Name: Vestibüler Schwannoma Araştırması İçin Birleştirilmiş Metodolojik Çerçeve (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Keşfedin vestibüler schwannoma örneklerini primer hücre kültürü ve tümör salgısı analizi için işleme yöntemini. Bu teknik, minimal manipülasyonla hücre canlılığını koruyarak nörolojik tümör araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Ulusal Araştırma Enstitüsü tarafından R01DC015824 (KMS) ve T32DC00038 (JES ve SD&#39;yi destekliyor), Savunma Bakanlığı hibe W81XWH-14-1-0091 (KMS), Bertarelli Vakfı (KMS) , Nancy Sayles Günü Vakfı (KMS), Lauer Tinnitus Araştırma Merkezi (KMS) ve Barnes Vakfı (KMS).

<ol><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+schwannomas+in+the+modern+era%3A+epidemiology%2C+treatment+trends%2C+and+disparities+in+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Vestibular schwannomas in the modern era: epidemiology, treatment trends, and disparities in management.</a> J Neurosurg. 119 (1), 121-130 (2013).</li>
<li>Gal, T. J., Shinn, J., Huang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+epidemiology+and+management+trends+in+acoustic+neuroma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Current epidemiology and management trends in acoustic neuroma.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (5), 677-681 (2010).</li>
<li>Propp, J. M., McCarthy, B. J., Davis, F. G., Preston-Martin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descriptive+epidemiology+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Descriptive epidemiology of vestibular schwannomas.</a> Neuro Oncol. 8 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Stangerup, S. E., Tos, M., Thomsen, J., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((True+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">True incidence of vestibular schwannoma?</a> Neurosurgery. 67 (5), 1335-1340 (2010).</li>
<li>Tos, M., Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P., Tos, T., Thomsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+real+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">What is the real incidence of vestibular schwannoma?</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 130 (2), 216-220 (2004).</li>
<li>Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+natural+history+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and natural history of vestibular schwannomas.</a> Otolaryngol Clin North Am. 45 (2), 257-268 (2012).</li>
<li>Mahaley, M. S., Mettlin, C., Natarajan, N., Laws, E. R., Peace, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+patterns+of+care+of+brain+tumor+patients+in+the+United+States%3A+a+study+of+the+Brain+Tumor+Section+of+the+AANS+and+the+CNS+and+the+Commission+on+Cancer+of+the+ACS%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Analysis of patterns of care of brain tumor patients in the United States: a study of the Brain Tumor Section of the AANS and the CNS and the Commission on Cancer of the ACS.</a> Clin Neurosurg. 36, 347-352 (1990).</li>
<li>Carlson, M. L., Link, M. J., Wanna, G. B., Driscoll, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+sporadic+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Management of sporadic vestibular schwannoma.</a> Otolaryngol Clin North Am. 48 (3), 407-422 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+vestibular+schwannomas+associated+with+good+hearing+secrete+higher+levels+of+fibroblast+growth+factor+2+than+those+associated+with+poor+hearing+irrespective+of+tumor+size%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Sporadic vestibular schwannomas associated with good hearing secrete higher levels of fibroblast growth factor 2 than those associated with poor hearing irrespective of tumor size.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 748-754 (2013).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+and+VEGF+receptor-1+concentration+in+vestibular+schwannoma+homogenates+correlates+to+tumor+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">VEGF and VEGF receptor-1 concentration in vestibular schwannoma homogenates correlates to tumor growth rate.</a> Otol Neurotol. 26 (1), 98-101 (2005).</li>
<li>Koutsimpelas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VEGF%2FVEGF-R+axis+in+sporadic+vestibular+schwannomas+correlates+with+irradiation+and+disease+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">The VEGF/VEGF-R axis in sporadic vestibular schwannomas correlates with irradiation and disease recurrence.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 74 (6), 330-338 (2012).</li>
<li>Dilwali, S., Roberts, D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+VEGF-A+and+cMET+signaling+in+human+vestibular+schwannomas+and+schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Interplay between VEGF-A and cMET signaling in human vestibular schwannomas and schwann cells.</a> Cancer Biol Ther. 16 (1), 170-175 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Kao, S. Y., Fujita, T., Landegger, L. D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+anti-inflammatory+medications+are+cytostatic+against+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal anti-inflammatory medications are cytostatic against human vestibular schwannomas.</a> Transl Res. 166 (1), 1-11 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+anti-nuclear+factor-kappa+B+therapy+to+inhibit+human+vestibular+schwannoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of anti-nuclear factor-kappa B therapy to inhibit human vestibular schwannoma growth.</a> Mol Oncol. 9 (7), 1359-1370 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Landegger, L. D., Soares, V. Y., Deschler, D. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secreted+Factors+from+Human+Vestibular+Schwannomas+Can+Cause+Cochlear+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Secreted Factors from Human Vestibular Schwannomas Can Cause Cochlear Damage.</a> Sci Rep. 5, 18599(2015).</li>
<li>Blakeley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+drug+treatments+for+neurofibromatosis+type+2-associated+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Development of drug treatments for neurofibromatosis type 2-associated vestibular schwannoma.</a> Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 20 (5), 372-379 (2012).</li>
