Name: Alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel Aşılama sonrası Tranjenik Farelerde Nöroinflamasyondan Biyoparlaklık Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Öğrenin, Parkinson hastalığı fare modelinde biyoparlaklık görüntüleme ile nöroinflamasyonu niceliksel olarak nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıkların erken teşhisinde değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Olga Sharma, Theresa Hundt ve teknik destek için DZNE mikroskopi ve hayvan tesislerinin çalışanlarına teşekkür ederiz.

hayvanlar dahil tüm işlemler Kuzey Ren-Vestfalya Eyalet Çevre Ajansı (LANUV) hayvan koruma komitesi onayı ile gerçekleştirildi. Hayvanlar konuldu ve 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsünde ve yiyecek ve suya serbest erişim ile standart koşullara göre bakım. 1. Hayvan Modeli <ol><li> Çaprazlamak hemizigot Tg (GFAP -Luc +/-) hemizigot bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) oluşturmak için hemizigot Tg (M83 +/-) fareler ile farelerinde 15, 16. </li><li> Ateşböceği lusiferaz 12, 17 için transgen kodlayan insan alfa-sinüklein ve standart PCR ile varlığı için, gerçek zamanlı PCR ile soy bir genotip. </li><li> Altı-sekiz haftalık bir yaşta hayvanları aşılamak. </li></ol> 2. Aşı hazırlanması <ol><li> mo hazırlayınolduğu gibi 20 mM Tris-HCl (pH 7.2) içinde 150 mM NaCl içeren Tris-tamponlu tuzlu su (TBS) tampon içinde A53T mutasyonu ile nomeric rekombinant insan alfa-sinüklein, daha önce 14 tarif. </li><li> 800 rpm ve 5 gün boyunca 37 ° C&#39;de bir orbital çalkalayıcı içinde monomerik rekombinant insan alfa-sinüklein 3 ug / uL çalkalanması suretiyle aşıları için fibril alfa-sinükleinin hazırlayın. </li><li> intraglossal aşılar için intraperitoneal ya da 2 ug / uL için 1 ug / uL nihai konsantrasyona ulaşmak için fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde fibril montajları seyreltin. </li><li> Buz üzerinde (her bir darbe ve% 50 olarak belirlenmiş bir genliği arasındaki bir saniyelik bir ara ile 0.5 s süresi 40 darbeleri) 1 dakika boyunca çubuk sonikatör ile alfa-sinüklein fibriller parçası. Çapraz tohumlama ile kirlenmesini önlemek için. Farklı inokülumu hazırlamak için temiz sonication sondalar kullanın. </li></ol> 3. Intraglossal Enjeksiyonlar <ol><li> Bir intrape hayvanlara anestezi100 mg / kg ketamin ve 10 mg / kg ksilazin ritoneal enjeksiyonu. hayvanın ayak sıkıştırın ve uygun anestezi sağlamak için elinden hindlimb çekilme olmadığını teyit etmektedir. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için hayvanın gözleri veteriner merhem kullanın. </li><li> dikkatle araştırmacı doğru bakan başlarını dorsal yatar konumda bir ısıtıcı plaka üzerine yapıştırıcı bant ile narkotize hayvanlar sabitleyin. </li><li> ultrasonik titreşim alfa-sinüklein liflerin veya PBS 5 uL 27 G tek kullanımlık deri altı şırınga doldurun. </li><li> hayvanın ağzı açık tutmak için tırtıklı ipuçları ile bir küt burunlu başparmak forseps kullanın ve forseps daha küçük olan ikinci çifti dikkatle enjeksiyon için dilin alt tarafı erişilebilir hale getirmek dilini dışarı çekmek için. </li><li> Hipoglossal sinire yakın dilin sağ veya sol alt tarafına şırınganın iğnesini enjekte edin. Yavaşça 5 sn sonra inokulum enjekte edin. Yavaşça inokulum sağlamak için 5 sn sonra iğneyi geri çekindoku nüfuz etmiş ve geri çekilmeden iğne olurken kayıp değildir. </li><li> onun tespitlerinin gelen hayvan bırakın ve tam iyileşme kadar sürekli izleme altında ısıtma plakası üzerinde bırakın. </li></ol> 4. intraperitoneal enjeksiyonları <ol><li> periton içine enjeksiyonlar için, 2 L / dakikalık bir akış oranı ve% 2 olarak ayarlanır buharlaştırıcı kullanılarak izofluran / oksijen ile soluma yoluyla bir anestezi bölmesi içerisinde kısa bir süre hayvanlar uyuşturuyorsun. hayvanın ayak sıkıştırın ve uygun anestezi sağlamak için elinden hindlimb çekilme olmadığını teyit etmektedir. </li><li> ultrasonik titreşim alfa-sinüklein, fibrillerin ya da PBS, 50 uL, 27 G tek kullanımlık deri altı şırınga doldurun. </li><li> Doğrudan fare periton içine enjekte ve araştırmacı uzağa bakan kafası olan bir sırt pozisyonda hayvan tutma ve aşağı doğru yaklaşık 45 ° ile karın duvarının arkasına yerleştirilmiş, ince bağırsağa veya çekum nüfuz kaçının. , tamamen iyileşene kadar hayvan izleyinanesteziden. </li></ol> 5. Biyoparlaklık Görüntüleme <ol><li> Resim Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) farelerde bir biyoışıldama görüntüleme sistemi kullanılarak her 2-4 haftada bir. </li><li> kısa bir süre görüntüleme 2 L / dk&#39;lık bir akış oranı ve% 2 olarak ayarlanmış buharlaştırıcı ile izofluran / oksijen bölmesi içinde fareler anestezi önce. hayvanın ayak sıkıştırın ve uygun anestezi sağlamak için elinden hindlimb çekilme olmadığını teyit etmektedir. </li><li> Tıraş ve tüy dökücü bir kremle farelerin başları atmaktadır. spesifik olmayan biyoluminesansının engellemek için bir tahriş işaretleyici ile siyah kulaklarını renklendirin. </li><li> 30 mg / mL stok solüsyonu PBS içinde D-lusiferin potasyum tuzu, lusiferaz alt-tabakanın, seyreltin. -20 ° C&#39;de 1 ml&#39;lik numuneler bu saklayın. ışığa maruz çözülmüş D-lusiferin koruyun. </li><li> enjeksiyondan önce hayvanlar tartılır. 150 mg / kg vücut ağırlığı, enjeksiyon için, D-luciferase tam hacmi hesaplayın. İntraperitoneal D enjekte-luciferin ve anestezi bölmesi hayvan dönün. </li><li> görüntüleme yazılımını başlatın. görüntüleme sistemi ulaşmıştır sonra onun çalışma sıcaklığı kontrol panelinde &#39;Initialize&#39; düğmesine tıklayarak sistemini başlatın. </li><li> düğmeleri &#39;Luminescent&#39; ve &#39;fotoğrafı seçin. 