Name: Sıçanlar Kronik Kalp Enfarktüsü histolojik Niceleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Keşfedin kronik miyokard infarktüsü sıçan modellerinde histolojik niceleme yöntemini. Sistematik örnekleme ve görüntü analizi ile infarkt boyutu ve sol ventrikül remodelasyonunu değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışma İsviçre Ulusal Vakfı [SNF 310030-149986 to MNG], Fribourg Üniversitesi ve Fribourg Hastanesi tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvanlar Hayvan Bakım Dair Avrupa Sözleşmesi uyarınca insancıl bakıma aldı. Cerrahi işlemler İsviçre Federal Veterinerlik Dairesi, İsviçre tarafından onaylanan Devlet Veterinerlik Ofisi, Fribourg, izin aldıktan sonra İsviçre Hayvanları Koruma Kanunu uyarınca yapıldı. 1. Kalp Hasat NOT: Tüm cerrahi girişimler izofluran anestezi altında yapıldı. Çabaları hayvan acı azaltmak için yapılmıştır. Özel olarak, bütün hayvanlar 0.1 mg / kg buprenorfin ön anestezi deri altı enjeksiyonu yapıldı. Miyokard enfarktüsü inducting için cerrahi protokol daha önce başka bir yerde 13 tarif edilmiştir. <ol><li> Anestezi (entübe hayvan,% 2,5 izofluran, pençe tutam refleks ile teyit uygun anestezi) altında myocardially enfarkte hayvan üzerinde bir sternotomi gerçekleştirin. <ol><li> Daha sonra kasları cilt kesme ve hayvansal açıncerrahi makas ile. sol ve sağ kaburga kesin ve ardından göğüs çıkarın. </li><li> Bir önceki ameliyatı (LAD ligasyonu) sonra kalan yapışıklıklar çıkarın. aort kesin ve kalp kaldırmak. (PBS içinde) 1 M KCl doku yerleştirin ve daha sonra PBS ile yıkayın. </li></ol></li></ol> 2. Doku Hazırlanması <ol><li> akrilik sıçan kalp matris içinde uzunlamasına infarkt kalbi koyun. 1 saat boyunca -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Bir çapraz olan bir traş makinesi bıçak kullanılarak matris içinde doğrudan kalp kesin. Her dilim sağlamak 2 mm kalınlığında. (Remodeling seviyesine göre) her kalp için 7 slaytlar - yaklaşık 5 Cut Bu sistematik örnekleme denir. </li><li> Bu aşamada, 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) boyama performans (kalp dilimleri tabanına-to-apeks yönünü tutmak) isteğe bağlıdır. <ol><li> 37 ° C&#39;de 50 dakika boyunca PBS içinde% 1 TTC inkübe edin. 1 saat 20 dakika süreyle% 4 paraformaldehid (PFA) içinde inkübe edin. betwee bölümleri koymakn 2 mm pullarla iki cam plakalar ve 15X büyütmede bir kamera ile birleştiğinde stereolojik mikroskobu ile fotoğraf çekmek. DİKKAT! Paraformaldehit toksiktir. </li></ol></li><li> Slayt dondurma (1. seçenek) <ol><li> (Kalıbın alt aşağı bölümün apeks odaklı tarafını yerleştirin) yönünü korumak cryotomy için orta (optimum kesme sıcaklığı, OKT) montaj bir plastik kalıp (10 x 10 x 5 mm) her slayt koyun. 15 dakika - 10 soğutma sıvı azot altında 2-metilbütan buharları ile blokları dondurun. Son olarak, -80 ° C de doku saklayın. </li></ol></li><li> Paraffinization (2. isteğe bağlı) <ol><li> 24 saat süreyle% 4 PFA sonra her kasetleri gömme slayt (aşağı kasetin altındaki bölümünün apeks odaklı yan koyarak yönünü korumak) ve yerleştirin. Bir doku işlemci makine gecede koy. <ol><li> 2 saat boyunca, etanol% 70 içinde inkübe edin. Ethan içinde inkübe2 saat boyunca 95% ol. 3 saat% 100 etanol içinde inkübe edin. 4 saat ksilol içinde inkübe edin. 5 saat (bir fırın içinde 60 ° C &#39;de erimiş) parafin içinde inkübe edin. Son olarak, parafin her kalp slayt gömerek blok yapmak. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Masson-Goldner Trikrom Boyası <ol><li> (: 5 mikron kalınlığında) ya da -18 ° C&#39;ye ayarlanmış bir kriyostat ile Ekim bloklardan (kalınlığı: 7 mikron) manuel mikrotom ile parafin bloklardan doku bölümleri yapın. </li><li> Masson-Goldner ile - (slayt başına 4 enine kesitleri 3) trikrom boyama (bkz) her sıçan için her kalp kısmından bir slayt Leke. NOT: parafin kesitler için bu adımdan başlayın. <ol><li> bir fırın içinde 60 ° C &#39;de slaytlar eritin. davlumbaz altında, 10 dakika her biri için iki kez ksilol onları deparaffinize. 3 dakika her biri için% 100 etanol,% 95 etanol,% 70 etanol ve distile suda rehidrate. Not: cryosection bu aşama Başlangıçs. </li><li> Bouin çözümü gecede bunları düzeltmek. 15 dakika - Sonra, 10 musluk suyu ile durulayın. damıtılmış su içinde çalkalanır. 3 dakika boyunca Mayer hematoksilin bunları inkübe edin. </li><li> slaytları çıkarın ve 5 dakika için damıtılmış su içinde bırakın. Daha sonra, 5 dakika boyunca asit Fuchsin-Ponceau bunları inkübe edin. 1 dakika için% 1 asetik asit ile durulayın. </li><li> Daha sonra, 1 dakika için fosfomolibdik asit Orange G inkübe. 1 dakika süre ile% 1 asetik asit ile durulayın, 10 dakika boyunca hafif bir yeşil boya bunları tasarlamak ve 1 dakika süre ile% 1 asetik asit içinde çalkalanır. </li><li> % 70 etanol (30 sn),% 95 etanol (30 sn), ve% 100 etanol (5 dakika) bunları kurutmak. , Doku kesitlerinde bir reçineli montaj orta bir damla koymak lamelleri ile onları karşılamak ve kurumaya bırakın. </li></ol></li></ol> 4. Enfarktüs Boyut Analizi <ol><li> Bir kamera ile birleştiğinde bir stereomikroskopta (15X büyütme) her slayttan bir görüntü kazanır. Aynı ayarıyla bir cetvel fotoğrafs. </li><li> enfarktüs, septum kalınlığı, sol ventrikül (LV) oyuğu alanı, infarkt alanı ve kullanma LV doku alanının ortasında skar kalınlığını ölçmek için görüntü analiz yazılımı kullanın. <ol><li> Cetvel resmi (Şekil 1A) ile ölçeği ayarlayın. <ol><li> Daha sonra Set Dönüşüm Faktörü seçin Ölçümleri tıklayın. Kalibrasyon çubuğunda bir çizgi çizin. Sağ resmin üzerine tıklayın ve Bitiş kalibrasyon tıklayın. Bar değerini not alın ve sonra Tamam &#39;ı tıklatın. </li></ol></li><li> Lekeli kalp resmi (Şekil 1B) den LV seçin. Birden bölüm aracını kullanın. LV noktası-by-point seçin ve ardından sağ tıklayın Kopyala / Yapıştır her yerde. </li><li> Tek parça ölçüm aracını kullanarak skar ve septum kalınlığı ölçmek (Şekil 1C </stRong&gt;). </li><li> Otomatik LV boşluğu, infarkt tespit ve LV alanları RGB modunda (Şekil 1D) otomatik alan ölçümü aracını kullanarak. <ol><li> aracını tıklayın. Etkinleştirin Sadece Sınırlar ve RGB modunda bitişik. Son olarak, bunu tespit etmek ilgi alanı içinde tıklatın. Gerekirse, hassas aletler kullanın. </li></ol></li></ol></li><li> AG alanına infarkt alanı oranı olarak enfarktüs boyutunu hesaplayın. </li><li> aşağıdaki gibi genişleme endeksi hesaplayın: [LV boşluğu alanı / bütün LV alanı] / [enfarktüs kalınlığı / septum kalınlığı], LV boşluğu ve LV doku alanlarında hem dahil bütün LV alanı ile. </li><li> Sonunda şöyle, her kalp için bir &quot;ortalama&quot; hesaplamak: [infarkt slaytlar genişleme endeksinin ortalama] * [infarkt slaytlar sayısı slaytlar / toplam sayısı]. </li></ol>