<li>Schroeder, R. D., Angelo, L. S., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF2%2Fmerlin+in+hereditary+neurofibromatosis+2+versus+cancer%3A+biologic+mechanisms+and+clinical+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">NF2/merlin in hereditary neurofibromatosis 2 versus cancer: biologic mechanisms and clinical associations.</a> Oncotarget. 5 (1), 67-77 (2014).</li>
<li>Schularick, N. M., Clark, J. J., Hansen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human vestibular schwannomas.</a> J Vis Exp. (89), (2014).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+Schwann+and+schwannoma+cells%3A+improved+and+simplified+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human Schwann and schwannoma cells: improved and simplified protocol.</a> Hear Res. , 25-33 (2014).</li>
<li>Brown, C. M., Ahmad, Z. K., Ryan, A. F., Doherty, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+expression+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor expression in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 158-162 (2011).</li>
<li>Cioffi, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+overexpression+contributes+to+vestibular+schwannoma+cell+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 overexpression contributes to vestibular schwannoma cell proliferation and survival.</a> Otol Neurotol. 31 (9), 1455-1462 (2010).</li>
<li>Doherty, J. K., Ongkeko, W., Crawley, B., Andalibi, A., Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB+and+Nrg%3A+potential+molecular+targets+for+vestibular+schwannoma+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">ErbB and Nrg: potential molecular targets for vestibular schwannoma pharmacotherapy.</a> Otol Neurotol. 29 (1), 50-57 (2008).</li>
<li>Aguiar, P. H., Tatagiba, M., Samii, M., Dankoweit-Timpe, E., Ostertag, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+between+the+growth+fraction+of+bilateral+vestibular+schwannomas+in+neurofibromatosis+2+%28NF2%29+and+unilateral+vestibular+schwannomas+using+the+monoclonal+antibody+MIB+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">The comparison between the growth fraction of bilateral vestibular schwannomas in neurofibromatosis 2 (NF2) and unilateral vestibular schwannomas using the monoclonal antibody MIB 1.</a> Acta Neurochir (Wien). 134 (1-2), 40-45 (1995).</li>
<li>Cattoretti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+recombinant+parts+of+the+Ki-67+antigen+%28MIB+1+and+MIB+3%29+detect+proliferating+cells+in+microwave-processed+formalin-fixed+paraffin+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections.</a> J Pathol. 168 (4), 357-363 (1992).</li>
<li>Hung, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+study+of+human+vestibular+nerve+schwannoma+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry study of human vestibular nerve schwannoma differentiation.</a> Glia. 38 (4), 363-370 (2002).</li>
<li>Archibald, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+expression+in+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">B7-H1 expression in vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (6), 991-997 (2010).</li>
<li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li>
<li>Zinn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Silico+Reconstruction+of+the+Viral+Evolutionary+Lineage+Yields+a+Potent+Gene+Therapy+Vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">In Silico Reconstruction of the Viral Evolutionary Lineage Yields a Potent Gene Therapy Vector.</a> Cell Rep. 12 (6), 1056-1068 (2015).</li>
<li>Kim, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulforaphane%2C+a+natural+component+of+broccoli%2C+inhibits+vestibular+schwannoma+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Sulforaphane, a natural component of broccoli, inhibits vestibular schwannoma growth in vitro and in vivo.</a> Sci Rep. 6, 36215(2016).</li>
<li>Soares, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+derived+from+human+vestibular+schwannomas+associated+with+poor+hearing+damage+cochlear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles derived from human vestibular schwannomas associated with poor hearing damage cochlear cells.</a> Neuro Oncol. 18 (11), 1498-1507 (2016).</li>
<li>Lysaght, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+of+human+perilymph%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteome of human perilymph.</a> J Proteome Res. 10 (9), 3845-3851 (2011).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., Borup, R., Stangerup, S. E., Thomsen, J., Nielsen, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+genes+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Deregulated genes in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (2), 256-266 (2010).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+nerve+microenvironment+for+schwannoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The importance of nerve microenvironment for schwannoma development.</a> Acta Neuropathol. 132 (2), 289-307 (2016).</li>
<li>Torres-Martin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+profiling+in+vestibular+schwannomas+shows+critical+deregulation+of+microRNAs+and+upregulation+in+those+included+in+chromosomal+region+14q32%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Global profiling in vestibular schwannomas shows critical deregulation of microRNAs and upregulation in those included in chromosomal region 14q32.</a> PLoS One. 8 (6), e65868(2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu el yazması, VS araştırması için birleştirilmiş bir metodolojik çerçeve tanımlamakta ve insan VS ve GAN numunelerinin akış aşağısı araştırma uygulamaları için eş zamanlı işlenmesini özetlemektedir. VS araştırması hassas tıbbın yapıldığı çağa girerken, aynı örneği çok sayıda araştırma sorusuna cevap verebilecek formlarda hazırlamak, bireysel hastalara özgü moleküler, hücresel, genetik ve proteomik görüşlerin keşfedilmesine olanak tanır. İnsan Schwann hücresi ve VS kültürlerinin saflığı, S10...

