Name: Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Öğrenin, segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak modifiye edilmiş farelerde kolorektal kanser modeli kurmayı. Yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile tümörleri izleyin ve kanser biyolojisini çalışın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Prof. Moritz Koch&#39;un anısına ithaf edilmiştir.

Burada sunulan hayvan deneyleri, kurumsal ve resmi bir Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından bağımsız olarak gözden geçirildi ve onaylandı ve FELASA (Laboratuar Hayvan Bilimi Dernekleri Federasyonu) kurallarına göre gerçekleştirildi. Anestezi ve analjezi ya da gerekirse erken ötanazi gibi acıyı en aza indirmek için olası tüm önlemler alındı. 1. Cerrahi Adeno-cre Enfeksiyonu ile Lokal Tümör İndüksiyonu <ol><li> Ameliyat için hayvanların hazırlanması NOT: Hemen hemen her şarta bağlı (&quot;floxed&quot;) mutasyon burada açıklanan yöntem vasıtasıyla indüklenebilir. Apc, Kras veya Tp53 gibi kolorektal kanserle ilgili genlerde mutasyonların kullanılması önerilir. Cre rekombinasyonunun etkinliği, eksize edilecek yapı büyüklüğüne bağlıdır. Büyük floxed sekanslar daha az verimli eksize edilir. Tüm allellerin rekombinasyonu tümörlerde PC ile teyit edilmelidirR. <ol><li> Kolorektal tümörlerin gelişimi için, CRC&#39;nin temel bir modeli (parantez içinde MGI veritabanı numarası) için aşağıdaki koşullu alellerin çaprazını kullanın: Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16 Kras tm4Tyj (MGI: 242.9948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 </li><li> Bir floresan muhabir alleli gerekliyse ( örn. Mikrometastazları saptamak için), aşağıdaki alleli kullanın: Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19 NOT: Yukarıdaki tüm suşlara NCI Mouse Repository veya Jackson Laboratuarı aracılığıyla erişilebilir. Geri kalan tüm dışkı maddeleri, adenovirüs enfeksiyonundan önce yıkanabildiğinden, oruç tutmaya gerek yoktur. Preoperatif açlık, perioperatif mortaliteye yol açar ve küçük kemirgenler için muazzam stres oluşturur. </li><li> Genel anestezi için sevofluran&#39;ı% 3 - 3.5 hacimde kullanın. T kaybıO ayak parmağı refleksi yeterli anestezi gösterir. </li><li> İlk insizyon öncesinde subkutan olarak 0.05 mg / kg buprenorfin enjekte edin. </li><li> Anestezi uygulanmış farenin gözlerini oftalmik merhem ile örtün, kornea kurutulmasını önleyin. </li><li> Fareyi küçük bir masanın üzerine yatar pozisyonda tutun. Fareyi tutmak için travmatik olmayan yapışkan bantlar kullanın. </li><li> Karnınızı elektrikli bir tıraş makinesiyle tıraş edin (alternatif olarak kaşeleştirici krem ​​kullanılabilir) ve alkollü çubuk veya iyot ile dezenfekte edin. Üretici tarafından önerilen temas süresini kullanın. </li><li> Cerrahi alanı steril perdeler ile örtün. NOT: Perioperatif antibiyotik kullanımı isteğe bağlıdır ve kurumsal yönergelere tabidir. </li><li> Tüm cerrahi prosedürler için steril tek kullanımlık veya sterilize edilmiş aletler kullanın. </li></ol></li><li> Orta hat laparotomisi ve kolonun maruziyeti <ol><li> Orta hat kesi yapmak için makas kullanın (alternatif olarak kaşaklar da kullanılabilir)(~ 15 mm) alt karın üzerindeki cilt. </li><li> Forseps ile karın duvar kaslarını alın ve dikkatli bir şekilde makasla incise edin, böylece karın boşluğunu açar. </li><li> Distal kolonu tanımlayın, sadece atravmatik forseps ile dokundurun. Kolonu, anüsün yaklaşık olarak 15 mm kadar ince bir kelepçesi ( örn. , Bir Micro Serrefine vasküler kelepçe) ile sıkıştırın. NOT: Her zaman kolonun hassasiyetine özel dikkat gösterin. Perforasyon kaçınılmaz olarak peritonit ve sepsise yol açar ve hayvanın ötanazisi gerektirir. </li></ol></li><li> Adeno-cre virüsü ile Segmental kolon enfeksiyonu <ol><li> Esnek bir Teflon tüpünü transanal olarak yerleştirin ve daha önce anal vertikalden 15 mm&#39;ye yerleştirilen kelepçe ile elde edilen lümen oklüzyonuna erişene kadar dikkatli bir şekilde ilerletin. Fazla güç kullanmayın, zira delik açılabilir. </li><li> Tüpü bir 30G kanül ile kanüle edin, standart bir 1 mL şırınga takın ve kolonu boşaltınN, kalan fekal maddeyi boşaltmak için normal tuzlu su ile yıkayın. Bu birkaç mL serum fizyolojik gerektirir. </li><li> Distal kolon boşaldığında tüpü çıkarın ve onu yeni bir Teflon tüpü ile değiştirin ve yine yukarıda tarif edildiği gibi kelepçeye doğrudan uzak tutun. </li><li> Kolon, proksimal kelepçeye ~ 3 mm uzakta ( yani , yerleştirilen tüpün üzerinde, anal vertikal ~ 12 mm) ikinci bir kelepçe ile kapatın, böylece enfekte edilecek 3 mm izole bir segment elde edilir. NOT: Fogarty koroner arter klipslerinin kauçuklaştırılmış olması nedeniyle klemp darlığı arasındaki intraluminal boruya rağmen kolonun sıkıca oklüzyona uğramasına yol açarak segmentin distal oklüzyonu için en uygun oldukları kanıtlanmıştır. </li><li> Sıkıca kelepçeli kolon segmentine 0.25% Trypsin-EDTA 50 - 80 mcL enjekte etmek için ikinci bir şırınga (30G kanül ile standart 1 mL) kullanın ve 10 dakika inkübe edin. Sıvının geri sızmasını önlemek için kanülü ve şırıngayı Teflon tüpüne yapışkan bırakın. <li> Önce distal kelepçeyi ve sonra tripsin tüpünü çıkarın. </li><li> Kalan tripsin uzaklaştırmak için distal kolonu ~ 500 μL normal salinle yıkayın. </li><li> Yeni bir Teflon tüpü takın, distal kelepçeyi yerine geri koyun ve kolon segmentini 50 - 80 μL adenoviral solüsyon (fosfat tamponlu salin içinde 10 11 plak oluşturucu ünite (PFU) / mL) ile şişirin ve 30 dakika inkübe edin Şekil 2A ). NOT: Adenoc ile temas, koşullu mutant farelerin tüm dokularında tümör gelişimine neden olabileceğinden, viral çözeltiyi dökmeyin. </li><li> Kelepçeleri ve boruyu çıkartın. </li></ol></li><li> Karın kapanması ve postoperatif iyileşme <ol><li> Karın duvarını 6-0 hızlı emilebilen su ile kapatın(Poldioksanon (PDS) gibi). </li><li> Cerrahi yara klipsleri ile cildi kapatın. </li><li> Fareyi, anesteziden tamamen kuruyana kadar 38 ° C&#39;ye ayarlanmış ısıtma yastığı üzerine yerleştirin. </li><li> Ameliyattan 12 saat sonra başka bir 0.05 mg / kg buprenorfin bolusunu uygulayın, bunu takiben gerekirse 12 saatte bir ilave buprenorfin bolusları uygulayın. </li><li> Fareler, tümör gelişimine bağlı olarak sıkıntı işaretleri için günde en az bir kere izleyin. </li></ol></li></ol> 2. Kolonoskopi NOT: Kullanılan koşullu mutasyonlara bağlı olarak, adenoviral enfeksiyon, 2-4 hafta içinde endoskopik olarak görülebilir tümörlere neden olur. Bu nedenle, adenoviral indüksiyondan 2 hafta sonra ilk postoperatif kolonoskopi uygulayın ve her 2 haftada bir tekrarlayın. Sıçan kolonoskopisi için piyasada bulunan bir sistem önerilir. 