1D İnce Tabaka Kromatografisinin Yapılması

1. TLC Plakaları

1. TLC için yaygın adsorbanlar silika jel, alümina ve selülozdur. TLC plakaları, çeşitli özelliklere sahip ticari olarak temin edilebilir. Bir TLC plakası seçin ve uygun bir boyuta kadar kesin (çoğu uygulama için yaklaşık 5 cm x 5 cm yeterlidir). Cam destekli TLC plakaları için, bir cetvel ve bir cam kesici kullanarak camı çizin, ardından çizgi boyunca dikkatlice kırın.

2. Lekelenme

1. Yaklaşık% 1'lik bir çözelti elde etmek için numuneyi uygun bir çözücü içinde çözün. Mümkünse, çözücü polar olmamalıdır. Kolon kromatografisi fraksiyonları ve diğer seyreltik çözeltiler, çözünen madde %0.2 ile %2.0 arasında bir konsantrasyonda mevcutsa seyreltme olmadan kullanılabilir.
2. Taban çizgisini, plakanın altından yaklaşık 1.0 cm uzakta bir kalemle işaretleyin. Lekeleri plakanın kenarından en az 1.0 cm uzağa yerleştirin ve uygun şekilde etiketleyin.
3. Lekeler bir cam kılcal damar kullanılarak uygulanabilir. TLC plakasını tespit etmek için, az miktarda sıvı çekmek için kılcal damarı çözeltiye batırın. Ucu TLC plakası üzerinde istediğiniz yere nazikçe dokundurun ve hemen çıkarın.
4. Alternatif olarak, her uygulama için yaklaşık 1 μL çözelti vererek mikrolitrelik bir şırınga ile lekeleri uygulayın.
5. Spotlar, adsorbanın yüzeyini gözcü ile rahatsız etmemeye dikkat ederek her yerde art arda uygulanabilir. Uygulamalar arasında solventin kurumasını bekleyin.

3. Gelişmekte Olan Bir Çözücü Seçmek

1. İyi bir ayırma için mümkün olan en az polar çözücünün kullanılması tercih edilir. TLC için yaygın çözücüler arasında heksan, etil asetat, diklorometan ve metanol bulunur (Tablo 1).
2. Uygun bir mobil faz bulmanın uygun bir yolu, TLC plakasını bir numune ile tespit etmektir. 1-2 cm çapında bir çözücü çemberi oluşturmak için yeterli miktarda çözücüyü doğrudan noktaya uygulayın. Dairenin çevresini işaretleyin. Görselleştirme üzerine, uygun bir çözücü, en dıştaki halka, merkezden çözücü cephesine olan mesafenin yaklaşık% 50'si ile iyi ayrılmış halkalar gösterecektir.
3. İki karışabilir çözücü seçerek ve bunları değişen oranlarda test ederek mobil fazın polaritesini ayarlamak gerekebilir. Yaygın karışımlara örnek olarak, etil asetat içeren hekzanlar ve metanol içeren diklorometan verilebilir.

4. Geliştirme

1. Benekli TLC plakasını uygun geliştirme çözücüsünü içeren bir geliştirme odasına yerleştirin. Çözücü çizgisi, TLC plakası üzerinde işaretlenen taban çizgisinin altında olmalıdır.
2. Gelişmekte olan oda, kapaklı bir kavanoz veya alüminyum folyo veya plastik film ile kaplı bir beher olabilir. TLC plakasını barındıracak mevcut en küçük kabı kullanın.
3. Çözücünün plakanın üst kenarına ulaşmasına izin vermeyin. Çözücü cephesi (adsorbanın ıslak kısmının bittiği sınır) plakanın üstünden 5-10 mm uzakta olduğunda, TLC plakasını geliştirme odasından çıkarın ve çözücü kurumadan önce çözücü önünü bir kalemle işaretleyin.

5. Görselleştirme

1. Renkli noktalar hemen görselleştirilebilir ve bir kalemle işaretlenebilir. Çoğu zaman, lekeler görünmez ve bu nedenle başka bir yöntemle görselleştirilmelidir.
2. Genellikle, TLC adsorbanı bir floresan göstergesi içerir. Lekeler, elde tutulan bir ultraviyole (UV) lamba kullanılarak görüntülenebilir. Floresanı söndüren bileşikler, plaka kısa dalga (254 nm) UV ışığı ile ışınlandığında koyu lekeler olarak görünecektir. Floresan bileşikler, uygun bir dalga boyunda UV ışığı ile ışınlandığında parlak noktalar üretecektir. Her noktanın ortasını bir kalemle işaretleyin.
3. Lekeler, TLC plakasına bir görselleştirme reaktifi veya leke uygulanarak da görselleştirilebilir. Görselleştirme reaktifi, plakayı reaktife daldırarak veya plakayı aşındırıcı olmayan bir reaktifle doyurulmuş bir pamuk top ile silerek uygulanabilir.
4. Etanol içindeki% 20'lik bir fosfomolibdik asit çözeltisi, çoğu organik bileşiğin görselleştirilmesi için yararlıdır. Lekeler, plakanın bir ısı tabancasıyla veya bir fırında ısıtılmasıyla ortaya çıkar.
5. Belirli bileşik sınıflarının görselleştirilmesi için başka reaktifler de kullanılabilir. Örneğin, amino asit görselleştirme için ninhidrin reaktifi ve aldehitler ve ketonlar için 2,4-dinitrofenilhidrazin kullanılır.

6. Analiz

1. Geciktirme faktörü (R_f), bir bileşiğin bir TLC plakasından kat ettiği mesafenin, çözücünün kat ettiği mesafeye oranıdır. Bu, taban çizgisinden noktanın merkezine olan mesafenin ölçülmesi ve değerin taban çizgisinden çözücü cephesine olan mesafeye bölünmesiyle belirlenebilir.
   
2. Bir bileşiğin R_f değeri, fiziksel özelliklerinin karakteristiğidir ve sıcaklık, numune boyutu ve adsorbanın kalınlığı ve aktivitesi, sıcaklık ve numune boyutu gibi faktörlere bağlıdır.
3. Bir bilinmeyenin bilinen bir bileşikle aynı olduğunu doğrulamak için, aynı TLC plakasında bir standart tespit edilmelidir. Aynı maddeler aynı özelliğe sahip olacaktır R_f.