Fare İç Kulak Hedefli İlaç Dağıtım Yöntemleri Karşılaştırmalı İncelemesi: Bullostomy Karşı Transtimpanik Enjeksiyon

Bu çalışmanın genel amacı, işitme parametreleri ve koklear sitomimari belirteçler üzerindeki etki açısından iç kulağa lokal ilaç verilmesi için iki mikrocerrahi yaklaşımı tanımlamak ve karşılaştırmaktır. Bu prosedürler, işitsel alanda, özellikle hayvan pro-kimyasal çalışmalarının geliştirilmesinde kilit soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajı, minimal invaziv olmalarıdır.

Bu da maddenin didaktik olarak iç kulağa ulaşmasını sağlar. Bu tekniklerin uygulanması, işitme kaybının tedavisine kadar uzanır, çünkü mikrocerrahi prosedürleri orta kulakta kuru doğum için uygundur. Bullostomi ve transtimpanik enjeksiyonun öğrenilmesi zor olması ve anatomik bilgi ve cerrahi eğitim gerektirmesi nedeniyle bu yöntemin barışçıl bir şekilde gösterilmesi çok önemlidir.

Başlamak için, ağırlıklı olarak mono-işitsel tepkiler elde etmek için anestezi uygulanmış bir farenin karşı kulağına bir kulak tıkacı yerleştirin. Ardından, fareyi ses azaltıcı bir bölme içindeki bir ısıtma yastığına yüzüstü konuma getirin. Pozitif paslanmaz çelik subdermal iğne elektrodunu, kafatasının üst noktası üzerindeki kulaklar arasındaki kafa derisine yerleştirin.

Referans elektrodunu kulak kepçesinin altındaki parotis bölgesine yerleştirin. Ardından toprak elektrodunu arka, kuyruk veya arka bacak bölgesine yerleştirin. Pozitif ve negatif elektrotlardaki elektrik empedansını kontrol edin.

Empedansın üç kiloohm'dan az olduğundan emin olun. Önceden doldurulmuş hoparlörü, hoparlörün merkezi dış işitme yolu ile aynı hizada olacak şekilde, seçilen kulağa bakacak şekilde sabit bir mesafeye yerleştirin. Hoparlör ile kulak arasında herhangi bir engel olmadığından ve kulak kepçesinin tamamen açıldığından emin olun.

Dijital-analog iş istasyonu çıkışını seçilen hoparlöre bağlayın. Burada serbest alan hoparlörleri kullanılır. Analog-dijital girişe düşük gürültülü ve iyi bir sinyal-gürültü oranına sahip bir amplifikatör bağlayın.

Ardından, önceden ayarlanmış uyaranları veya uygun yazılımla tasarlanmış yeni sinyalleri kullanarak akustik uyaranları dış işitme kanalına iletme işlemine başlayın. Yüksek yoğunlukla başlayan ve yoğunluğu azaltarak beş ila 10 desibel ses basıncı seviyesi adımlarında uyaranları sunun. Elektriksel tepkiyi, stimülasyondan sonraki ilk 10 milisaniye içinde, uyarılmış ABR yanıtları altı ila sekiz milisaniyede göründüğü için kaydedin.

Protokolün yazılı bölümünde açıklandığı gibi ABR eşiğini belirlemek için yazılımı kullanın. Onaylanmış protokollere göre anestezi uyguladıktan sonra, ayak parmağı tutamına reaksiyon olmaması ve düzenli nefes almanın sunulması ile cerrahi bir anestezi düzlemine ulaşıldığını kontrol edin. Boynun ventral yüzeyindeki kürkü çıkarmak için makas kullanın ve gözleri hidroksi-propil-metil-selüloz bazlı bir jel ile kornea keratitinden koruyun.

Fareyi steril cerrahi alana dekübit sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Cildi povidon-iyot bazlı antiseptik bir solüsyonla temizleyin ve steril bir örtü ile örtün. Mandibuladan klavikulaya iki santimetre uzunlamasına bir kesi yapmak için bir neşter kullandıktan sonra, cerrahi mikroskoptan bakın ve submandibular bezleri tanımlayın.