60 sn, &#39;Orta&#39;, F / Stop &#39;1&#39; e binning ve &#39;Kapalı&#39; EM kazanç pozlama süresini ayarlayın. </li><li> uyarma filtresi &#39;Aç&#39; için &#39;Blok&#39; ve emisyon filtresine ayarlandığını doğrulayın ve 1.50 cm tabi yüksekliğini ayarlayın. </li><li> On dakika D-lusiferin ile enjeksiyondan sonra, görüntüleme odasında ısıtma plakası üzerine, hayvanları ve Ağızlıklar doğru anestezi çıkışına yerleştirilmiş olduğundan emin olun. inhalasyon odasından izofluran / oksijen akışı kapatın ve 0.25 L / dk&#39;lık bir akış oranı ve% 2&#39;lik bir buharlaştırma ile görüntüleme bölmesi için akış açın. görüntüleme odasının pr kapağını kapatınoperly. </li><li> 60 s sürer ışıldaması, ölçmek için &#39;Acquire&#39; butonuna tıklayın. izofluran akışını durdurun ve onlar tamamen kendi kafeslerine geri döndükten sonra iyileşene kadar hayvanları izlemek. </li><li> biyoluminesansının ölçmek için görüntüleme yazılımı kullanın. &#39;Araç Paleti&#39; içinde &#39;ROI Araçlar&#39; ı seçin. YG Araçları &#39;içinde &#39;Türü&#39; altında &#39;Ölçüm YG&#39;yi&#39; seçin. </li><li> YG Araçları &#39;kapsamında &quot;daire&quot; aracını tıklayın ve açılan menüden çizmek ROI sayısını seçmek - ideal olarak &#39;3&#39; üç fareler için. </li><li> resimde, her bir ilgi ve altındaki &#39;Özellikleri&#39; 1.25 cm genişliği ve yüksekliği ayarlamak sağ tıklayın. ölçülür beyin alanı üzerinde her bir YG yerleştirin. </li><li> Resmin sol üst olarak, &#39;(fotonlar)&#39; için birim paneli ayarlayın. </li><li> &#39;Araç Paleti&#39; içinde, seçin &#39;Görüntü ayarla&#39; ve minimum ayarlamak ve0.20e6 den 1.00e6 için örneğin &#39;Renk Ölçeği&#39;, maksimum. </li><li> &#39;Dosya&#39; altında &#39;Kaydet&#39; ile verileri kaydetmek. </li></ol> 6. Biyokimyasal Analizi <ol><li> Standart prosedürlere 18, 19 uygun olarak beyin ve omurilik izole edin. </li><li> bir doku homojenleştirici 6000 rpm&#39;de iki 30 döngüleri (PBS 1x seyreltilmiş) proteaz ve fosfataz inhibitörleri varlığında ayrı PBS içinde bütün beyin ve bütün omurilik örnekleri homojenize. beyin ve omurilik numuneleri% 20 (ağırlık / hacim) bir son konsantrasyona kadar homojenize emin olun. </li><li> 10 s sabit bir nabız ve% 50 olarak ayarlanır, bir genlik ile buz üzerinde tutarken, iki kez numune sonikasyon. </li><li> PBS içinde 1.5 M NaCl ile 1: olanağına 1 seyreltilerek PBS ve 750 mM NaCl içinde% 10 homojenatları ayarlayın. </li><li> hücre tortularım ayırmak için, 5 dk için 1000 x g&#39;de santrifüj homojenatları4 ° C. Bir sonraki adımlar için süpernatantlar tutun ve granül atın. </li><li> üreticinin talimatlarına uygun olarak bisinkoninik asit (BCA) deneyi kullanılarak homojenatlarda protein konsantrasyonu ölçülür. Buz üzerinde 15 dakika süre ile,% 10 (ağırlık / hacim) içindeki bir nihai konsantrasyonda, N-laurylsarcosyl omurilik homojenatlarında homojenleştirilmiş beyinlerinden toplam proteinin 1.0 mg ya da 0.8 mg inkübe edin. </li><li> damıtılmış su içinde% 10 (ağırlık / hacim) içindeki bir 3 ml sakroz yastığı üzerine homojenatları Yerleşimi ve 4 ° C &#39;de 1 saat boyunca 465,000 x g&#39;de bunları ultrasantrifüj. </li><li> % 4 sodyum dodesil sülfat (SDS),% 2 β-merkaptoetanol, 192 mM glisin, 25 mM Tris ve% 5 (ağırlık / hacim) sukroz içeren bir tampon içinde yeniden süspanse peletler. </li><li> 5 dakika boyunca 100 ° C&#39;de örnekleri kaynatın ve morpholineethanesulfonic asit (MES), tampon sisteminde elektroforez için SDS-poliakrilamit jeller üzerine yerleştirin. </li><li> Bir sem ayrılan poliviniliden diflorit proteinler (PVDF) zarlara aktarmablot sistemi idry. </li><li> Çapraz bağlantı 35 rpm&#39;lik bir rotor üzerinde oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBS (hacim / hacim) formalin çözeltisi membran proteinleri% 0.4 membranları inkübe edin. </li><li> % 0.05 (hacim / hacim) içeren TBS tamponu Tween 20 ve oda sıcaklığında 1 saat boyunca% 5 (ağırlık / hacim) süt membranları bloke eder. </li><li> 4 ° C&#39;de gece boyunca bloke edici tampon içinde primer antikor ile blot inkübe edin. </li><li> TBS tampon membranlar üç kez yıkanır ve oda sıcaklığında 1 saat süre ile TBS içinde peroksidaz ya da florofor-konjuge sekonder antikor ile inkübe edin. </li><li> Kurulu protokollere 20&#39;ye göre kimyasal ışıldama veya floresan ile bağlı sekonder antikor görselleştirmek. </li></ol> 7. immünofloresan analizi <ol><li> bir doku işleme istasyonunda disseke beyinleri ve omurilik Kurut ve bir parafin istasyonunu kullanarak parafin içine gömmek. </li><li> parafine gömülü tis Kesme8 mikron kalınlığında koronal bölümlerde bir mikrotom ile dava açar ve lamlar üzerine bölümler monte edin. </li><li> 5 ila 10 dakika için iki ayrı ksilol banyolarında enkübe edilerek doku bölümleri deparafınize ve dereceli etanol banyoları (100,% 90,% 70,% 50,%) bir dizi ve son olarak da H2O ile rehidrate </li><li> Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 0.01 M sitrat tampon maddesi (pH 6.0) bölümleri inkübe ve buna ek olarak bir mikrodalga fırın içinde 10 dakika boyunca kaynatın. </li><li> kesitleri oda sıcaklığına kadar soğuması ve endojen peroksidazlar inhibe 30 dakika süreyle% 3 hidrojen peroksit çözeltisi ile inkübe edin. </li><li> % 20 (hacim / hacim) normal keçi serumu,% 1 (hacim / hacim) sığır serum albümini (BSA) ve% 0.5 Triton X-100, oda sıcaklığında 1 saat boyunca PBS içinde ile kuluçkalama ile doku bölümleri bloke eder. </li><li> % 1 (hacim / hacim) normal keçi serumu,% 1 (hacim / hacim) BSA ve% 0.25 Triton, PBS içinde X-100, gece boyunca 4 ° C&#39;de seyreltilmiş primer antikor ile bölümleri inkübe edin. </li> &lt;li&gt;% 0.25 (hacim / hacim) Triton X-100, PBS içinde bir kez PBS ile iki kez bölümleri yıkayın. </li><li> karşılık gelen fluorofor-konjuge sekonder antikor ile oda sıcaklığında 1 saat boyunca% 1 seyreltilmiş nükleer boya DAPI (hacim / hacim) normal keçi serumu,% 1 (hacim / hacim) BSA ve PBS bölümleri leke. </li><li> % 0.25 (hacim / hacim) Triton X-100, PBS içinde bir kez PBS ile iki kez yıkandıktan sonra, gömme ortamı ile slaytlar lamel ve konfokal lazer tarama mikroskobu ile boyama görselleştirmek. </li></ol>

