Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Wei Wen; Jian-Ping Zhang; Wanqiu Chen; Cameron Arakaki; Xiaolan Li; David Baylink; Gary D. Botimer; Jing Xu; Weiping Yuan; Tao Cheng; Xiao-Bing Zhang

doi:10.3791/55091

Epizomal vektörlerin kullanılması insan periferik kan mononükleer hücrelerinden entegrasyon içerm...

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Generation of Integration-free Induced Pluripotent Stem Cells from Human Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Episomal Vectors

Epizomal vektörlerin kullanılması insan periferik kan mononükleer hücrelerinden entegrasyon içermeyen uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Full Text

11,462 Views

09:45 min

January 1, 2017

DOI: 10.3791/55091-v

Wei Wen¹, Jian-Ping Zhang¹, Wanqiu Chen², Cameron Arakaki², Xiaolan Li^1,2, David Baylink², Gary D. Botimer³, Jing Xu¹, Weiping Yuan¹, Tao Cheng^1,4,5,6,7, Xiao-Bing Zhang^1,2

¹State Key Laboratory of Experimental Hematology, Institute of Hematology and Blood Disease Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, ²Division of Regenerative Medicine, Department of Medicine,Loma Linda University, ³Department of Orthopaedic Surgery,Loma Linda University, ⁴Center for Stem Cell Medicine,Chinese Academy of Medical Sciences, ⁵Department of Stem Cell & Regenerative Medicine,Peking Union Medical College, ⁶Collaborative Innovation Center for Cancer Medicine, ⁷Tianjin Key Laboratory of Blood Cell Therapy and Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu protokol, insan yetişkin periferik kan hücrelerinden entegrasyon gerektirmeyen iPSC'lerin verimli bir şekilde üretilmesi için ayrıntılı bir yöntemi açıklar. Yeniden programlama faktörlerini ifade etmek için dört oriP/EBNA bazlı epizomal vektörün kullanılmasıyla, KLF4, MYC, BCL-XL veya OCT4 ve SOX2, 1 mL periferik kandan binlerce iPSC kolonisi elde edilebilir.

Bu prosedürün genel amacı, entegre olmayan epizomal vektörler kullanarak yetişkin insan periferik kan mononükleer hücrelerinden iPS hücreleri üretmektir. Bu protokol, hastalık izleme, ilaç taraması ve düzenli radyo tıbbı için iPS hücreleri üretmek isteyen kök hücre alanındaki bilim adamlarına yardımcı olabilir. Yeniden programlama protokolümüz çok basit, ancak son derece verimlidir.

Bu prosedürü takiben, kan hücresi yeniden programlama tekniğine kolayca hakim olunabilir. Başarılı bir yeniden programlama için plazmanın kalitesi de aynı derecede önemlidir. Kirleticiler yeniden programlama verimliliğini azaltabilir, bu nedenle epizomal plazmitleri saflaştırmak için Endofree kitlerinin kullanılmasını öneririz.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos