Name: Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem Çevresel Kirleticilerin Akut Zehirliliğini Değerlendirmek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Keşfedin deniz bakterisi Vibrio anguillarum kullanarak çevresel kirleticilerin akut zehirliliğini değerlendirme yöntemini. Bu protokol LC50 hesaplaması için reprodüktif bir ekotoksikolojik analiz sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, araştırma projesi tarafından finanse edildi: &quot;NanoBioTech ortamı, Progetto 2: Ambiente, Biyo -Teknoloji Teknolojisi: Çevre ve Sağlık Projesi 2: Çevre&quot; Ekotoksikolojik Araçlar ve Yöntemleri Nanopartiküllerin izlenmesi &quot; ) Lazio-Consorzio Hypatia Bölgesi&#39;nden LM&#39;ye verilmiştir. AR, daha önce belirtilen proje çerçevesinde Tor Vergata / Regione Lazio-Consorzio Hypatia Üniversitesi&#39;nden doktora sonrası hibe ile finanse edildi. ISPRA-Tor Vergata Üniversitesi (N. 2015/52857) ile yapılan bir anlaşma, tesislerin karşılıklı kullanımına ve araştırmacıların değişimine izin verdi. Yazarlar, tüm mikrobik faaliyetler için koruyucu meleğimiz olan Prof. Maria Cristina Thaller&#39;e, mikrobik dünyaya ilgi duyma ve konuyla ilgili araştırmalarımızı iyileştirmeye büyük katkılarından dolayı borçluyuz. Yazarlar Andrea Tornambè ve Eri&#39;yi minnetle kabul ettilerKa Magaletti, Fitoplankton ekolojisi ve ekotoksikoloji ile ilgili ISPRA Laboratuarı ile değerli işbirliği için.

1. Reaktiflerin / Materyallerin Hazırlanması <ol><li> Test konsantrasyonları ile etiketlenmiş test kapları olarak 15 mL steril tüplerin yanı sıra bakteri süspansiyonlarının seri seyreltilmesi için steril 1.5 mL tüpler hazırlayın (yaklaşık 300). </li><li> Temas ortamı olarak% 2 NaCl çözeltisi hazırlayın ve sterilize edin. Alternatif olarak, 5-40 arasında değişen tuzluluk derecesine sahip sterilize edilmiş sentetik veya doğal deniz suyu kullanın. </li><li> Etiket talimatlarına göre triptik soya agar (TSA) büyüme ortamını% 2 NaCl ile hazırlayın ve ortamda zaten bulunan NaCl miktarını göz önünde bulundurun. </li><li> Daha önce test konsantrasyonu ve maruz kalma süresi, çoğaltma sayısı ve seyreltme faktörü ile etiketlenmiş 90 mm Petri kaplarına TSA (soğuk ama yine de sıvı) dökün; 19 mL uygun bir hacimdir. </li><li> Triptik soy broth (TSB) büyüme ortamını etiket talimatlarına göre hazırlayın. Maruz bırakma ortamıyla aynı tuzluluk elde etmek için uygun miktarda NaCl ekleyin. </li><li> hazırlamakÇift damıtılmış su ile CuSO4 stok solüsyonu ve 0.22 mikronluk şırınga filtresi kullanarak (gerekli) alikotu sterilize edin. Çevresel numuneler için, numunenin uygun seyreltik aralıklarını hazırlayın ve 0.22 um&#39;lik şırınga filtresi kullanarak sterilize edin. </li><li> Test konsantrasyonları ile etiketlenmiş 15 mL tüpler içine test solüsyonları hazırlayın. Negatif kontrol, 5 mL maruz kalma maddesi (% 2 NaCl) ile doldurun. 5 mL son hacimde test konsantrasyonlarını elde etmek için diğer tüpleri uygun miktarda maruz bırakma ortamı ve CuSO 4 stok solüsyonu ile doldurun. </li></ol> 2. Bakteri İnokülum Hazırlığı <ol><li> Testten 12-18 saat önce, Vibrio anguillarum&#39;un sıvı bir taze kültürü hazırlayın . Steril bir halka kullanarak, katı bir ortamda (TSA) gece boyunca bir kültürden izole edilmiş tek bir koloni seçin. 10 mL TSB ile doldurulmuş bir tüp aşılanır ve 12-18 saat boyunca 25 ° C&#39;de bakteri kültürü kuluçkalanır. </li&gt; <li> 12-18 saat sonra inokulumun spektrofotometrik olarak bakteri konsantrasyonunu hesaplayın. İnküboyu vorteksleyin ve TSB&#39;yi boş olarak kullanarak 600 nm dalga boyundaki optik yoğunluğu ölçün. </li><li> Bilinen bir bakteri konsantrasyonu elde etmek için, bu formüle göre hesaplanan TSB miktarını ilave ederek 2 mL vortekslenmiş aşıdan seyreltin: TSB mL = [(OD / 0.14) x2] - 2. </li><li> Seyreltilmiş inokulumun optik yoğunluğunun 0.140 (± 0.005) olduğunu doğrulayın; bu, McFarland nefelometrik standartta 0.5 noktasına karşılık gelir. </li><li> Seyreltilmiş aşıları 3,000 g&#39;da 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı eleyin ve 1 mL% 2 NaCl solüsyonunda (maruz kalma ortamı) mikrobiyal pelleti tekrar süspanse edin. </li></ol> 3. Maruz kalmayı test etme <ol><li> Kontrol dahil olmak üzere her tüpe 150 uL yeniden süspanse edilmiş bakteri inokulumu ekleyin. V. anguillarum süspansiyonlarını 25 ° C&#39;de 6 saat karanlıkta ve sürekli olarak inkübe edinÇökmesini önlemek için titriyor. </li><li> Maruz kalma zamanının başında (T 0 ) ve sonunda (T 6 ), maruz kalan tüm bakteri süspansiyonlarında bakteri sayımı koloni oluşturma ünitesi (CFU) sayma yöntemleri kullanılarak gerçekleştirilir. </li><li> Her bir maruz kalmış bakteri süspansiyonunun seri seyreltmelerini üç kat halinde hazırlayın ve on kat seyreltme faktörü uygulayın (10 -5&#39;e kadar). 900 μL maruz kalma ortamı (% 2 NaCl) ile dolu ilgili boruya her bir bakteri süspansiyonundan 100 uL ekleyin. Bakterileri yeniden askıya almak için her adımda vorteks uygulayarak seri seyreltme işlemine devam edin. </li><li> İlgili bölümdeki TSA Petri kaplarındaki 10-4 ve 10-5 seyreltmelerden oluşan plakadan 10 uL. Plakayı döndürerek damlaları küçük bir daireye hızlıca kaydırın. Plakaları 25 ° C&#39;de 48 saat inkübe edin. </li></ol> 4. CFU Sayımı <ol><li> 48 saat sonra, Petri yemeklerinde yetiştirilen kolonileri sayın; Barındıran tabaklar bDoğru sayım için 5 ve 50 koloniler en uygunudur. </li><li> Aşağıdaki formülleri uygulayarak her maruz kalmış bakteri süspansiyonunun mL başına canlı bakteri sayısını hesaplayın: 10 -4 → CFU / mL = n ° CFU x 100 x 10,000 10 -5 → CFU / mL = n ° CFU x 100 x 100,000 </li><li> Kontrol ile karşılaştırıldığında mortaliteyi değerlendirmek için paralel çoğaltılmalarda elde edilen sayımların ortalamasını kullanın. Aşağıdaki formülü kullanarak mortaliteyi yüzde olarak hesaplayın: M% = 100 - [(N / C) * 100] NOT: Burada N = toksik maddeye maruz kaldıktan sonra yetiştirilen CFU / mL sayısı; C = kontrol ortamında yetiştirilen CFU sayısı. </li><li> Uygun bir istatistiksel yazılım kullanarak doğrusal regresyon analiziyle LC 50&#39;yi ( örn . Aktif olarak çoğaltan bakterilerin sayısını mL başına% 50 CFU / mL azaltan toksikant konsantrasyonunu) hesaplayın (materyal tablosuna bakın). Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) uygulayınTedaviler arasındaki önemli farklılıkları değerlendirmek için post-hoc pairwise t- testleri sayesinde. </li></ol>