<ol><li>Aguzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+biology%3A+Beyond+the+prion+principle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell biology: Beyond the prion principle.</a> Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).</li>
<li>Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body-like+pathology+in+long-term+embryonic+nigral+transplants+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease.</a> Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).</li>
<li>Li, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+bodies+in+grafted+neurons+in+subjects+with+Parkinson%27s+disease+suggest+host-to-graft+disease+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation.</a> Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).</li>
<li>Hansen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((alpha-Synuclein+propagates+from+mouse+brain+to+grafted+dopaminergic+neurons+and+seeds+aggregation+in+cultured+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells.</a> J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).</li>
<li>Masuda-Suzukake, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+spreading+of+pathological+alpha-synuclein+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain.</a> Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).</li>
<li>Holmqvist, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+of+Parkinson+pathology+spread+from+the+gastrointestinal+tract+to+the+brain+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats.</a> Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+alpha-synuclein+transmission+initiates+Parkinson-like+neurodegeneration+in+nontransgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice.</a> Science. 338 (6109), 949-953 (2012).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1, 38(2013).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramuscular+injection+of+alpha-synuclein+induces+CNS+alpha-synuclein+pathology+and+a+rapid-onset+motor+phenotype+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).</li>
<li>Mougenot, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+acceleration+of+a+synucleinopathy+in+a+transgenic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model.</a> Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).</li>
<li>Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+prion+neuroinvasion+following+tongue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Rapid prion neuroinvasion following tongue infection.</a> J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).</li>
<li>Tamgüney, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+prions+by+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Measuring prions by bioluminescence imaging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).</li>
<li>Watts, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+multiple+system+atrophy+prions+to+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).</li>
<li>Breid, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinvasion+of+alpha-Synuclein+Prionoids+after+Intraperitoneal+and+Intraglossal+Inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation.</a> J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).</li>
<li>Giasson, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+alpha-synucleinopathy+with+severe+movement+disorder+in+mice+expressing+A53T+human+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein.</a> Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+imaging+of+GFAP+expression+after+neuronal+damage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice.</a> Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).</li>
<li>Bernis, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion-like+propagation+of+human+brain-derived+alpha-synuclein+in+transgenic+mice+expressing+human+wild-type+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75(2015).</li>
<li>Gunther, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+testing+and+spinal+cord+removal+in+a+mouse+model+for+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).</li>
<li>Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+systems+for+westerns%3A+chemiluminescence+vs.+infrared+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection.</a> Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).</li>
<li>Kim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+bacterial+endotoxin+generates+a+distinct+strain+of+alpha-synuclein+fibril%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril.</a> Sci Rep. 6, 30891(2016).</li>
<li>Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+pathogenesis%3A+disease+onset+is+characterized+by+marked+induction+of+GFAP+in+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells.</a> Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).</li>
<li>Stöhr, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+synthetic+Abeta+prion+strains+producing+different+amyloid+deposits+in+bigenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).</li>
<li>Luk, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+inoculation+of+pathological+alpha-synuclein+initiates+a+rapidly+progressive+neurodegenerative+alpha-synucleinopathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice.</a> J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).</li>
<li>Recasens, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewy+body+extracts+from+Parkinson+disease+brains+trigger+alpha-synuclein+pathology+and+neurodegeneration+in+mice+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys.</a> Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).</li>
<li>Sacino, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+CNS+alpha-synuclein+pathology+by+fibrillar+and+non-amyloidogenic+recombinant+alpha-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38(2013).</li>
<li>Peelaerts, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((alpha-Synuclein+strains+cause+distinct+synucleinopathies+after+local+and+systemic+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration.</a> Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) periton içine alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel enjeksiyon farenin sinükleinopatilerin önemli özelliklerini özetlemek için nöro eşlik nörolojik hastalık oluşturmak için, basit bir yöntemi temsil eder. Benzer bir şekilde, dil enjeksiyon transgenik farelerde alfa-sinüklein prionoids ile neuroinvasion için başka bir yol tasvir eder fakat daha az etkilidir. Biz enjeksiyon sonrası 420 gün bizim deneyler sonlandırmak için seçti ve biz daha fazla veya kökcük enjekt...

