Name: Bir Tüysüz fare kulak memesi içinde intravital Mikroskopi ve trombüs İndüksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Öğrenin, tüysüz fare kulak memesi modelinde intravital floresan mikroskopi ve fototoksik trombüs indüksiyonu ile mikrovasküler trombüs oluşumunu in vivo araştırma. Bu yöntem yeni antitrombotik ilaçların geliştirilmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar hiçbir onayları var.

All in vivo deneyler (7221.3-1-006 / 15) Hayvanların korunması ve Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanımı için NIH Kılavuzu (Laboratuar Hayvan Kaynakları Enstitüsü, Ulusal Araştırma Konseyi) Alman mevzuatına uygun olarak yapılmıştır. Hayvanların 1. Genel tutulması <ol><li> 4 ila 6 hafta arası erkek SKH1-Hr hr farelerle deneyler yapın. 20 ve 25 g arasında ağırlığa sahip hayvanlar kullanın. </li><li> Su ve yiyecek istedikleri kadar hiç istikrarlı erişimi olan bir patojen içermeyen tesiste ve 26 ° C&#39;ye kadar 24 standartlaştırılmış koşulları ve yaklaşık% 60 bağıl nem altında hayvanları tutun. </li><li> bir kafes içinde beş erkek hayvanlar kadar tutun. Onların iyiliği için hayvanların barınma sırasında yatak ve zenginleştirme malzemeyi sağlamak. </li></ol> Hayvanlar 2. prearrangement <ol><li> (Örneğin, kanabinoid, 5 m fare tartılır ve ilgili ilaç yükbir insülin şırıngasına g / kg vücut ağırlığı (BW)). trombus indüksiyonu öncesinde ilaç 30 dakika yönetmek. </li><li> başparmak ve işaret parmağı ve küçük parmak fare kuyruğu arasındaki farenin boynunu tutarak, hayvan germek ve karın sol alt kadranda içine ilaç intraperitoneal (ip) enjekte edin. 15 dakika boyunca kafesine geri hayvan koyun. </li><li> ketamin (90 mg / kg vücut ağırlığı) ve ksilazin (25 mg / kg vücut ağırlığı) ile anestezi hazırlayın. trombus indüksiyonuna 15 dakika önce, fare anestezi. Kafesteki fareyi koyun hafifçe kuyruk çekin ve bir insülin şırınga ile anestezikler ip enjekte edin. </li><li> Anestezi başlangıcından kadar geri kafesin içine fare koyun. Yeterli anestezi doğrulamak için, forseps ile kuyruk çimdik. </li><li> bir insülin şırıngasına (% 5, 150 kDa, FITC-dekstran) çözüldü floresin izotiyosiyanat-etiketli dekstran yük 0.05 ml. şırıngayı doldururken, hava kabarcığı, kalmasını sağlamak hatta küçük intravenousl çünküY, (iv) idaresindeki hava kabarcıkları hayvan için ölümcül olabilir. </li><li> aşağı dönük pozisyonda bir ısıtma plakası üzerinde anestezi fare yerleştirin. 37 ° C&#39;ye ısıtma plakası ayarlayın. </li><li> fare kornea üzerinde göz merhemi koyun. cilt dezenfekte ve steril aletler kullanılır. </li><li> Sağ kulak kranial ve kaudal kenarına polipropilen 7/0 iki dikiş Dikiş. Mümkün olan (Şekil 1B) gibi bir baz olarak kenarına yakın ve proksimal olarak dikiş yerleştirin. </li><li> sırtüstü için fareyi Shift. yapışkan şeritler kullanılarak acrylglass platforma tüm bacaklar sabitleyin. ön dişleri altında bir dikiş kanca ve yapışkan şeritlerle acrylglass sütürü yapışarak dorsifleksiyonda baş pozisyonu. </li><li> operasyon stereomicroscope altında platformda hayvan transloke. 16X büyütme kullanın. </li></ol> Sol jügüler damar ve FITC-dekstran Enjeksiyon 3. hazırlanması Not: mikrofon içinSağ kulak roscopy, sol juguler ven hazırlar. <ol><li> Bir bisturi kullanılarak, bir kranyokaudal yönünde boyun sol tarafında deri 5 mm&#39;lik bir insizyon oluşturmak. Bir microforceps ve microscissors deri altı doku inceleyin. Polyester 8/0 dikiş veya elektrokoagülasyon ile ligatı geçiş kaplar ya. </li><li> gemi dokunmadan microforceps ve microscissors kullanarak kendi adventisyanın gelen damar boşaltın. </li><li> Floresan boyasının, enjeksiyon için hazırlanmış insülin şırınga kullanın. Dikkatle damarı delinmeden, mikroforcepslerle damar duvarını yakala. şırınga ile gerilmiş damar duvarına penetre ve FITC-dekstran iv enjekte edilir. </li><li> bir pamukla şırınga çekilmesi sonrasında kanamayı durdurun. kan kaçının ve kulağın kirlenmesini boya. </li></ol> Intravital Floresan Mikroskopi Sağ Kulak 4. Konumlandırma <ol><li> Bir acrylglass c ısıtma plakası üzerinde hayvan aktarmaIsıtma plakası için bir yarık ve kulak konumlandırılması için bir 0.5 cm yüksekliğindeki düzlem ile onstrüksiyon. </li><li> yapışkan şeritler kullanılarak ısıtma plakası üzerinde hayvan yüzü aşağı bakacak şekilde düzeltildi. Kulak apikal kısmı düzlemde düz yerleştirilmiş olabilir, böylece kulak (Şekil 1B) 0.5 cm yüksekliğindeki düzlem yanında kulağın kökünde nispeten güçlü ve dışbükey kıkırdak yerleştirin. </li><li> kulak konumlandırmak üzere acrylglass düzlemine Oda sıcaklığında% 0.9 NaCl, bir damla ekleyin. içbükey ventral tarafta önceden düzenlenmiş dikiş% 0.9 NaCl damla, aşağı doğru bakacak şekilde, sağ kulak yerleştirin. Pamuklu çubuk kullanarak, NaCl damlasını emmesi ve kılcal kuvvetler acrylglass için kulak uçağı eklemek edelim. </li><li> kulağın pozisyonunu düzeltmek için acrylglass için dikiş kaydet. </li><li> kulak dışbükey dorsal tarafına% 0.9, oda sıcaklığı NaCI bir damla ekleyin. Dikkatle th giren bazal damarları sıkıştırmadan kulakta, bir lamel (0.5 cm çaplı) koymakE kulak. pamuklu bez kullanılarak, lamel ve kulak hedef damarlar arasındaki mesafeyi en aza indirmek için coverslip altında mümkün olduğu kadar NaCl çıkarın. </li></ol> Sağ Kulak 5. intravital Floresan Mikroskopi ve Trombüsü İndüksiyon <ol><li> (-;: 510; LP: 520 FT 490 nm, 450), FITC-dekstran görselleştirme için intravital floresan mikroskobu ayarlayın. bir ışık kaynağı olarak bir değişken 100 W cıva buharlı bir lamba kullanarak. Bir DVD kaydedici yüksek çözünürlüklü, siyah-beyaz CCD kamera bağlayın. </li><li> İntra vital floresan mikroskop masasına sabitlenen kaçırılan kulak ısıtma plakası içeren acrylglass üzerinde hayvan aktarın. </li><li> çapında ve 400 anterograd kan akımı ile 60 um - - 600 mm / s 20X büyütme (20X / 0.95 sayısal açıklığı) ve% 20 ışık yoğunluğu kullanılarak, bir venöz damar için 50 arayın. </li><li> 63x magnificatio su daldırma için lamel oda sıcaklığında su bir damla eklemen, hedef (63X / 0.95 sayısal açıklık). 1 mm çaplı kanül olan bir şırınga kullanın ve mikroskop amacı olduğunda damla yerleştirin. su damlası ile lamel ve objektif temas için yeterli su ekleyin. </li><li> Hemen su damlası uygulanmasından sonra, çapı ve kan akışı çevrimdışı ölçümü için% 20 ışık yoğunluğuyla 20 s için kabı kayıt başlar. </li><li> FITC-dekstran ile enjekte edilmesinden sonra trombus indüksiyon 5 dakika başlatın. Bu amaçla,% 100 ışık yoğunluğunu yükseltmek. </li><li> trombus indüksiyonu sırasında, kan akışını kontrol etmek için 30 saniyelik bir süre içinde, 2 saniye süreyle mikroskop açıklığı kapatmak. Kan akışının devam etmesi durumunda, daha açıklığı açmak. durdu kan akışı durumunda, 30 saniye boyunca gemi gözlemleyin. NOT: Akış 30 sn veya daha uzun süre veya kan retrograd akar eğer hala duruyor sanki damar tıkalı olarak sınıflandırılır. ortograd kan akışı yeniden başlarsa, tamamen açıklığı ve Contin açmak<html> yukarıda tarif edildiği gibi vi damar oklüzyonu kadar trombus indüksiyon meydana gelir. Erken trombus indüksiyonu sırasında, açıklık kan akışını kontrol etmek için kapalı süreleri neredeyse sürekli epi-aydınlatma sağlamak amacıyla mümkün olduğu kadar kısa olduğundan emin olun. Daha sonra, trombüs büyüme sırasında, gemi az bir floresan boya ile perfüze, bu yüzden sürekli gözlenebilir. </li><li> Seçip kulağa başına 5 damarlarını tıkayabilir. FITC-dekstran ile enjekte edilmesinden sonra, yaklaşık 1 saat için mikroskop altında trombus indüksiyon süresi sınırlar. </li></ol> 6. Takibi Etkinlikleri <ol><li> transkütanöz polipropilen 6/0 sütür kullanılarak boynun bir yara kapanmasını gerçekleştirin. </li><li> anestezi kurtarma sırasında, kafesine geri fare koymak ve kızıl ötesi ışık kullanarak hayvan ısıtın. </li><li> damar ve kan akışının hızının çapının ölçümü sağlayan yazılıma DVD kaydedici kaydedilen verileri aktarın. </li></ol>Sol Kulak _title &quot;&gt; 7. Sınav <ol><li> hayvan eski ve 48 saat tüm enjekte FITC-dekstran ortadan olsun. </li><li> Yukarıda açıklanan adımları, sağ juguler ven ve sol kulağını hazırlarken bu kez yeniden çalıştırın. </li></ol> 8. Doku Asservation <ol><li> sol kulağın intravital floresan mikroskobu sonra, numune 0.5 mL göz retrobulbar damar pleksustan kan bir cam kılcal kullanılmıştır. Venöz kan kılcal akar kadar dikkatlice, vidalama hareketi ile iç palpebral açısı nüfuz eder. bir etilendiamintetraasetik asit (EDTA), kan tüpü içinde sonda toplayın. </li><li> kan örneği alındıktan sonra, kuyruk damarına 500 mg / kg vücut ağırlığı ketamin enjekte edilerek hayvan kurban. </li><li> lökositler eritrosit, trombosit, hemoglobin ve hematokrit kantitatif bir değerlendirme için bir hematoloji analiz cihazı kullanarak kan hücreleri sayın. </li><li> 10 m 2.500 x g&#39;de oda sıcaklığında geri kalan EDTA kan santrifüjiçinde. Pipet ve daha ileri araştırmalar için kan plazması dondurmak. </li><li> makas kullanarak, kulakçıkları kesilmiş ve histolojik inceleme için% 4 formaldehit bunları düzeltin. </li></ol>