<ol><li>Guidance on information requirements and chemical safety assessment. , ECHA (European CHemicals Agency). Available from: 
 <a target="_blank" href="http://guidance.echa.europa.au/docs/guidance document/information">http://guidance.echa.europa.au/docs/guidance document/information</a> (2008).</li>
<li>Parvez, S., Venkataraman, C., Mukherji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+advantages+of+implementing+luminescence+inhibition+test+%28Vibrio+fischeri%29+for+acute+toxicity+prediction+of+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environm.+Internat%22%5BJournal%5D)">A review on advantages of implementing luminescence inhibition test (Vibrio fischeri) for acute toxicity prediction of chemicals.</a> Environm. Internat. 32 (2), 256-268 (2006).</li>
<li>Rad, M., Shahsavani, D. <a target="_blank" href="http://journals.tubitak.gov.tr/veterinary/issues/vet-10-34-4/vet-34-4-15-0812-5.pdf">Isolation and characterization of Vibrio (Listonella) anguillarum from catfish.</a> Turkish J. Veter. Animal. 34 (4), 413-415 (2010).</li>
<li>Thompson, F., Iida, T., Swings, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15353563">Biodiversity of Vibrios.</a> Microbiol. Mol. Biol. Rev. 68, 403-431 (2004).</li>
<li>Austin, B., Austin, D. A. Vibrionaceae representatives: characteristics of the disease. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAustin%2C+B+%22Bacterial+Fish+Pathogens%3A+Disease+of+Farmed+and+Wild+Fish%22">Bacterial Fish Pathogens: Disease of Farmed and Wild Fish</a>. 29-30, Springer-Praxis. Chichester, UK. 108-115 (1999).</li>
<li>Larsen, J. L., Mellergaard, S. Microbiological and hygienic problems in marine aquaculture: furunculosis and vibriosis in rainbow trout (Salmo gairdneri). L.). Bull. Eur. Assoc. Fish Pathol. 1, 29-31 (1981).</li>
<li>Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+viable+but+nonculturable+state+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The viable but nonculturable state in bacteria.</a> J. Microbiol. 43 (1), 93-100 (2005).</li>
<li>Hsieh, C. -Y., Tsai, M. -H., Ryan, D. K., Pancorbo, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+the+13+priority+pollutant+metals+to+Vibrio+fisheri+in+the+Microtox+chronic+toxicity+test%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Toxicity of the 13 priority pollutant metals to Vibrio fisheri in the Microtox chronic toxicity test.</a> Sci. Total Environ. 320, 37-50 (2004).</li>
<li>Migliore, L., Rotini, A., Thaller, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+doses+of+Tetracycline+trigger+the+E.+coli+growth%3A+a+case+of+hormetic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Dose-Response%22%5BJournal%5D)">Low doses of Tetracycline trigger the E. coli growth: a case of hormetic response.</a> Dose-Response. 11, 550-557 (2013).</li>
<li>Adams, M. S., Stauber, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+whole-sediment+toxicity+test+using+a+benthic+marine+microalga%5BTitle%5D)+AND+%22Environm.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Development of a whole-sediment toxicity test using a benthic marine microalga.</a> Environm. Toxicol. Chem. 23 (8), 1957-1968 (2004).</li>
<li>Manfra, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecotoxicity+of+diEthylene+Glycol+and+risk+assessment+for+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Mat%22%5BJournal%5D)">Ecotoxicity of diEthylene Glycol and risk assessment for marine environment.</a> J. Hazard. Mat. 284, 130-135 (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Microtox%C2%AE+Acute+Toxicity+Solid-Phase+Test%22">Microtox® Acute Toxicity Solid-Phase Test</a>. , Azur Environmental. 20 (1995).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.rsambiente.it/data/photo/APAT%20CNR%20IRSA%201030%20Man%2029%202003.pdf">Metodi analitici per le acque. Manuali e Linee Guida (Analytical methods for waters. Manual and Guidelines).</a> Metodi Ecotossicologici (Ecotoxicological methods). 29 (3), APAT IRSA-CNR. 8030(2003).</li>
<li>Heinlaan, M., Ivask, A., Blinova, I., Dubourguier, H. -C., Kahru, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+nanosized+and+bulk+ZnO%2C+CuO+and+TiO2+to+bacteria+Vibrio+fischeri+and+crustaceans+Daphnia+magna+and+Thamnocephalus+platyurus%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Toxicity of nanosized and bulk ZnO, CuO and TiO2 to bacteria Vibrio fischeri and crustaceans Daphnia magna and Thamnocephalus platyurus.</a> Chemosphere. 71, 1308-1316 (2008).</li>
<li>Mortimer, M., Kasemets, K., Heinlaan, M., Kurvet, I., Kahru, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+kinetic+Vibrio+fischeri+bioluminescence+inhibition+assay+for+study+of+toxic+effects+of+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+In+Vitro%22%5BJournal%5D)">High throughput kinetic Vibrio fischeri bioluminescence inhibition assay for study of toxic effects of nanoparticles.</a> Toxicol. In Vitro. 22 (5), 1412-1417 (2008).</li>
<li>Bondarenko, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilaboratory+evaluation+of+15+bioassays+for+%28eco%29+toxicity+screening+and+hazard+ranking+of+engineered+nanomaterials%3A+FP7+project+NANOVALID%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">Multilaboratory evaluation of 15 bioassays for (eco) toxicity screening and hazard ranking of engineered nanomaterials: FP7 project NANOVALID.</a> Nanotoxicology. 10 (9), 1229-1242 (2016).</li>
<li>Matranga, V., Corsi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxic+effects+of+engineered+nanoparticles+in+the+marine+environment%3A+model+organisms+and+molecular+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Envir.+Res%22%5BJournal%5D)">Toxic effects of engineered nanoparticles in the marine environment: model organisms and molecular approaches.</a> Mar. Envir. Res. 76, 32-40 (2012).</li>
<li>Corsi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+strategies+and+technologies+for+the+ecosafety+assessment+and+design+of+nanomaterials+entering+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+NANO%22%5BJournal%5D)">Common strategies and technologies for the ecosafety assessment and design of nanomaterials entering the marine environment.</a> ACS NANO. 8 (10), 9694-9709 (2014).</li>
<li>Handy, R. D., von der Kammer, F., Lead, J. R., Hassellöv, M., Owen, R., Crane, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ecotoxicology+and+chemistry+of+manufactured+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicology%22%5BJournal%5D)">The ecotoxicology and chemistry of manufactured nanoparticles.</a> Ecotoxicology. 17, 287-314 (2008).</li>
<li>Kasemets, K., Suppi, S., Kunnis-Beres, K., Kahru, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+of+CuO+nanoparticles+to+yeast+Saccharomyces+cerevisiae+BY4741+wild-type+and+its+nine+isogenic+single-gene+deletion+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Res.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Toxicity of CuO nanoparticles to yeast Saccharomyces cerevisiae BY4741 wild-type and its nine isogenic single-gene deletion mutants.</a> Chem. Res. Toxicol. 26, 356-367 (2013).</li>
<li>Ivask, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+toxic+action+of+Ag%2C+ZnO+and+CuO+nanoparticles+to+selected+ecotoxicological+test+organisms+and+mammalian+cells+in+vitro%3A+A+comparative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of toxic action of Ag, ZnO and CuO nanoparticles to selected ecotoxicological test organisms and mammalian cells in vitro: A comparative review.</a> Nanotoxicology. 8 (1), 57-71 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.

