kava kırpma ve iterek yapılır1 / dak 4 ml hızında kaba karaciğer damar - 2 dakika kan ve lökosit dolaşan kaldırmak için. NOT: Bu çalışma, hücre çizgisi ve kullanılan konsantrasyona için uç bağlı olarak, belirgin karaciğer metastazı veya otopside anlaşılacaktır ya da olmayabilir. Mikrometastatik lezyonlar karaciğer histolojik analiz ile ortaya çıkabilecektir. Bitiş noktaları çalışma tasarımı göre değişir. </li><li> İlk safra kesesi kaldırarak makas ve forseps ile karaciğer Özü, ardından karaciğere üstün inferior vena kava kesti. vena kava, portal ven ve karaciğer aşağı hepatik arter yoluyla kesti. </li><li> yavaşça tüm karaciğer çıkarın ve 1x PBS içinde 5x yıkayın. </li><li> sol, sağ, orta ve kaudat lob içine karaciğer ayırın. </li><li> 48 saat boyunca% 10 nötr tamponlu formalin içine formalin düzeltme karaciğer, oda sıcaklığında çalkalandı. Proses konsantrasyonu ve ksilen artan alkoller bir dizi dokular; parafin sabit doku embed 71 </s&gt; Yukarı. NOT: Alternatif olarak, karaciğer optimum kesme sıcaklığı (OKT) formülü ile bir cryomold doku yerleştirerek ve% 95 etanol batık kuru buz pelet üzerinde dondurma ile ek dondurulmuş olabilir. <ol><li> Bir mikrotom kullanılarak, bir doku maç kafa boyutu ortaya öyle ki parafin doku bloğu bölünür. </li><li> Beş 4 mikron seri bölümleri kesmek, bu analiz için birinci basamağını oluşturan. </li><li> doku 250 mikron kesti, atık bu bölümleri atmak. </li><li> 250 mikron azından beş 4 mikron seri bölümleri bir ikinci seviyede kesip. </li><li> tüm karaciğerden bölüme Gerektiği kadar tekrarlayın. Hematoksilen ve eozin boyama her düzeyde ilk bölümü metastazı 72 değerlendirmek. NOT: ek dondurulmuş doku için bölümleri kesmek için bir Kriyostat kullanın. NOT: mikrometastatik hastalığın tespiti, tümör hücre spesifik boyama gerektirir. </li></ol></li><li> oturup tümör büyüme kesi de varsa çalışma fareler kaldırmake, bu enjeksiyonu takiben periton boşluğuna tümör hücre kaçağı belirttiği gibi. Not: Bu sorun gözlenmemiştir. </li></ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur ve rekabet eden herhangi bir mali çıkar beyan etmezler.

BALB / C fare modeli, kapı toplardamarı enjeksiyonu karıştırıcı çoklu organ metastazının yokluğunda karaciğerde ve tam bağışıklık yetkin konukçuda meme kanseri lezyonlarının çalışmasına izin verir. Bizim protokol doğrudan karaciğer 16,55,56 halinde tümör hücrelerinin enjeksiyonu için portal ven erişime izin daha önce yayınlanmış bir cerrahi prosedürlerin gelişmedir. Yaptığımız tek bir ilerleme anlamlı 10,000 tümör hücrelerini / enjeksiyon Â için ≥ 1 x 10 5 hücre / enjeksiyon aşağı 16,55,56 enjekte tümör hücrelerinin sayısını azaltmaktır. Biz de karaciğere meme kanseri metastazı çalışma için modelini genişletmiştir. Bu protokol kullanılarak, bilinen metastaz potansiyeli olan iki meme kanseri hücre çizgileri, daha pasif meme tümörü hücre çizgisinde daha kısa gecikme ile karaciğer metastazları geliştirir. Ayrıca, erken zaman noktalarında, tümör hücreleri tek ce tek veya küçük gruplar olarak karaciğer parankimi boyunca dağıtılanTümör hücresi enjeksiyonundan sonra LLS. karaciğerde-mikro metastatik ve açık metastatik hastalık gelişimine katkıda bulunan tüm fenotipleri - Model tümör hücre ekstravazasyonu, hücrenin hayatta kalması dinlenmesi ve çoğalması da dahil olmak üzere metastatik verimlilik soruları için hazırlanıyor. Çalışmaların başlatılması öncesinde portal ven enjeksiyon protokolünün sayısız yönlerini dikkate almak önemlidir. Dikkatle hücre hatları, hücre konsantrasyonu, toplam hücre sayısı ve daha küçük keşif çalışmalara dayalı ilgi son noktaları karar şiddetle tavsiye edilir. Ayrıca, bağışıklık yetkili ana ve genetik olarak özdeş hücre hatlarının kullanımı konak-tümör hücre etkileşimleri anlamak için büyük önem taşımaktadır. Ön hipofiz bezinden yeni geliştirilen &quot;parlayan kafa&quot; EGFP ifade fare ve lusiferaz eksojen eGFP ve lusiferaz ev sahipliği yanıtları ortadan kaldırmak için önemli bir araçtır, proteinler genellikle meme tümör hatları 75 etiketlemek için kullanılır </sup&gt;. &quot;Parlayan kafa&quot; fare ve genetik olarak özdeş kullanımı tümör hücreleri eGFP veya lusiferaz inflamatuar yanıtların endişesi olmadan İHK tarafından tek yaygın hücrelerin kolay tanımlama ve mikrometastatik odaklar kolaylaştıracaktır etiketlenmiş. Benzer şekilde, en az anti- veya ilaç tedavi rejimi yanlısı tümör etki sağlamak için dikkatle ağrı yönetimi stratejileri seçme şiddetle tavsiye edilir. Bu herhangi bir sonuç bulandırabilir olarak bu protokol kritik adımlar, oluşmaz enfeksiyon sağlamak için ameliyatları boyunca steril koşullar yakalamak yer alıyor. Iğnenin doğru tümör hücrelerinin karaciğer teslim edilmesini sağlamak portal vene yerleştirilmiş olması da önemlidir. Böyle Hindistan mürekkep gibi boyalar ile protokol Pratiği bu konuda yardımcı olacaktır. cilt insizyonu yerinde tümör büyümesi uygunsuz iğne yerleştirme oluştuğunu en iyi göstergesidir. Son olarak, portal ven kan kaybı yeterince kontrol edilmesi önemlidir ve suturi tamamen önce sona ererhayvan ng. hemostatik gazlı bez kullanımı büyük ölçüde enjeksiyonu takiben portal venden kontrolsüz kan kaybı riskini azaltır. Bizim ellerde nedeniyle portal ven aşağıdaki enjeksiyon kan kaybına usul ilgili mortalite hemostatik gazlı bez kullanımı ile farelerin% 2% 30 düşürülmüştür. Portal ven enjeksiyon modeli tam metastatik kaskad çoğaltma değil dikkat etmek önemlidir, ancak ekstravazasyon ve tümör büyümesinin aşağıdaki tümör hücresi ekstravazasyon, tümör hücre niş etkileşimleri çalışmaya sınırlıdır. hastalarda ortaya gibi doğru karaciğere tam metastatik kaskad çoğaltmak Modelleri, acilen ihtiyaç vardır. Portal ven enjeksiyon modeline üzerinde ek bir sınırlama hastalığın ilerlemesini 76,77 etki bilinen yara iyileşmesi, ana bilgisayar üzerinde cerrahi etkisi ile karıştırılmakta olmasıdır. kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli diğer enjeksiyon bir gelişmeyi temsil ederModeller intrakardiyak ve intrasplenik modelleri dahil olmak üzere karaciğer metastazı, çalışmak için. Özel olarak, kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli genellikle diğer dokularda birlikte metastazı ile sınırlıdır intrakardiyak modeli, daha hastalığın ilerlemesinin daha büyük bir aralık çalışma sağlar. intrasplenik modelde yapıldığı gibi Ayrıca, portal ven modeli, dalak uzaklaştırılarak karmaşık değildir. portal ven enjeksiyon modeli genel olarak karaciğer metastazı çalışma için yararlı bir araç ispat edebilir. Karaciğer metastazı&gt; özellikle yüksek pankreas kanserlerinde oranları (metastaz% 85&#39;i karaciğerde vardır), kolon ve rektum adenokarsinomların (&gt;% 70) yanı sıra mide ve yemek borusu ile (genel 30 adenokarsinomlarında metastaz en sık sitedir %) 1. Pankreas ve kolon adenokarsinomların kendiliğinden ve ortotopik primer tümör modelleri daha kolay karaciğer 78,79 metastaz rağmen, portal ven enjeksiyon modeli prov olabilirTümör hücrelerinin kontrollü teslimat olarak bu kanserlerin metastatik süreci anlamak için yararlı e tümör hücre geldikten sonra belirli zamanlarda, biyokimyasal, moleküler ve histolojik değerlendirmeler izin verir. Özet olarak, kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli meme kanseri uygun karaciğer metastazı modellerinde önemli bir gelişmeyi temsil eder, ve aynı zamanda, genel olarak, karaciğer metastazı alanına uygulanabilir.