<ol><li>White, R. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12814979">The epidemiology of venous thromboembolism.</a> Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).</li>
<li>Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2646590/">The hairless mouse in skin research.</a> J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).</li>
<li>Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+endogenous%2C+phyto+and+synthetic+cannabinoids+on+thrombogenesis+and+platelet+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biofactors%22%5BJournal%5D)">Differential effects of endogenous, phyto and synthetic cannabinoids on thrombogenesis and platelet activity.</a> Biofactors. , (2016).</li>
<li>Eriksson, E., Boykin, J. V., Pittman, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+in+vivo+microscopy+of+the+cutaneous+microcirculation+of+the+hairless+mouse+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Method for in vivo microscopy of the cutaneous microcirculation of the hairless mouse ear.</a> Microvasc Res. 19 (3), 374-379 (1980).</li>
<li>Barker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hairless+mouse+ear+for+in+vivo+studies+of+skin+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">The hairless mouse ear for in vivo studies of skin microcirculation.</a> Plast Reconstr Surg. 83 (6), 948-959 (1989).</li>
<li>Goertz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+novel+polihexanide-preserved+wound+covering+gel+on+dermal+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a novel polihexanide-preserved wound covering gel on dermal wound healing.</a> Eur Surg Res. 44 (1), 23-29 (2010).</li>
<li>Goertz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+microcirculatory+changes+and+angiogenesis+in+a+model+of+frostbite+injury+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Determination of microcirculatory changes and angiogenesis in a model of frostbite injury in vivo.</a> J Surg Res. 168 (1), 155-161 (2011).</li>
<li>Roesken, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+for+quantitative+in+vivo+microscopic+analysis+of+thrombus+formation+and+vascular+recanalisation%3A+the+ear+of+the+hairless+%28hr%2Fhr%29+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">A new model for quantitative in vivo microscopic analysis of thrombus formation and vascular recanalisation: the ear of the hairless (hr/hr) mouse.</a> Thromb Haemost. 78 (5), 1408-1414 (1997).</li>
<li>Sorg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+is+as+effective+as+heparin+and+hirudin+to+prevent+formation+of+microvascular+thrombosis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemos%22%5BJournal%5D)">Antithrombin is as effective as heparin and hirudin to prevent formation of microvascular thrombosis in a murine model.</a> Thromb Haemos. 96 (3), 371-377 (2006).</li>
<li>Sorg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+antithrombin+in+the+prevention+of+microvascular+thrombosis+during+endotoxemia%3A+an+intravital+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Efficacy of antithrombin in the prevention of microvascular thrombosis during endotoxemia: an intravital microscopic study.</a> Thromb Res. 121 (2), 241-248 (2007).</li>
<li>Kovács, I. B., Sebes, A., Trombitás, K., Csalay, L., Görög, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings%3A+Improved+technique+to+produce+endothelial+injury+by+laser+beam+without+direct+damage+of+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Diath+Haemorrh%22%5BJournal%5D)">Proceedings: Improved technique to produce endothelial injury by laser beam without direct damage of blood cells.</a> Thromb Diath Haemorrh. 34 (1), 331(1975).</li>
<li>Laschke, M. W., Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dorsal+skinfold+chamber%3A+window+into+the+dynamic+interaction+of+biomaterials+with+their+surrounding+host+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mat%22%5BJournal%5D)">The dorsal skinfold chamber: window into the dynamic interaction of biomaterials with their surrounding host tissue.</a> Eur Cell Mat. 20 (22), 147-167 (2011).</li>
<li>Grambow, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+hydrogen+sulfide+donor+GYY4137+on+platelet+activation+and+microvascular+thrombus+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Effect of the hydrogen sulfide donor GYY4137 on platelet activation and microvascular thrombus formation in mice.</a> Platelets. 25 (3), 166-174 (2014).</li>