20 <ol><li> Kolonoskopi için hayvanların hazırlanması NOT: Açlık yok required. Kalan fekal madde genellikle distal kolondan iyi oluşur ve kolonoskopi sırasında tümörün ötesine itilebilir, böylece tekrarlanan orucun stresli işlemi gereksiz hale getirilir. <ol><li> Genel anestezi için sevofluran&#39;ı% 3 - 3.5 hacimde kullanın. Parmak çakma refleksi kaybı, yeterli anestezi anlamına gelir. </li><li> Korneanın kurutulmasını önlemek için anestezi uygulanmış farelerin gözlerini oftalmik merhem ile örtün. </li><li> Fareleri küçük bir masanın üzerinde yatay bir konumda tutun. </li></ol></li><li> kolonoskopi <ol><li> Kapağı (çap 1.9 mm, uzunluk 10 cm) anüs yoluyla bağırsak yoluna sokun ve kolonu genişletmek için görsel kontrol altında havayı dikkatle yerleştirin. Muayene için gereken miktardan fazla havayı koymayın. NOT: Hava insuflasyonu için, kolonoskopi sisteminin sis önleyici hava pompası kullanılabilir. Hiçbir sis önleyici hava pompası yoksa, çok düşük basınç ayarları olan diğer herhangi bir hava pompası kullanılabilir veya önZarif bir basınç düşürücü valf ile püskürtülmüş hava. Karbondioksit (CO 2 ) küçük kemirgenlerde asidoza kolayca yol açar ve bu nedenle kaçınılmalıdır. </li><li> Distal kolondaki bir mukozal lezyon tanımlanıncaya kadar alanı dikkatle ileri itin ( Şekil 1A - 1D ). </li><li> Daha sonraki değerlendirme için endoskopik görüntüleri saklayın. Daha önce intralüminal tümörler için bir endoskopik skorlama sistemi tanımlanmıştır. 20 </li><li> Kapsamı dikkatlice çıkarın ve fareyi, anesteziden tamamen kuruyana kadar 38 ° C&#39;ye ayarlanmış ısıtma yastığı üzerine yerleştirin. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li>
<li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15639298">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li>
<li>Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li>
<li>García, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li>
<li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li>
<li>Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/peer-reviewed/mouse-models-of-colorectal-cancerderived-circulating-tumor-cells-76740.html">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li>
<li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19263594">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+combined+with+TLR7%2F8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li>
<li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays%2C+with+a+note+on+carcinogen+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li>
<li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priceless+GEMMs%3A+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li>
<li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li>
<li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li>
<li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li>
<li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenomatous+polyposis+coli+%28APC%29+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).</li>
<li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li>
<li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li>
<li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li>
<li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency%2C+methylation+tolerance%2C+hyperrecombination%2C+and+predisposition+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li>
<li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+of+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Genellikle üretilmesi ve bakımı kolay olsa da, hücre çizgisi enjeksiyonuna dayanan klasik CRC fare modelleri yapaytır ve insan hastalığını tam olarak tekrar edememektedir. Sonuç olarak GEMM&#39;ler geliştirildi. İlk CRC GEMM, Apc geninde heterozigot boş bir mutasyona sahip Apc Min fare idi, bu nedenle insan kalıtsal hastalık ailevi adenomatöz polipozis (FAP) taklit eder. Bununla birlikte, Apc Min fare- lerinde her zaman kolond ile sınırlı olmayan çok sayıda bağırsak adenomu gelişir; Ayrıca, adenom ...