Her iki submandibular bezi forseps ile ayırın, geri çekin ve fasiyal sinirdeki digastrik kasın kökenini lokalize edin. Daha sonra, digastrik kasın kökeninde bir makasla bir kesi yapın ve ventral olarak geri çekin ve timpanik bülün altta yatan alt medial yönünü ortaya çıkarın. Ardından, bullayı delmek ve bir açıklık oluşturmak için 27 gauge bir iğne kullanın.

Delinmiş bölgedeki kanı emilebilir bir jelatin süngerle temizleyin. Stapedial arteri, üzerine yapıştırılmış yuvarlak pencere zarında bulun. 34 gauge bir kateter ve bir cam mikro şırınga kullanarak, bullostomiden yavaşça üç ila beş mikrolitre araç solüsyonu enjekte edin ve doldurmak için doğrudan yuvarlak pencere nişine enjekte edin.

Bullostomiyi bir ila iki damla doku yapıştırıcısı ile kapatın. Submandibular bezleri başlangıç pozisyonlarına getirin ve cilt kesilerini 5-0 ipek cerrahi sütür ile kapatın. Yara enfeksiyonunu önlemek için kesi etrafına povidon-iyot veya klorheksidin bazlı antiseptik uygulayın.

Sternal yaslığı korumak için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde tutun. Hayvanı ancak tamamen iyileştikten sonra ev kafesine geri koyun. Fareyi lateral dekübit pozisyonuna yerleştirin ve daha önce gösterildiği gibi dış kulak içi meatusun altındaki septik bir cerrahi alana hazırlayın.

Dış kulak yolunun dikey kısmında 0,5 santimetre boyuna bir kesi yaptıktan sonra cerrahi mikroskop yardımıyla kulak zarının yerini tespit edin. Malleus'un sapı ile ön ve arka bölümlere ayrılan inferior pars tensa'daki üst pars flaccida'yı tanımlayın. Daha sonra, pars flaccida'nın kaudal kısmında küçük bir miringostomi yapın ve enjeksiyon sırasında hava tahliyesine izin vermek için timpanik membranın pars tensasında ek bir kesi yapın.

34 gauge katetere bağlı bir cam mikro şırınga kullanın ve orta kulak net bir şekilde dolana kadar yuvarlak pencere nişine yakın pars flaccida'dan 10 ila 15 mikrolitre araç enjekte edin. Cilt kesilerini 5-0 ipek cerrahi dikiş ile kapatın ve daha önce tarif edildiği gibi temizleyin. Bu grafik, ameliyattan önce ve mikrocerrahiden yedi, 14 ve 28 gün sonra tıklama uyaranlarına yanıt olarak 8 haftalık erkek C57BL / 6J farelerinde ABR eşiklerini göstermektedir.

Bullostomi verileri turuncu renkte, transtimpanik enjeksiyon verileri mavi renkte ve ameliyat edilmemiş hayvanlardan elde edilen veriler gri renkte gösterilmiştir. Bu grafik, mikrocerrahiyi takiben aynı zaman diliminde sekiz ila 40 kilohertz aralığında ton patlaması uyaranlarına yanıt olarak ABR eşiklerini göstermektedir. Yine bullostomi ve trans-timpanik yaklaşımlar arasında anlamlı bir fark gözlenmedi.

Morfolojik çalışmalar, bullostomi veya transtimpanik enjeksiyon ile araç teslimini takiben skala ortamının değişiklik göstermediğini göstermektedir, bu da her iki prosedürün de tek başına hasara yol açmadığını göstermektedir. Bullostomi prosedürünü denerken, kemirgenlerin orta ve iç kulağını çevreleyen kritik ve anatomik yapıyı gözden geçirmeyi unutmamak önemlidir. Bu işlemleri takiben başka teknikler de uygulanabilir.

Örneğin, farmakokinetik çalışmalar için Berlin örneklemesi geliştirildikten sonra, bu teknikler işitsel sinirbilim alanındaki araştırmacıların, başta kemirgenler olmak üzere hayvan modellerinde potansiyel lokal tedavileri keşfetmelerinin yolunu açmaktadır. Bu videoyu izledikten sonra, orta kulakta ilaçların nasıl uygulanacağını ve kemirgenlerde işitmenin nasıl değerlendirileceğini iyi anlamış olmalısınız.