Vestibüler schwannomalar (VS), her 100.000 kişiden 1 tanesinde serebellopontin açılarının en sık rastlanan neoplazmıdır. Metastatik olmamasına rağmen, bu tümörler bir hastanın yaşam kalitesini ciddi şekilde etkiler 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 . Etkilenen kişiler genellikle işitme kaybı, kulak çınlaması ve işitme hissi ile yaşar. Belirtileri, tümör büyüdükçe denge sorunları, yüz felci ve diğer kraniyal sinir fonksiyonlarının bozulmasına yol açarak giderek zayıflamaya başlar. Beyin sapı kompresyonuna bağlı yaşamı tehdit eden komplikasyonlar da oluşabilir 7 . VS için yönetim seçenekleri esasen statik tümörleri beklemek ve stereotaktik radyasyon tedavisi veya büyümekte olan tümörler için cerrahi rezeksiyon ile sınırlıdır <sUp class = &quot;xref&quot;&gt; 8. Araştırmaya bağlı hastanelerde bu tümörlerin cerrahi olarak çıkarılması, hasta ameliyatları sırasında toplanan taze tümör dokusunu edinme ve analiz etme olanağı sunar. Translabirüsin rezeksiyonu olan, VS&#39;ye spesifik bir cerrahi yaklaşım dahili kulaktan ve perilymfden değerli insan sensoryum epiteline ulaşmayı sağlayabilir. VS&#39;ler periferik bir duyu sinirinden ( yani, vestibüler sinir) kaynaklandığından VS ile ilişkili gözlemlerin, insan büyük auriküler sinir (GAN) gibi uygun bir kontrol sinirinden elde edilen gözlemlerle karşılaştırılması önemlidir. Sağlıklı GAN&#39;lar parotidektomi veya boyun diseksiyonu sırasında düzenli olarak feda edilir ve sağlıklı Schwann hücre fizyolojisi için sağlam modeller olarak kullanılabilir 9 . Sporadik VS&#39;nin tedavisi veya önlenmesi için FDA onaylı herhangi bir ilaç bulunmadığından, araştırmacıların altta yatan moleküler meşeyi aydınlatması zorunludurTerapötik hedefleri belirlemek için hastalığın nismleri. VS patogenezinde rol oynadığı gösterilen proteinler merlin, vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), siklooksigenaz 2 (COX-2), nükleer faktör kappa B (NF-κB), tümör nekroz faktör alfa (TNF-alfa) , Epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR) ve ilgili sinyal molekülleri olan 10,11,12,13,14,15,16,17 . Yakın zamandaki ilerlemeler, birincil insan vestibüler schwannomaları ve sağlıklı sinir dokularının toplanması, işlenmesi, kültürü ve alt başlarında araştırılması için protokoller geliştirilmiş ve geliştirilmiş 18,19. Bununla birlikte, mevcut protokollerin çoğunun, preparatın( Örn . Tek başına hücre kültürü) için bu tür dokuların atılması. Bu makale, hücre tipi-spesifik kültür, protein ekstraksiyonu, RNA korunumu, tümör salgı toplama ve doku fiksasyonu gibi birçok alt akış uygulamaları için tek bir birincil insan VS veya GAN örneğinin aynı anda işlenmesi için birleşik bir metodolojik çerçeve sunmaktadır. Bu çalışma ayrıca, translabyrinthine VS reseksiyonu esnasında insan beyin-omurilik sıvısının (CSF) ve perilymfinin cerrahi olarak toplanması ve işlenmesi hakkında detaylı bilgi vermektedir, çünkü bu yakından ilişkili dokular VS için biyolojik belirteç kaynakları olarak hizmet edebilir. Sonunda, bu protokol, gen terapisinde kullanılmak üzere bu dokunun yeni bir uygulaması olan kültürdeki birincil insan VS hücrelerinin viral iletimi için adımlar sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>BioCoat Poly-D-Lysine/Laminin 12 mm #1 Alman Cam Lamel</td><td>Corning</td><td>354087</td><td>Veya Corning Laminin (CB-40232) ve Cultrex Poly-L-Lysine (3438-100-01) ile lameller hazırlayın</td></tr>, <tr><td>CELLSTAR 15 mL Santrifüj Tüpleri, Konik tabanlı, Derecelendirmeli, Steril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188161</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR 50 mL Santrifüj Tüpleri, Konik tabanlı, Derecelendirmeli, Steril</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR Hücre Kültürü Çanağı, 60 mm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Clostridium histolyticum'dan kollajenaz, Steril filtreli</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1639</td><td></td></tr><tr><td>Costar 24 Kuyu Berraklığında TC ile İşlem Görmüş Çoklu Kuyu Plakaları, Steril</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4 ',6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidroklorür)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz, piruvat, glutamin yok, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10313-039</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 Forseps, Dumoxel</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11231-30</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps, Standart uç, Inox</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, nitelikli, USDA onaylı bölgeler, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10437-028</td><td>Aliquot 50 mL tüplerde ve -20 ° C'de saklayın; Sığır</td></tr><tr><td>Testislerinden C dondurucu Hyaluronidaz, Tip I-S, Liyofilize Toz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP Şırınga Filtre Ünitesi, 0.22 ve mikro; m, polietersülfon, 33 mm, steril</td><td>EMD Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit, Reaktif Sınıfı, Kristalin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Kullanmadan önce: Çevrimiçi olarak sunulan protokollere dayalı Standart Çalışma Prosedürleri oluşturun</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/mL), 100 mL</td><td>Termo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PhosSTOP Fosfataz İnhibitör Tabletleri</td><td>Roche</td><td>04906845001</td><td></td></tr><tr><td>Pierce Proteaz İnhibitörü Tabletleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88666</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler ve pipet uçları, 5/10/25 mL</td><td></td><td></td> 1.5/2.0 mL Mikrotüpler için Değişken Değişken <td></td></tr><tr><td>Plastik Homojenizasyon Havaneli</td><td>E& K Scientific</td><td>EK-10539</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide İğneleri, 27 G x 1 1/2 inç</td><td>BD</td><td>301629</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Tamponu</td><td>Boston BioProducts</td><td>BP-115</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater (RNA stabilizasyon solüsyonu)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Güvenli Kilitli Mikrosantrifüj Tüpleri, Polipropilen, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363719</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Safe-Lock Mikrosantrifüj Tüpleri, Polipropilen, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td>Kullanmadan önce otoklav</td></tr><tr><td>Tuzlu - %0,9 Sodyum Klorür Enjeksiyonu, bakteriyostatik, 20 mL</td><td>Hospira</td><td>0409-1966-05</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Bıçakları - #15</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Schuknecht Emme Borusu 24 gauge</td><td>Bausch + Lomb</td><td>N1698 42</td><td>Cerrahi yaklaşım için kullanışlıdır (yaygın otolojik cerrahi aletlere ek olarak) ve ör. mavi bir cerrahi işaretleyici</td></tr><tr><td>Numune Kabı, VEYA steril, 4OZ</td><td>Medline</td><td>DYND30331H</td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000-C Stereo Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>000000-1106-133</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga/İğne Kombinasyonu, Luer-Lok Ucu, 5 mL, 22 G x 1 inç.</td><td>BD</td><td>309630</td><td></td></tr><tr><td>Sadece Tüberkülin Şırıngası, Kayma ucu, 1 mL</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Sadece Tüberkülin Şırıngası, Kayma ucu, 3 mL</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonik homojenizatör, 4710 Serisi, CV18 probu</td><td>Cole-Parmer</td><td>CP25013</td><td></td></tr></tbody></table>