alfa-sinüklein özellikle kendinden tohuma sıfatıyla prion proteininin benzeyen ve hücreler arasındaki ve nöronal yollar boyunca yanlış katlanması yaymak özelliklere sahip olduğunu kanıtlar gittikçe artmaktadır. Alfa-sinüklein Bu özellik aynı zamanda &#39;prion-benzeri&#39; ya da &#39;prionoid&#39; olarak adlandırılır, ve yeni sağlıklı nöronlar 1, 2 nakledilen hastalıklı nöronlardan yanlış katlanmış alfa-sinüklein bulaşıcılığını göstermektedir nakli deneylerinde, gözlem ile desteklenmektedir , 3, 4. Ayrıca beyin veya çevresine, örneğin arka bacak, kas veya bağırsak duvarı, distal kısımlarına alfa-sinüklein patoloji yayılması ile sonuçlanır içine yanlış katlanmış alfa-sinüklein doğrudan enjeksiyon MSS 5, 6, 7, &lt;sup sınıfı = &quot;xref&quot;&gt; 8, 9, 10. Daha ayrıntılı olarak, periferik yollar ile alfa-sinüklein prionoids iletimini analiz edilmiş ve yanlış katlı alfa-sinüklein, tek intraglossal veya intraperitoneal enjeksiyondan sonra daha önce prionlar için değil, yanlış katlanmış alfa- için gösterilmiş olan bir özellik merkezi sinir neuroinvade olup olmadığı sorusunu ele synuclein. Dillerine prionların enjeksiyonundan sonra, CNS neuroinvasion beyin sapı 11 bulunur hipoglosal sinir, çekirdeğine neden dilin hipoglosal sinir boyunca yayılımı ile elde edilir. Tarafından astrositik aktivasyon izleme prion promotöründen insan alfa-sinüklein A53T mutantını aşırı ifade eden, ve ateş böceği bir GFAP promotörünün kontrolü altında lusiferaz fareler: bir fare modelinde olarak, Tg (GFAP -Luc +/- M83 +/-) seçtik biyoışıldama, daha önce beyinde de gösterildiği gibifareler 12 prion ile enfekte. Bizim ellerde bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) başkaları 13 tarafından gösterildiği gibi fareler yaşı 23 aya kadar hastalık olmadı. Beyinlerinde patolojisi ve Tg omurilik ile intraglossal ya da intraperitoneal yol kaynaklı nörolojik hastalık ile insan alfa-sinüklein fibrillerinin bir tek bir enjeksiyonu: hipotezi destekleyen farelerde (+/- M83 +/- GFAP -Luc) alfa-sinüklein prionoids prionların 14 ile önemli özellikleri paylaşır.