<ol><li>Amsterdam, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AHA%2FACC+Guideline+for+the+Management+of+Patients+with+Non-ST-Elevation+Acute+Coronary+Syndromes%3A+a+report+of+the+American+College+of+Cardiology%2FAmerican+Heart+Association+Task+Force+on+Practice+Guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines.</a> J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).</li>
<li>Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+remodeling+in+heart+failure%3A+current+concepts+in+clinical+significance+and+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).</li>
<li>Frobert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+Value+of+Troponin+I+for+Infarct+Size+to+Improve+Preclinical+Myocardial+Infarction+Small+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models.</a> Front Physiol. 6, 353(2015).</li>
<li>Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+infarct+size+and+area+at+risk+assessment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice.</a> Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).</li>
<li>Guex, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma-functionalized+electrospun+matrix+for+biograft+development+and+cardiac+function+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization.</a> Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).</li>
<li>Landa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+injectable+alginate+implant+on+cardiac+remodeling+and+function+after+recent+and+old+infarcts+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat.</a> Circulation. 117, 1388-1396 (2008).</li>
<li>Valente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+heart+sampling+and+systematic+evaluation+of+cardiac+therapies+inmouse+models+of+ischemic+injury%3A+Assessment+of+cardiacremodeling+and+semi-automated+quantification+of+myocardial+infarctsize%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Mouse+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize.</a> Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).</li>
<li>Csonka, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+myocardial+infarct+size+in+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).</li>
<li>Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+myocardium+infarction+in+rats%3A+Analysis+of+the+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arq.+Bras+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model.</a> Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).</li>
<li>Lichtenauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+infarct+size+measurement+using+geometric+angle+calculation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation.</a> Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).</li>
<li>Lutgens, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+cardiac+structural+and+functional+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes.</a> Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).</li>
<li>Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+therapy+for+heart+failure+in+rat%3A+double+thoracotomy+for+myocardial+infarction+and+epicardial+implantation+of+cells+and+biomatrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix.</a> J Vis Exp. , e51390(2014).</li>
<li>Takagawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+infarct+size+measurement+in+the+mouse+chronic+infarction+model%3A+comparison+of+area-+and+length-based+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches.</a> J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).</li>
<li>Fishbein, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+phase+acute+myocardial+infarct+size+quantification%3A+validation+of+the+triphenyl+tetrazolium+chloride+tissue+enzyme+staining+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique.</a> Am Heart J. 101, 593-600 (1981).</li>
<li>Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+of+myocardial+infarct+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion.</a> Circulation. 78, 186-201 (1988).</li>
<li>Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+administration+after+myocardial+infarction+promotes+early+infarct+expansion.+A+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat.</a> J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Protokol çerçevesinde kritik adımlar Fibrotik doku doğru hasat kalp ve görüntünün sistematik örnekleme yöntemiyle kronik MI sıçan modelinde değerlendirilebilir tabandan tepeye doğru edilen trichromatic lekeli histolojik kesitlerin analiz eder. Iki adım başarılı protokol uygulanması için özellikle önemlidir. İlk olarak, kalp hasat için KCI kullanımı kalp kası rahat bir halde muhafaza edilmesini sağlar. Bu aşama, farklı kalplerinden infarkt boyutlarının karşılaştırılması için ...