vestibüler schwannoma araştırması İçin birleştirilmiş metodolojik Çerçeve

A Unified Methodological Framework for Vestibular Schwannoma Research

Vestibüler schwannomalar, serebelopontin açıdaki en yaygın neoplazmlardır ve tüm intrakranyal büyümelerin% 6-8&#39;ini oluştururlar. Bu tümörler, etkilenen bireylerin% 95&#39;ine kadar sensörinöral işitme kaybına neden olsa da, işitme kaybının altında yatan moleküler mekanizmalar kaçınılmazdır. Bu makale, laboratuarımızda, vestibüler schwannomaların çalışmasına ayrık akışaşağı araştırma uygulamaları için çeşitli birincil insan dokusu örneklerinin toplanmasını ve işlenmesini kolaylaştırmak için kurulmuş olan adımları özetlemektedir. Özellikle, bu çalışma, cerrahi numunelerdeki Schwann ve schwannoma hücrelerinin toplanması, işlenmesi ve kültürü için birleşik bir metodolojik çerçeve tanımlamaktadır. Bu, şu anki araştırmalar için gerekli görülen paralel proses adımlarıyla bütünleşmiştir: tümör ve sinir salgılarının toplanması, RNA&#39;nın korunması ve toplanan dokulardan protein ekstraksiyonu, bölümlerin hazırlanması için doku fiksasyonu,Primer insan hücrelerinin gen tedavisine uygulanması için adeno-ilişkili virüslere maruz kalması. Ek olarak, bu çalışma, bu tümörü, iç kulaktan ve perilymftten insan sensory epitelini elde etmek için eşsiz bir fırsat olarak toplamak için translabyrinthine cerrahi yaklaşımı vurgular. Deneysel kaliteyi artırmak için ipuçları sağlanmaktadır ve vurgulanılan yaygın tuzaklar bulunmaktadır.

Beşinci bölümde belirtildiği gibi, kültürde birincil insan VS hücreleri, birçok aşağı akım araştırma uygulamasında hastalıkla ilişkili süreçler için bilgilendirici modeller olarak görülebilir ( Şekil 1 ). Bölüm 6&#39;da yetiştirilen sağlıklı Schwann hücreleri doğrudan ve öğretici bir karşılaştırma noktası sağlar. Aşağıda ana hatlarıyla belirtildiği üzere, bu birleşik metodolojik çerçeveye göre işlenmiş VS&#39;ler ve GAN&#39;lardan elde edilen kapsamlı verile...

Bu protokolün amacı, vestibüler schwannoma ve Schwann hücresi araştırmalarında birden fazla aşağı akım uygulaması için insan cerrahi numunelerinin toplanması ve işlenmesinin ana hatlarını vermektir.

Vestibüler Schwannoma Araştırması İçin Birleştirilmiş Metodolojik Çerçeve

Vestibular schwannomas are the most common neoplasms of the cerebellopontine angle, making up 6-8% percent of all intracranial growths. Though these ...

