Immünkompetan Kemirgenler bir Sağlam Pnömoni Modeli karşı antibakteriyel etkinliğini değerlendirmektir S. pneumoniae H. influenza K. pneumoniae P. aeruginosa ya da A. baumannii

Bu cerrahi olmayan intrabronşiyal enfeksiyon prosedürünün genel amacı, immün yetmezliği olan kemirgenlerde sağlam bir bakteriyel pnömoni oluşturmaktır. Bu yöntem, potansiyel tedavilerin etkinliğinin immünokompetan bir şiddetli pnömoni modelinde değerlendirilmesine izin vererek antibakteriyellerin keşfi ve geliştirilmesi için değer katmaktadır. Bu tekniğin temel avantajı, tipik olarak hayvanların nötropenik olmasını gerektirenler veya diğer yöntemlerle canlı bir enfeksiyon oluşturmayan izolatlar da dahil olmak üzere birçok izolat ile sağlam ve tekrarlanabilir bir akciğer enfeksiyonu oluşturmasıdır.

Genel olarak, bu prosedüre yeni başlayan kişiler mücadele edecektir. Uygun entübasyon, yemek borusu yerine trakeayı entübe etmek için doğru hissi öğrenmeyi gerektiren kör bir prosedürdür. Uygun entübasyon her bilim insanı için farklıdır.

Kanülün tam açısı herkes için aynı olmayabilir. Trakea sırtları için hissetmek anahtardır. Bu tekniği gösteren, laboratuvarımızdan bir bilim adamı olan Cindy Mininger olacak.

Başlamak için, metin protokolünde belirtildiği gibi gece boyunca et suyu kültürlerinden veya burada gösterildiği gibi agar plakalarından tuzlu bakteri süspansiyonları hazırlayın. Kolonileri yüzeyden kazımak için steril bir halka kullanarak agar plakalarından gece boyunca büyümeyi hasat edin. Hasat edilen materyali bulanık, opak bir süspansiyon elde edilene kadar beş mililitre steril tuzlu suya aktarın ve homojen olana kadar kültürü nazikçe girdaplayın.

Daha sonra seri olarak seyreltin ve metin protokolüne göre her seyreltmeden bir alikot plakalayın. Agarı hazırladıktan ve enfeksiyon işlemi için gerekli aletleri monte ettikten sonra, metin protokolüne göre, dokuz mililitre agarı steril bir tüpe alın ve ardından agar yaklaşık 42 santigrat dereceye dengelenene kadar tüpü su banyosuna yerleştirin. Önceden hazırlanmış tuzlu bakteri süspansiyonundan bir mililitre agar tüpüne ekleyin.

Ardından, karıştırmak ve suya geri döndürmek için tüpü birkaç kez ters çevirin. Su banyosuna yakın çalışma yüzeyine temiz, tek kullanımlık bir paspas yerleştirin. Çalışma yüzeyini ve entübasyon cihazını hazırlamak için önce metal kanül ve polietilen boruyu metin protokolüne göre sterilize edin ve ardından cam saklama tüpünde çalışma yüzeyine aktarın.

Ardından, saklama tüpünün kapağını çıkarın ve kanülün tutamak ucunu tüpün açık ucuna kaydırın. Steril forseps kullanarak, beherden bir uzunlukta polietilen boruyu çıkarın ve steril metal kanülün içinden geçirin ve serbestçe hareket ettiğinden emin olun. Silinmez kalemle önceden belirlenmiş bir yere bir kılavuz işareti yerleştirin.

Ardından, steril tek kullanımlık 25 gauge iğneyi, iğneyi borunun içine birkaç milimetre kaydırarak polietilen borunun serbest ucuna yerleştirin. Ardından, tek kullanımlık bir mililitrelik şırıngayı doldurmak için steril bir tuzlu su kullanın. Şırıngayı polietilen boruya takılan iğneye takın ve tüm tuzlu su hacmini borudan yıkayın.

Kullanılmış şırıngayı keskin alet kabına atın. Ardından, yeni bir steril tek kullanımlık bir mililitrelik şırıngayı su banyosundan gelen agar bazlı aşı ile doldurun. 25 gauge iğneyi ve hortumu yeniden takın ve boru tamamen agar ile dolana kadar pistona bastırarak agarı borudan yıkayın.

Fareyi metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, hayvanı başı sağa ve kuyruğu sola bakacak şekilde tek kullanımlık mat üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Ardından, metal kanülün serbest ucunu hayvanın ağzına yerleştirin. Kanülü, serbest ucu yukarı doğru açılı olacak şekilde çevirin ve hafif bir bükülme hareketi ile gırtlak yapılarını dikkatlice atlayarak yavaşça trakeaya doğru ilerletin.

Trakeal halkaları palpe etmek için sol işaret parmağını kullanırken kanülü birkaç kez hafifçe ileri ve geri kaydırarak yemek borusunun aksine trakeaya yerleştirmeyi onaylayın. Yemek borusuna değil trakeaya entübasyonu sağlamak için kanülü hafifçe ileri geri hareket ettirin ve çıkıntıları hissedin. Kanül boğazdan aşağı düzgün bir şekilde kayarsa ve çıkıntılar hissedilemezse, cihazı çıkarın ve tekrar deneyin.