Miyokard infarktüsü (Mİ) dünya çapında ölüm ve sakatlık önde gelen nedenidir. Koroner kalp hastalığı ana nedenidir; MI böyle tıkanıklığı koroner olaylara ardışık iskemi kaynaklanır. reperfüzyon ilk 6 saat içinde gerçekleştirilen olmadığında, iskemi geri dönüşü olmayan miyokard nekrozu neden olur. Hastalarda, MI karakterizasyonu klinik bulgular, elektrokardiyografi, biyomarkerlerin, ekokardiyografi, MR görüntüleme plazma seviyelerinin değerlendirilmesi dahil olmak üzere farklı tanı araçları, dayanır ve histolojik 1 analizleri. Akut ve kronik MI koroner oklüzyon zaman miyokard nekrozu göreli zamanlamasına göre yaralanma iki farklı aşamalarında olarak sınıflandırılır. ilk 7 günü içinde ortaya çıkan akut faz, kardiyomiyositlerin kaybı, detaylı enflamasyon ve fibroblastların alımı ile ilişkilidir. kardiyak doku ve bir yara oluşması iyileşmesi ile karakterize edilen bir alt-akut faz, meydana1 ila 4-6 haftadır. enfarktüs, ventrikül duvar incelmesi ve ventrikül dilatasyon Genişleme kronik faz karakterize eder. Sol ventrikül geniş biçimlenme giderek şiddetli kalp yetmezliği 2 sonuçlanır. Kalıcı sol ön inen arter (LAD) ligasyonu ile uyarılan MI kronik miyokard infarktüsü standart kemirgen modeli temsil eder. Koroner bağ taklit koroner oklüzyon. infarkt büyüklüğü ligasyonu sitede bağlıdır. Bir kemirgen modelinde miyokard iskemik hasar Karakterizasyonu klasik gibi troponin olarak biyobelirteç plazma seviyelerini, kullanılarak yapılır I ve T 3, ekokardiyografi, MR ve histoloji 4,5. Biyomarker seviyeleri Kardiyomiyosit ölüm yaygınlığı ile ilişkilidir. Ekokardiyografi, bölgesel duvar hareket bozukluğu kaynaklanan sol ventrikül fonksiyon bozukluğu değerlendirir. MRI veya yüksek çözünürlüklü olarak eklenmesi, non-invaziv görüntüleme teknikleri, içindeekokardiyografi, duvar hareketi azalma değerlendirilmesine olanak azaltılmış perfüzyon ve canlı miyokard ve duvar incelme ile yara alanının hacmi. LV boyutları infarkt doğru değerlendirilmesine izin verir. Son olarak, canlı ve ölü miyokardın miktar hasat kalplerin histolojik bölümlerde özel boyalar kullanılarak otopsi yapılmış ve enfarktüs boyutunu (IS) doğrulanmasını sağlar edilebilir. Bir diğer önemli özelliği enfarktüs genişleme indeksi (EI) 6 değerlendirilmesidir. EI ilk 3 gün içinde transmural enfarktüs ve başlar ilişkilidir. EI duvar kalınlığı artan bir şekildeki azalma, sol ventrikül boşluğu boyutunda bir artış ve AG şeklinde buna bağlı olarak değişiklikler ile karakterizedir. yeni tedavilerin terapötik etkinliğini değerlendirmek için - özellikle rejeneratif stratejiler hücreler, matrisler dayalı ve kemirgenlerde MI gen teslimi-doğru bir değerlendirme büyük önem taşımaktadır.papiller kas düzeyinde elde edilen tek bir kesitte ölçülen zaman, IS boyutu LAD ligasyon aşağıdaki enfarktüs gelişme var büyük değişkenlik nedeniyle önyargılı olabilir; tepe infarkt sonra occulted olabilir. Önemli olarak, tespit MI boyutuna daha doğru metodolojiler fareler 7-9 ya da sıçanlar 10 için tarif edilmiştir. Bununla birlikte, IS doğru LV biçimlenme ya da yeniden terapötik uyarılan azalmalar (veya önleme yollarını) ölçmek için yeterli değildir. Gerçekten de, genel olarak kalbin kesitleri üzerinde belirlenen toplam LV hacminin bir yüzdesi olarak ifade edilir. Bu yöntem, akut MI için geçerli olmasına karşın, yeniden sırasında meydana gelen AG duvarının incelmesi 11,12 değerlendirdi altında kalır. infarkt ve yapısal değişikliklerin tam bir morfometrik ölçümü gibi endokardiyal ve epikardiyal uzunluk ve çaplarda yanı sıra enfarktüs ve sağlıklı alanlar gibi çeşitli parametreler, ölçmek gerekir. Biz bir metodolojik yakl tarifoach doğru kronik sıçan modelinde MI ve yenileme değerlendirmek.