Kolorektal kanser (ÇHS), batı ülkelerinde kansere bağlı ölümlerin başlıca nedenlerinden biri olmayı sürdürüyor. Erken evre hastalığı olan hastaların prognozu iyi olmakla birlikte, birçok tedavi seçeneği olmasına rağmen prognozu sınırlı olan sonraki aşamalarda birçok tümör tanısı konur. 2 , 3 , 4 , 5 Mevcut CRC fare modellerinin çoğunluğu, hücre hatlarından veya hasta tümörlerinden türetilen tümör hücrelerinin immün yetersiz farelere implante edilmesine dayanır. 6 , 7 , 8 Bu, lokal yol açar ve enjeksiyon yerine ve enjeksiyon için kullanılan tümör hücrelerine bağlı olarak, bazen metastatik tümörler oluşturur. Ancak, ortaya çıkan xenograft modelleri majo&#39;yduSınırlamaları. Bağışıklık eksikliği olan farelerde kurulmalılar, böylece tümör ve bağışıklık sistemi arasındaki karmaşık etkileşim ortadan kaldırılmalıdır. Buna ek olarak, tümör stroması konukçu hücrelerden türetildiğinde, insan tümörü parankimi ile mürin stroması arasındaki etkileşim kusurludur ve bu nedenle hastalığı temsil etmez. Bu eksiklikler, enjeksiyon için fare hücre dizilerinin kullanımı ile engellenebilir. Bununla birlikte, sadece birkaç fare CRC hücre çizgisi mevcuttur ve en çok bulunan insan CRC hücre çizgilerine benzer şekilde, monoklonal ve oldukça anaplastiktir. Özetle, halihazırda mevcut CRC fare modellerinin çoğu yapaytır ve insan hastalığını tam olarak temsil etmez. CRC&#39;nin genetik olarak tasarlanmış fare modelleri (GEMM&#39;ler), bu iki dezavantajdan kaçınılabildikleri için kolondaki CRC&#39;nin anahtar mutasyonlarının indüksiyonu yoluyla oluşturulan gerçek fare tümörleri özelliği taşırlar. 12 , 13 ,14 Bu, kolorektal mukozadaki kreatin recombinaz tarafından koşullu (ökelenmiş) tohum çizgisi mutasyonlarının aktivasyonu ile başarılabilir. Diğer pek çok tümör varlıklarının GEMM&#39;lerinde dokuya özgü hızlandırıcılar tarafından yönlendirilen germline (indüklenebilir) cre ifadesi kullanılırken, germline cre, kolondaki çok sayıda adenomaya yol açtığı için benign tümör yükü tarafından ölüm neden olur Çok genç yaş. Bu nedenle, burada tarif edilen modelde, cre&#39;yi ifade eden bir adenoviral vektör kısa bir kolon segmentini enfekte etmek için kullanılır. Bu, araştırmacı tarafından tanımlanan bir zaman noktasında, mukozanın bu segmenti içindeki tümörojenezin uyarılmasına yol açarak sonuçta invaziv ve metastatik karsinomaya ilerleyen adenomlarla sonuçlanır. Tümörler orijinal fare tümörleri olup bozulmamış bir mikro ortamda büyür ve bu nedenle tümör-konakçı etkileşimi ve metastatik kaskad da dahil olmak üzere kolorektal onkogenezin tamamını taklit edebilmektedir. Bu modelBu nedenle kanser biyolojisi ve klinik öncesi terapötik denemeler için çekici bir platform. CRC&#39;nin genetik olarak tasarlanmış fare modellerinin büyük bir dezavantajı teknik karmaşıklığıdır. Floxed Apc alelleri taşıyan farelerde rektal adeno-cre enema kullanan lokal cre doğum daha önce tanımlanmıştır; Bununla birlikte, bağırsak tümörlerinin insidansı, çokluğu ve lokalitesi, bu teknikle oldukça değişken olabilir. 15 Bu nedenle, adeno-cre enfeksiyonunun indüklenecek segmentin ameliyat klemplemesi ile sınırlandırılması tekniği geliştirilmiştir. 13 Bu prosedürü, hayvan refahını arttırmak için, ayrıca mortaliteyi ve ortaya çıkan tümör sayısını azaltmak için değiştirdik. Bu protokol ile, küçük kemirgen cerrahide deneyime sahip tüm laboratuarlar, modeli çoğaltmalı ve kolonoskopi için kolaylıkla erişilebilen ve oldukça tekrarlanabilir olan tümörler üretmelidir. Koşullu m&#39;ye bağlı olarakTümörigenez için kullanılan utasyonlar, adenomun tam spektrumu, invaziv karsinom ve metastazlar gözlenebilir. Tümörler distal kolondaki konumundan dolayı bu modelde seri endoskopik değerlendirme kolayca mümkündür.