Karaciğer için Meme Kanseri Metastaz Karaciğer, kemik ve akciğer 1-3 ile birlikte meme kanseri metastazı ortak bir sitedir. Meme kanserli hastalarda karaciğer metastazı 4,8 itibaren 15 ay 6-9 karaciğer metastazı aralıkları ile meme kanseri hastalarının ortalama yaşam olarak, çok kötü sonuçlar 4,5 bağımsız bir prognostik faktördür. Buna karşılık, akciğer veya kemik metastazı olan meme kanserli hastalarda 9 27.4 ay 8,9 ve 16,3 56 ay sırasıyla 8,10-12, medyan sağkalım oranlarına sahiptir. Metastaz Primer tümör tümör hücresi yayılması ile başlar ve nedeniyle organa 13-15 olan dolaşan tümör hücrelerinin tohumlama ve oluşumun hasta mortalite ile sona metastatik kaskad, şu şekilde de ifade çok aşamalı bir süreçtir. % 10 - metastaz Kemirgen modelleri metastatik kaskad sadece 0.02 ile son derece verimsiz olduğunu ortaya koymuşturaleni metastazı 16,17 kuran dolaşan tümör hücrelerinin. Metastatik verimsizlik biri büyük darboğaz anlayışı siteye özgü metastaz önemini vurgulayarak, metastatik nişler 18 olarak adlandırılan, ikincil siteler eşsiz doku mikroçevrelerde tarafından belirlenir. Metastatik niş nüks siteye özgü, ve kısmen, farklı hücre dışı matris proteinlerinin 19,20 birikimi, çeşitli bağışıklık hücre popülasyonlarının 21-23 infiltrasyonu ve çok sayıda sitokin düzensiz üretimi de dahil olmak üzere değiştirilmiş doku homeostazında ile karakterize edilir, kemokinler ve büyüme faktörleri 15,18,24,25. Böylece, doku spesifik metastatik niş bir anlayış metastatik hastalık hedef nasıl bir anlayış önce gelir. Ancak, karaciğer metastazı sağlam modeller eksiktir. Dahası, karaciğer metastazı geliştirilmiş modelleri meme kanserli hastalarda wi için yeni hedefler ve etkili tedaviler belirlenmesi için gerekli olacakinci karaciğer metastazları. Karaciğer için Meme Kanseri Metastaz Eğitim için Modeller kurulmuş Karaciğer immün sistemi baskılanmış farelerde insan kanser hücresi zenograftlarını dahil Şu anda mevcut modeller meme kanseri metastazı incelemek için. - / - Veya SCID bağışıklık sistemi zayıflamış sıçangil ana 26-29 Bu modeller, tipik olarak, MCF-7, MDA-MB-231 ve çıplak, Rag1 da çalışılmış insan göğüs kanseri hücre çizgileri kullanın. Ksenograft modelleri insan kaynaklı kanser hücre hatları içeren avantajı sağlamak, ancak metastaz 30-32 ve tedavi direnci 33-35 bağışıklık hücreleri için son takdir verilen, tam bağışıklık yetkili konakta metastaz çalışma çok önemlidir. Bağışıklık yetkili ana karaciğer meme kanseri metastazı çalışma modelleri ile ya da cerrahi olmayan memenin yağlı pedine sinjenik tümör hücreleri (örneğin, 4T1 ve D2A1 hücre çizgileri) ortotopik enjeksiyon arasında,primer tümör rezeksiyonu ve metastaz 36-38 sonraki değerlendirme. Notun, ortotopik nakli modelleri karaciğer metastazı oranı çok düşük ya da akciğer 39,40 gibi diğer metastatik sitelere göre varolmayan veya akciğer metastazı kurulduktan sonra karaciğere özgü metastaz 37,39 çalışma zorlaştıran oluşur . Spontan genetik olarak meme kanseri modellerinden tümör eksplantlannın sinjenik tümör hücreleri gibi naif ana meme yağ yumuşak dokusu içine yeniden enjekte edilebilir. Örneğin, son zamanlarda orthotopically wild tip hosts enjekte edildiğinde K14 Cre ecad f / f P53 f / f fareler, spontan tümörler hangi model invaziv lobüler meme kanseri, tümörleri geliştiği bildirilmiştir. Onlar 15 mm 2 ulaştıktan sonra bu tümörlerin cerrahi rezeksiyon ardından, farelerin% 18 karaciğer metastazı 40,41 ilerledi. Üçüncü bir yaklaşım karaciğer metastazı yararlı kullanımlarını modellemek içinGenetik olarak farelerde spontan metastazı. Bugüne kadar, hali hazırda karaciğere yayılmış meme kanseri metastazı spontane fare modelini raporları seyrektir. İstisnalar H19-Igf2 p53 fp / fp MMTV Cre Wap-Cre ve K14 Cre ecad f / f P53 dahil f karaciğer metastazı farelerin düşük bir yüzdesinde gelişir genetiği değiştirilmiş fare modelleri, f / 38,41- 43. Genetiği değiştirilmiş fare modelleri metastatik kaskad, güçlü ve klinik olarak anlamlı modelleri sağlayan tüm aşamalarında çalışma kolaylaştırmak Böylece, onlar yüzünden karaciğer metastazı 38 düşük oranlarda sınırlıdır. Çeşitli metastaz modelleri, primer tümörün ve intravasation tümör hücrelerinin yayılması dahil olmak üzere metastatik kaskad ilk adımları atlayabilir. Bu modeller ekstravazasyon ikincil sitelerde tümörlerin kurulması, metastatik kaskad sonraki adımlarda ilgili soruşturma izin verir. intracardiac enjeksiyon modeli aort yoluyla dolaşım sistemine tümör hücrelerini dağıtır sol ventrikül içine tümör hücrelerini sunar. Intrakardiyak enjeksiyon başarılı bir enjeksiyon onaylamak için hücreler enjeksiyon yerinde ya da lusiferaz biyolüminesans gibi diğer görüntüleme yöntemlerinin ultrasonografi eşliğinde görüntüleme etiketli gerektirir. Sol karıncık yoluyla tümör hücre enjeksiyonu diğer organlarda 44-48 arasında kemik, beyin, akciğer, ve / veya karaciğer metastazı, neden olabilir. Çünkü çoklu-organ metastazları, bu fareler sık ​​tam karaciğer içinde metastatik büyümeye araştırmak için etkilemediğini önce açık karaciğer metastazı gelişimine ötenazi gerekmektedir. önemli ölçüde multi-site metastaz gelişimini en aza indirir alternatif bir yaklaşım intrasplenik enjeksiyon modelidir. Intrasplenik enjeksiyon portal ven 49,50 haline