Bu çalışma, referans toksikant olan CuSO 4&#39;ün toksik etkilerini değerlendirmek için başarılı bir şekilde uygulanan deniz bakterisi V. anguillarum&#39;la yeni bir biyolojik tahlil açıklamakta olup, açık bir doz-tepki ilişkisi sergilemektedir. Deniz bakterisi V. anguillarum , haloolerant, her yerde bulunan ve deniz ekosistemlerinin temsilcisi olduğu için model organizma olarak seçilmiştir. Test, geniş bir tuzluluk değerleri aralığında (5-40) gerçekleştirilebilir ve mikroorganizmaların tüm test süresince kolayca kurtulabildiği sürece, salma solüsyonlarını ve maruz kalma ortamı olarak sentetik veya doğal deniz suyunu kullanabilir. Bu, acayip ve deniz ortamları da dahil olmak üzere farklı türde numunelerin analiz edilmesini sağlar. Maruz kalma aşamasında kirletici maddeler 8 ile olan etkileşiminden ve biyolojik tepki üzerindeki muhtemel etkisinden kaçınmak için büyüme ortamı gerekmez. thE protokolü güvenilir, hızlı, düşük maliyetli ve nispeten kolaydır. Sıvı-plakalı mikro sayımlar 9&#39;un prosedürü, küçük (örnek) hacimlerin kullanılmasının avantajını sağlar, ancak bu, yüksek bir doğruluk derecesi ve sağlamlık anlamına gelmektedir. Her bir tedavi için üç bağımsız deneme ve tekrarın sonuçları, bu yöntemin yüksek tekrar edilebilirliğini göstermektedir. Bakterinin biyolojik bir model olarak kullanılması ve tekniğin uyarlanabilirliği, bu prosedürün ekolojik ve çevresel önemini desteklemektedir. Diğer kritik teknik konular, bakteriyel inokülumun hazırlanmasında ve prosedürün bazı adımlarında gerekli olan kısırlığa hassasiyettir. Önerilen test, diğer deniz ekotoksikolojik testlerinden (24-96 saat) daha hızlıdır (6 saat) ve daha yüksek organizmaların kullanımından kaynaklanan etik sorunlara yol açmaz. Ayrıca, referans toksikant üzerine ilişkin veriler, akut t ile elde edilenlerle karşılaştırılabilir LC 50 değerlerini göstermektedir<html> Diğer deniz türleri üzerinde 10 , 11 , iyi bir hassasiyet sergilediğini belirtir. Bakteriyel biyolojik tahliller arasında, V. fischeri lüminesans inhibisyon testi en yaygın ve iyi standardize edilmiş 12 . Bu biyolojik tahlil çok hızlıdır (15-30 dakika) ve katı fazlı numunelerin test edilmesi için geçerlidir, ancak lüminesans ölçümlerine müdahale eden renkli ve bulanık örneklerden etkilenebilir. Tuzluluk, yukarıda bahsedilen testin kullanımındaki sınırlayıcı bir faktördür ve% 2 NaCl gerekir 13 . Aksine burada V. anguillarum ile önerilen test, geniş bir tuzluluk değerleri aralığında uygun sonuçlar verir, bulanık veya renkli numuneler için herhangi bir sınırlama getirmez ve parlaklık analiz cihazlarına kıyasla daha az pahalı ekipman gerektirir. Çalışmamızın sonuçları ile V. fisheri&#39;nin literatürdeki sonuçları arasında bir karşılaştırma 14 ,Ss = &quot;xref&quot;&gt; 15 , 16 karşılaştırılabilir EC 50 değerlerini gösterir ve bu biyolojik tahlilin etkinliğini de destekler. Bu biyolojik tahlil, şu anda mikroorganizma için mevcut olan testlerde kullanılan popülasyon büyüme oranı veya enzimatik aktivite inhibisyonu yerine, genellikle mortalite olarak adlandırılan bakteri kültürlenebilirliğinin azaltılmasını değerlendirir. LC 50 hesaplaması, genellikle deniz seviyesinin ekotoksikolojik değerlendirmesine uygulanan ve genellikle bitki noktası olarak hayatta kalma / ölüm oranına sahip olan diğer biyolojik tahliller ile karşılaştırılmasını sağlar. Bu testin güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini değerlendirmek / onaylamak ve standardizasyonunu ve düzenleyici protokollerde kullanılmasını desteklemek için intercalibration uygulaması yapılması acilen gereklidir. Nanomalzemelerin artan kullanımı ve çevredeki potansiyel salınımı, risk değerlendirmesi ihtiyacını işaret etmektedir 17 . Ancak, klasOrtaya çıkan bu kirleticiler için sical (eko) toksikolojik yaklaşımlar uygun fiyatlı sonuçlar vermez ve bazı adaptasyonlar gerektirebilir 18 . Bu yeni biyolojik tahlilin özellikleri, nanoparçacıkların toksisite değerlendirmesine kolay ve kullanışlı bir uygulama yapmasını sağlar. Aslında, farklı salinities&#39;de tahlil yapma imkanı, toksisiteyi önemli ölçüde etkileyebilen, çevresel bir parametre değişkeni olan farklı iyonik kuvvetler altında nanoparçacık davranışı hakkında bilgi verecektir 19 . Ayrıca organik maddeler toksik etkileri 20 arttırarak absorpsiyonunu kolaylaştırabildiği veya agregaya neden olabileceği, biyoyararlanabilen fraksiyonu ve dolayısıyla toksisitesini düşürebileceği için, büyüme ortamı ve besin maddeleri kullanımına özellikle nanoparçacıkların ekotoksisite değerlendirmelerinde önerilmemektedir21. Sonuç olarak, Vibrio anguillarum üzerindeki biyolojik tahlil apKlasik ve ortaya çıkan kirleticilerin risk değerlendirmesi için kullanılan romantizm aracı, ayrıca deniz ve tuzlu ortamların durumunun değerlendirilmesi için.