<li>Fiebig, E., Ley, K., Arfors, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+leukocyte+accumulation+by+spontaneous+rolling+and+adhesion+in+the+exteriorized+rabbit+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microcirc+Clin+Exp%22%5BJournal%5D)">Rapid leukocyte accumulation by spontaneous rolling and adhesion in the exteriorized rabbit mesentery.</a> Int J Microcirc Clin Exp. 10 (2), 127-144 (1991).</li>
<li>Harder, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-specific+ischemic+tissue+tolerance+in+critically+perfused+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks.+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Gender-specific ischemic tissue tolerance in critically perfused skin.</a> Langenbecks. Arch Surg. 395 (1), 33-40 (2010).</li>
<li>Langer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+polyvinylpyrrolidone-iodine+liposomal+hydrogel+on+wound+microcirculation+in+SKH1-hr+hairless+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of polyvinylpyrrolidone-iodine liposomal hydrogel on wound microcirculation in SKH1-hr hairless mice.</a> Eur Surg Res. 38 (1), 27-34 (2006).</li>
<li>Saniabadi, A. R., Umemura, K., Matsumoto, N., Sakuma, S., Nakashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+wall+injury+and+arterial+thrombosis+induced+by+a+photochemical+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Vessel wall injury and arterial thrombosis induced by a photochemical reaction.</a> Thromb Haemost. 73 (5), 868-872 (1995).</li>
<li>Herrmann, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+aggregation+induced+in+the+hamster+cheek+pouch+by+a+photochemical+process+with+excited+fluorescein+isothiocyanate-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet aggregation induced in the hamster cheek pouch by a photochemical process with excited fluorescein isothiocyanate-dextran.</a> Microvasc Res. 26 (2), 238-249 (1983).</li>
<li>Rumbaut, R. E., Slaff, D. W., Burns, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+thrombosis+models+in+venules+and+arterioles+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Microvascular thrombosis models in venules and arterioles in vivo.</a> Microcirculation. 12 (3), 259-274 (2005).</li>
<li>Lee, W. M., Lee, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+coronary+atherosclerosis+in+swine+produced+by+combination+of+balloon-catheter+injury+and+cholesterol+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Advanced coronary atherosclerosis in swine produced by combination of balloon-catheter injury and cholesterol feeding.</a> Exp Mol Pathol. 23 (3), 491-499 (1975).</li>
<li>Callahan, A. B., Lutz, B. R., Fulton, G. P., Degelman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+and+thrombus+thresholds+to+unipolar+stimulation+of+small+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle and thrombus thresholds to unipolar stimulation of small blood vessels.</a> Angiology. 11, 35-39 (1960).</li>
<li>Rosen, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+noninvasive+vascular+injury+models+in+mice+generate+platelet-+and+coagulation-dependent+thrombi%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi.</a> Am J Pathol. 158 (5), 1613-1622 (2001).</li>
<li>Agero, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+mutalysin+II+on+vascular+recanalization+after+thrombosis+induction+in+the+ear+of+the+hairless+mice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Effect of mutalysin II on vascular recanalization after thrombosis induction in the ear of the hairless mice model.</a> Toxicon. 50 (5), 698-706 (2007).</li>
<li>Menger, M. D., Rösken, M., Rücker, M., Seiffge, D., Vollmar, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14518203">Antithrombotic and thrombolytic effectiveness of rhirudin in microvessels.</a> Langenbecks Arch Chir. 115 (1), 19-20 (1998).</li>
<li>Bilheiro, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thrombolytic+action+of+a+proteolytic+fraction+%28P1G10%29+from+Carica+candamarcensis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">The thrombolytic action of a proteolytic fraction (P1G10) from Carica candamarcensis.</a> Thromb Res. 131 (4), 175-182 (2013).</li>
<li>Kram, L., Grambow, E., Mueller-Graf, F., Sorg, H., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-thrombotic+effect+of+hydrogen+sulfide+is+partly+mediated+by+an+upregulation+of+nitric+oxide+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">The anti-thrombotic effect of hydrogen sulfide is partly mediated by an upregulation of nitric oxide synthases.</a> Thromb Res. 132 (2), 112-117 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