superior mezenterik ven ile birleştiği splenik ven yoluyla tümör hücrelerini sunar. Hayvanlar outgr için izlenebilirkaraciğerde Metastazların owth diğer bölgelerde metastaz oluşumu çok düşük olduğu için, ve bunun bir sonucu olarak, hayvanın genel sağlık 49,50 korunur. Ancak, bir prosedür olduğunu etkileri bağışıklık fonksiyonu, intrasplenik modeli dalak tümörleri 49,50 önlemek için splenektomi gerektirdiğini dikkat etmek önemlidir. Örneğin, miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarı, dalak kaynaklanan ve iskemi 51,52 Aşağıdaki yara iyileşmesi sırasında fagositik ve proteolitik aktivitesi için sorumlu olan Ly6C + monosit alt-infiltrasyonu ile karakterize edilir. Splenektomi ile 52 yara iyileşmesi yardımcı monosit popülasyonlarında gözlenen azalma var. Bundan başka, splenektomi, özellikle dolaşım ve intra-tümör CCR2 + CD11b + Ly6C + monositik miyelo sayısında bir azalma ile, bir küçük hücreli dışı akciğer kanseri modelinde ana tümör büyümesini ve akciğer metastazları azaltmak için gösterilmiştirid hücreleri 53. Buna ek olarak, kolon kanseri hücrelerinin intrasplenik enjeksiyonunun ardından splenektomi mezenterik lenf düğümleri ve karaciğer metastazı 54 anti-tümör, doğal öldürücü hücrelerin azaltılmış seviyelerine yol açtı. Özetle, bu bulgular splenektomi metastatik hücre kaderi için daha sonraki sonuçları ile bağışıklık sisteminin rolünü ödün düşündürmektedir. Karaciğer Metastazı Portal Ven Enjeksiyon Modeli fareler nedeniyle çoklu organ metastaz için tehlikeye atmaz koşullar altında tam bağışıklık yetkili konakta karaciğere meme kanseri metastazı, araştırmak, bir portal ven enjeksiyon modeli geliştirilmiştir. Intraportal enjeksiyon modelleri kolorektal 55,56 ve melanoma 16 hücre çizgilerinin karaciğer metastazı çalışma önce kullanılmıştır; burada singeneik meme tümör hücre metastazı model intraportal enjeksiyon uygulamasını anlatmak. Bu model incelemek için kullanılabiliraçık lezyonlara meme kanseri hücre ekstravazasyon ve tohumlama, ölüm / çoğalması / dinlenmesi ile ilgili tümör hücre kaderini belirleyen ve akıbet de dahil olmak üzere metastatik kaskad sonraki aşamaları. Bu modelde, singeneik meme tümörü hücre çizgileri bağışıklık yetkin Balb / c dişi fare portal ven, dalak çıkartılmadan karaciğere ilk ve doğrudan doğruya tümör hücreleri sunan bir yöntem ile enjekte edilir. Bu modeli, istihdam edildi yüksekten düşüğe kendi metastatik yeteneği arasında değişen dört meme tümör hücre hatlarının kullanılmasını geliştirmek için: D2.OR, D2A1 ve 4T1 ve yeşil floresan protein (D2A1-GFP) ile etiketlenen D2A1 istihdam var tümör hücre enjeksiyonundan sonra zaman noktaları erken araştırmak. 4T1 spontan bir MMTV +, Balb / c dişi fare 36,37 ortaya çıkan ve meme yağ pedi birincil tümörlerin 39,57,58 gelen akciğer, karaciğer, beyin, kemiğe metastaz 410.4 tümöründen türetilmiş yüksek ölçüde metastatik hücre hattıdır. D2A1 tümör hücreleri werE ayrıca ilk D2 hiperplastik alveoler nodül hücresi transplantasyonundan sonra, bir Balb / c konakçıda ortaya çıkan kendiliğinden meme tümöründen türetilen, ve akciğer 59,60 birincil tümörden metastatik olduğu teyit edilir. Onlar birincil tümörü kaçış ve ikincil siteler varmak rağmen D2.OR tümör hücrelerinin nadiren uzak metastaz 60,61 kurmak, D2A1 hattına bir metastatik olmayan kardeş hattı ve. Buna ek olarak, non-steroid anti-enflamatuar ilaçlar (NSAID&#39;ler) sırasında ya da cerrahi müdahale sonrasında da dahil olmak üzere yaygın olarak kullanılan ağrı tedavisi ilaçların kullanımını önlemek için önemlidir. NSAID&#39;ler, belirli göğüs kanserlerinin 62-65 anti-tümör aktiviteye sahip olan ve NSAID bazı sınıfları potansiyel karaciğer metastazı çalışma ve karaciğer metastazı niş ödün, hepatotoksisite 66,67 riskini artırır. Dahası, çalışmalar yanlısı metastatik ext azaltarak, NSAID doğrudan doku mikro etkilediğini düşündürmektedirracellular matris proteinleri 68-C tenaskin ve fibriler kollajen 62,65. Seçenek olarak ise, bir opioid türevi buprenorfin kullanımı, opioidler, anti-tümör aktiviteye 70, çünkü kemirgen ağrı yönetimi 69 etkinliği ve delil olmaması için kullanılmıştır. karaciğer gereksiz zarar vermemek için 10 ul - Bu portal ven enjeksiyon modeli 5 küçük enjeksiyon hacimleri için optimize edilmiştir. modeli aynı zamanda küçük çaplı (≥ 32 ölçü) ve hemen işlem sırasında kan kaybını en aza indirmek için enjeksiyonu takiben hemostatik gazlı bez kullanımı ile iğneler içerecek şekilde optimize edilmiştir. Bu optimize edilmiş püskürtme parametrelerinin aksine, hücre sayıları hücre çizgisinin tümörijenik potansiyeline göre bireysel olarak belirlenmelidir. Ancak, uzun vadeli çalışmalar için / enjeksiyon ≤ 10,000 hücre başlayan tavsiye edilir. Örneğin kısa uç noktalara (örneğin, 24 saat enjeksiyon sonrası) çok daha tümör hücreleri (için,1 x 10 5 - garanti eğer 1 x 10 6) kullanılabilir. Özetle, burada açıklanan portal ven enjeksiyon modeli karaciğer, meme kanseri metastazı çalışma için yararlı bir araç temsil eder ve diğer karaciğer metastazı modellerinin sınırlamaları bir dizi circumvents. Bu model tümör hücre ekstravazasyonu, tohumlama, bağışıklık yetkili fare konaklarda yaşam, çoğalma ve uyuşukluk ve metastatik akıbet erken kaderi kararlarının çalışma kolaylaştırır.

