Fields Tedavisi Tümör kullanma Kanserli Hücreleri için optimum inhibitör Frekans (TTFields) Belirlenmesi

TTFields in vitro uygulama sisteminin genel amacı, farklı tümör tiplerinden kanser hücreleri üzerindeki etkilerini araştırmak, TTFields'in klinik uygulamasına rehberlik etmek ve tedavi sonucunu optimize etmektir. Bu yöntem, farklı TTField parametrelerinin kanser hücreleri üzerindeki etkisini tanımlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, nihai olarak insanlarda uygulanabilecek belirli bir kanser hücre hattının büyümesini engelleyen en etkili TTField frekansının klinik öncesi tanımlanmasına izin vermesidir.

Bu tekniğin küçük bir modifikasyonu ile, TTField'in kombine tedavisinin ve kemoterapi ajanları ve radyasyon tedavisi gibi diğer tedavi modalitelerinin etkinliğini test etmek mümkündür. Prosedürü göstermek, ekibimizden bir araştırmacı olan Yaara Porat olacak. Başlamak için, kapaklı TTFields tabaklarını bir taban plakasına yerleştirin ve kontrol hücrelerini büyütmek için kullanılacak sekiz tabak daha hazırlayın.

Her tabağın dibine iki milimetrelik steril bir lamel yerleştirin. Daha sonra, bir mililitre DMEM ortamında dördüncü U-87 MG hücresine 10 kez beş kez süspanse edin. Her bir tabakta kaplanmış uygun hücre sayısı, kullanılan hücre hattının özelliklerine bağlıdır.

Hücre büyümesinin aşırı büyümesini önlemek için deneyden önce kalibre etmek çok önemlidir. Her bir lamel üzerine yüzeyinde bir damla oluşacak şekilde 200 mikrolitre hücre süspansiyonu pipetleyin ve bulaşıkları kapaklarıyla kapatın. Hücrelerin yapışmasını sağlamak için tüm bulaşıkları gece boyunca 37 santigrat derecede, %5 karbondioksitte inkübe edin.

Hücreler bağlandıktan sonra, 200 mikrolitrelik bir pipet kullanarak ortamı lamellerden aspire edin, ardından her bir tabağa iki mililitre tam büyüme ortamını dikkatlice pipetleyin. Sürgünün altına sıkışan hava kabarcıklarını serbest bırakmak için lamel kenarlarına steril bir pipet ucuyla hafifçe vurun. Daha sonra, TTFields tedavisi başlayana kadar hücreleri 37 santigrat derecede,% 5 karbondioksitte inkübe edin.

TTFields işlemine başlamak için, taban plakasını 37 santigrat derece inkübatörden çıkarın ve soğutulmuş bir karbondioksit inkübatöre yerleştirin. Soğutmalı inkübatör sıcaklığı, elektrik alan yoğunluğunu belirleyecektir. TTFields'e karşı hücre duyarlılığına bağlı olan uygun yoğunluğu kullanmak önemlidir.

Ardından düz kablolu bir dişi konektörü taban plakasına takın ve TTFields jeneratörünü açın. TTFields in vitro uygulama sistemi için ayrılmış yazılımı açın. Deneyi yapan kişinin ve deneyi yapan kişinin adlarını girerek yeni bir etüt tanımladıktan sonra, her yemek için frekansı ve hedef sıcaklığı ayarlayın.

Yazılımda TTFields tedavisini başlatmak için başlat düğmesine tıklayın ve tüm yemeklerin monitörde açık mavi görünüp görünmediğini kontrol edin, bu da doğru bağlantılarını onaylar. Bağlantıyı yeniden kurmak için, çanağı hafifçe aşağı bastırın ve çanak ekranda açık mavi görünene kadar yavaşça ileri geri döndürün. Tedaviden 24 saat sonra, duraklat'a tıklayarak yazılımdaki deneyi durdurun.

Düz kablo konektörünü taban plakasından ayırın ve ardından taban plakasını laminer akış kabinine yerleştirin, ardından bulaşıkların ve standart koşullarda yetiştirilen kontrol hücrelerinin bulunduğu taban plakasını inkübatörlerinden çıkarın. Tüm bulaşıklardaki ortamı taze tam büyüme ortamı ile değiştirin, ardından kontrol hücrelerini 37 santigrat derece,% 5 karbondioksit inkübatöre yerleştirin ve taban plakasını soğutmalı inkübatöre geri koyun. Taban plakasını jeneratöre yeniden bağlayın.

Devam butonuna tıklayarak tedaviye devam edin. Tedavi tamamlandıktan sonra, yazılımdaki deneyi sonlandır düğmesine tıklayarak deneyi bitirin, ardından sistemden yüklenen verileri kaydedin. TTFields jeneratörünü kapattıktan sonra, düz kabloyu taban plakasından ayırın ve sistemi inkübatörden çıkarın.

Seramik kabı taban plakasından ayırmak için aşağı bastırın ve saat yönünün tersine çevirin. Daha sonra, tedavi edilmiş TTFields ve kontrol lamellerini aseptik olarak daha fazla değerlendirme için taze besiyeri içeren steril Petri kaplarına aktarın. TTFields işleminin etkisini değerlendirmek için, besiyerini her bir lamel içeren tabaktan çıkarın, ardından 0,5 mililitre %0,25 tripsin/EDTA ekleyin ve hücreler lamel yüzeyinden ayrılana kadar bulaşıkları 37 santigrat derece, %5 karbondioksitte inkübe edin.

Tripsini 0.5 mililitre tam büyüme ortamı ile nötralize edin ve süspansiyonu hafifçe yukarı ve aşağı pipetleyerek hücreleri yeniden askıya alın. Son olarak, hücreleri akış sitometrisi ile sayın. Burada, A2780 hücrelerinde gerçekleştirilen frekans taramasının sonuçları, TTFields'in incelenen hücrelerin büyümesi ve klonojenik kapasitesi üzerindeki frekansa bağlı etkisini ortaya koymaktadır.

En belirgin tedavi etkinliği 200 kilohertz frekansı uygulandığında gözlenmiştir. İki farklı yoğunlukta gerçekleştirilen TTFields tedavisinin etkinliği OVCAR-3 hücrelerinde araştırıldı. Çalışma, uygulanan yoğunluk ile tedavi sonucu arasında açık bir ilişki olduğunu ve daha yüksek alan yoğunluğunun daha fazla büyüme inhibitör aktivitesi olduğunu göstermektedir.

Uygulanan alan yoğunluğundan bağımsız olarak, TTFields tedavisinin en güçlü etkisi 200 kilohertz frekansında gözlenmiştir. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik günde 30 dakikadan daha kısa sürede yapılabilir. Bu prosedürü denerken, ortamın dökülmesini önlemeyi ve bulaşıkları kuvözden davlumbaza ve sırta aktarırken dengede tutmayı unutmamak önemlidir.

TTField uygulamasını takiben, tedavi sonucunu ve gözlenen aktivitenin altında yatan mekanizmayı daha fazla araştırmak için akış sitometrisi, alanin protein analizi veya immünofloresan mikroskopi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu teknik, farklı kanser türleri için klinik ortamlarda uygulanacak optimal TTFields frekanslarını belirlemek için kullanılır. Bu videoyu izledikten sonra, TTFields in vitro deneylerinin nasıl planlanacağını ve yürütüleceğini iyi anlamış olmalısınız.

İnsan hücre hatlarıyla çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman koruyucu eldiven ve giysi gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.