<table><tbody><tr><td>Akrilik sıçan kalp matrisi 2 mm</td><td>72-5015</td><td>Harvard Appartus</td><td></td></tr><tr><td>Inspira gelişmiş hacim kontrollü ventilatör</td><td>Harvard Aparatı</td><td>557058</td><td></td></tr><tr><td>Kateter Kurulumu 14 G</td><td>BD</td><td>381267</td><td></td></tr><tr><td>OCT</td><td>BDHA361603E</td><td>VWR</td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>T8877-10G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Mayer hematoksilen</td><td>MHS32-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Asit Fuchsin CI 42685</td><td>F8129-50G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau Xylidin CI 16150</td><td>P2395-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Turuncu G CI 16230</td><td>O3756-100G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Açık yeşil CI 42095</td><td>L5382-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>P9333-500G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>10315083</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>Etanol mutlak</td><td>10303990</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>2-metilbütan</td><td>M32631-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Stereojik mikroskop</td><td>SM2800</td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehit</td><td>99340</td><td>Reactolab</td><td></td></tr><tr><td>Gömme kaseti</td><td>K113.1</td><td>Carl Roth</td><td></td></tr><tr><td>Bersoft Görüntü ölçüm Yazılımı</td><td></td><td>Bersoft.com</td><td>Lisanslı yazılım</td></tr></tbody></table>

