Balık Yağı Takviyeler Lipid Profilinin Rapid Değerlendirilmesi için Sağlam Aracı Olarak NMR Spektroskopisi

Bu yöntemin genel amacı, Nükleer Manyetik Rezonans spektroskopisi kullanarak balık yağı takviyelerinin lipid profilini belirlemektir. Bu yöntem, balık yağı takviyelerinin lipid içerikleri ve çeşitli yağ asitlerinin gliserol iskeleti üzerindeki konumsal dağılımı gibi lipid analizi için temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, ayırma ve saflaştırma adımlarını kullanmadan tek bir anlık görüntüde birkaç farklı molekülün hızlı ve sağlam analizini mümkün kılmasıdır.

Numuneleri proton ve karbon NMR analizine hazırlamak için, önce bir şırınga kullanarak bir diyet kapsülünden yaklaşık 110 miligram balık yağı olan 120 mikrolitreyi çıkarın ve 4 mL'lik bir cam şişeye yerleştirin. Balık yağının ağırlığını kaydedin. 100 miligram artı veya eksi 10 miligram balık yağını çözmek için 500 mikrolitre BHT stok çözeltisi kullanın.

Yağı çözdükten sonra, tüm çözeltiyi doğrudan yüksek kaliteli, beş milimetrelik bir NMR tüpüne aktarın ve bir kapak takın. Numuneleri hazırladıktan sonraki 24 saat içinde numuneleri analiz edin. NMR tüpünü bir döner türbine yerleştirin.

Döndürücüyü ve boruyu kademeli bir derinlik ölçerin üstüne yerleştirin ve borunun üst kısmını, alt kısmı ölçerin altına değene kadar yavaşça itin. Ardından NMR tüpünü numune kutusunun açık bir yerine yerleştirin. Örneğin yerleştirildiği yuva numarasını not edin.

Numuneyi NMR cihazına yüklemek için kontrol bilgisayarına dönün ve SX numarasını yazın, burada numara s'yi tutan kutudaki yuvadır.ample'yi tutan kutu. Döteryumlu kloroformun döteryum sinyalinin ekranda görünmesini bekleyin. Döteryum sinyali görünür görünmez, komut satırına "lock" yazın ve döteryum rezonansını kullanarak numuneyi kilitlemek için çözücüler listesinden döteryumlu kloroformu seçin.

Döndürmenin etkin olmadığından emin olmak için komut satırına "bsmsdisp" yazın. Döndürme düğmesi yeşilse, döndürmeyi devre dışı bırakmak için tıklayın. Yeni bir veri seti oluşturmak için "new" komutunu yazdıktan sonra name sekmesine veri seti için bir isim ve EXPNO başlıklı deney numarası sekmesine deney numarasını giriniz.

PROCNO başlıklı işlem numarası sekmesinde bir numarayı kullanın. BAŞLIK sekmesine deneyin başlığını yazın. Deney sekmesinde Seç'e basın ve C13IG parametre dosyasını seçin.

Sonra vur Düzenleyicide seçili öğeyi ayarla"ve Tamam'ı tıklayın. Mevcut NMR probu ve çözücü için standart parametreleri elde etmek için komut satırına "getprosol" yazın. Ardından, hem karbon hem de proton çekirdekleri için otomatik ayarlama ve probun eşleştirilmesi için "komutunu yazın. Ardından, oldukça homojen bir manyetik alan ve böylece NMR sinyalleri için optimum çizgi şekli elde etmek için tek boyutlu gradyan şimleme gerçekleştirin.

Bunu yapmak için, komutları sırayla çalıştırarak 1D şimleme için standart otomatik prosedürü kullanın qu topshim 1dfast ss; qu topshim tuneb ss; ve qu topshim raporu"komut satırında. Metin protokolünde açıklandığı gibi parametre optimizasyonundan sonra, tek boyutlu karbon NMR spektrumları elde edin. Bunu yapmak için, karbon veri setine gidin ve komut satırına pulprog zgig" yazarak ters kapılı ayrıştırılmış bir darbe dizisi kullanın.

Spektrali nppm, RF vericisinin merkezi, tarama sayısı, sahte tarama sayısı, veri noktası sayısı ve doksan derecelik darbe açısı için darbe süresi ile ayarlamak için komut satırına komutlar yazın. Geliştirilmiş bir taban çizgisine sahip bir spektrum elde etmek için komut satırına "digmod baseopt" yazın. Ardından, komut satırına "60s" yazarak 850 megahertz enstrüman için 60 saniyelik bir gevşeme gecikmesi ayarlayın.