<table><tbody><tr><td>anti-aktin antikoru</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB1501</td><td></td></tr><tr><td>anti-alfa-sinüklein, fosfo S129 antikoru [pSyn#64]</td><td>Wako</td><td>015-25191</td><td></td></tr><tr><td>anti-alfa-sinüklein, fosfo S129 antikoru [EP1536Y]</td><td>Abcam</td><td>ab51253</td><td></td></tr><tr><td>anti-GFAP antikoru</td><td>Dako</td><td>Z0334 01</td><td></td></tr><tr><td>anti-IBA-1 antikoru</td><td>Wako</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>anti-Sequestosome-1 (p62) antikoru</td><td>Proteintech</td><td>18420-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>anti-ubikitin antikoru [Ubi-1]</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB1510</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>İnvitrojen</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin&nbsp;</td><td>Ratiopharm</td><td></td><td>100 mg / kg</td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Ratiopharm</td><td></td><td>10 mg / kg</td></tr><tr><td>27 G şırınga</td><td>VWR</td><td>613-4900</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran ve nbsp;</td><td>Piramal Healthcare</td><td>PZN&nbsp; 4831850</td><td></td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Veet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Secureline laboratuvar kalemi&nbsp;</td><td>Neolab</td><td>25040</td><td></td></tr><tr><td>D-lusiferin potasyum tuzu</td><td>Acris</td><td>LK10000</td><td>30 mg/mL stok çözeltisi</td></tr><tr><td>Thermomixer</td><td>Eppendorf</td><td>5776671</td><td></td></tr><tr><td>Sonopuls Mini20 sonikatör</td><td>Bandelin</td><td>3648</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II görüntüleme sistemi</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image 3.0 Yazılımı</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tg(M83+/- ) fareler veya B6; C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>004479</td><td></td></tr><tr><td>Standart model forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11000-16</td><td></td></tr><tr><td>Dar model forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>N-laurylasarkosil</td><td>Sigma</td><td>L5125-100G</td><td></td></tr><tr><td>Optima Max-XP ultrasantrifüj ve nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>TLA-110 rotor&nbsp;</td></tr><tr><td>Kalın duvarlı polikarbonat tüpler</td><td>Beckman Coulter</td><td>362305</td><td></td></tr><tr><td>NuPAG Novex %4-12 Bis-Tris Midi Protein Jelleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>WG1401BOX</td><td></td></tr><tr><td>HRP konjuge antikor</td><td>Cayman</td><td>Cay10004301-1</td><td></td></tr><tr><td>IR Boya 680 konjuge antikor&nbsp;</td><td>LI-COR Biosciences</td><td>926-68070</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Dura Uzatılmış Süreli Substrat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>34075</td><td></td></tr><tr><td>Stella 3200 görüntüleme sistemi</td><td>Raytest</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Odyssey kızılötesi görüntüleme sistemi ve nbsp;</td><td>LI-COR Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20&nbsp;</td><td>MP Biyomedikal</td><td>TWEEN201</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>SA / T8787</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon-FL PVDF membran</td><td>Merck Millipore</td><td>IPFL00010</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Sigma</td><td>Roth</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit</td><td>Sigma</td><td>SA / 00216763/000500</td><td>çalışma çözeltisi</td></tr><tr><td>% 3 Sığır serum albümini (BSA) &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A3294-100G</td><td></td></tr><tr><td>Keçi serumu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PCN5000</td><td></td></tr><tr><td>4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>çalışma seyreltmesi 1:50.000</td></tr><tr><td>Floromount ortamı&nbsp;</td><td>Omnilab</td><td>SA/F4680/000025</td><td></td></tr><tr><td>LSM700 konfokal lazer tarama mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HALT proteaz ve fosfataz inhibitörleri</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10516495</tr><tr><td>Precellys 24-Çift Homojenizatör&nbsp;</td><td>Peqlab</td><td>91-PCS24D</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 konjuge antikor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A31619</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 konjuge antikor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td>Pierce&nbsp; BCA&nbsp; Protein&nbsp; Tahlil&nbsp; Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10741395</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom RM2255</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSM700 konfokal lazer tarama mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel aşılama sonrası tranjenik farelerde nöroinflamasyondan biyoparlaklık görüntüleme

Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils

yanlış katlı alfa-sinüklein prion benzeri bir davranış çalışma yapmak için, fare modelleri, merkezi sinir sistemi (CNS) içinde nevropatlojinin neden olan alfa-sinüklein prionoids, hızlı ve basit bir iletimine izin verir ihtiyaç vardır. Farelerde, prion proteini promoterinden A53T mutasyonu ile insan alfa-sinükleinin aşırı ifade eden ve ateş böceği lusiferaz: Burada bigenic Tg (GFAP -Luc +/- M83 +/-) içine alfa-sinüklein fibrillerinin bu intraglossal veya intraperitoneal enjeksiyon tarif glial fibriller asidik protein promotörü (GFAP), nöropatolojik hastalık oluşturmak için yeterlidir. Hayvanların bir ulaşana kadar spontan hastalığı serbest kalır: 8 ay, heterozigot Tg (GFAP -Luc +/- M83 +/-) bir yaşta başlayan şiddetli nörolojik semptomlar gelişebilir homozigot Tg (M83 + / +) fareler karşılaştırıldığında 22 ay yaşı. İlginç bir şekilde, intraperitone ile alfa-sinüklein fibrillerinin enjeksiyonu229 ± 17 günlük bir ortalama kuluçka süresi ile farelerde: el yol beş Tg (GFAP -Luc +/- M83 +/-) dördünde felçli nörolojik hastalık kaynaklı. Hastalıklı hayvanların beyinleri ve omurilik fosforile alfa-sinüklein ciddi birikme gösterdi. alfa-sinüklein birikimleri sarkosil çözünmeyen ve ubikuitin ve P62 ile birlikte lokalize olduğunu ve astrositik gliyoz ve mikrogliyozu sonuçlanan bir enflamatuar tepki eşlik etti. Şaşırtıcı bir şekilde, dil içine alfa-sinüklein fibrillerinin aşılama 285 gün sonra, alfa-sinüklein patolojiyi gösteren beş enjekte edilen hayvanların sadece bir tanesi ile hastalığa neden olan daha az etkili olmuştur. Bulgularımız (+/- M83: GFAP -Luc +/-) intraperitoneal yolla intraglossal rota ve daha çok yolu ile aşılama Tg sinükleinopatilerin ilgili işaretlerinden ile nörolojik hastalık ortaya çıkarmak için uygun olduğunu göstermektedir fareler. Bu neden prion-benzeri patojenezinin araştırılması için yeni bir model sağlardaha ayrıntılı olarak, alfa-sinüklein prionoids tarafından d.