sıçanlar kronik kalp enfarktüsü histolojik niceleme

Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats

Miyokard enfarktüsü, uzamış iskemiye bağlı kardiyomiyosit ölümü olarak tanımlanır; iskemik hasarı inflamatuar yanıt ve skar oluşumu (fibrozis) takip eder. İlk akut fazı takiben, sol ventrikülün (LV) kronik yeniden şekillenmesi kalbin yapısını ve işlevini değiştirir. Küçük hayvanlarda kalıcı koroner ligasyon, kronik bir MI modeli için bir referans model olarak yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Enfarktüslü duvarın incelmesi giderek transmural fibrozise dönüşür. Enfarktüs boyutunun histolojik değerlendirmesi yaygın olarak yapılır; Bununla birlikte, niceleme yöntemlerinin bir standardizasyonu eksiktir. Gerçekten de, analiz edilen bölümlerin sayısı ve örnekleme ve niceleme yöntemleri gibi önemli metodolojik yönler genellikle açıklanmaz ve bu nedenle araştırmalar arasında karşılaştırmayı engeller. Çok sık olarak, papiller kaslar seviyesinde elde edilen tek bir bölüm üzerinde nicelik ölçümü yapılır. Enfarktüs genişlemesini ve yeniden şekillenmesini azaltmayı amaçlayan yeni stratejiler araştırılmakta olduğundan, doğru kalp örnekleme protokollerinin standardizasyonuna önemli bir ihtiyaç vardır. Hasat edilen sıçan kalbinin sistematik bir örneklemesini ve tabandan tepeye kadar elde edilen trikromatik lekeli histolojik kesitlerin görüntü analizlerini kullanarak enfarktüs boyutunu ölçmek için doğru bir yöntem tarif ediyoruz. Ayrıca, genişleme indeksinin (EI) hesaplanmasının, yeniden şekillenme boyunca sol ventriküldeki değişiklikleri hesaba katarak enfarktüs boyutu değerlendirmesine izin verdiğine dair kanıtlar sunuyoruz.

Altı hafta sonra, LAD ligasyonu, kalpler Lewis sıçanlarında hasat edildi. 2 mm doku kesitleri tepesinden tabanına elde edilmiştir. Bir TTC boyama işlemi beyaz görünen infarkt alanı, ve kırmızı görünen sağlıklı miyokard, (Şekil 2) görselleştirmek için yapıldı. LAD ligasyonu sitede bağlı olarak, enfarktüs boyutu değişir. Büyük MI için transmural infarktlar taban (Şekil 2A) için tepesinden gözlendi. Daha küçük infarktlar kalp (Şekil 2B) ort...

Kemirgenlerde miyokard enfarktüsünün (MI) ölüm sonrası değerlendirmesi, lekeli kalp bölümlerindeki enfarktüsün ölçülmesine dayanır. Hasat edilen sıçan kalplerinin tabandan apekse sistematik örneklemesini ve trikrom lekeli histolojik kesitlerin görüntü analizlerini kullanarak enfarktüs boyutunu ölçmek için doğru bir yöntem tarif ediyoruz.

Sıçanlar Kronik Kalp Enfarktüsü histolojik Niceleme

Myocardial infarction is defined as cardiomyocyte death due to prolonged ischemia; an inflammatory response and scar formation (fibrosis) follow the ...