SKH1-Sa sa farelerin kulak memesi başarılı trombüs indüksiyon için pek çok kritik adım vardır. Sorun giderme için, protokolün ilgili adımlar parantez içinde belirtilmiştir. 6 hafta ve epidermis düşük kornifikasyonu ile - Sınav koşulları 4 yaşında genç hayvanlarda idealdir. Büyük hayvanlarda, damarların görüntülenmesi kalitesi nedeniyle cilt yüzeyi ile hedef damarlar (adım 1.1) arasında daha yüksek mesafeye daha kötü ve daha karşılaştırılabilir. incelem...

Bu makalenin amacı direkt gözlem ve mikrodolaşımında analizi, trombüs oluşumu ve trombüs evrim için tüysüz fare aurikula uygulanan intravital mikroskopi tekniği tanımlamaktır. 1,000&#39;de 1 olan bir insidans oranı ile, venöz tromboz hala morbiditenin yaygın bir nedenidir. Teşhis, önleme stratejileri ve tedavileri son yıllarda geliştirilmiş olmasına rağmen, venöz tromboz üçte biri bir pulmoner emboli 1 olarak tezahür eder. Arter trombozu sanayi ülkelerinde en yaygın ölüm nedenidir kardiyovasküler hastalıklar, kritik bir rol oynar. aterosklerotik plakların kopması dayalı Arter trombozu kalp krizi, mezenterik enfarktüsü ve felcin katılır. Her ameliyat, kan bileşenlerine subendotelyal yapıları ortaya çıkarır kan akışı dinamiklerini değiştiriyor ve hastayı hareketsiz hale getirir. Alt bacak, organ t endoprostetik cerrahisinderansplantation ve flep cerrahisi tromboz komplikasyonlarının sık nedenleridir. özellikle mikrovasküler tromboz sık olarak klinik semptomların olmaması nedeniyle, geri dönüşü olmayan bir hasara neden olur. Benzer şekilde, mikrovasküler tromboz diğerleri arasında trombotik trombositopenik purpura, sepsis, yayılmış damar içi pıhtılaşma, antifosfolipid sendromu, kronik venöz yetmezliği de dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda önemli bir kural oynar. terapi ve tromboz önlenmesi için çeşitli yeni ilaçlar son yıllarda geliştirilen, ancak antiplatelet ilaçlar ve antikoagülanlar hala yan etkileri, eksikliği antagonistleri var ve uzun süreli etkileri vardır. Bu eksiklikler, acil tıbbi bakım problemlerine yol açar. Bu nedenle, daha fazla araştırma hiç in vitro taklit edilebilir tromboz, esnasında cereyan eden kompleks işlemleri ortaya çıkarmak için gereklidir. Tüysüz SKH1-Sa sa fare Londra&#39;da bir hayvanat bahçesinde 1926 keşfedildi.Nedeniyle kromozom 14 üzerinde bir gen hatası nedeniyle, hayvan Bu gemilerin intravital mikroskopi için erişilebilir iyi kanlanan kulak kepçesi yapar doğum sonrası 10. günde sonra kürk kaybeder. kulak ortalama kalınlığı 300 um&#39;dir. Bu kıkırdak ayrılmış dermisin iki katmandan oluşur. kıkırdak dışbükey sırt tarafında, 3 iletim demetleri kulak memesi girin. Apikal vasküler yaylar ve bazal şant üç demetleri bağlayın. venüller 200 um (bazal) ve 10 um (apikal) arasında çaplara sahiptirler. Dar örgülü kılcal boş saç 2 folikülleri çevreler. Tüysüz SKH1-Hr hr fare anatomi kulak kepçesi tromboz araştırma için güçlü ve uygun maliyetli bir model yapar.