Ekotoksikolojik biyolojik tahliller, standart biyolojik modellerle kimyasalların veya çevresel numunelerin toksisitesini değerlendirir, fiziksel, kimyasal ve biyolojik stresörlerin ekosistemler üzerindeki etkilerini bütünleştirir. Ekosistemlerin karmaşıklığı nedeniyle, ekotoksikolojik risk değerlendirmeleri, farklı trofik seviyelerdeki organizmaları içeren bir biyoanaliz testi düşünmelidir. Laboratuvar hayvanları üzerindeki toksisite testleri pahalı, zaman alıcı ve etik açıdan şüpheli olabilir. Hayvan testlerini sınırlandırmak ve alternatif yaklaşımlar geliştirmek ( örneğin, bakteriler ve omurgalı olmayan hayvanlar üzerinde), mevcut AB mevzuatı çerçevesinde bildirilen ve AB Hayvanları Koruma Direktifi, Madde 7&#39;deki Değişiklikler AB Kozmetik Direktifi ve REACH. Kabuklular, balıklar ve algler, deniz ortamında toksisite ölçümleri için büyük oranda kullanılır 1 . Bakteriler önemli bir bileşenEkosistemin ve mikrobik topluluklardaki değişikliklerin biyojeokimyasal döngü ve diğer kritik ekosistem hizmetleri üzerinde önemli etkileri olabilir. Mikroorganizmalara dayanan toksisite testleri, nispeten hızlı, çoğaltılabilir ve ucuz oldukları ve etik sorunları ortaya koymadığı için popülerlik kazanmaktadırlar 2 . Bu çalışmanın amacı, çevre kirleticilerine maruz bırakıldığında deniz bakterisi Vibrio anguillarum&#39;un ( Listonella anguillarum, Vibrionaceae) cevabını değerlendirmek için bir ekotoksikolojik protokolün tanımlanmasıdır. V. anguillarum , polar lekeli bir Gram-negatif, kısa, eğri şeklinde çubuk bakteri (0.5 x 1.5 μm) &#39;dir. Kabuklu su veya tuzlu suda tipik olarak bulunan, yaklaşık 20 ° C&#39;lik bir optimum tuzluluk derecesine ve 25 ° C ile 30 ° C3 arasında en uygun sıcaklığa sahip halotoleranttır. Yaygın olması ve önemli ekolojik rolleri nedeniyle organizma modeli olarak seçilmiştir.Dünya çapında 4 . V. anguillarum&#39;un bazı serotiplerinin, çeşitli denizel ya da acayip balık türlerinde 5 , 6 vibriozise neden olduğu bilinmektedir. Bunun için deneyin bazı aşamaları standart mikrobiyolojik uygulamalar gerektirir, ancak herhangi bir özel güvenlik teçhizatı veya önlem gerekmez. Önerilen toksisite test protokolü, son nokta olarak bakteri kültürlenebilirliğini ( örn. , Replikasyon ve kolonileri oluşturma kabiliyeti) kullanır ve aktif olarak replike olan ve kolonileri oluşturan bakterilerin% 50 azalmasına neden olan konsantrasyonun LC 50&#39;yi belirlemesine izin verir; 6 saatlik maruz kalma. Vibrio&#39;da, diğer mikroplarda olduğu gibi, genel olarak ölüm oranı olarak gösterdiğimiz bu azalma kısmen, yaşanabilir ama kültürsüz olmayan (VBNC) faz 7&#39;deki bireylerden kaynaklanabilir. Bu çalışmada, bu metodu, bakır sülfatın (CuSO 4), Bir referans toksik madde. Bu yöntem, nanomalzemeler gibi ortaya çıkan kirleticiler de dahil olmak üzere kirleticilerin / kimyasal bileşiklerin ekotoksik değerlendirilmesi için uygun bir mikroorganizma temelli test sağlamak üzere geliştirilmiştir. Bu protokolün, mikroorganizmalar için kullanılan mevcut yöntemlere kıyasla yeniliği esas olarak maruz kalma aracı ve son nokta ile ilgilidir. Aslında, maruziyet, büyüme ortamının biyolojik cevabı etkileyebilecek araştırılan kirleticilerle olası herhangi bir etkileşiminden kaçınarak salin solüsyonu içinde gerçekleştirilir 8 . Son nokta bakteri kültürlenebilirliğinin azalmasıdır; bu, bakteri / ekşi ortamlarda ektotoksikolojik tarama için kullanılan hayatta kalma / ölüm oranına dayalı diğer akut sonlanım noktalarıyla kolayca karşılaştırılabilir. Üstelik, protokol hacimleri azaltarak E. coli 9 üzerinde zaten kullanılan likit-plakalı mikro sayım tekniklerini kullanır ve böylece deneysel eff(Ayrıntılar için protokolün 3.3 ve 3.4 adımlarına bakınız).