Fareler (Tablo 1 ve Şekil 1): dil ya da bigenic Tg CNS (GFAP -Luc +/- M83 +/-) içerisinde periton neden nöropatoloji ile alfa-sinüklein prionoids periferik enjeksiyonu. alfa-sinüklein fibrillerinin ile tek bir entraperitoneal enjeksiyon sonrasında beş fareden oluşan dört 229 ± 17 günlük bir ortalama kuluçka süresi ile nörolojik hastalık geliştirdi. Şaşırtıcı bir şekilde, sadece, bir ila beş arasında fareler, 285 gün sonra, ...

(+/- M83: GFAP -Luc +/-) Tg periton ya da dil içine alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel enjeksiyon ailesel A53T mutasyon ve ateş böceği lusiferaz ile insan alfa-sinükleinin eksprese eden farelerden, nöro de dahil olmak üzere, nevropatlojinin uyarabilir bunların merkezi sinir sistemindeki.

Alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel Aşılama sonrası Tranjenik Farelerde Nöroinflamasyondan Biyoparlaklık Görüntüleme

To study the prion-like behavior of misfolded alpha-synuclein, mouse models are needed that allow fast and simple transmission of alpha-synuclein ...

Bu biyolüminesans görüntüleme yönteminin genel amacı, periferik alfa-sinüklein fibril enjeksiyonu sonrası bir Parkinson hastalığı fare modelinin merkezi sinir sistemindeki nöroenflamasyonu niceliksel olarak belirlemektir. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıkların fare modellerinde nöroenflamasyonun ne zaman ve ne derece gerçekleştiğinin belirlenmesine yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, farelerde nörolojik hastalık gelişene kadar nöroenflamasyonun noninvaziv ve tekrarlanabilir şekilde izlenebilmesidir.Bu tekniğin önemi, sinir inflamasyonuna bağlı biyolüminesans artışının nörolojik hastalığa sadece eşlik etmemesi, sıklıkla ondan önce gerçekleşmesi nedeniyle nörolojik hastalıkların 10. saatte teşhis edilebilmesidir. Hayvana cerrahi için uygun şekilde anestezi uygulayarak başlayın. Pençe sıkma testi uygulayın ve cerrahi anestezi düzleminin sağlandığını belirtmek için hayvanın ekstremiteyi geri çekmediğini doğrulayın.Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için oftalmik pomad uygulayın. Hayvanı, başı araştırmacıya dönük olacak şekilde dorsal rekumbent pozisyonda bir ısıtma plakasına dikkatlice sabitlemek için yapışkan bant kullanın. Ardından, 27 gauge tek kullanımlık hipodermik şırıngayı beş µL sonike edilmiş alfa-sinüklein fibrilleri ile doldurun.Ardından, hayvanın ağzını açık tutmak için bir çift küt uçlu pens kullanın ve dilin alt kısmının enjeksiyona erişilebilir hale gelmesi için dili dikkatlice dışarı çekmek üzere daha küçük olan pens çiftini kullanın. Şırınga iğnesini, hypoglossal sinirin yakınında, dilin sağ veya sol alt tarafına yerleştirin. Beş saniye sonra, inokülumu yavaşça enjekte edin.İnokülumun dokuya nüfuz ettiğinden emin olmak için iğneyi beş saniye daha yerinde tutun ve ardından iğneyi dikkatlice geri çekin. Enjeksiyondan sonra hayvanı serbest bırakın ve tamamen iyileşene kadar sürekli izleme altında ısıtma plakası üzerinde kalmasını sağlayın. İntraperitoneal enjeksiyonlar için hayvanları bir anestezi odasında izofluran ile kısa süreli narkotize edin.Uygun anesteziyi sağlamak için hayvanın parmağını tekrar sıkıştırın ve arka bacağını geri çekmediğini doğrulayın. 27 gauge tek kullanımlık hipodermik şırıngayı 50 µL sonike edilmiş alfa-synuclein fibrilleri veya PBS ile doldurun. Hayvanı, başı araştırmacıdan uzağa ve yaklaşık 45 derecelik bir açıyla aşağıya bakacak şekilde dorsal pozisyonda tutun.Karın duvarının arkasında yer alan ince bağırsak veya sekuma zarar vermeden doğrudan farenin peritona enjeksiyon yapın. Hayvanları anesteziden çıkana kadar gözlemleyin. Görüntüleme öncesinde, izofluran ile anestezi altına alınmış farelerin başlarını tıraş edin ve tüylerini dökücü yöntemlerle temizleyin.Spesifik olmayan biyolüminesansı engellemek için kulaklar tahriş etmeyen bir markörle siyaha boyayın. Enjeksiyondan önce hayvanları tartın. Ardından, vücut ağırlığının kilogramı başına 150 miligram olacak şekilde enjekte edilecek D-Luciferin'in kesin hacmini hesaplayın.Hesaplanan hacimdeki D-Luciferin'i intraperitoneal olarak enjekte edin ve ardından her hayvanı anestezi kamerasına geri koyun. Görüntüleme yazılımını başlatın. Görüntüleme sistemi çalışma sıcaklığına ulaştıktan sonra, kontrol panelindeki Initialize düğmesine tıklayarak sistemi başlatın.Ardından Luminescent ve Photograph düğmelerini seçin. Pozlama süresini 60 saniye, Binning ayarını medium, F/Stop değerini bir ve EM gain