Kanül, trakeanın sol ve sağ bronşlara ayrıldığı çatallanmaya ulaştığında, kanülün sol bronşlara yerleştirildiğinden emin olmak için hayvanın sol tarafına doğru hafif bir bükülme hareketi yapın. Yaygın bir hata, inokusu akciğere yeterince derine yerleştirmemektir, bu da hava yollarını tıkayabilir ve nefes almayı engelleyebilir. Kanül uygun açıya çevrildiğinde sol bronşun içine kolayca kaymalı ve uygun derinliğe doğru düzgün bir şekilde ilerlemelidir.

Uygun derinliğe ulaşıldığını doğrulamak için önceden yerleştirilmiş kılavuz işaretini kullanarak, metal kanülü sol akciğerin yarısı ila dörtte üçü arasında olana kadar ilerletin. Metal kanül yerindeyken, metal kanülün ucundan çıkacak ve akciğeri delmeyecek kadar ilerletildiğinden emin olmak için boru üzerine önceden yerleştirilmiş kılavuz işaretini kullanarak polietilen boruyu birkaç milimetre ilerletin. Her iki kanül de yerindeyken, sol akciğerin büyük lobunun derinliklerine 100 mikrolitre agar süspansiyonu aşılamak için ekli şırıngayı kullanın.

Borunun birkaç milimetresini geri çekin ve sağlam entübasyon cihazını yavaşça çıkarın. Tekrar cam saklama tüpüne koyun ve iyileşmesi için hayvanı yeni bir kafese koyun. Fareler için uygun büyüklükteki ekipmanı kullanarak, çalışma yüzeyini ve kanülü sıçanlar için gösterildiği gibi hazırlayın.

Cam mikro enjeksiyon şırıngasını steril tuzlu su ile doldurmak için steril tek kullanımlık 1 mililitrelik bir şırınga ve steril 25 gauge iğne kullanın. Ardından, salini yeniden monte edilmiş cihazdan yıkayın. Daha sonra, mikro enjeksiyon şırıngasını agar aşısı ile doldurmak için yeni bir steril tek kullanımlık bir mililitre şırınga ve steril 25 gauge iğne kullanın.

Ardından, cihazı yeniden monte edin ve boru tamamen agar ile dolana kadar agar'ı borudan yıkayın. Fareyi metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, hayvanı sıçan için gösterildiği gibi aynı yönde konumlandırın ve trakeayı sıçanla benzer şekilde entübe etmek için sabit ama hafif bir basınç uygulayın. Farelerde teknik daha hassas olduğu için kuvvet kullanmaktan kaçının.

Trakeal halkaları hissederek kanülün trakeaya yerleştirildiğinden emin olun. Kanülü hafifçe çevirin ve sol bronşun içine ilerletin, önceden yerleştirilmiş kılavuz işaretlerini kullanarak akciğerin derinliklerine yerleştirin. Metal kanül yerindeyken, polietilen boruyu birkaç milimetre ilerletin ve 20 mikrolitre agar süspansiyonu aşılayın.

Burada, bir akciğer homojenat numunesinin seri seyreltilmesi ve üçlü kaplamasından sonra bir agar plakası üzerinde büyüyen kolonilerin temsili bir örneği gösterilmektedir. S.pneumoniae ile bu grafikte gösterildiği gibi, enfeksiyondan 96 saat sonra bile, çoğu bakteri izolatı için enfekte akciğerlerde tipik olarak başlangıç kontrollerinin üzerinde birkaç log bazlı on CFU'nun bakteri yükünde bir artış gözlenir ve hayvanlar arasındaki değişkenlik düşüktür. Bu deneyde, bu akciğer enfeksiyonu modelinin, yapı aktivite ilişkilerini desteklemek için bir kurşun kimyasal serisinin optimizasyonu sırasında kullanılabileceğini göstermek için S.pneumoniae'nin kinolona duyarlı veya kinolona dirençli izolatlarına karşı iki bileşik değerlendirildi.

Her sembol, bir sıçanın akciğerlerinden belirlenen CFU'yu temsil eder. Burada, yeni bir polipeptit deformilaz inhibitörü için farmakokinetik, farmakodinamik hedefleri belirlemek için S.pneumoniae veya H.influenzae izolatları ile akciğerde enfekte olmuş immünokompetan farelerde doz aralıklı etkinlik verileri kullanılarak oluşturulan E max modelleri gösterilmiştir. Daireler, değişen dozlarda bileşikle tedavi edilen grup başına dört ila beş fareden ortalama bakteri yükünü temsil eder.

Açık daireler, eğrinin altındaki serbest alanı temsil eder ve dolu daireler, minimum inhibitör konsantrasyon üzerinden konsantrasyon zaman eğrisinin altındaki alanı temsil eder. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik hayvan başına yaklaşık 30 saniye içinde tamamlanabilir ve şırınga dolusu agar aşısı başına beş veya altı hayvana kadar aşılanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, bu ameliyatsız intrabronşiyal enfeksiyon yönteminin nasıl uygulanacağını iyi anlamalı ve birçok farklı bakteri izolatı ile akciğer enfeksiyonları oluşturmak için kullanabilmelisiniz.

enerjik enstrüman