Bu histolojik prosedürün genel amacı, enfarkt boyutunu ve sol ventrikül yeniden şekillenmesini değerlendirmek amacıyla, bir miyokard enfarktüsü sıçan modeli kullanarak enfarkt genişleme indeksinin ve kalp yapısal parametrelerinin morfometrik kantifikasyonunu gerçekleştirmektir. Bu yöntem, miyokard enfarktüsü sonrası rejeneratif terapinin etkisi veya enfarkt genişlemesini azaltmayı hedefleyen yeni stratejiler gibi kardiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, enfarkt boyutunu doğru bir şekilde değerlendirmek ve yeniden şekillenme boyunca sol ventriküldeki değişiklikleri hesaba katmak için toplanan sıçan kalbinin sistematik örneklemesinin kullanılmasıdır.Bu yöntemin izlenmesi, kronik sıçan miyokard enfarktüsü modelindeki enfarkt boyutuna dair bilgi sağlayabilir. Ayrıca farelere veya akut miyokard enfarktüsü ya da iskemi reperfüzyonu gibi diğer iskemik modellere de uygulanabilir. Bu prosedüre başlamak için, anestezi altındaki miyokard enfarktüsü geçirmiş bir hayvana sternotomi uygulayın.Cerrahi makasla sternum boyunca deri ve kaslarda bir insizyon yapın. Ardından, göğüs kafesini çıkarmak için sol ve sağ kaburgaları kesin. Bundan sonra, LAD ligasyonundan sonra kalan adezyonları temizleyin.Aortayı kesin ve kalbi çıkarın, ardından dokuyu PBS ile yıkamadan önce bir dakikadan kısa bir süre boyunca bir molar potasyum klorür içeren PBS'ye yerleştirin. Dokuyu korumak için ventriküllerin içindeki PBS dikkatlice uzaklaştırılmalıdır. Ardından, enfarktüs geçirmiş kalbi akrilik bir sıçan kalp matrisine aktarın ve boylamsal olarak konumlandırın.Ardından, örneği bir saat boyunca -20 °C'de tutun. Bir saat sonra sistematik örnekleme yapmak için, kalbi bir jilet kullanarak doğrudan matriks içinde kesin. Her bir kesitin 2 mm kalınlığında olduğundan emin olun.Ardından, kesitleri 1% TTC içerisinde 37 °C'de 15 dakika inkübe ederek TTC boyamasını gerçekleştirin, ardından oda sıcaklığında 20 ila 60 dakika boyunca 4% PFA içerisinde inkübe edin. Sonrasında, kesitleri iki milimetrelik ara parçaları olan iki cam plaka arasına yerleştirin ve kameraya bağlı bir stereolojik mikroskop ile 15x büyütmede fotoğraflarını çekin. Beyaz renkte görünen infarkt alanı ile kırmızı renkte görünen sağlıklı miyokardı görselleştirmek için TTC boyama prosedürü uygulanmıştır.Geniş bir miyokard enfarktüsü için, apeksden baza kadar transmural enfarktüsler gözlemlenmiştir. Daha küçük enfarktüslerde, apeksden kalbin orta kesimine kadar görülebilen beyaz enfarktüs dokusu mevcuttu. Küçük, non-transmural enfarktüsler için ise apeksden itibaren yalnızca bir veya iki kesitte fibrotik doku gözlemlenmiştir.Kesitleri dondurmak için, her kesiti kriyotomi için montaj ortamı içeren plastik bir kalıba yerleştirin ve apeks kısmı kalıpta aşağıya bakacak şekilde konumlandırın. Blokları, sıvı azot soğutması altında 2-Methylbutane buharları ile 10 ila 15 dakika boyunca dondurun. Ardından, dokuları -80 °C'de saklayın.Parafinleme için, her bir kesiti apeks kısmı alta gelecek şekilde bir gömme kasetine yerleştirin, ardından kasetleri 24 saat boyunca %4 PFA içinde bekletin. Sonrasında, kasetleri gece boyunca bir doku işlemciye yerleştirin. İşlem tamamlandığında, her bir kalp kesitini parafine gömerek bloklar oluşturun.Bu prosedürde, manuel bir mikrotom kullanarak parafin bloklarından 5 µm kalınlığında doku kesitleri hazırlayın. Ardından, her sıçanın her kalp kesitinden bir lamı Masson-Goldner trikrom boyama ile boyayın. Parafin kesitler için dokuları bir fırında 60 °C'de eritin.