<table><tbody><tr><td>Vibrio anguillarum (AL 102 suşu, serotip O1)</td><td></td><td></td><td>NOIFMA (Norveç) laboratuvar koleksiyonundan elde edilmiştir</td></tr><tr><td>.</td><td>Liofilchem</td><td>610052</td><td>Susuz Kültür Ortamı</td></tr><tr><td>Triptik Soya Suyu büyüme ortamı</td><td>Liofilchem</td><td>610053</td><td>Susuz Kültür Ortamı</td></tr><tr><td>CuSO4&middot; 5H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>209198</td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-3014</td><td></td></tr><tr><td>Ekipman Adı<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar/Açıklama</td></tr><tr><td>Biosafety Laminer Akış Başlığı&nbsp;</td><td>ESCO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kuluçka Merkezi&nbsp;</td><td></td><td>2100</td><td></td></tr><tr><td>Yazılımın Adı</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar/Açıklama</td></tr><tr><td>Benchmark Dose Software&nbsp;</td><td>US EPA</td><td>Benchmark Dozu 2.4.0&nbsp;</td><td>2012</td></tr></tbody></table> Yılı

deniz bakterileri ile ekotoksikolojik yöntem<emvibrio anguillarum</em&gt; Çevresel kirleticilerin akut zehirliliğini değerlendirmek

Ecotoxicological Method with Marine Bacteria Vibrio anguillarum to Evaluate the Acute Toxicity of Environmental Contaminants

Bakteriler ekosistemin önemli bir bileşenidir ve mikrobik topluluk değişiklikleri biyojeokimyasal bisiklet ve gıda ağları üzerinde önemli bir etkiye neden olabilir. Mikroorganizmalara dayanan toksisite testleri nispeten hızlı, tekrarlanabilir, ucuz ve etik konularla ilişkili olmadığı için yaygın olarak kullanılır. Burada, deniz bakterisi Vibrio anguillarum&#39;un biyolojik cevabını değerlendirmek için bir ekotoksikolojik yöntem tarif ediyoruz. Bu metot, nanoparçacıklar gibi yeni kirleticiler ve çevresel numuneler de dahil olmak üzere kimyasal bileşiklerin akut toksisitesini değerlendirir. Bitki noktası, toksik maddeye maruz kalma nedeniyle bakteri kültürlenebilirliğinin azaltılması ( yani, koloni çoğaltma ve biçimlendirme kabiliyeti) &#39;dir. Bu azalma genel olarak ölüm oranı olarak adlandırılabilir. Test, LC 50&#39;yi , aktif olarak replike olan ve kolonileri oluşturan bakterilerin% 50 azalmasına neden olan konsantrasyonun saptanmasına izin verir;6 saat boyunca maruz kaldım. Kültürlenebilir bakteriler, koloni oluşturma üniteleri (CFU) bakımından sayılır ve &quot;ölüm oranı&quot; kontrol edilir ve kontrol ile karşılaştırılır. Bu çalışmada bakır sülfatın (CuSO 4 ) toksisitesi değerlendirildi. Üç bağımsız testten sonra, ortalama LC 50 1.13 mg / L ile açık bir doz-yanıt ilişkisi gözlemlendi. Bu protokol, mikroorganizma ile mevcut yöntemlerle karşılaştırıldığında, daha geniş bir tuzluluk aralığında uygulanabilir ve renkli / bulanık numuneler için herhangi bir sınırlama yoktur. Araştırılan kirleticilerle büyüme ortamının muhtemel etkileşimlerinden kaçınarak, maruz bırakma ortamı olarak tuz çözeltisi kullanır. LC 50 hesaplaması, deniz çevresinin ekotoksikolojik değerlendirmelerine sıkça uygulanan diğer biyolojik tahliller ile karşılaştırmayı kolaylaştırır.