Alıcı kazancının otomatik hesaplanması için rga" komutunu kullanarak alıcı kazancını uygun bir değere ayarlayın. Son olarak, komut satırına "pulse acquire komutu zg" yazarak alımı başlatın. Verileri işlemek için önce şunu yazın: si 64K"sıfır doldurma uygulamak için komut satırında ve ray spektrumunun boyutunu 64K olarak ayarlayın.

Ardından, 4 adet dönüşümden önce 1.0 hertz satır genişletme faktörüne sahip bir bekleme işlevi uygulamak için komut satırına lb 1.0" yazarak satır genişletme parametresini 1.0 hertz olarak ayarlayın. Komut satırına efp" yazarak 4 adet dönüşümünü gerçekleştirin. Ardından, komut satırına apk "komutunu yazarak otomatik faz düzeltmesi yapın.

Spektrumu daha da iyileştirmek için ek faz ayarlamaları gerekiyorsa, İşlem sekmesine tıklayın. Ardından Fazı Ayarla simgesine ve sıfır mertebe ve birinci dereceden faz düzeltmesi için Faz Düzeltme simgelerine tıklayın. Sıfır mertebe ve birinci mertebe faz düzeltme simgelerine tıklarken, tüm sinyaller pozitif absorpsiyon moduna geçene kadar fareyi sürükleyin.

Faz Düzeltme modundan çıkmak için Geri Dön ve Kaydet düğmesine tıklayarak faz düzeltme değerlerini uygulayın ve kaydedin. Komut satırına abs n" komutunu yazarak entegrasyon üzerine taban çizgisi düzeltmesi için bir polinom dördüncü sıra fonksiyonu uygulayın. TMS'den ppm cinsinden kimyasal kaymaları bildirmek için, TMS sinyalini yakınlaştırın, ardından Kalibrasyon simgesine tıklayın ve imleci, referans alınacak NMR sinyalinin (bu durumda TMS) üzerine kırmızı çizgi ile yerleştirin.

Eşik yoğunluğunu ayarlamak için gerekirse orta fare düğmesini kullanın. Sol tıklayın ve 0 yazın. BHT'yi dahili bir standart olarak kullanırken, tepe noktasının her iki tarafından beş hertz uzanan delta 151.45'te tepe noktasını entegre edin.

Daha sonra integrali, stok çözeltisinin 0,5 mililitresi başına BHT'nin mikromollerine eşit olarak ayarlayın. Zirvenin her iki tarafından beş hertz uzanan ilgi zirvelerini entegre edin. Bir bölgeye odaklanmanız gerekiyorsa, devre dışı bırakmak için vurgu simgesine tıklayın.

Ardından bölgeyi yakınlaştırmak için sol tıklayın ve sürükleyin. Entegrasyon işlevini aktif hale getirmek ve bir sonraki zirveye geçmek için vurgu simgesine tekrar tıklayın. Sol tıklayın ve imleci integralin içinden sürükleyin.

Return Save Regions (Kaydedilen Bölgeleri Döndür) düğmesini tıklayın. Burada, karbonil karbon bölgesindeki Karbon NMR analizinin temsili bir spektrumu gösterilmektedir. EPA ve DHA'nın sn-1, 3 ve sn-2 konumlarındaki NMR sinyalleri gösterilir.

Bu sinyaller, EPA ve DHA'nın kantitatif tayini için kullanılabilir. Burada gösterilen, proton NMR analizinin temsili bir spektrumudur. Tayinleri için kullanılabilecek EPA ve DHA'nın NMR sinyalleri gösterilmektedir.

Proton NMR spektrumu, karbon NMR spektrumuna kıyasla daha dar bir spektral genişlik ve dolayısıyla daha düşük bir spektral çözünürlük ile karakterize edilir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 30 dakikadan daha kısa sürede yapılabilir. Geliştirilmesinden sonra bu teknik, lipid analizi alanındaki araştırmacıların, diyet takviyeleri, bitkisel yağ ve biyoyakıtlar gibi çok bileşenli matrislerde görünen çeşitli lipid bileşenlerini hızlı bir şekilde analiz etmelerinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, balık yağı takviyelerinin lipit profilinin analizi için proton ve karbon, NMR spektroskopisinin nasıl uygulanacağını iyi anlamış olmalısınız. NMR spektrometreleri tarafından üretilen güçlü manyetik alanlarla çalışmanın, kalp pilleri ve cerrahi protezlerin yanı sıra kredi kartları ve saatler gibi elektronik eşyalar için son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.