<table><tbody><tr><td>1 ml Şırınga w / 26 gauge İğne</td><td>BD Şırınga</td><td></td><td>309597 Deri altı buprenorfin enjeksiyonu için; dikkatli kullanın, keskin</td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama Pedleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-669-62</td><td>Cerrahi insizyondan önce karın temizliği için</td></tr><tr><td>Çok Amaçlı Süngerler, Steril</td><td>Kendall</td><td>8044</td><td>4 "x 4", kalın ve ince bağırsakları korumak ve nemli tutmak için steril tuzlu suya batırılmış olarak kullanın cerrahi</td></tr><tr><td>Suni Gözyaşı</td><td>Rugby</td><td>370114</td><td>Mineral yağ %15, beyaz vazelin %83; Ameliyat sırasında gözleri korumak için kullanın</td></tr><tr><td>Buprenorfin HCl, 0.3 mg / ml</td><td>Mfg. Reckitt Benckiser tarafından</td><td>NDC-12496-0757-1</td><td>0.05 - 0.1 mg / kg vücut ağırlığında, 72 saat boyunca günde 1 - 2 kez, deri altına enjekte</td></tr> edilir <tr><td>Bupivakain HCl,% 0.5 (5 mg / ml)</td> <td>Mfg. Humira Inc</td><td>NDC-04091163-01</td> <td>tarafından% 0.5, ameliyattan hemen sonra 1x, 10 & mu; l insizyon bölgesinde deri altına enjekte edilir&nbsp;</td></tr><tr><td>anti-CD45 antikoru</td><td>BD Pharmingen</td><td>550539</td><td>Metastatik odakların tanımlanmasında lökositleri dışlamak için multipleks immünofloresan</td></tr><tr><td>kullanımı, Celox &trade; Hızlı Hemostatik Gazlı Bez</td><td>Medtrade Ürünleri Ltd</td><td>FG08839011</td><td>5 mm ve sup2 parçalar halinde kesin, enjeksiyonu takiben basınçla portal venden kan akışını durdurmak için kullanın Kimyasal</td></tr><tr><td>Tüy Dökücü</td><td></td><td></td><td>Cerrahi alandan tüyleri almak için kullanın; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Klorheksidin, %2 Çözelti</td><td>Vet One</td><td>1CHL008</td><td>Dikkatli kullanın, farenin mukoza zarlarına veya kulaklarına klorheksidin almayın</td></tr><tr><td>anti-CK18 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab53118</td><td>Metastatik odakları tanımlamak için multipleks immünofloresanda kullanın</td></tr><tr><td>Pamuk Uçlu Aplikatörler, Steril</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-114</td><td>6" Ahşap Şaft 2 adet / zarf</td></tr><tr><td>DMEM, Yüksek Glikozlu</td><td>HyClone</td><td>SH30243.01</td><td>D2A1, D2.OR ve 4T1 meme tümör hücre hatları ile kullanım için hücre kültürü ortamı tabanı</td></tr><tr><td>Kuru Cam Boncuk Sterilizatörü</td><td></td><td></td><td>Paslanmaz çelik aletleri sterilize etmek için ameliyatlar arasında kullanın, dikkatli kullanın, aşırı sıcak; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Etanol,% 70 çözelti</td><td></td><td></td><td>Dikkatli yanıcı kullanın; Cerrahi alanı gerektiği gibi temizlemek için kullanın; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>HyClone</td><td>SH30071.03</td><td>D2A1, D2.OR ve 4T1 meme tümör hücre hatları ile kullanım için hücre kültürü ortamı katkı maddesi, DMEM yüksek glikozlu Gazlı Bezde% 10'da kullanım</td></tr><tr><td>, Steril</td><td>Kendall</td><td>2146</td><td>2 "x 2", cerrahi insizyon öncesi karın temizliği için klorheksidin% 2 çözeltisine batırılmış kullanın</td></tr><tr><td>Anti-Yeşil Floresan Protein antikoru</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>BA0702</td><td>GFP etiketli D2A1 veya diğer meme tümör hücre dizileri için boyama için kullanın</td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM (100x)</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>D2A1, D2.OR ve 4T1 meme tümör hücre hatları ile kullanım için hücre kültürü ortamı katkı maddesi, DMEM yüksek glikozlu ısıtma yastığında 2 mM'de (1x) kullanın</td></tr><tr><td>, x 2 - 3</td><td></td><td></td><td>Ameliyat ve iyileşme sırasında vücut ısısını korumak için kullanın; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Hausser Scientific</td><td>1483</td><td>Hücre saymak için hücre kültüründe kullanım için</td></tr><tr><td>Hemostatik Forseps</td><td></td><td></td><td>Paslanmaz çelik; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>anti-Heppar-1 antikoru</td><td>Dako</td><td>M7158</td><td>Metastatik odakların tanımlanmasında hepatositleri dışlamak için multipleks immünofloresan kullanımı</td></tr><tr><td>İnsülin Şırıngası, 0.3 ml, 29 gauge</td><td>BD&nbsp; &nbsp;</td><td>324702</td><td>Sütür bölgesinde bupivakain enjeksiyonu için; Dikkatli, keskin</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Piramal</td><td>NDC-66794-017-25</td> %<td>2,5</td></tr> <tr><td>İzofluran Buharlaştırıcı</td><td>VetEquip VetEquip</td><td>911103</td><td>Dikkatli kullanın, anestezik gazları buharlaştırır</td></tr><tr><td>Işık Kaynağı</td><td></td><td></td><td>Cerrahi alanı görselleştirmek için kullanın; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Nötr tamponlu formalin, %10</td> <td>Anatech ve Tic. Ltd. Şti</td><td>135</td><td>Dikkatli kullanın, toksik; metastaz uç noktaları için bir doku sabitleyici olarak kullanın ve metastatik yükün histoloji ile değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>Opal&trade; 4 renkli fIHC kiti</td><td>PerkinElmer, Inc.</td><td>NEL794001KT</td><td>Fare karaciğerindeki metastazları tespit etmek için Heppar-1 / CD45 / CK18'in multipleks immünofloresan için kullanın</td></tr><tr><td>Ameliyat Makası</td><td></td><td></td><td>Paslanmaz çelik; Dikkatli kullanın, keskin; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td>D2A1, D2.OR ve 4T1 meme tümör hücre hatları ile kullanım için hücre kültürü ortamı katkı maddesi, DMEM'de 1x'te kullanın yüksek glikoz</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu Salin</td><td></td><td></td><td>Enjeksiyondan önce tümör hücrelerini yeniden askıya almak için 1x'te kullanın, çoklu tedarikçiler</td></tr><tr><td>Çıkarılabilir İğne Şırıngası, 25 & mu; l, Model 1702</td><td>Hamilton</td><td>7654-01</td><td>Portal ven enjeksiyonu için; Tümör hücresi yüklü iğnelerle çalışırken pariküler olarak dikkatli kullanın, iğne takıldığında keskin</td></tr><tr><td>Neşter sapı</td><td></td><td></td><td>Paslanmaz çelik; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Neşter bıçağı, # 15</td><td></td><td></td><td>Karbon çeliği, steril, boyut 15; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Küçük Hub Çıkarılabilir İğneler, 32 gauge</td><td>Hamilton</td><td>7803-04</td><td>Portal ven enjeksiyonu için, 1 "uzunluk, nokta stili 4, 12 derece; açılı, 33 ila 34 gauge yeniden kullanılabilir iğneler de kullanılabilir; Tümör hücresi yüklü iğneler, keskin</td></tr><tr><td>Sodyum Hipoklorit</td><td></td><td></td> ile çalışırken dikkatli <td>kullanın, aşındırıcı; Çalışma alanını ve yüzeyleri dezenfekte etmek için %10'da kullanın, birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Steril Salin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td>%0.9 NaCl çözeltisi; alternatif olarak, ev yapımı ve steril filtreli</td></tr><tr><td>olabilir Cerrahi Eldivenler, Steril</td><td></td><td></td><td>Çoklu tedarikçiler</td></tr><tr><td>Sütürler, Steril&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>J310H</td><td>4-0 27 "kaplamalı vicryl w / 22 mm 1/2c konik ethalloy iğnesi; Dikkatli kullanın, keskin</td></tr><tr><td>Masa Üstü Portatif Anestezi Makinesi</td><td>VetEquip</td><td>901801</td><td>Fare anestezisi için izofluran buharlaştırıcı ile kullanın</td></tr><tr><td>Başparmak Pansuman Forseps</td><td></td><td></td><td>Paslanmaz çelik, tırtıklı, körelmiş; birden fazla tedarikçi</td></tr><tr><td>Havlu Perdeleri, Steril ve nbsp;</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>18" x 26", ısıtma yastığını örtmek ve ameliyat sırasında steril bir çalışma alanı sağlamak için</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Life Technologies</td><td>T10282</td><td>Canlılığı değerlendirmek için hücre kültüründe kullanım için, 1x PBS</td></tr><tr><td>Tripsin/EDTA, %0.05 (1x)</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>Tümör hücrelerini doku kültürü plakalarından ayırmak için hücre kültüründe kullanım</td></tr></tbody></table>