<table><tbody><tr><td>SKH-1 / saat fareler</td><td>Charles River</td><td>477</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>standart laboratuvar gıda</td><td>ssniff Spezialdiaeten</td><td>V1594-0&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>operasyon stereomikroskop</td><td>Leica&nbsp;</td><td>M651/M655&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>intravital mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Axiotech Vario 100&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>amaç (20X/0.95)&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>objektif (63X/0.95)</td><td>Zeiss</td><td>63x/0,95 W; ACHROPLAN&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>siyah beyaz CCD kamera&nbsp;</td><td>Börek&nbsp;</td><td>FK 6990 IQ-S&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>DVD kaydedici</td><td>Panasonic</td><td>DMR-EX99V&nbsp;</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>sodyum klorür</td><td>Braun</td><td>5/12612055/1011</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Ketamin% 10</td> <td>Bela pharm</td><td>F3901-6</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Ksilazin% 2</td> <td>Bayer</td><td>6293841.00.00</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC-dextran %5</td> <td>Sigma&nbsp;</td><td>46945-100MG-F</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>deksapanthenol% 5 göz merhemi</td><td>Bayer</td><td>6029009.00.00</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>formaldehit% 4</td> <td>Sigma</td><td>HT501128-4L</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>472301</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>lameller 5 x 5 x 1 mm</td><td>Menzel</td><td>L4339</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Yapışkan şeritler</td><td>Leukosilk</td><td>4683400</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>santrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>CLGS 15</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>hematoloji analizörü</td><td>Sysmex</td><td>KX-21 A6980</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>EDTA-kan tüpü</td><td>Sarstedt</td><td>201,341</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>pamuklu çubuklar</td><td>Sanyo</td><td>604-A-1</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>kızılötesi ışık</td><td>Beurer</td><td>5/13855</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>tek kullanımlık synringe</td><td>Braun&nbsp;</td><td>2020-08</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>insülin şırıngası</td><td>Braun</td><td>9161502</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>tek kullanımlık hipodermik iğneler</td><td>Braun</td><td>465 7640</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>uçtan uca kılcal</td><td>Sarstedt</td><td>19.447</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>ısıtma plakası</td><td>Klaus Effenberg</td><td>OP-T 185/03</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>makas 14,5 cm</td><td>Aesculap</td><td>BC259R</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>iğne Tutucu</td><td>Aesculap</td><td>BM081R</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>microforceps</td><td>Aesculap</td><td>BD331R</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>microscissors</td><td>Aesculap</td><td>OC496R</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>neşter 21</td><td>Dahlhausen</td><td>11.000.00.511</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Prolene 7-0</td><td>Ethicon</td><td>XNEH7470</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Etik</td><td>XN8706. P33</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>elektrokoter</td><td>Servoprax</td><td>H40140</td><td>diğer satıcılardan satın alınabilir&nbsp;</td></tr><tr><td>Acrylglass ped</td><td></td><td></td><td>entegre ısıtma, 0.5&nbsp; cm yüksekliğinde düzlem</td></tr></tbody></table>

bir tüysüz fare kulak memesi içinde intravital mikroskopi ve trombüs İndüksiyon

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Vasküler hastalıkların trombotik komplikasyonlar sanayi ülkelerinde morbidite ve mortalite bir önde gelen nedenidir. Nedeniyle trombus oluşumu sırasında hücresel ve hücresel olmayan kan bileşenleri arasındaki karmaşık etkileşimler, fizyoloji ve tromboz patofizyolojisi güvenilir çalışmalar sadece, in vivo olarak gerçekleştirilebilir. Bu nedenle, bu makale tüysüz farelerde bir kulak modeli sunar ve mikrosirkülasyonun, trombüs oluşumu ve trombüs evrim in vivo analiz odaklanmaktadır. İntra vital floresan mikroskobu ve ilgili floresan boyalar intravenöz (iv) uygulama kullanılarak, kulak içinde bir mikrodolaşım tekrar analiz kolayca cerrahi hazırlamaya gerek kalmadan, gerçekleştirilebilir. Bundan başka, bu model, yara iyileşmesi, reperfüzyon hasarı, veya anjiyojenezin de dahil olmak üzere, farklı sorunları in vivo çalışmalar için uyarlanabilir. Özetle, tüysüz farelerin kulak içinde viv için ideal bir modeldirfizyolojik veya patofizyolojik koşullarda ve farklı sistemik veya topikal tedavilere yönelik reaksiyonun değerlendirilmesinde cilt mikro o çalışması.

Trombogenezis üzerinde Kannabinoid Tedavinin Etkileri FITC dekstran 0.05 mL enjeksiyonundan sonra, fototoksik trombüs indüksiyon (Şekiller 2 ve 3). Bir endotel lezyon ve parietal trombosit tıkacın oluşumuna yol açar Bu çalışmada, ip kanabinoid enjeksiyonu (5 mg / kg vücut ağırlığı) ya da araç daha sonra trombus indüksiyon tüm venüllerde trombotik damar tıkanması (Şekil 4) elde ed...

Tüysüz SKH1-Hr hr fare kulak modeli incelendiğinde mikrovasküler yatakta önce cerrahi hazırlık yapmadan mikrosirkülasyonun ve fototoksik trombüs indüksiyon Intravital floresan mikroskopisi sağlar. Bu nedenle, tüysüz fare kulak mikrovasküler trombus oluşumu, trombüs evrimi ve tromboliz sırasında karmaşık etkileşimleri incelemek için in vivo model bir mükemmeldir.

Bir Tüysüz fare kulak memesi içinde intravital Mikroskopi ve trombüs İndüksiyon

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Bu deneyin genel amacı, potansiyel vazoaktif ilaçların in vivo mikro vasküler trombüs oluşumu üzerindeki etkisini incelemektir. Bu yöntem, sepsis ve doku transplantasyonu sırasında temel komplikasyonlardan biri olan mikro vasküler trombüs oluşumunu önlemeye yardımcı olabilecek yeni antitrombotik maddelerin belirlenmesi gibi trombüs oluşumuna dair temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tüysüz fare kulak modelinin, incelenen mikro vasküler yatakta ön cerrahi hazırlığa gerek kalmadan intravital floresan mikroskopiye ve fototoksik trombüs indüksiyonuna olanak tanımasıdır.İşe farenin ağırlığını ölçüp kaydederek başlayın. Ardından, test maddesinin uygun hacmini bir insülin şırıngasına doldurun. İlacı, trombus indüksiyonundan 30 dakika önce uygulayın.Trombüs indüksiyonundan 15 dakika önce fareyi anestezi ettikten sonra, anestezinin etkisini göstermesi için fareyi tekrar kafesine yerleştirin. Anestezinin yeterli olduğunu doğrulamak için kuyruğunu pensetle sıkın ve herhangi bir reaksiyon oluşmadığını gözlemleyin. Ardından, çözünmüş 50 Dextran'dan 0,05 ml'yi bir insülin şırıngasına çekin.Şırıngayı doldurduktan sonra, intravenle olarak uygulanan küçük ha

intravital-microscopy-thrombus-induction-earlobe-hairless

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Bu video, ışığa duyarlı boya uygulandıktan sonra sağlam bir kafatasının lazerle aydınlatılmasıyla bir fare modelinde fototrombotik vuruş oluşturma prosedürünü göstermektedir.