Çeker ocuk altında, örnekleri iki kez onar dakika boyunca ksiloled ile deparafinize edin. Ardından, %100 etanol, %95 etanol, %70 etanol ve son olarak distile su içerisinde üçer dakika boyunca rehidrate edin. Deparafinize edilen kesitleri ve kriyokesitleri gece boyunca Bouin solüsyonunda fikse edin.Ertesi sabah, örnekleri 10 ila 15 dakika boyunca akan musluk suyu ile durulayın, ardından distile su kullanarak tekrar durulayın. Bouin ile tespit, mükemmel bir Goldner boyamasının sağlanması için en önemli adımdır. Örnekleri üç dakika boyunca Mayer's hematoksilin içerisinde inkübe edin.Üç dakika sonra lamları çıkarın ve beş dakika boyunca distile suda bekletin. Ardından, bir dakika boyunca %1 asetik asit ile durulamadan önce beş dakika boyunca ponceau acid fuchsin içinde inkübe edin. Sonrasında, kesitleri bir dakika boyunca phosphomolybdic acid orange g içinde inkübe edin ve ardından bir dakika boyunca %1 asetik asit ile durulayın.On dakika boyunca açık yeşil boyada inkübe edin ve ardından bir dakika boyunca %1 asetik asitte durulayın. Son olarak kesitleri sırasıyla 30 saniye %70 etanolde, 30 saniye %95 etanolde ve beş dakika %100 etanolde dehidrate edin. Doku kesitlerinin üzerine bir damla reçineli montaj medyumu uygulayın, üzerlerini lamellerle kapatın ve kurumaya bırakın.Bu adımda, kamerayla entegre bir stereo mikroskop kullanarak 15x büyütmede her slayttan bir görüntü alın. Aynı ayarlar altında bir cetvelin fotoğrafını çekin. Her kalp kesitinden beş mikron kalınlığında kesitler alındı ve Masson-Goldner trikrom ile boyandı.Sağlıklı dokular kırmızı, bağ dokusu ise yeşil renkte görünmüştür. Ardından, infarktın ortasındaki skar kalınlığını, septum kalınlığını, sol ventrikül boşluk alanını, infarkt alanını ve LV doku alanını ölçmek için görüntü analiz yazılımını kullanın. Bunu yapmak için, cetvel resmi ile ölçeği ayarlayın.Ölçümler (measurements) kısmına tıklayın ve dönüşüm faktörünü ayarla (set conversion factor) seçeneğini belirleyin. Kalibrasyon çubuğu üzerine bir çizgi çizin. Resmin üzerine sağ tıklayın ve kalibrasyonu bitir (end calibration) seçeneğine tıklayın.Çubuk değerini not edin ve ardından Tamam'a tıklayın. LV'yi nokta nokta seçmek için çoklu segment aracını kullanın ve ardından sağ tıklayıp herhangi bir yere kopyalayıp yapıştırın. Bundan sonra, tekli segment ölçüm aracını kullanarak skar ve septum kalınlığını ölçün. Ardından, RGB modundaki otomatik alan ölçüm aracını kullanarak LV boşluğunu, enfarktı ve LV alanlarını otomatik olarak tespit edin.Sadece RGB modunda "borders" ve "contiguous" seçeneklerini etkinleştirin. Son olarak, ilgi alanını tespit etmek için bu alanın içine tıklayın. Ardından, infarkt boyutunu, infarkt alanının LV alanına oranı olarak hesaplayın.Ardından, bu formülü kullanarak genişleme indeksini hesaplayın. Son olarak, gösterilen formülü kullanarak her kalp için bir ortalama hesaplayın. Goldner boyamasından hesaplanan genişleme indeksi, enfarkt gelişimini değerlendirmek için iyi bir indekstir.Şekilde gösterildiği üzere, bu durum sol ventrikülün yüzdesi olarak ifade edilen enfarkt boyutu ve ekokardiyografi ile ölçülen ejeksiyon fraksiyonu ile korelasyon göstermektedir. Grafiklerde doğrusal regresyon ve %95 güven aralıkları sunulmuştur. Enfarkt genişleme indeksi, buradaki formülde açıklandığı şekilde hesaplanmıştır.Tüm LV alanı, LV boşluğu ve LV doku alanının toplamı olarak ölçüldü. Enfarkt yüzdesi gösterildiği şekilde hesaplandı. Fonksiyon, LAD ligasyonundan altı hafta sonra yüksek çözünürlüklü ekokardiyografi kullanılarak değerlendirildi.Bu videoyu izledikten sonra, kalbin sistematik örneklemesinin nasıl yapılacağı ve boyanmış kesitlerin görüntü analiziyle infarkt boyutunun nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