<table><tbody><tr><td><güçlü >Reaktifler / sarf malzemeleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu Tuzlu</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25, Fenol-Kırmızı)</td> <td>Life Technologies GmbH</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Normal tuzlu su% 0.9 (E154)</td> <td>Serumwerk Bernburg AG</td><td>10013</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>235144</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMV-Cre (adenovirüs, c = 2E+11 PFU/mL)</td><td>Gen Transfer Vektörü Core University of Iowa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL, 50 mL santrifüj tüpleri</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>188271/227270</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri 1.5 mL/ 2 mL</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>72,695,400</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı PS 100/15 mm (steril, Nuclon)</td><td>Fisher Scientific GmbH</td><td>10508921/ NUNC150350</td><td></td></tr><tr><td>1 mL Şırınga (ölü hacim olmadan) - Injekt-F SOLO</td><td>Braun/neoLab</td><td>194291661</td><td></td></tr><tr><td>30G enjeksiyon</td><td>iğnesi BECTON DICKINSON</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</td></tr><tr><td>Analjezi / anestezi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sevofluran (Sevoflurane AbbVie)</td><td></td><td>AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical</td><td></td></tr> <tr><td>oxygen</td><td>Air Liquide Medical</td><td></td> GmbH-Buprenorfin <td></td></tr><tr><td>(Temjezik)</td><td>Indivior Eu Ltd.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen - oftalmik merhem</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>10047757</td><td></td></tr><tr><td>Masa Üstü Araştırma Anestezi Makinesi x/O2 Flush w / Sevofluran Buharlaştırıcı</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PS/PK</td><td></td></tr> < <tr><td>güçlü > İsim</td> <td> Şirket</td><td>Katalog Numarası</td><td> Yorumlar</td></tr><tr><td><güçlü>Cerrahi Ekipman< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Selüloz swablar</td><td>Lohmann & Rauscher Deutschland</td><td>13356</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırınga EMG 1 mL (30G kanül ile)</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9161627S</td><td></td></tr><tr><td>İnce Delikli Boru (delik: 0,28 mm / çap: 0,61 mm)</td><td>Smiths Medical Deutschland</td><td>800/100/100</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>İris Makas - ToughCut</td><td>İnce Bilim Araçları</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar İğne Tutucu</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip</td><td>Kiti Güzel Bilim Araçları</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>PDS Z1012H 6/0 C1 (cerrahi sütür)</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH</td><td>Z1012H</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Mikro Serrefine Vasküler Kelepçe</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Fogarty Yaylı Klipsler</td><td>Edwards</td><td>CDSAFE 6</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak Plaka 062</td><td>Labotect</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>Isis - Saç tıraş makinesi</td><td>Aesculap - Braun</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Yorumlar</strong</td></tr><tr><td>>Kolonoskopi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğuk Işık Çeşmesi XENON 175 SCB</td><td>Karl Storz</td><td>20132101-1</td><td>Karl Storz Coloview Sistemi Mainz</td></tr><tr><td>Fiber Optik Işık Kablosu</td><td>Karl Storz</td><td>69495NL</td><td>Karl Storz Coloview Sistemi Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM Üç Çipli Kamera Kafası</td><td>Karl Storz</td><td>20221030</td><td>Karl Storz Coloview Sistemi Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM SLII Kamera Kontrol Ünitesi</td><td>Karl Storz</td><td>20223011-1</td><td>Karl Storz Coloview Sistemi Mainz</td></tr><tr><td>15" Düz Ekran Monitör EndoVue</td><td>Karl Storz</td><td>9415NN</td><td>Karl Storz Coloview Sistemi Mainz</td></tr><tr><td>HOPKINS Düz İleri Teleskop çapı 1.9 mm; uzunluk 10 cm otoklavlanabilir fiber optik ışık geçirgenliği dahil</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Koruma ve Muayene Kılıfı</td><td>Karl Storz</td><td>61029C</td><td></td></tr></tbody></table>