Bu prosedürün genel amacı, ameliyathaneden gelen bir insan vestibüler schwannoma örneğini primer hücre kültürü ve tümör salgılarının toplanması için işlemektir. Bu yöntem, birden fazla biyomoleküler analizde kullanılması amaçlanan primer insan tümör örneğinin en iyi nasıl alınacağı, saklanacağı ve işleneceği gibi vestibüler schwannoma araştırmaları alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, primer insan vestibüler schwannoma hücrelerini çoğaltmak için minimum manipülasyona dayalı bir kültür yöntemi kullanmasıdır.Bu tekniğin etkileri, gelecek vaat eden terapötik adayların doğrudan kültürlenmiş hücreler üzerinde test edilebilmesi nedeniyle vestibüler schwannoma tedavisine kadar uzanmaktadır. Ameliyathaneden nakil için kullanılan buzdan, taze toplanmış vestibüler schwannoma veya great auricular nerve örneğini içeren numune kabını laboratuvardaki laminer akışlı kabine taşıyarak başlayın. Steril pens kullanarak numuneyi, 1,4 mililitre dış PBS ile doldurulmuş üç adet 1,5 mililitre tüpün ilkine dikkatlice aktarın.Her tüp numuneyi aldıktan sonra kapatın ve yıkama için hafifçe çalkalayın. Örneği kuru bir 60 milimetrelik petri kabına yerleştirin ve belirgin kan damarlarının bulunduğu bölgelerdeki tüm ölü dokuları pens yardımıyla temizleyin. Örneği RNA koruma, protein ekstraksiyonu, sekresyon toplama, fiksasyon ve hücre kültürü için ayrı parçalara bölmek üzere pens veya skalpel ucu kullanın.Hücre kültürü için ayrılan örnek parçasını, beş ila sekiz mililitre soğuk takviyeli DMEM F12 medyumu içeren yeni bir 60 milimetrelik kültür kabına aktarın. Salgıların toplanması için ayrılan vestibüler schwannoma veya great auricular nerve parçasını boş bir 1,5 mililitrelik tüpe yerleştirin. İşleme, iki adet 1,5 mililitrelik tüpe 500 mikrolitre FBS ile takviye edilmemiş DMEM pipetleyerek başlayın.İlk tüp tümör salgılarının toplanması için kullanılacak, ikinci tüp ise eşleştirilmiş kontrol olarak hizmet edecektir. DMEM içeren tüplerden birini kalibre edilmiş bir dijital teraziye yerleştirin. Teraziyi sıfırlayın, salgıların toplanması için belirlenen örnek parçasını tüpe yerleştirin ve tartın.Sadece dokunun ağırlığını temsil edecek olan sonucu kaydedin. Laminar akışlı kabin altında, tüpteki DMEM hacmini numunenin her 10 miligramı için 100 mikrolitre olacak şekilde ayarlayın. Doku örneğini ve buna karşılık gelen kontrolünü içeren tüpü inkübatöre yerleştirin.Tümör veya sinir salgılarını biyolojik olarak yararlı miktarlarda toplamak için en az 72 saat boyunca inkübe edin. 72 saatlik inkübasyonun ardından, salgı içeren ortamı numuneden uzaklaştırmak için bir mililitrelik pipet kullanın. Tekrarlayan dondurma-çözme döngülerini önlemek için, ortamı planlanan sonraki analizlere göre yeni tüplere alikotlayın.Orijinal doku parçasını, salgıları ve kontrol DMEM'i, alt uygulamalar başlatılana kadar -80 °C dondurucuda saklayın. Her iki elde birer pens kullanarak vestibüler schwannoma dokusunu yaklaşık 1 mm³ boyutundaki parçalara ayırarak kültür prosedürüne başlayın. Ardından, besiyeri ve tümör parçalarını 10 mm'lik bir serolojik pipetle aspire edin ve tüm içeriği 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın.25 °C'de 1000G'de üç dakika boyunca santrifüjleyin. Santrifüjleme sırasında, 60 mm'lik bir kültür kabında 4,7 mL tamamlanmış DMEM F12 ortamını 250 µL kollagenaz ve 50 µL hyaluronidaz ile birleştirerek disintegrasyon ortamını hazırlayın. Santrifüjleme sonrası, tümör parçaları konik tüpün