Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

İmünokompetan farelerde böbrek hücreli karsinom ortotopik bir model uygulanması Araştırmacı aynı hayvanda bir primer böbrek tümörü, akciğer metastazların varlığı ile tanımlanan bir klinik açıdan ilgili bir sistem elde edilir. Bu sistem, klinik öncesi, in vivo olarak tedaviler çeşitli test etmek için de kullanılabilir.

Bu prosedürün genel amacı, tümör büyümesi ve metastazı ve anti-tümör tedavilerinin etkinliğinin incelenmesi için tümör hücresinin intrarenal implantasyonu yoluyla fare ortotopik böbrek tümörlerini oluşturmaktır. Bu yöntem, klinik öncesi bir böbrek kanseri modelinde yeni bir tedavinin ne kadar etkili olduğu gibi ürolojik onkoloji alanındaki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu tekniğin en önemli avantajı, intrarenal tümör implantasyonunun klinik renal hücreli karsinom patogenezini taklit eden primer akciğer metastazı yapan bir renal tümör oluşturmasıdır.

Renca tümör hücrelerini hazırlamak için önce PBS ile duruladıktan sonra hücre kültürünü %0.25 Tripsin ve HBSS ile ayırın. Komple RPMI Ortamı ile beş dakika sonra reaksiyonu nötralize edin. Hücreleri santrifüjleme için konik bir tüpe aktarın ve peleti taze HBSS'de yeniden süspanse edin.

Saydıktan sonra, hacmi HBSS'de mililitre başına iki kez on ila altı hücreye ayarlayın ve hücreleri 18 gauge iğne ile donatılmış bir mililitrelik bir şırıngaya çekin. Ardından, bir ısıtma yastığının üzerine steril bir cerrahi örtü yerleştirin ve ayak parmağınızı sıkıştırarak uygun sedasyon seviyesini onaylayın. Farenin sol tarafındaki tüyleri çıkarın ve gözlere veteriner merhemi sürün.

Daha sonra implantasyon bölgesini %5 povidon iyot antiseptik ile temizleyin ve steril bir neşter kullanarak sol kanatta tek bir ila bir buçuk santimetrelik bir kesi yapın ve peritona nüfuz etmemeye dikkat edin. Makas kullanarak, dermisi peritondan ayırın, kanı çıkarmak için insizyon bölgesini steril pamuklu gazlı bezle dövün. Daha sonra başınızı sol elinizle kavrayın ve dalağı peritondan geçirmek için sağ elinizle kanadı destekleyin.

Sağ elinizin bir parmağını kullanarak, fareyi alttan palpe edin. Böbrek görünür hale gelmelidir. Periton ve böbrek boyunca gerginlik sağlamak için hayvanı sıkıca tutarak, bir asistanın 0.1 mililitre Renca hücresini sağlam peritondan böbreğin merkezine yavaşça iletmesini sağlayın.

Hücrelerin geri akışını azaltmak için iğneyi beş ila 10 saniye yerinde tutun. Ardından, insizyonu ince bir siyanoakrilat doku yapıştırıcısı tabakası ile kapatın. Deneysel son noktada, orta karın bölgesinden başlayarak göğüs kafesi, boyun ve tükürük bezleri boyunca orta hat kesisi yapmak için makas kullanın.

Makas ve forseps kullanarak, akciğer dokusundan ödün vermeden kaburgaları dikkatlice çıkarın ve trakeayı ortaya çıkarmak için bağ dokusunu çıkarın. 18 gauge iğne ile donatılmış üç mililitrelik bir şırıngayı %10Hindistan Mürekkebi ve PBS ile doldurun. Daha sonra trakeanın altına dikkatlice ipek bir dikiş geçirmek için forseps kullanın ve ardından gevşek bir düğüm atın.

Daha sonra, iğneyi dikkatlice trakeaya yerleştirin ve akciğerleri bir ila bir buçuk mililitre Hindistan Mürekkebi çözeltisi ile yavaşça şişirin. Mürekkebin geri akışını engellemek için düğümü trakeanın etrafına sıkıca çekin, ardından iğneyi çıkarın ve şişirilmiş akciğerleri çıkarmak için bağ dokusunu dikkatlice kesin. Akciğerleri, oda sıcaklığında kimyasal bir davlumbazda beş mililitre Fekete çözeltisi içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe sabitleyin.

24 ila 48 saat sonra, bozulmamış lekesiz akciğerleri çıkarın ve lobları 35 x 10 milimetrelik bir petri kabında dikkatlice ayırın. Daha sonra diseksiyon mikroskobu altında beyaz tümör nodüllerinin sayısını sayın. Başarılı bir fare intrarenal Renca hücresi implantasyonu, böbrekte tümör gelişimi ve tümör taşıyan hayvanlarla akciğerlere metastaz ile sonuçlanır ve tümör implante edilen böbreklerin artan ağırlığı ile ölçüldüğü gibi sağlam bir tümör yükü gösterir.

Gözlendiği gibi, Renca tümörleri Sitokeratin sekiz ve 18 için immünohistokimyasal boyama ile tanımlanabilir. Renca hücre hattını eksprese eden bir lusiferaz implantasyonu, böbrekteki tümör yükünün izlenmesine ve biyolüminesan görüntüleme ile akciğere metastaz yapılmasına izin verir, çünkü hindistan bağlantısı akciğer şişirme ile daha da doğrulanır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa fare başına beş dakikadan daha kısa sürede tamamlanabilir.

Bu prosedürü denerken, doğru bir intrarenal tümör implantasyonu sağlamak için böbreği periton yoluyla net bir şekilde tanımlamayı unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, yeni ilacın intrarenal tümörlerin büyümesini veya metastazını ne ölçüde etkilediği gibi ek soruları yanıtlamak için klinik öncesi ilaç testi gibi başka yöntemler de gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, farede ortotopik böbrek tümörleri oluşturmak için böbrek içi tümör hücresi implantasyonunun nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.

Canlı hayvanlar ve cerrahi aletlerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken kurumsal hayvan taşıma yönergelerine uymak ve steril bir cerrahi alan ve aletlerin bakımı gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.