bir portal ven enjeksiyon modeli karaciğer metastazı meme kanseri eğitim için

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Meme kanseri tüm dünyada kadınlarda kansere bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir. 15 ay - Karaciğer metastazı sadece 4.8 ortalama sağkalım oranları ile kötü sonuçlar meme kanseri metastazı olan olguların% 30 yukarı ve sonuçlar yer almaktadır. primer tümör hücresi xenograftlarının ve spontan tümör modelleri dahil olmak üzere meme kanseri metastazı Güncel kemirgen modelleri, nadiren karaciğer metastaz. Kalp ve intrasplenik enjeksiyon modelleri ancak bu modeller sayesinde enjeksiyon yerinde tümör büyümesini önlemek için dalağın çıkarılması eşlik eden ikincil site metastazı ile eleştirilmiştir veya tehlikeye bağışıklık yoluyla olabilir, karaciğer metastazı neden yoktur. gelişmiş karaciğer metastazı modelleri ihtiyacını, karaciğer geliştirildi öncelikle ve doğrudan tümör hücrelerini sunan fare portal ven enjeksiyon yöntemi çözmek için. Bu model diğer organ veya dalağın alınması eş zamanlı metastaz komplikasyon olmadan karaciğere tümör hücrelerini sunar. seçmekkan kaybının kontrol etmek için enjeksiyon yerinde 10 ul, ≥ 32 gauge iğne ve hemostatik gazlı bez - imized portal ven protokolü 5 küçük enjeksiyon hacimleri kullanır. metastatik potansiyelin test edildi değişen üç singeneik meme tümörü hatları kullanılarak Balb / c dişi fare portal damar enjeksiyonunu yaklaşımı; yüksek metastatik 4T1 hücreleri, orta metastatik D2A1 hücreleri ve düşük metastatik D2.OR hücreleri. daha az agresif D2.OR hattı için yüksek metastatik 4T1 ve D2A1 hatları ile karaciğer metastazlarının gelişimi için 40 gün ve&gt; 55 gün - 20 ~ bir gecikme ≤ 10.000 hücre / enjeksiyon sonuçlarının Konsantrasyonları. Bu model karaciğer, meme kanseri metastazı incelemek için önemli bir aracı temsil ve sık sık kolorektal ve pankreatik adenokarsinomlarında dahil karaciğer metastaz diğer kanserler için geçerli olabilir.