dibinde bir tabaka oluşturacaktır.Süpernatantı dikkatlice pipetle çekip atın. Ardından, tümör paletine taze hazırlanmış enzim içeren parçalama ortamından iki mililitre ekleyin. Dokuyu hareketlendirmek için pipetle birkaç kez yukarı aşağı çekme işlemi yapın ve ardından dokuyu 60 milimetrelik kültür kabına aktarın.Kültür kabını 18 saat boyunca inkübatörde bekletin; ertesi gün, %10 FBS ve %1 1 penisilin streptomisin ile desteklenmiş DMEM F12 ortamını 37 °C su banyosunda ısıtın. Vestibüler schwannoma kültürünü içeren kabı inkübatörden çıkarın ve steril hava akışlı kabine transfer edin. Altı mililitrelik bir şırıngaya takılmış 22 gauge iğne kullanarak, kültürü içeren ortamı aspire edin ve yeni bir 15 mm konik tüpe aktarın.37 °C'de 1000G hızında beş dakika boyunca santrifüjleyin. Bu sırada, gerekli sayıda polidelysin ve laminin kaplı cam lamelleri steril pens yardımıyla 24 kuyucuklu bir kültür plağına yerleştirin. Bir santimetreküplük bir tümörden 24 ila 32 kuyucuk kültürlenebilir, bu nedenle çoğu küçük tümör için sekiz ila 16 kuyucukluk hücre kültürü planlanması uygundur.Santrifüjlemeden sonra supernatantı uzaklaştırın ve planlanan her kuyucuk için bir mililitre hücre süspansiyonu sağlayacak şekilde, kalıntı hücre peletini önceden ısıtılmış besiyerinde yeniden süspanse edin. İki mililitre hücre süspansiyonu aspire etmek için beş mililitrelik bir serolojik pipet kullanın ve bunun bir mililitresini 24 kuyucuklu plakanın bir kuyucuğuna aktarın. Tüm hazırlanmış kuyucuklar arasında tümör hücresi süspansiyonu eşit şekilde bölünene kadar, ikişer mililitrelik artışlarla aspirasyon yapıp her bir planlanan kuyucuğa birer mililitre tümör hücresi içeren besiyeri aktarma işlemine devam edin.24 kuyucuklu plakayı gece boyunca 37 °C'lik inkübatöre yerleştirin. Plakayı ertesi gün kontrol edin; kuyucukların tabanında belirgin düzeyde döküntü görülürse, yapışık hücreleri yerinden oynatmamaya dikkat ederek her kuyucuktaki besiyerini dikkatlice yeni takviyeli DMEM F12 kültür besiyeri ile değiştirin. Eğer döküntü yoksa, plakayı inkübatöre geri koyun ve besiyerini ilk kez beşinci günde, ardından her üç günde bir değiştirin.Bu parlak alan görüntüsü, kültürdeki vestibüler schwannoma hücrelerinin tipik organizasyonel modelini göstermektedir. Birincil insan vestibüler schwannoma kültürüne ait bu immünofloresan görüntüler, yeşil renkte gösterilen GFP eksprese eden ink 80'e 48 saatlik maruziyetten sonra alınmıştır. Kırmızı floresans, hücre iskeletini boyayan falloidin F aktin immün boyamasından, mavi floresans ise çekirdeği boyayan dapi'den kaynaklanmaktadır.İçteki küçük resim, düşük büyütmeli görüntünün bir bölgesinin daha yüksek büyütmeli görüntüsüdür. Bu prosedürü uygularken, sonraki adımların doğru inkübasyon sürelerinden sonra takip edildiğinden emin olmak için salgı örneğini ve kültür örneğini inkübatöre yerleştirdiğiniz saatleri not etmeyi hatırlamanız önemlidir. Bu prosedürün ardından, farklı virüslerin hücrelerde nasıl eksprese edildiği veya ilaç tedavisinden sonra gen ekspresyonunun nasıl değiştiği gibi ek soruları yanıtlamak için viral transduksiyon, fiksasyon, immünofloresan, ilaç tedavisi ve RNA ekstraksiyonu gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Bu teknik geliştirildikten sonra, vestibüler schwannoma araştırmaları alanındaki araştırmacıların, cerrahi operasyon geçirmiş canlı hastalarda primer insan hücrelerinin farklı ilaçlara verdiği yanıtları incelemelerinin önünü açmıştır.