sporadik kolorektal kanserin genetik olarak geliştirilmiş fare modeli

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Kolay uygulanabilirlik ve maliyet etkinliğinin avantajlarına rağmen, tümör hücresi enjeksiyonuna dayanan kolorektal kanserli fare modelleri ciddi sınırlamalara sahiptir ve tümör biyolojisi ve tümör hücresi yayılımını doğru şekilde simüle etmez. Genetik olarak tasarlanmış fare modelleri bu sınırlamaların üstesinden gelmek için sunulmuştur; Bununla birlikte, bu tür modeller, özellikle tek bir tümörün arzulanan kolon gibi büyük organlarda teknik olarak talep edilmektedir. Sonuç olarak, oldukça uyumlu tümörler geliştiren ve tümör biyolojisi çalışmaları ve terapötik denemeler için kullanılabilen, bağışıklık kazandırıcı, genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli geliştirildi. Tümör gelişimi, bileşik koşullu mutant farelerde distal kolonun adeno-cre virüsü ile cerrahi, segmental enfeksiyonu ile başlatılır. Kolonoskopi ile tümörler kolayca tespit edilebilir ve izlenebilir. Burada segmental adeno-cre enfeksiyonunun cerrahi tekniğini tanımlıyoruzKolon, yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile tümörün gözetimi ve oluşan kolorektal tümörler.

Yeterli şekilde uygulandığında, hayvanlar&gt; n% 85&#39;inde tümörler gelişir. Burada sunulan cerrahi prosedürün mortalitesi &lt;% 5, kolonoskopinin mortalitesi neredeyse mevcut değildir. Farelerin çoğunda tek bir lezyon tespit edilmiştir; Yaklaşık% 30 2-3 küçük adenom tespit edilebilir, bunlar genellikle tümör indüksiyonundan 2-3 hafta sonra tek bir tümöre bağlanır. Ortaya çıkan tümörlerin fenotipi ve biyolojik davranışı, hay...

Segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak tasarlanmış kolorektal kanserli fare modeli kurulması ve yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile gözlemlenmesi için bir protokol sunulmuştur.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Bu prosedürün genel amacı, genetiği değiştirilmiş bir fare modelinde kolonun segmental adeno-cre enfeksiyonunu gerçekleştirmektir. Bu yöntem, kolorektal kanserin (CRC) biyolojisini ve tedavisini incelemek için mükemmel bir model sağladığından, CRC alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, küçük kemirgen cerrahisi deneyimi olan her laboratuvarın, yüksek düzeyde tekrarlanabilir ve kolayca erişilebilir kolon yerleşimli tümörler üretmek için bu modeli kullanabilmesidir.Anestezi uygulanmış bir fareyi sırtüstü pozisyona getirerek başlayın ve hayvanın gözlerine pomad sürün. Fareyi güvenli bir konumda bantlayın ve ardından ayak parmağı sıkıştırma testi ile sedasyon seviyesinin uygun olduğunu doğrulayın. Alt karın derisinde yaklaşık 15 mm'lik bir orta hat insizyonu yapın.Ardından, abdominal duvar kaslarını tutmak için pens kullanın ve abdominal kaviteyi açmak için kası makasla dikkatlice kesin. Distal kolon belirlendikten sonra, anüsten yaklaşık 15 milimetre proksimaldeki dokuyu hassas bir klemple dikkatlice sıkıştırın. Daha sonra, transanal olarak esnek bir Teflon tüp yerleştirin ve tüp lüminal oklüzyona ulaşana kadar dikkatlice ilerletin.Tübü

a-genetically-engineered-mouse-model-of-sporadic-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli

Biz hızla pro-inflamatuar ajan dekstran sülfat sodyum (DSS) üç kür takip ve sürekli insan kolit görülenler ile morfolojik ve moleküler benzerlikleri olan farelerde kolon tümörleri oluşturur genotoksik ajan azoxymethane (AOM) hangi yönetiminde bir protokol göstermek kanserle ilişkili.