ayarını off olarak ayarlayın. Block seçeneğini seçin ve ardından Open'a tıklayın.Ardından, "subject height" sekmesi altında açılır menüden 1.50 seçeneğini belirleyin. D-Luciferin enjeksiyonundan on dakika sonra, hayvanları görüntüleme odasındaki ısıtma plakasına yerleştirin ve kaslarının anestezi çıkışına doğru şekilde yerleştirildiğinden emin olun. İzofluran akışını inhalasyon odasından görüntüleme odasına aktarın ve görüntüleme odasının kapısını uygun şekilde kapatın.Biyolüminesansı ölçmek için 60 saniye süren acquire düğmesine tıklayın. İzofluran akışını durdurun ve ardından hayvanları kafeslerine geri götürün. Araç paleti menüsünü açıp ROI Tools'u seçerek biyolüminesansı nicelleştirmek için görüntüleme yazılımını kullanın.Tür kısmından Measurement ROI'yi seçin. ROI Araçları (ROI Tools) içinden daire aracına tıklayın ve açılır menüden çizilecek ROI sayısını belirleyin. Üç fare için ideal olarak üç tane seçilmelidir.Görüntüde, her bir ROI'ye sağ tıklayın ve özellikler kısmından genişliği ve yüksekliği 1,25 santimetre olarak ayarlayın. Her bir ROI'yi, nicelendirilmiş beyin alanı üzerine yerleştirin. Görüntünün sol üst köşesindeki birimler panelini foton cinsinden radyans olarak ayarlayın.Ardından araç paleti menüsünü açın. Görüntü ayarla (image adjust) seçeneğini belirleyin ve renk ölçeğinin minimum ve maksimum değerlerini ayarlayın. Örneğin, 200.000'den bir milyona kadar.Son olarak, dosya (file) menüsü altında verileri kaydetmek için kaydet (save) seçeneğine tıklayın. Burada gösterildiği üzere, alfa-sinüklein fibrilleri ile intraperitoneal enjeksiyon yapıldıktan sonra, beş A53T sinüklein GFAP lüsiferaz reporter transgenik farenin dördünde, mor karelerle belirtildiği üzere 229 gün içinde nörolojik hastalık gelişmiştir. Ancak, interglossal olarak enjekte edilen beş fareden sadece birinde, yeşil dairelerle belirtildiği üzere 285 gün içinde nörolojik hastalık gelişmiştir.Biyolüminesans görüntüleme, transgenik farelerin nörolojik hastalık belirtileri geliştirmeden kısa bir süre önce beyinlerinden ve omuriliklerinden artmış biyolüminesans yaydığını ortaya koymuştur. Bu biyolüminesans, intraperitonal enjeksiyondan sonra daha belirgin hale gelmiş ve PBS enjeksiyonundan sonra ise görülmemiştir; bu durum astrositik gliyozisin yokluğuna işaret etmektedir. Bu şekil, alfa-sinüklein fibrillerinin intraperitonal enjeksiyonundan sonra transgenik farelerin beyinlerindeki biyolüminesansın zaman içindeki değişimini göstermektedir.Mavi, yeşil, kahverengi ve turuncu dairelerle gösterildiği üzere, bu dört bireysel farede hastalığın nörolojik belirtileri gelişmeden birkaç hafta önce, santimetrekare başına, steradyan başına saniyede 2 milyon foton eşiğinin üzerinde artmış biyolüminesans seviyeleri gözlemlenmiştir. Beş hayvandan biri de alfa-sinüklein fibrillerinin intraglossal enjeksiyonundan 285 gün sonra ölmeden kısa bir süre önce yükselmiş biyolüminesans seviyeleri göstermiştir.Buna karşılık, sağlıklı PBS enjekte edilmiş kontrol fareleri ve intraperitoneal enjeksiyondan sonra hastalık geliştirmediği kırmızı dairelerle belirtilen alfa-sinüklein fibrilleri olan bir hayvan için biyolüminesans sinyali, gözlem süresi boyunca eşik değerinin altında kalmıştır. Hasta hayvanların beyin kesitlerinde GFAP ve Iba1'e karşı antikorlarla yapılan immünofloresan boyama, alfa-sinüklein birikintilerinin bulunduğu bölgelerde mikrogliyoz ve reaktif astrositlerle birlikte nöroinflamasyonu doğrulamıştır. Alfa-sinüklein birikintileri oluşmayan sağlıklı hayvanlarda GFAP ve Iba1 için çok az boyama görülmüştür.Bu teknik, doğru şekilde uygulandığında ve uzmanlaşıldığında bir saatten kısa sürede tamamlanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, nörodejenerasyon alanındaki araştırmacıların farelerin merkezi sinir sistemindeki nöroinflamasyonu noninvaziv olarak incelemelerine olanak sağlamıştır. Bu videoyu izledikten sonra, farelere periferik olarak alfa-sinüklein fibrilleri nasıl enjekte edileceği ve MSS nöroinflamasyonunu izlemek için biyolüminesans görüntülemenin nasıl yapılacağı konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız.Prosedürün genel amacı, alfa-sinüklein fibrilleri ile intraglossal veya intraperitoneal enjeksiyon yoluyla periferik olarak nörolojik hastalık indüklemek ve nöroenflamasyon indüksiyonunu zaman içinde noninvaziv olarak görüntülemektir.

bioluminescence-imaging-neuroinflammation-transgenic-mice-after

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem...