a-unified-methodological-framework-for-vestibular-schwannoma-research

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bir yöntem özgürlük altı derece (6DF) hareket simülatörü kullanarak insanlarda üç boyutlu vestibulo göz refleksleri (3D VOR) ölçmek için açıklanmıştır. 3D açısal VOR kazanç ve kaymalar vestibüler fonksiyon kalitesinin doğrudan bir ölçüsü. Sağlıklı konularda Temsilcisi veri...

Özgürlük Hareket Platformu Six Degrees kullanarak Üç Boyutlu Vestibüler Oküler Refleks Testi

Vestibüler Schwannomalar (VSS) TNF2 tümör baskılayıcı gen mutasyonu ile ilişkili Schwann hücre (SC) kökenli olmayan habis tümörler vardır. Biz, moleküler ve hücresel deneysel manipülasyon ve analiz için izin verir ve insan hastalığının heterojen doğası tekrarıdır hücre kültürü VS birincil insan için yeniden üretilebilir ve etkili protokolü sunulmaktadır.

İnsan Vestibüler Schwannomalar İlköğretim Kültürü

Kranial sinir sinir kaybı gibi morfolojik değişiklikler değerlendirmek için yapıları veya kranial sinirler Menière'nın hastalığı (MD) veya sağlıklı kişilerin vivo içindebir protokol değerlendirme şişmesi manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ile geliştirilmiş . Ek MRI tabanlı onay MD gerçekleştirildi.