histological-quantification-of-chronic-myocardial-infarct-in-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Bu protokol reperfüzyon ile sol ön inen arter (LAD) bir 90 dakika kapalı göğüs koroner balon oklüzyon kullanarak domuz miyokard infarktüsü (Mİ) modeli anlatılmaktadır. Ayrıca, bu tür kalp fonksiyonu, hemodinamikler, mikrovasküler direnci ve enfarkt boyutu gibi birçok parametrelerde için protokol de sunulmaktadır.

Domuzlar miyokard enfarktüsü ve Fonksiyonel Sonuç Değerlendirmesi

Minimal invaziv manipülasyonlara sahip farelerde miyokard enfarktüsü için yüksek oranda tekrarlanabilir bir model tanımlanmıştır. Model kolayca gerçekleştirilebilir, bu da yüksek tekrarlanabilirlik ve hayatta kalma oranı ile sonuçlanır. Bu nedenle, açıklanan model, 3R ilkesinin (Değiştirme, İyileştirme ve İndirgeme) talep ettiği gibi gerekli hayvan sayısını azaltacaktır.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Bu yöntem, deneysel olarak indüklenen miyokard iskemisi olan farelerde kardiyak morfolojiyi, fonksiyonu, perfüzyonu, metabolizmayı ve iyotlu kontrast madde ile canlılığı değerlendirmek için Kuantum Mikro Bilgisayarlı Tomografi (MikroBT) kullanımını ana hatlarıyla belirtir. Teknik, insan kalbi hastalığının çeşitli hayvan modellerinin tahribatsız, yüksek verimli uzunlamasına in vivo görüntülenmesi için uygulanabilir.

Miyokard Yapı, Fonksiyon Vivo Kantitatif Değerlendirilmesi yılında Perfüzyon ve Canlılık Kardiyak Mikro-bilgisayarlı Tomografi ile

Güvenilir ve doğru sonuç değerlendirmesi klinik tedavi içine klinik öncesi tedavilerin çeviri için anahtardır. Geçerli kağıt domuz akut miyokard infarktüsü modelinde kardiyak performans ve hasar üç klinik açıdan primer sonuç parametreleri değerlendirmek açıklamaktadır.

Akut Miyokard İnfarktüsü bir Domuz Modeli İlköğretim Sonuç Değerlendirmesi

Burada biz miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarı Patofizyoloji anlamada translasyonel değerini artırmak için örnekleme prosedürleri akut miyokard infarktüsü, kurulan bir domuz modelinin standart hale getirmek için bir protokol göstermek ve yeni ilaç adaylarının sınamak için.

Kapalı göğüs domuz miyokard infarktüsü manken standardizasyon doku ve kan örnekleme prosedürleri tarafından geliştirilmesi

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Yeterli anestezi altında, fare kalbi interkostal boşluktan dışsallaştırıldı ve miyokard enfarktüsü, çoğu laboratuvarda kolayca bulunabilen malzemeler kullanılarak sol ön inen arteri (LAD) bağlayarak başarılı bir şekilde indüklendi.

Farelerde Miyokard Enfarktüsünün İndüksiyonu için Değiştirilmiş Basit Bir Yöntem

Mevcut 2,3,5-Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC) testi, mikroskobik çözünürlükte miyokard hasarının analizini mümkün kılan ve hücresel düzeyde infarkt boyutu ile kardiyomiyositlerin canlı yapılabilirliğinin doğru ve güvenilir değerlendirilmesini sağlayan yüksek kaliteli görüntüler elde eden ince bir TTC boyama protokolü sunmaktadır.

Miyokard yaralanmasının doğru ve güvenilir analizi için mikroskobik 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür testi

Akut miyokard infarktüsü (AMI) sıçan modelinde kalp patofizyolojik ve fizyolojik fonksiyonu MI sonucu incelemek için yararlıdır.

Sıçanlarda Akut Miyokard Enfarktüsü

Keşfedin kronik miyokard infarktüsü sıçan modellerinde histolojik niceleme yöntemini. Sistematik örnekleme ve görüntü analizi ile infarkt boyutu ve sol ventrikül remodelasyonunu değerlendirin.

Sıçanlar Kronik Kalp Enfarktüsü histolojik Niceleme

Daha fazla video keşfet