2 Ocak 2017
Mürin tam kalınlıkta deri transplantasyonu alloimmun ortamda reddini incelemek için iyi kurulmuş bir modeldir. > C57BL / 6 tam kalınlıkta deri nakli - Burada bir BALB / c performans katılan her adımda bir öğretici sağlar.
Bu video makalesinin genel amacı, tam kat deri transplantasyonu gerçekleştirmek ve başarılı bir prosedür için gerekli olan önemli adımları tanımlamaktır. Fare tam kat deri transplantasyonu, alloimmün yanıtları ve greft reddini incelemek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Prosedürün uygulanması kolaydır ve hassas mikrocerrahi teknikler gerektirmez.
Bu modelde greft reddi, oldukça tekrarlanabilir bir immünolojik reaksiyonla gerçekleşir ve doğrudan inceleme ve palpasyonla kolayca izlenebilir. Ayrıca, donörle eşleşen veya üçüncü taraf deri greftleri ile yapılan ikincil deri transplantasyonu, donöre özgü toleransı değerlendirmek için alternatif ve basit bir yöntem olarak daha karmaşık transplantasyon modellerine uygulanabilir. Metin protokolüne uygun olarak bir donör fareyi anestezi altına aldıktan sonra, hayvanın sırtını tıraş etmek için elektrikli tıraş makinesi kullanın.
Ardından, %10 povidon-iyot ile cildi dezenfekte edin. Makas ve künt diseksiyon kullanarak, donör sırt derisini kalçadan boyuna kadar areolar bağ dokusu seviyesinde hasat edin. Sırt derisini bir mikroskop altına yerleştirin ve bağ dokusunu ve panniculus carnosus'u deriden ayırmak için ince tenotomi makasları kullanın.
10 x 10 ile 15 x 15 milimetrelik bir greft yatağı oluşturmak için sırt derisinden 15 x 15 milimetrelik greftler kesin. Greftleri PBS ile ıslatılmış gazlı bez üzerinde bir Petri kabında saklayın ve buz üzerine yerleştirin. Alıcı fareyi metin protokolüne uygun olarak anestezi altına alın.
Greftin yerleştirileceği bölge olan hayvanın sırtının yan kısmını tıraş edin ve ardından ameliyat sonrası ağrıyı gidermek için kilogram başına 0,02 miligram buprenorfine uygulayın. Bölgeyi dezenfekte etmek için %10 povidon-iyot kullanın. Makas kullanarak, mümkün olduğunca yüzeysel bir şekilde, 10 x 10 ile 15 x 15 milimetre boyutlarında kare bir deri parçası kesin.
Panniculus carnosus'u ve onun yüzeysel kısmında seyreden kan damarlarını korumaya özen gösterin. Ardından, kenarlarda katlanmalar oluşmamasına dikkat ederek grefti greft yatağına yerleştirin. Sonrasında, iğneyi greften ve ardından çevre alıcı deri altındaki greft yatağının panniculus carnosus'undan geçirerek greftin köşelerine ve her kenarın ortasına toplam sekiz dikiş atın.
Katlanmış gazlı bezi iki kat yapılmış bir bandajın üzerine yerleştirin ve ardından hayvanı, greft tarafı aşağı gelecek şekilde bandajın üzerine konumlandırın; hayvanın kısmen ayılmasına izin vermek için anestezik maskeyi çıkarın. Sonra, bandajı hayvanın etrafına sarın. Greftleme sürecindeki en kritik faktör, konakçı damarların grefte doğru büyümesiyle greft dokusunun revaskülarizasyonudur.
Panniculus carnosus'un diseksiyonu ve bandajın doğru şekilde yerleştirilmesi en önemli adımlardır. Cerrahi işlemden hemen sonra, enfeksiyon profilaksisi için kilogram başına 5 miligram enrofloksasin uygulayın. Transplant edilen fareyi, anesteziden tamamen çıkana kadar temiz bir kafese yerleştirin.
Fareyi, barınma tesisine geri götürmeden önce ameliyat sonrası bir saat boyunca gözlemleyin. Bandajın göğüs hareketlerini ve solunumu kısıtlamadığından emin olmak için fareyi iyileşme sürecinde yakından izleyin. Sekiz gün sonra, grefti kabuklanma, kontraksiyon veya sertleşme belirtileri açısından gözlemleyin ve palpasyonla değerlendirin.