V. anguillarum&#39;un dört konsantrasyonda CuSO 4&#39;e maruz bırakılmasına ilişkin üç bağımsız çalışmanın sonuçları açık bir doz-tepki ilişkisi ve aktif olarak çoğaltan ve referans toksikantın konsantrasyonunun artan şekilde kolonileri oluşturan bakterilerin belirgin bir azalmasını göstermektedir ( Şekil 1 ; ANOVA, F = 20.28, p &lt;0.001). CFU / mL sayısı, kontrol (CNTR) ile karşılaştırıldığında 1.25 mg / L&#39;de (post-hoc Tukey testi, p &lt;0.05) anlamlı şekilde azaltıldı. Herhangi bir kültürlenebilir bakteri, test edilen en yüksek konsantrasyonda tespit edildi. Pozlama ortamının geniş tuzluluk aralığı boyunca CuSO4 toksisitesinde herhangi bir fark bulunamadı ( yani, 5, 20 veya 35 g / L NaCl, veriler gösterilmemiştir). Doğrusal olmayan regresyonu gösteren istatistiksel analizin temsili bir çıktısı İlave Şekil 1&#39;de rapor edilmiştir . Üç bağımsız deneme için hesaplanan LC 50 değerleri (&lt;Strong&gt; Tablo 1) bu yöntemin uygulanabilirliği ve tekrarlanabilirliği üzerinde durmaktadır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55211/55211fig1.jpg" /> Şekil 1: CuSO 4&#39;e maruz bırakılan Vibrio anguillarum 4. Farklı konsantrasyonda CuSO 4 ile 6 saat süreyle maruz bırakılan ortalama CFU / mL (CFU = koloni oluşturma birimi) sayısı. Değerler, üç bağımsız denemenin ortalamasını (± SD) temsil etmektedir. Sarı kutularda aktif olarak replike olan ve kontrole (CNTR) göre koloniler oluşturan bakterilerin azaltılması (yüzdeler olarak) rapor edilmiştir. Kontrol ile post-hoc Tukey testine dayanan önemli farklılıklar yıldız işareti ile belirtilmiştir (* = p &lt;0.05; ** = p &lt;0.01). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55211/55211fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> Tablo 1: CuSO 4&#39;e maruz bırakılan Vibrio anguillarum için öldürücü konsantrasyon (LC 50 ) değerleri . Üç bağımsız deneme ve araç (± SD) sonuçları bildirildi. Ek Şekil 1: Doğrusal Olmayan Regresyon Analizi. Doğrusal olmayan regresyon analizinin (Logit-Hill modeli) temsilci çıktıları testin sonuçları üzerinde gerçekleştirildi. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55211/suppl_fig_1.tif" target="_blank">Bu rakamı indirmek için lütfen tıklayınız.</a>

Bu çalışma, kirleticilerin ekotoksisitesini değerlendirmek için nanomalzemeler gibi gelişmekte olan bulaşıcılar da dahil olmak üzere deniz bakterisini Vibrio anguillarum kullanarak yeni bir protokolü açıklamaktadır . Bu yöntem, LC 50&#39;nin veya 6 saatlik maruz kaldıktan sonra bakteri kültürlenebilirliğinde% 50 azalmaya neden olan ölüm konsantrasyonunun belirlenmesine izin verir.

Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem<emVibrio anguillarum</em&gt; Çevresel Kirleticilerin Akut Zehirliliğini Değerlendirmek

Bacteria are an important component of the ecosystem, and microbial community alterations can have a significant effect on biogeochemical cycling and food ...