Tümör hücreleri, bir cerrahi prosedür vasıtasıyla karaciğer doğrudan teslim edildiği kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli, portal ven içine, tümör hücre enjeksiyonu sağlar. antiseptik koşullar altında, bir anestezi fare olarak, ~ 1 inç cerrahi kesi sadece dördüncü inguinal meme bezi emzik düzlemi üzerinde başlayan ve kaburgaların alt biten ortanca ve sagital düzlemleri arasındaki farenin sol tarafında yapılır . Büyük ve küçük bağırsak yavaşça portal ven (Şekil 1A) görselleştirme sağlamak için kesiden çekilir. portal ven ve başarılı içi portal enjeksiyonu doğru anatomik tanımlama çini mürekkebi veya benzeri bir boya enjeksiyon protokolü uygulayarak teyit edilebilir. Portal ven yoluyla doğru enjeksiyon karaciğer derhal ve özellikle teslim edilmesini mürekkep neden olur, ve (akciğer Hindistan mürekkep yayılması figu neden olmaz) 1B yeniden. Bundan başka, D2A1 fare meme tümörü GFP ile etiketlenmiş hücrelerin, tümör hücrelerinin dağılımı kullanarak ciğer karaciğer (Şekil 1C) portal damar enjeksiyonunu teslimi onaylama doksan dakika Enjeksiyondan belirgindir boyunca. Yüksek büyütmede 90 dakika sonrası enjeksiyon de, tümör hücreleri sinüzoidlerin içinde, yanı sıra portal ven kan karaciğer (Şekil 1C) girer portal üçlü yakın, karaciğer parankimi içinde bulunan ortaya çıkmaktadır. Bu veriler, aktif tümör hücre Ekstravazasyon 90 dakika sonrası tümör hücre enjeksiyonu meydana geldiğini ortaya koymaktadır. Birlikte ele alındığında bu veriler, kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli karaciğer ve akciğer enjeksiyon hacmi kayda değer taşıma boyunca dağıtılmış mürekkebi ya da tümör hücreleri ile karaciğere doğrudan enjeksiyon hacmi sağladığını teyit etmektedir. portal ven enjeksiyon modeline sağlamlığını değerlendirmek için, üç separsingeneik fare meme tümörü hücre çizgileri, yetişkin dişi Balb / c farelerinde test edilmiştir yedi. Bu meme tümör hatları meme yağ yastığı modelleri kendi karakterize davranışlarına göre ve son derece agresif ve metastatik 4T1 hücre hattı, daha az agresif metastatik D2A1 hattı ve düşük / non-metastatik D2.OR hattını içeren seçilmiş edildi 37,61,73 74. enjeksiyon başına 2.000 ve 10.000 hücre bu düşük hücre konsantrasyonları ile açık bir metastaz gelişimi için zaman içinde herhangi bir kayda değer farklar test edildi. bu çalışmalar için metastaz vekil belirteçleri karaciğer metastazlarının varlığı ya da yokluğu içi portal teslim onaylamak için karaciğer görsel değerlendirme ve diğer organlar tarafından teyit edildi, bunun üzerine otopsi, haklı damat eksikliği, solukluk ve kilo kaybı gibi kullanıldı . Bu veriler kısa metastaz sağkalım oranları gözlenmektedir olarak 4T1 ve D2A1 hücre hatları enjekte farelere kıyasla, daha agresif meme tümörü hatları temsil ettiği önceki raporlar teyitdaha az agresif D2.OR hattı (Şekil 2A) ile birlikte. Fareler 30 ~ tarafından 4T1 veya D2A1 tümör hücreleri geliştirdi aşikar karaciğer metastazı ile enjekte - 40 gün sonrası enjeksiyon ve D2.OR hücreleri enjekte tek bir fare vardı oysa bazı enjeksiyon sonrası (Şekil 2A) gibi erken 18 gün gibi metastaz gelişti 65 gün sonrası tümör hücre enjeksiyonu - 60 oldu çalışma sonunda, tarafından geliştirilen açık karaciğer metastazı. Metastaz sonra 250 mikron seviyelerinde karaciğer yoluyla kesit ve hematoksilen ve eozin (H &amp; E) boyanan kesitler (Şekil 2B-D) analiz ederek teyit edildi. fare karaciğerinde belirgin metastatik lezyonların tespitine ek olarak, portal ven modeli aynı zamanda ekstravazasyonu aşağıdaki tek hücre / hücre kümelerinin algılama ve mikro-metastatik lezyonların oluşumu dahil metastatik kademeli olarak daha önce olayları incelemek için kullanılabilir. Mültipleks immünofloresan boyama kullanıldıH &amp; E, küçük lezyonlar varlığını doğrulamak için yeterli değildir onlar, tek hücre ya da mikro-metastatik lezyonlar olarak mevcut olduğunda, karaciğerde 4T1, D2A1 ve D2.OR meme tümörü hücrelerinin tespit etmek. Şekil 3A, hepatosit işaretleyici Heppar-1 için pan-bağışıklık işaretleyici CD45 negatif, epitelyal keratin CK18 pozitif ve negatif tümör hücreleri D2A1 bir farazi mikrometastatik odağı olan temsili bir Balb / c fare karaciğer gösterir. Hepatositler de bu boyama panelinde Heppar-1 kullanımını gerektiren, CK18 için pozitif leke. Önemli bir not safra kanalı epiteli ve karaciğer progenitör hücreler özellikle periportal bölgeleri (Şekil 3A) değerlendirirken, tümör hücreleri ve safra yollarında arasındaki dikkatli ayrımı gerektiren, CK18 için olumlu leke olmasıdır. Bir alternatif gelişmiş yeşil floresan ile etiketlendi singeneik meme tümörü hatlarını kullanmak için immünofloresan tek yaygın hücreleri ve mikrometastatik odaklar tespit edilir multipleks içinprotein (EGFP) ve / veya lusiferaz ve etiket (Şekil 1C) IHC gerçekleştirin. Nedeniyle eGFP, lusiferaz, ve diğer proteinlerin bağışıklık kazandırma için, tür ön hipofiz bezi 75, yeni bağışıklık yetkin "parlayan kafa" eGFP ifade fare ve lusiferaz gibi, bu proteinlere tolerans kazandırma olan fare modelleri kullanmak esastır. Bu D2A1 tümörün olarak etiketlenmemiş singeneik hatlarının macrometastatic lezyonların tanımlanması için, CK18 / Heppar-1 / CD45 çoklu immünofloresan (Şekil 3B) idealdir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54903/54903fig1.jpg"> Şekil 1: Portal Ven Enjeksiyon Karaciğer Doğrudan Tümör Hücreleri sunar. A) kapı toplardamarı enjeksiyonu; Kesi dördüncü inguinal meme bezi emzik düzlemi üzerinde ve hemen ri altında biten, medyan ve sol sagital düzlemlerde arasında yapılırb kafes. PBS enjeksiyonu (solda) ile B) Balb / c karaciğer. portal ven yoluyla çini mürekkebi enjeksiyonu takiben, karaciğer (orta) değil akciğer (sağ) mürekkep alır. C) portal ven aracılığıyla 1 x 10 6 tümör hücrelerinin 90 dakika enjeksiyon sonrası bir Balb / c fare karaciğerinde GFP ile etiketlenmiş D2A1 fare meme tümörü hücrelerinin Örnek ince kesit ve görüntüler. Karaciğerler, formalin, tespit edilmiş parafine gömülmüş, parçalarına ayrılmış ve tümör hücresi, saptama için anti-GFP antikor ile boyandı. Üst panel, yıldız santral venlerin çevresinde non-spesifik hepatosit boyama gösterir karaciğer boyunca dağılmış koyu kahverengi lekeli tümör hücrelerinin (oklar) göstermektedir; ölçek çubuğu = 300 mikron. Alt paneller hala yakından damarsal ile ilişkili 90 dakika sonrası enjeksiyon tümör hücrelerinin temsilcisi görüntüleri gösterir; Ölçek çubuğu 50 mikron =. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <pkeep-together.within sayfa='"1"&gt;:' fo class='"jove_content"' alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54903/54903fig2.jpg"></pkeep-together.within> Şekil 2: Portal Ven Enjeksiyon sonrasında Karaciğer Fare Meme Tümör Hücre Hatlarının akıbet. A) farelerde metastaz sağkalım oranları gösteren Kaplan-Meier eğrisi 2,000-10,000 4T1, D2A1 veya D2.OR fare meme tümör hücreleri enjekte. Fareler tümör hücreleri enjekte edilmiş ve tımar eksikliği, soluk gözler ve ağırlık değişiklikleri dahil olmak üzere, metastaz belirtileri için gözlendi. Metastaz otopsi zamanında karaciğer ve histolojik bölümler üzerinde H &amp; E ile teyit edilmiştir. N = 2 4T1 2.000 hücreleri; 2 4T1 10,000 hücre. N = 2 D2A1 2.000 hücreleri; 3 D2A1 10,000 hücre. N = 3 D2.OR 2.000 hücreleri; 3 D2.OR 10,000 hücre. Temsilci H &amp; E B görüntüleri) 4T1 lezyonlar 10,000 hücre, C) D2A1 lezyonların 21 gün enjeksiyon sonrası 10.000 tümör hücrelerinin 26 gün sonrası enjeksiyon de, ve D) D2.OR lezyonlar da10.000 hücre 59 gün sonrası enjeksiyon; Ölçek çubukları 75 mikron =. 2000 4T1 veya D2A1 tümör hücreleri enjekte edildiğinde Benzer lezyonlar görülür. Resim lezyonlar 2.000 D2.OR hücreleri ile tespit edilmiştir. diğer organlarda ya da cerrahi kesi yerinde metastaz hiçbir kanıt bu çalışmalar üzerinde herhangi bir fare belli oldu. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54903/54903fig3.jpg"> Şekil 3: Multiplex Immunofluorescence kullanarak Fare Karaciğer Tek Hücreler ve metastatik lezyonların saptanması. Kapı toplardamarı enjeksiyonu modeli kullanılarak 90 dakika enjeksiyon sonrası bir Balb / c fare karaciğerinde D2A1 tümör hücrelerinin A) Örnek çoklu immünofloresan. Boyama, çoklu bir takım kullanılarak yapılır. Soldan sağa DAPI göstermektedir; CD45 lökosit işaretlemek için; Heppar-1 marhepatositleri k; ve CK18 tümör hücrelerini, hepatositler ve safra kanalı epiteli işaretlemek için. CD45 - - yakın bir portal üçlü ilişkili D2A1 tümör hücreleri birleştirilmiş görüntü CK18 + Heppar-1 'deki bir varsayımsal kümesini göstermektedir. Ok = D2A1 tümör hücreleri, yıldız = safra kanalı epiteli; Ölçek çubuğu 25 mikron =. B) A tümör hücreleri ile aynı boyama panelini kullanarak temsili bir açık D2A1 metastatik lezyonu CK18 + bitişik hepatositler CK18 + Heppar-1 + iken; Ölçek çubuğu 25 mikron =. Görüntüler mikroskop yazılımı kullanılarak, x 0.8 20 ile bir mikroskop 40 x 1.3 ve 60 x 1.4 amaçları ve CCD kamera ele geçirildi. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54903/54903fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Bu prosedürün genel amacı, meme kanseri karaciğer metastazının deneysel modellemesi için tümör hücrelerini doğrudan murin karaciğerine iletmektir. Bu yöntem, murin karaciğerindeki metastatik kaskadının sonraki aşamalarını incelemek için kullanılabilir. Meme kanseri hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, ölüm, proliferasyon ve uyku hali kararlarının yanı sıra büyüme dahil.Bu tekniğin temel avantajı, dalağın çıkarılması veya eşlik eden çoklu organ metastazı olmadan tümör hücrelerini doğrudan karaciğere iletmesidir. Portal ven enjeksiyonu, doğrudan anatomik gözetime dayanan hassas manipülasyonlar gerektirdiğinden, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Bu prosedürde bana Pepershadine'in laboratuvarında yüksek lisans öğrencisi olan Alexandra Quackenbush yardımcı olacak.İşleme başlamadan önce cerrahi alanın tüm yüzeylerini %10 çamaşır suyu ile silin. Enjeksiyonlardan bir saat önce, ağrı yönetimi için sekiz ila 15 haftalık balb / c dişi fareleri deri altından 100 mikrolitre analjezi ile tedavi edin. Hayvanın gözlerine merhem sürün.Ardından, fareleri sırtüstü pozisyona getirin ve ayak parmağınızı sıkıştırarak uygun sedasyon seviyesini onaylayın. Daha sonra, kuyruk da dahil olmak üzere hayvanın cerrahi ve çevresindeki bölgeleri, üç alternatif steril gazlı bezle ıslatılmış% 2 klorheksidin mendil ve iki alkol hazırlama pedi mendili ile dezenfekte edin. Son klorheksidin silme işleminden sonra, farenin sol tarafındaki medyan ve sagital düzlemler arasındaki cilde bir inçlik bir kesi yapmak için steril bir neşter kullanın, kaburgaların hemen altından başlayıp dördüncü kasık meme bezi emziğinin üzerinde biten, ardından periton boyunca benzer bir inçlik bir kesi yapın.Şimdi hücre çözeltisini yeniden askıya almak için tümör hücrelerini birkaç kez yukarı ve aşağı pipetleyin ve 10 mikrolitre hücre ile 32 gauge iğne ile donatılmış 25 mikrolitrelik çıkarılabilir bir iğne şırıngası yükleyin. Hücreler iğnenin ucuna gelene ve piston enjeksiyon için uygun hacimde olana kadar pistona bastırın. İğne batmalarından kaçınmaya dikkat ederek, harici tümör hücrelerini çıkarmak için yüklenen iğnenin dışını steril bir alkol pedi ile silin.Daha sonra, insizyonun medyan tarafının cildini ve periton astarını forseps ile tutarak, kalın ve ince bağırsakları steril tuzlu suya batırılmış steril bir gazlı bez üzerine dikkatlice hareket ettirmek için steril bir pamuklu çubuk kullanın. İç nemi ve steriliteyi korumak için iç organları tuzlu suya batırılmış gazlı bezle örtün. Portal ven göründüğünde, steril bir pamuklu çubukla portal veni ortaya çıkarmak için bir asistanın bağırsakları nazikçe tutmasını sağlayın ve iğneyi portal venin içine üç ila beş milimetre sokun, karaciğerin yaklaşık 10 milimetre altına, 5 dereceden daha az bir açıyla, eğimli tarafı yukarı.Tümör hücrelerinin damardan geri akışını önlemek için kanın iğne başından birkaç saniye boyunca akmasına izin vererek, tümör hücrelerinin tam hacmini yavaşça enjekte edin. Portal ven içine uygun görselleştirme, erişim ve enjeksiyon gerekli olduğundan, enjeksiyonu denemeden önce portal venin iğneye göre konumlandırılmasının tatmin edici olduğundan emin olmak için zaman ayırın. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, steril bir pamuk uçlu aplikatör ile damara aynı anda hafif bir baskı uygularken iğneyi çıkarın.Ardından, enjeksiyon bölgesi üzerinde 0,5 ila bir santimetre karelik bir hemostatik gazlı bez parçası tutmak için yeni bir steril pamuk uçlu aplikatör kullanın. Beş dakika sonra, damar kapanmasını değerlendirmek için gazlı bezi dikkatlice kaldırın. Kan akışı tamamen durduğunda, gazlı bezi çıkarın ve bağırsakları karın boşluğuna geri koyun.Basit bir sürekli veya kesintili sütür paterni kullanarak, peritoneal astarı steril dört sıfır vicryl sütür ile kapatın ve konikleştirin. Cildi aynı şekilde kapattıktan sonra, insizyon bölgesi boyunca 100 mikrolitre lokal anestezik enjekte edin, ardından 0,5 mililitre steril salinin deri altına verin. Portal venin doğru anatomik tanımlaması ve başarılı intra-portal enjeksiyonu, Hindistan mürekkebi veya benzer bir boya ile enjeksiyon protokolünün uygulanmasıyla doğrulanabilir.Portal ven yoluyla doğru bir enjeksiyonla, mürekkebin akciğere yayılmadan hemen ve spesifik olarak karaciğere iletilmesine neden olur. GFP ile etiketlenmiş fare hafızalı tümör hücreleri kullanılarak, enjeksiyondan 90 dakika sonra karaciğer boyunca tümör hücresi dağılımı belirgindir ve karaciğere başarılı bir portal ven iletimini doğrular. Tümör hücreleri, sinüzoidlerin yanı sıra karaciğer parankimi içinde, portal ven kanının karaciğere girdiği portal triadların yakınında bulunur ve bu da şu anda aktif tümör hücresi ekstravazasyonunun gerçekleştiğini düşündürür.Bu sağkalım eğrileri ile gösterildiği gibi, agresif meme tümör hücre hatlarının evlat edinen portal ven transferi, daha az agresif bir tümör hücresi hattı enjekte edilen farelere kıyasla daha kısa metastazsız sağkalım oranları ile sonuçlanır. Bu hayvanlardan elde edilen metastazlar, karaciğerden 250 mikron seviyelerinde kesit alınarak ve ardından örneklerin H&E analizi ile doğrulanabilir. Ayrıca, immünofloresan analizi, bu temsili görüntülerde gösterildiği gibi CD45 negatif, Heppar-1 negatif ve CK18 pozitif olan D2A1 tümör hattı gibi etiketlenmemiş sinjenik hatların mikro ve makro metastatik lezyon analizleri için yararlıdır.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa fare başına 12-14 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, enjeksiyonu denemeden önce portal veni düzgün bir şekilde görselleştirmek ve erişmek için gerekli zamanı ayırmayı unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, tümör hücrelerinin lubramicro ortamı ile nasıl etkileşime girdiğine dair ek soruları yanıtlamak için tümör hücresi enjeksiyonunu takiben intravital görüntüleme gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir.Geliştirilmesiyle birlikte, bu teknik, metastaz alanındaki araştırmacıların, farelerde çeşitli kanserlerin metastatik kaskadının daha sonraki aşamalarını keşfetmelerine izin verir. Bu videoyu izledikten sonra, cerrahi insizyonun nerede yapılacağını, portal ven'e erişmek için iç organların nasıl nazikçe hareket ettirileceğini ve portal içi enjeksiyonun nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız. Unutmayın, tümör hücreleri ile yüklü şırıngalarla çalışmak tehlikeli olabilir ve bu işlemi gerçekleştirirken iğne batmalarını önlemek için önlemler alınmalıdır.