Vivo Menière'nın hastalığı kulakları ve Normal işitme kulak manyetik rezonans görüntüleme kullanarak insan kranial sinirler xarakteristikaları analizi

Asimetrik yanıtları olan hastalarda vestibüler sistemin yeniden dengelenmesi için yeni bir rehabilitasyon yöntemi sunulur ve bu yöntem zayıf tarafa doğru tek yönlü rotasyonlardan oluşur. Kompansitenin çok duyusal yönlerini geliştirmek yerine doğrudan vestibüler yolu değiştirerek, asimetri 1-2 seans içinde normale döndürülebilir ve kalıcı etkiler gösterebilir.

Vestibüler Disfonksiyonlu Hastalarda Vestibüler Sistem Asimetrisini Geliştirmek Için Tek Yönlü Rotasyonların Kullanılması

Yerçekimi algısı genellikle baş dik pozisyonda öznel görsel dikey tarafından belirlenir. Rulo düzlemde ± 15° ve ± 30° baş eğimlerinde yapılan ek değerlendirme, bozulmuş graviceptive algının saptanması için daha fazla bilgi içeriği sağlar.

Öznel Görsel Dikey Paradigma kullanılarak Rulo Düzlemde Statik Graviceptive Algının Değerlendirilmesi

Bu makalede, manyetik vestibüler stimülasyon altında refleksif göz hareketlerini, kendi kendine hareket algısını ve bilişsel görevleri ve vestibüler organların anatomik yönelimini değerlendirmek için deneysel kurulum, materyal ve prosedürleri 7 Tesla Manyetik rezonans tomografi (7T-MRT) tarayıcısında açıklayacağız.

7T MRT'de Manyetik Vestibüler Stimülasyonun Nistagmus, Kendi Kendine Hareket Algısı ve Bilişsel Performans Üzerindeki Etkisinin Ölçülmesi

Burada, labirentektomi sırasında fizyolojik koşullar altında insan vestibüler uç organlarının toplanması ve bunların immün boyama kullanılarak analizi için bir teknik tanımlanmıştır.

Labirentektomi Sırasında Fizyolojik Koşullar Altında Vestibüler Uç Organların Çıkarılması

Metodoloji, optokinetik ve tüm vücut rotasyonları sırasında bakış stabilizasyonuna görsel ve vestibüler katkıları araştırdı. Stimülasyonlar görsel, vestibüler ve görselovestibüler denemelerle gerçekleştirildi. Burulmalı göz hareketi kazancı ve nistagmus frekansları, her deneme için duyusal spesifik hareket bilgisinin refleksif beyin sapı yanıtına doğru subkortikal iletimi için göstergeler olarak görev yaptı.

Rulo düzleminde subkortikal hareket işlemede görsel ve vestibüler girdinin göreceli önemini değerlendirmek için göz izlemeyi kullanma

Daha önce ışınlanmış bir alanda izole tekrarlayan akciğer kanserinin yönetimi zordur. Burada, daha önce radyasyona maruz kalmış bir alanda lokalize akciğer kanseri nüksü olan hastaların yönetimi için endobronşiyal ultrason (EBUS) kılavuzluğunda sisplatin enjeksiyonu tanımlanmıştır.

Endobronşiyal Akciğer Kanseri İzole Mediastinal Nüks Tedavisinde Sisplatin intratümöral Enjeksiyon Ultrason eşliğinde

Kolon-26 (C26) karsinomu taşıyan fareler, kanser kaşeksisinin klasik bir modelini temsil eder. Progresif kas kaybı, tümör büyümesi, kasa özgü ubikitin ligazlarının aşırı ekspresyonu ve kas kesit alanında azalma ile ilişkili olarak ortaya çıkar. Yağ kaybı da gözlenir. Kaşeksi, artan israf şiddeti ile zamana bağlı bir şekilde incelenir.

Kolon-26 Karsinoma Tümör taşıyan Kanser Kaşeksi Araştırmaları Modeli Olarak Fare

Keşfedin vestibüler schwannoma örneklerini primer hücre kültürü ve tümör salgısı analizi için işleme yöntemini. Bu teknik, minimal manipülasyonla hücre canlılığını koruyarak nörolojik tümör araştırmalarına katkı sağlar.

Vestibüler Schwannoma Araştırması İçin Birleştirilmiş Metodolojik Çerçeve

Daha fazla video keşfet