Bizler, Roma'daki İtalyan Çevre Koruma ve Araştırma Enstitüsü ile Tor Vergata Üniversitesi'nden araştırmacılarız. Çevredeki kirleticilerin etkisini değerlendirmek için araçlar geliştiriyor ve biyobelirteçler olarak model organizmalar tanımlıyoruz. Tor Vergata Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nün ekotoksikoloji laboratuvarında çalışmaktayız.Bu videoda, deniz bakterisi Vibrio anguillarum'un biyolojik yanıtını değerlendirmek için kullanılan ekotoksikolojik bir yöntemi açıklıyoruz. Bu video, toksisite testinin tüm hazırlama ve uygulama adımlarını kapsamaktadır. Standart laboratuvar ekipmanlarına ek olarak, aşağıdaki malzemeleri hazırlayın.Bakteri süspansiyonlarının seri dilüsyonu için 1,5 mililitrelik tüpler. Bakterileri ekmek için 90 milimetre çapında Petri kapları. Kontrol dahil olmak üzere, her test konsantrasyonu için en az iki plaka gereklidir.Petri kaplarının yan yüzeylerini test konsantrasyonu ve maruz kalma süresi ile etiketleyin. Petri kaplarının altına altı bölüm çizin ve bunları tekrar numarası ve dilüsyon faktörü ile etiketleyin. Test kapları olarak kullanılacak 15 mililitrelik steril tüpleri test konsantrasyonları ile etiketleyin.Bu deneyde, maruziyet ortamı olarak %2'lik sodyum klorür steril çözeltisi kullandık. Sterilize edilmiş sentetik veya doğal deniz suyu da litre başına 5 ila 40 gram arasında başlangıç konsantrasyonlarında kullanılabilir. %2 sodyum klorür içeren yeterli miktarda tripsik soya agar besi yeri hazırlayın.Final konsantrasyonun %2'ye ulaşması için, ortamda halihazırda bulunan miktarı dikkate alarak sodyum klorür ekleyin. Sterilize edin ve soğuduğunda ancak hâlâ sıvı haldeyken, önceden etiketlenmiş Petri kaplarını doldurun. Sodyum klorür içeren büyüme ortamı için tripsik soya bulyonu hazırlayın.Maruziyet ortamının aynı tuzluluk oranına sahip olması için sodyum klorür ekleyin. Ortamda halihazırda bulunan sodyum klorür miktarını her zaman göz önünde bulundurun. Bu deneyde, %2 sodyum klorür içeren tryptic soy broth kullandık.Sterilize edin ve kullanmadan önce soğumaya bırakın. Bu deneyde, referans toksikant olarak bakır sülfat kullanıyoruz. Çift distile su ile bir stok çözelti hazırlayın ve bunu 4 °C'de saklayın.Gerekli alikotu 0,22 mikronluk bir şırınga filtresi kullanarak sterilize edin. Çevresel örnekler söz konusu olduğunda, örneğin uygun bir dilüsyon serisini hazırlayın. Test kapları olarak 15 mililitrelik tüpler kullanın.Pozlama tüplerini pozlama besiyeri ile doldurun. Beş mililitre negatif kontrol hazırlayın. Nihai hacmi beş mililitre olacak şekilde, test konsantrasyonunu elde etmek için uygun miktarda pozlama besiyeri ve bakır sülfat stok çözeltisi ile pozlama tüplerini hazırlayın.Bu test için taze bir Vibrio anguillarum kültürü gereklidir. Steril bir öze kullanarak, agar plakadan iyi izole olmuş tek bir koloni seçin. Önceki günlerde hazırlanan bu bakteri ile inokülasyonu gerçekleştirin.Tüpü eğik bir açıyla tutarak, inokülüm bulunan öziyle tüp yüzeyine sürün. Tüpü 10 milliliters triptik soya bulyonu ile doldurun. Bakteri kültürünü 25 degrees C'de 12-18 saat inkübe edin.İnokülümün bakteriyel konsantrasyonu spektrofotometrik olarak tahmin edilir. İnokülümü vorteksleyin ve 600 nanometre dalga boyunda optik yoğunluğu ölçün. Blank olarak triptik soya bulyon kullanın.Bilinen bir bakteri konsantrasyonu elde etmek için, vortexlenmiş inokülumun iki mililitresini, bu formülle hesaplanan miktardaki tripsik soya bulyonu ekleyerek seyreltin. Seyreltilmiş inokülumun optik yoğunluğunun, McFarland nefelometrik standardının 0,5 noktasına karşılık gelen 14 olduğunu doğrulayın. Seyreltilmiş inokülumu 3.000 g'de 10 dakika boyunca santrifüj edin.Süpernatantı uzaklaştırın ve mikrobiyal paleti bir mililitre %2 sodyum klorür çözeltisinde yeniden süspande edin. Her tüpe yeniden süspande edilen bakteriyel inokulumdan 150 mikrolitre ekleyin. Vibrio anguillarum süspansiyonunu, çökmeyi önlemek için sürekli çalkalama altında, karanlıkta ve 25 °C'ye kadar altı saat boyunca inkübe edin.Altı saatlik maruziyetin başlangıcında ve sonunda, tüm maruz bırakılmış bakteri süspansiyonlarında koloni oluşturan birim sayım yöntemini kullanarak bakteri sayımı gerçekleştirin. Bakteri süspansiyonunun, 10⁻⁵'e kadar 10 katlık dilüsyon faktörü uygulayarak steril dilüsyonlarını hazırlayın. Her bakteri süspansiyonu için, beş tüplü bir setten üç tekrarlı hazırlık yapın.Tüpleri dilüsyon faktörü ve tekrar numarasına göre etiketleyin ve tüm tüpleri 900 µL %2 sodyum klorür çözeltisi ile doldurun. İlgili tüplere 100 µL bakteriyel süspansiyon ekleyin. Her adımda vorteksleyerek seri dilüsyon işlemine devam edin.Son iki dilüsyonun 10 mikrolitresini ilgili bölümlerdeki tryptic soy agar Petri kaplarına ekleyin ve plakayı döndürerek damlanın küçük bir daire şeklinde hızla yayılmasını sağlayın. Ardından, plakaları 25 °C'de 48 saat boyunca inkübe edin. 48 saat sonra, Petri kaplarında büyüyen kolonileri sayın.Doğru sayım için beş ile 50 arasında koloni içeren plakalar idealdir. Her bir test çözeltisindeki mililitre başına canlı bakteri sayısı hesaplanabilir, mortalite değerlendirilebilir ve kontrol grubu ile karşılaştırılabilir. Mililitre başına koloni oluşturan birimlerin hesaplanması için, paralel tekrarlardan elde edilen koloni ortalamasını, bilinen dilüsyon faktörü N ile 100'le çarpın.Yüzde olarak mortalite aşağıdaki formül ile elde edilir. Üç bağımsız testin sonuçları, bunlara bağlı mortaliteyi göstermektedir. Toksik maddeye maruz kalan bakteri kolonilerinin %50'sini öldüren letal konsantrasyon olan LC 50, Benchmark Dose Yazılımı kullanılarak bilinen bir doğrusal regresyon analizi logit L modeli ile hesaplanır.Üç bağımsız testin LC50 değerleri, bu yöntemin uygulanabilirliğini ve tekrarlanabilirliğini vurgulamaktadır. Sonuç olarak, deniz bakterisi Vibrio anguillarum'un biyolojik yanıtını değerlendirmek için ekotoksikolojik bir yöntem tanımladık. Bu mikroorganizma; halotolerant olması, her yerde bulunması ve deniz ekosistemlerini temsil etmesi nedeniyle seçilmiştir.Yeni test, bakır sülfatın toksik etkisini belirgin bir doz-yanıt ilişkisiyle değerlendirmek için başarıyla uygulanmıştır. Mevcut yöntemlerle karşılaştırıldığında bu protokol, diğer mikroorganizmalarla birlikte, numuneler için herhangi bir sınırlama olmaksızın daha geniş bir pH ve tuzluluk aralığında uygulanabilir. Bu nedenle, çevresel numuneler üzerinde de gerçekleştirilebilir.Ayrıca, bu biyolojik analiz büyüme hızı veya enzimatik aktivite inhibisyonu yerine mortaliteyi değerlendirmektedir. Bu durum, son nokta olarak mortaliteyi kullanan deniz ortamı için diğer akut ekotoksisite testleriyle karşılaştırmayı kolaylaştırmaktadır. Test, nanoparçacıklar gibi yeni ortaya çıkan kirleticilerin ekotoksisitesini değerlendirmek üzere tasarlanmıştır ve bu konu üzerindeki çalışmalar devam etmektedir.

ecotoxicological-method-with-marine-bacteria-vibrio-anguillarum-to

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Kaynak: Yeung, M., ve diğerleri. Vibrio parahaemolyticus ve diğer vibrio türlerinin tespiti için daha hassas ve spesifik bir kromojenik agar ortamının geliştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, Vibrio türlerini tanımlamak için kültüre dayalı bir yöntemi göstermekte ve kromojenik agarın yaygın olarak kullanılan tiyosülfat-sitrat-safra tuzları-sakaroz veya TCBS agar'a daha doğru bir alternatif olduğunu vurgulamaktadır. Kromojenik agar, türe özgü enzimatik aktiviteleri tespit ederek Vibrio...