Fare Modelinde Fototrombotik İnmenin Modellenmesi: Fototrombozu İndüklemek İçin Işığa Duyarlı Boya Uygulamasını Takiben Fare Kafatasından Bir Lazer Aydınlatma Tekniği

Bu video, bir fare modelinde trombüs oluşumunu incelemek için intravital floresan mikroskobu tekniğini göstermektedir. Fareye, kan dolaşımını izlemek için florofor etiketli bir polisakkarit enjekte edilir. Yüksek yoğunluklu bir ışıkla aydınlatıldıktan sonra, kulağın mikro damar sistemindeki bir yaralanmanın fototoksik indüksiyonu, kan akışındaki tıkanıklığın görselleştirilmesiyle doğrulanan bir trombüs oluşumuna yol açar.

Mikrovasküler Trombüs oluşumunu incelemek için intravital floresan mikroskobu

Kaynak: Kim, D., et. al. Serebral Tromboemboliyi Doğrudan Görselleştirmek için Yakın Kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro Bilgisayarlı Tomografi. J. Vis. Uzm.  (2016)Bu video, mikro bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) görüntüleme kullanılarak farelerde serebral trombüsün görselleştirilmesini göstermektedir. Bir serebral trombüs fare modeline, kontrast bir ajan olarak işlev gören fibrin hedefli altın nanopartiküller enjekte edilir. Fare, bir mikro-CT makinesinin yatağına yerleştirilir ve...

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme Kullanılarak Bir Farede Serebral Trombüsün Görselleştirilmesi

Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.

Canlı Fare Damar İltihabı ve trombüs oluşumu sırasında Activated Endotel üzerinde heterotypic Trombosit nötrofil Etkileşimleri Gerçek zamanlı Görüntüleme

Hücre dışı matris yara iyileşmesi, iltihap ve kanser gelişimi sürecinde önemli bir yeniden şekil alır. Biz lifimsi dinamiklerinin yanı sıra Epifloresans veya iki-foton mikroskopi kullanılarak yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe sahip örgü benzeri matris bileşenleri görselleştirmek için yeni bir Intravital immunofloresan mikroskopi yaklaşım sunmak.

Epifluoresan ile Doku Matrix Bileşenler ve İki foton Mikroskopi uzun vadeli Intravital İmmünofloresan Görüntüleme

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Biz trombüsler oluşumunu tıkayıcı zaman izlemek için intravital mikroskopi kullanılarak etkin bir şekilde karakterize bir rafine demir klorür (FeCl3) karotis ve mezenterik arter üzerinde indüklenen trombozu modelleri prosedürü yanı sıra damar, rapor.

Ferrik klorit indüklenen fare tromboz modellerinde

Bu protokol mıknatıs sıkma kullanarak fare kulak cilt üzerinde bir iskemi-reperfüzyon (İR) modeli indüksiyon açıklar. Özel bir dahili Intravital görüntüleme modeli kullanarak, in vivo inflamatuvar yanıt sonrası reperfüzyon eğitim. Bu tekniğin gelişiminin arkasındaki mantık lökosit cilt IR hasarı nasıl cevap anlayışı yaygınlaştırmaktır.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Burada iki fotonlu mikroskopi kullanarak canlı farelerin kafatası kemiğinin iliğindeki megakaryositleri ve proplateletleri görüntüleme yöntemini açıklıyoruz.

In Vivo Fare Kafatası Kemik İliği'nde Megakaryositlerin ve Proplateletlerin İki FotonLu Görüntülemesi

Protokol, ters konfokal mikroskopi kullanarak intravital görüntülemeyi basitleştirmek için yeni bir araç sunar.

Epitel Doku Dinamiğinin İnverted Konfokal Mikroskopta Uzun Süreli İzlenmesi için Kolaylaştırılmış İntravital Görüntüleme Yaklaşımı

Öğrenin, tüysüz fare kulak memesi modelinde intravital floresan mikroskopi ve fototoksik trombüs indüksiyonu ile mikrovasküler trombüs oluşumunu in vivo araştırma. Bu yöntem yeni antitrombotik ilaçların geliştirilmesine yardımcı olur.

Bir Tüysüz fare kulak memesi içinde intravital Mikroskopi ve trombüs İndüksiyon

Daha fazla video keşfet