Bu belirtilerden herhangi biri mevcutsa, greft uygun şekilde vaskülarize olmamış olabilir ve bu durum teknik bir başarısızlık olarak değerlendirilmelidir. Redd edilme belirtileri açısından grefti her gün izleyin. Greft dokusunun %90 veya daha fazlası nekrotik hale geldiğinde greftlerin reddedildiği kabul edilmelidir.
Tam uyumsuzluk modellerinde, tam kat deri greftleri genellikle sekiz ila 12 gün içinde reddedilir. Küçük uyumsuzluk modellerinde red yanıtları daha yavaştır, daha değişkenlik gösterir ve deri greftinin görünümü büzülme veya tüy kaybı gibi daha az belirgin değişikliklerle karakterizedir. Akut greft reddi genellikle greftin şişmesi ve eritemi ile başlar.
Bu olayları, burada görüldüğü üzere greft kuruması, kabuk oluşumu ve büzülme takip eder. MHC uyumsuzluğunun derecesine ve immünosupresyon protokolüne bağlı olarak redde; tüy kaybı, pigmentasyon kaybı, dermal çizgilerin kaybolması ve greft hacminin azalması gibi hafif değişikliklerle karakterize subakut bir süreçle meydana gelebilir. Bu durumlarda, reddedilmiş bir greft; parlak, beyaz, tüysüz ve kenarları düzensiz görünür.
Donör olarak BALB/c ve alıcı olarak C57 black 6 kullanılarak yapılan çalışmalarda, glikolizin ve oksidatif fosforilasyonun veya tek başına glutamin metabolizmasının inhibe edilmesinin deri grefti sağkalımını uzattığı gözlemlenmiştir. Ancak, üç yolun eş zamanlı olarak bloke edilmesi greft sağkalımında anlamlı bir artışla sonuçlanmıştır. Dahası, üçlü metabolik terapi, geleneksel siklosporin veya rapamisinden daha etkili bulunmuştur.
Ayrıca, metabolik terapi grubundan alınan deri greftlerinin histolojisi, tedavi edilmeyen dokuyla karşılaştırıldığında daha sağlam doku hizalanması ve daha az lenfositik inflamatuar infiltrat sergilemiştir. Organ nakli sonuçları, cerrahi prosedürlerdeki ve immünosüpresyon protokollerindeki gelişmelerle önemli ölçüde iyileşmiştir. Ancak, uzun süreli immünosüpresyon ciddi yan etkilerle ilişkilendirilmektedir ve toleransı artıran yeni stratejiler modern transplantasyon araştırmalarının hedefi olmaya devam etmektedir.
Metabolizmanın T-hücrelerini düzenlemedeki önemi iyi bilinmektedir. Glikolizi, oksidatif fosforilasyonu ve glutamin metabolizmasını inhibe ederek, allogreft sağkalımını önemli ölçüde artırmayı başardık. Bu yeni yaklaşım, geleneksel terapiden daha etkili olmuş olup, immün düzenleme ve transplantasyona yönelik potansiyel yaklaşımlarda bir paradigma değişimini temsil etmektedir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu video makale, farelerde, özellikle BALB/c'den C57BL/6 modeline tam kat deri nakli gerçekleştirme üzerine bir öğretici sunmaktadır. Başarılı bir prosedür için gerekli adımları ana hatlarıyla belirtmekte ve bu modelin alloimmün yanıtların ve greft reddinin incelenmesindeki önemini tartışmaktadır.
Murin tam kat cilt transplantasyonu, alloimmün yanıtların ve greft reddinin incelenmesi için tekrarlanabilir bir in vivo model sağlayarak, immünomodülatör stratejilerin mekanistik risklerinin azaltılmasına olanak tanır. Bu model, hedef doğrulamayı ve tolerans indükleyici tedavilerin preklinik değerlendirmesini destekleyerek transplant biyolojisi programları için öngörücü değer sunar. Basitliği ve tekrarlanabilirliği, erken keşif iş akışlarında fonksiyonlar arası iş birliğini kolaylaştırır.
Model, keşiften preklinik aşamaya uzanan sürekliliğe uyum sağlayarak immünolojide hipotez testlerini desteklemekte ve immünomodülatör değerlendirmesi için assaya hazır sistemlerin oluşturulmasına olanak tanımaktadır.