Vibrio Türlerinin Hızlı Tespiti için Yeni Bir Kromojenik Ortam

Kaynak: Villela, H. D. M . ve diğerleri. Metaorganizma Araştırması ve Koruma için Biyoremediasyon ve Probiyotik Geliştirme için Mikrobiyal Suşların Araştırılması. J. Vis. Exp. (2019).Bu video, EE2 içeren ortamda kirletici bozucu deniz bakterilerinin seri seyreltme, koloni seçimi ve büyüme yoluyla izole edilmesini göstermektedir. Protokol, tek karbon kaynağı olarak EE2'yi kullanarak, bu çevresel kirletiyi metabolize edebilen bakteri suşlarını tanımlar.

Deniz Bakterilerinin Kirletici Bozucu Suşların İzolasyonu Taraması

Kaynak: Chen, Y. ve diğerleri. Caenorhabditis elegans modelinde Aeromonas enfeksiyonunun virülansı ve patogenezi değerlendirilmesi. J. Vis. Exp. (2018).Bu video, besin sınırlı sıvı ortamda solucanların hayatta kalmasını ölçerek bakteriyel virülansı değerlendirmek için kullanılan C . elegans Aeromonas ile Sıvı Toksisite Testini gösteriyor. Test, C. elegans'ta toksin kaynaklı hasar ve ölüm oranına dayalı suş özgül patojenikliği ortaya koymaktadır.

C. elegans Sıvı Toksisite Testi ile Bakteriyel Virulansın Değerlendirilmesi

Endokrin Bozucu Bileşikler (EDC) Akuatik çevre için önemli bir risk oluşturmaktadır. Belediye atıksu arıtma tesisleri yüzey sularının östrojenik etki gücüne önemli katkıda bulunmaktadır. Bu yazıda verilen metodoloji EDC kaldırılması ile ilgili etkinlik ve atıksu arıtma süreçlerinin uygunluğunun değerlendirilmesi için izin verir.

Atıksu Arıtma Süreçlerinin Etkinliğinin Değerlendirilmesi için Kimya ve Ekotoksikolojik Yöntemlerinin bir pil kullanılması östrojenik Potency çıkarmak

Klinik olarak anlamlı Vibrio türlerinin tespiti ve izolasyonu, seçici ve diferansiyel kültür ortamı gerektirir. Bu çalışma, yeni bir kromojenik ortamın V. parahaemolyticus ve diğer ilgili türleri tespit etme ve tanımlama yeteneğini değerlendirdi. Yeni ortamın geleneksel ortamdan daha iyi duyarlılığa ve özgüllüğe sahip olduğu bulundu.

Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Ve Diğer<em&gt; Vibrio</em&gt; Türler

Bu çalışmada, akut, kronik ve multigenerational bir bioassay turkuaz killifish Nothobranchius furzeritek ve kombine stresler etkilerini çalışmaya açıklar. Bu iletişim kuralı hayat-Tarih özellikleri (ölüm, büyüme, verimlilik, ağırlık) ve kritik termal maksimum çalışma için tasarlanmıştır.

Akut ve kronik Ecotoxicity test turkuaz Killifish Nothobranchius furzeri için iletişim kuralı

Bakteriler, interbakteriyel rekabetle uğraşmak için farklı mekanizmalar kodlayabilir. Burada, bakteriyel izolatlar ve karma bir nüfusun uzamsal yapısını nasıl etkilediğini arasında rekabetçi etkileşimleri karakterize etmek için kültür tabanlı bir protokol sunuyoruz.

Vibrio fischeri Izolatlar arasında rekabetçi etkileşimleri ölçmek için kokuluçak assay

Kirlilik tüm biyomları etkiler. Deniz ortamları özellikle, özellikle mercan resifleri, dünya üzerindeki en hassas ekosistemler biri etkilenmiştir. Biyoremediasyon, organizmaların kirleticileri bozabilme kapasitesidir. Burada, mercanlar için biyoremediasyon yeteneği ve potansiyel probiyotik özellikleri sunan mikropları izole etmek ve test etmek için metodolojileri tanımlıyoruz.

Metaorganizma Araştırma ve Koruma için Biyoremediasyon ve Probiyotikler Gelişimi için Mikrobiyal Suşların Prospektileri

Zebra balığı embriyo titreşimi ürkütücü tepkisine dayalı olarak kimyasal bileşik toksisitesini değerlendirmek için bir tarama sisteminin iş akışını ve veri analizini açıklıyoruz. Sistem, zebra balığı embriyolarının bir titreşim uyaranına maruz kaldıklarında hareketlerini kaydeder ve genel toksisite/ölümcüllük ve nöromüsküler toksisitenin entegre bir değerlendirmesine izin verir.

Zebra Balığı Titreşim İrkilme Tepkisi Tarama Sistemi Kullanılarak Kimyasalların Toksisitesinin Değerlendirilmesi

Makale, Mytilus galloprovincialis hemositlerinin motilitesine dayalı olarak kirleticilerin toksisitesinin ve ekotoksisitesinin hızlı ve hassas bir şekilde değerlendirilmesi için yeni bir in vitro yöntem önermektedir. Yöntem, daha etik ve hassas toksikolojik ve ekotoksikolojik maruziyet testlerinin geliştirilmesine katkıda bulunmayı amaçlamaktadır.

Midye (Mytilus galloprovincialis) Hemosit Motilitesine Dayalı Toksikolojik ve Ekotoksikolojik Bir Test

Keşfedin deniz bakterisi Vibrio anguillarum kullanarak çevresel kirleticilerin akut zehirliliğini değerlendirme yöntemini. Bu protokol LC50 hesaplaması için reprodüktif bir ekotoksikolojik analiz sunar.

Deniz Bakterileri ile Ekotoksikolojik Yöntem

Daha fazla video keşfet