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Parkinson hastalığı, pestisitlere maruz kalma ile ilgili olmuştur. Burada bir gastrik tüp istenen konsantrasyon ve enterik sinir sistemi alfa-sinüklein birikimi etkilerini analiz etmek için bir yöntem kullanarak pestisitler sağlamak için bir yöntem gösteriyor.

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

Bir roman olarak lusiferaz ve in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) olarak kullanılması klinik gelişmeler ortaya çıkmadan hastalığın bitiş noktaları tespit etmek anlamına gelir. IVIS bizim gelecekteki çalışma için daha doğru bir hastalık modeli sağlayan, gerçek zamanlı olarak birden fazla gün içinde encephalitic virüs istilasına görselleştirmek için izin verdi. Bu da bize daha hızlı şu anda kullanılan hayvan modellerinde daha antiviral ve aşıların potansiyel koruyucu özellikleri tanımlamak için...

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Bu video, nöroinflamasyonu indüklemek için alfa-sinüklein fibrillerinin bir fareye enjeksiyonunu göstermektedir. Fibriller, mutasyona uğramış alfa-sinüklein proteinlerini eksprese eden transgenik bir fareye intraperitoneal olarak enjekte edilir. Merkezi sinir sistemine ulaştıktan sonra, fibriller nöronlara girer ve mutasyona uğramış proteinlerin toplanmasını indükler. Agregalar komşu nöronlara, mikroglialara ve astrositlere yayılır. Agregaların tanınması, nöroinflamasyonu indüklemek için...

Alfa-sinüklein Fibrillerinin Enjeksiyonu ile Farelerde Nöroinflamasyonun İndüksiyonu

Kaynak: Breid, S., et. al. Alfa-sinüklein Fibrillerinin Periferik Aşılanmasından Sonra Transgenik Farelerde Nöroinflamasyonun Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, transgenik farelerde nöroinflamasyonun biyolüminesans görüntülemesini göstermekte ve aktive edilmiş astrositlerde lusiferaz-lusiferin reaksiyonlarını göstermektedir. Protokol, astrositik aktivasyonun non-invaziv olarak ölçülmesini sağlayarak CNS inflamasyonu ve terapötik etkinlik üzerine çalışmalara yardımcı olur.

Transgenik Bir Farede Nöroinflamasyonun Biyolüminesans Görüntülemesi

Kaynak: Bosco, A.,  et al.  Nörodejenerasyon Sırasında Retinal Mikroglial Aktivasyonun İn Vivo Dinamiği: Fare Glokomunda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre Morfometrisi. J. Vis. Uzm. (2015) Bu video, bir fare glokom modelinde retinal mikroglianın in vivo görüntülemesini göstermektedir. Floresan protein eksprese eden retinal mikrogliaya sahip transgenik bir fare, bir oftalmoskop altına yerleştirilir. Kızılötesi aydınlatma, optik sinir başını (ONH) bulmak için kullanılır ve odak düzlemi,...

Glokomun Fare Modelinde Retinal Mikroglia'nın İn vivo Görüntülenmesi

style='line-height:1.2;margin-bottom:0pt;margin-top:0pt;' dir='ltr'&gt;Source: Schmitz, K., et al., Farelerde Multipl Skleroz EAE Modelinde Optik Nörit ve Beyin İltihabının Biyolüminesansı ve Yakın Kızılötesi Görüntülemesi. J. Vis. Exp. (2017).Bu video, optik sinirde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit veya EAE'nin neden olduğu iltihabı görselleştirme ve izleme yöntemini göstermektedir. biyolüminesans görüntüleme. Fareyi konumlandırmayı, reaktif enjeksiyonunu ve zaman içinde biyolüminesanstaki...

EAE Fare Modelinde Biyolüminesans Görüntüleme

Biz inflamatuvar aşamaları ayırt için invaziv olmayan bir görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır. Luminol sistemik teslim nötrofillerinde MPO aktivitesi bağlı akut inflamasyon alanları ortaya koymaktadır. Bunun aksine, lusigenin enjeksiyon makrofajlarda Phox aktivitesi bağlı kronik inflamasyon görselleştirme sağlar.

In vivo Görüntüleme Yöntemi Akut ve Kronik İltihap ayırt

Biz, in vivo canlı biyolüminesans ve yakın kızılötesi SJL / J farelerinde multipl skleroz için deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) modelinde optik nevrit ve ensefalit görüntüleme tekniğini göstermektedir.

Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Bu iletişim kuralı, Alfa-synuclein oluşumu çoğaltır hücre tabanlı bir sistem içinde vivoagrega sağlamak için hedeftir. Hücre içi Alfa-synuclein kapanımlar birincil nöronlarda tarafından içselleştirilmesi numaralı seribaşı ve eksojen yayılması hastalıklı Alfa-synuclein transgenik fareler izole yerli microsomes ilişkili Alfa-synuclein toplamları yönetilen.

Microsomes ilişkili Alpha-synuclein toplamları için birincil nöronlar eksojen yönetim olarak güçlü hücre modeli liflerinde oluşumu

Öğrenin, Parkinson hastalığı fare modelinde biyoparlaklık görüntüleme ile nöroinflamasyonu niceliksel olarak nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, nörodejeneratif hastalıkların erken teşhisinde değerli bir araçtır.

Alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel Aşılama sonrası Tranjenik Farelerde Nöroinflamasyondan Biyoparlaklık Görüntüleme

Daha fazla video keşfet