a-portal-vein-injection-model-to-study-liver-metastasis-breast

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu makalede, farelerde ortotopik bioluminescent karaciğer tümörleri indüksiyon ve canlı tüm vücut lüminesans görüntüleme ile karaciğer sınırlı tümör büyümesini sonraki analiz için bir prosedür açıklanmıştır.

Murin Bioluminescent Karaciğer Tümör Modeli

Bu videoda, meme tümör hücrelerini portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletmek için kullanılan cerrahi bir prosedür açıklanmaktadır. Bu model, karaciğer metastazının geç evrelerinin araştırılmasına izin verir.

Portal Ven Enjeksiyonu: Karaciğere Kanser Metastazı Çalışmak İçin Bir Yöntem

Bu videoda, bir fare modeline kuyruk damarı enjeksiyonu kullanılarak etiketli kanser hücrelerinin enjekte edilmesi tekniği açıklanmaktadır. Gerçek zamanlı in vivo canlı hayvan görüntülemeyi kullanarak meme kanseri, metastaz oluşumunu ve büyümesini daha fazla izliyoruz.

Kuyruk Damarı Enjeksiyonu: Bir Fare Modelinde Metastatik Çalışmalar için Kanser Hücrelerini Uygulamak İçin Bir Yöntem

Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Metastatik klonların uzak bölgeleri kolonize etme yeteneği, çoğalma kapasitelerine ve/veya önemli bir çoğalma olmaksızın konakçı mikro ortamda hayatta kalma yeteneklerine bağlıdır. Burada, metastatik klonlar tarafından her iki tip karaciğer kolonizasyonunun kantitatif olarak görselleştirilmesine izin veren bir hayvan modeli sunuyoruz.

İleri Hayvan Karaciğer Kolorektal Metastaz Model: Görüntüleme Teknikleri ve Metastatik Klonların Özellikleri

Klinik olarak ilgili kolorektal kanser karaciğer metastazları (CRLM) tümör modeli ve karaciğer iskemi reperfüzyonunun (I/R) tümör büyümesi ve metastazdaki etkisini ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Bu model daha iyi karaciğer metastatik büyüme cerrahi kaynaklı promosyon altında yatan mekanizmaları anlamak için yardımcı olabilir.

İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Kolorektal kanser (KRK) organoidlerinin portal ven enjeksiyonu stroma bakımından zengin karaciğer metastazı oluşturur. CRC hepatik metastazının bu fare modeli, tümör-stroma etkileşimlerini incelemek ve adeno ilişkili virüs aracılı gen terapileri gibi yeni stroma yönelimli terapötikler geliştirmek için yararlı bir araçtır.

Karaciğer Metastazı Stromasını İncelemek için Kolorektal Kanser Organoidlerinin Portal Ven Enjeksiyonu

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Öğrenin portal ven enjeksiyonu yöntemiyle meme kanserinin karaciğer metastazını fare modellerinde incelemeyi. Bu teknik, immün yetkin ortamda metastaz kademelerini araştırmaya olanak tanır.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Daha fazla video keşfet