İzole edilen fare kalpten interstisyel transüdao toplanması için ters kalp modeli

Bu ters kalp modelinin genel amacı, izole edilmiş bir sıçan kalbinden kardiyak interstisyel transüda toplamaktır. Atan kalbin içinde, kalbin bireysel duyusu parakrin faktörleri serbest bırakır ve bunları çevredeki interstisyel sıvı boşluğuna salar. Bu önemlidir, çünkü interstisyel sıvı alanı, kalp hücreleri arasındaki iletişim için bilgi taşır.

Ve bu, enfarktüslü miyokardın iltihaplanması ve rejenerasyonu koşulları altında özellikle önemlidir. Bu videoda, işbirlikçilerim Dr.Ding ve Tan, size burada, bu uh-aşkta, izole edilmiş perfüze edilmiş bir sıçan kalbinin yüzeyinden interstisyel sıvı toplama tekniklerimizi gösterecekler. Lateks kalp kapağını veya kapağını yapmak için, bir farenin kalbinin ortalama boyutuna uyan ve çok ince zımpara kağıdı ile cilalanmış bir alüminyum kalıba sahip olun.

Kalıbın boynunu freze makinesine dikey olarak sabitleyin ve kalıbı yavaşça döndürmeye başlayın. Daha sonra, 20 mililitre sıvı lateksi 50 mililitrelik bir cam kabın içine dökün ve dönen kalıbı daldırılana kadar lateksin içine indirin. Ardından yavaşça kaldırın ve lateks katılaşana kadar kalıbı 15 dakika daha döndürmeye devam edin.

Döndürme, bu köpüğü yapmak ve sıvı lateks tabakasını kalıbın yüzeyine eşit olarak dağıtmak için hayati önem taşır. Bu nedenle, kalıbın lateksten kaldırılırken döndüğünden emin olun. Lateks kuruduktan sonra, latekse zarar vermemek için lateksi talk pudrası ile kaplayın.

Döndürmeyi durdurun, ardından kalıbı makineden yavaşça ayırın. Lateksi kalıptan dikkatlice çıkarın. Şimdi, lateks kapaktaki prize 25 santimetre uzunluğunda bir silikon boru takın.

Bu tüp, interstisyel kardiyak transüdatı veya BT'yi toplamak için kullanılır. Daha sonra, sıçan büyüklüğündeki ventriküler balonu, bir mililitre su dolu şırıngaya bağlı L şeklinde bir metal kanül üzerine sıkıca takın. Ve sıçan büyüklüğündeki ventriküler balonu suyla doldurun. Şırıngayı kullanarak birkaç kez şişirip söndürerek balonun hava geçirmez olduğundan emin olun.

Ardından, kanülü üç yönlü bir durdurma yoluyla bir basınç dönüştürücüsüne bağlayın. Son olarak, intraventriküler basıncın ölçümü için balonun ventriküler boşluğu dolduracağı şırınga üzerinde bir işaret yapın. Kalbin hazırlanmasına geçmeden önce, Langendorff perfüzyon sistemini metin protokolüne göre hazırlayın.

Şimdi, 300 ila 350 gramlık bir erkek Wistar sıçanı tamamen uyuşturduktan sonra, oda sıcaklığındaki bir ameliyat masasına aktarın. Tecrübe ile, kalbin kanülasyonuna yol açan aşağıdaki adımlar sadece yaklaşık üç dakika sürmelidir. Forseps kullanarak sternumun hemen altındaki cildi ve kası kaldırın ve ağır makas kullanarak kaburgaların alt kenarını kesin.

Ardından, ince bir makasla kaburga kenarındaki diyaframa küçük bir kesik yapın. Daha sonra, tüm ventral göğüs duvarının bir flebini yapmak için kaburganın kaudal olarak kesin. Şimdi, kalbi nazikçe tutun ve kalp damarları gerilmeye başlayana kadar yavaşça canlandırın.

Ardından, aort tamamen açığa çıkana kadar kalbi kesin ve kalbi 50 mililitre buz gibi KHB içeren 100 mililitrelik bir behere aktarın. Şimdi, kalbi hemen füzyon aparatına götürün ve aortu damlayan bir kanül üzerine monte edin. Kalbe hava kabarcığı girmemesi için 4-0 dikişle sıkıca sabitleyin.

Ardından, sabit bir bolluk basıncı veya bir bolluk akışı uygulayın. Ters kalp kurulumunu oluşturmak için, önce aort kanülünü hart'ın arka duvarı yüz yüze gelene kadar yavaşça döndürün. Ardından, sol atriyumdaki açıklığı ortaya çıkarmak için bağ dokusunu kesin.

Sonra, kalbi nazikçe kavrayın ve ters çevirin. Kalbi, balon sönmüş olarak hazırlanan ventrikül balonunun üzerine monte edin ve sol ventriküle besleyin. Kalp şimdi balon kateter düzeneğini destek olarak kullanarak dik bir pozisyonda mekanik olarak stabilize edilir.

Pistonu doldurma işaretine kadar ilerleterek balonu tüm ventriküler boşluğu doldurana kadar şişirin. Kalbi, aort kökü üzerinde minimum stres olacak şekilde sabitleyin. Prosedürün bu kısmı pratik gerektirir.

Şimdi, balonun üzerindeki göstergeyi gözlemleyin ve diyastolik basıncı üç ila beş milimetre cıvaya ayarlayın. Basınç doğru ayarlanmışsa epikard üzerinde küçük damlacıklar oluşmalıdır. Ardından, lateks kapağı yavaşça kalbin üzerine çekin.

En ventriküler yüzey bile kaplanmalıdır. Devam etmeden önce, kapağın içinde hava kabarcıkları olup olmadığını kontrol edin. Hava kabarcıklarını gidermek için şırıngadan hafifçe emme kullanın.

Şimdi, izin tüpünün ucunu kalbin 10 santimetre altına yerleştirin. Damlayan BT'yi 1,5 mililitrelik bir tüpe toplayın ve tüpü 1: 1 buz ve sodyum klorür karışımına gömerek dört santigrat derecenin altında tutun. 0,15 ila 1,5 mililitre CT toplayın, ardından numuneyi tartın ve sıvı nitrojen içinde dondurun.

İşlenene kadar eksi 80 santigrat derecede saklayın. Ters kalp modelini 100 santimetre su sabit basıncında retroperfing yaparken, koroner venöz atık suyun 1/10 ila %1'i toplanabilir. BT'nin protein içeriği BCA testi ile ölçüldü ve mililitre başına ortalama 1.1 miligram idi.

Basit jel elektroforezi geniş bir protein spektrumu ortaya çıkardı. Normal örnekler, 2D DIGE kullanılarak 50 dakikalık iskemi reperfüzyonuna tabi tutulan kalplerden alınan örneklerle karşılaştırıldı. İskemik kalplerin BT'sinde birkaç proteinin yukarı regüle edildiği bulundu.

Yukarı regüle edilmiş proteinler üzerinde proteomik analiz yapıldı. Pürinler de büyük ilgi gördü. Pürinler, özellikle iskemik yaralanmadan sonra kardiyak immün yanıtı, vazomotor tonusu ve kardiyak fonksiyonu düzenleyen çok önemli sinyal molekülleridir.

BT'nin HPLC analizi, yaralı kalplerde birçok pürinin yüksek konsantrasyonlarını gösterdi. Bu prosedürü denerken, izole bir kalpte oluşan bir kardiyak trans-in-date'nin, in-vee-vuh koşullarının gerçek bileşimini tamamen taklit etmeyeceğini hatırlamak önemlidir.