Azoxymethane (AOM) ve Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) ile Modelleme Kolit-İlişkili Kanser

Bu videoda, obez olmayan diyabetik/şiddetli kombine immün yetmezlik (NOD/SCID) farelerinde kolorektal kanser hücrelerinin ilerlemesini incelemek için hastadan türetilmiş bir ortotopik ksenogreft kolorektal kanser fare modeli oluşturma protokolü açıklanmaktadır. Bu fare modeli, primer tümör büyümesi ve metastaz paterni anlamada yardımcı olur.

Kolorektal Kanserin PDOX Fare Modelinin Oluşturulması: Bir Murin Modelinde Kolorektal Kanserin İlerlemesinin İncelenmesi

Bu videoda, kolorektal kanser hastadan türetilmiş ksenogreftlerin veya PDX'lerin spontan metastaz fare modelini oluşturmak için kullanılan protokol açıklanmaktadır. Bu ksenogreft modelleri, insan karsinomlarının özelliklerini kısmen taklit eder ve invazyon ve metastaz dahil olmak üzere insan malignitelerinin kritik yönlerini anlar.

Spontan Metastaz Fare Modelleri: Ortototopik Olarak Enjekte Edilen Kolorektal Kanser Hücrelerinin Metastatik Potansiyelini İncelemek İçin Bir Platform

Bu videoda, segmental adeno-cre enfeksiyonu ile kolorektal fare modelinin oluşturulması anlatılmaktadır. Enfekte kolon segmenti, mukozanın bu segmentinde tümörigeneze yol açar ve sonuçta adenomların invaziv ve metastatik karsinoma ilerlemesine neden olur. Bu model, kanser biyolojisi çalışmaları ve klinik öncesi terapötik çalışmalar için çekici bir platformdur.

Segmental Adeno-Cre Enfeksiyonu: Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modelleri Kullanılarak İzole Kolorektal Kanser Oluşturma Tekniği

Farelerin çekumuna tümör hücreleri veya organoidler enjekte edilerek ortotopik kolorektal tümörlerin oluşumunu ve ardından bu modelden dolaşımdaki tümör hücrelerinin (CTC'lerin) izole edilmesini açıklıyoruz.

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Bu makalenin amacı, KitV558Δ/+ fare modelini ve fare örneklerinin başarılı diseksiyonu ve işlenmesi için teknikleri tanımlamaktır.

Gastrointestinal Stromal Tümörün Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Moleküler ve İmmünolojik Teknikler

Bu protokol, immün yetmezliği olan farelerin çekum duvarına hasta kaynaklı kanser hücrelerinin ortotopik implantasyonunu açıklar. Model, ilerlemiş kolorektal kanser metastatik hastalığını özetler ve klinik olarak anlamlı bir akciğer ve karaciğer metastazı senaryosunda yeni terapötik ilaçların değerlendirilmesine izin verir.

Farelerde Hasta Kaynaklı Kanser Hücrelerinin Ortotopik İmplantasyonu, İleri Kolorektal Kanseri Özetliyor

Bu çalışma, bir murin modelinde ışıldayan kolorektal kanser hücrelerinin in vivo deri altı indüksiyonuna ve ardından bir görüntüleme sistemi kullanılarak lüminesans ölçümüne odaklanmaktadır. Prosedür, gerçek zamanlı izleme ve terapötik değerlendirme için tekrarlanabilir bir tümör büyüme modeli oluşturmayı amaçlamaktadır.

Antitümör Etkinliğini Değerlendirmek için Atimik Çıplak Farelerde İnsan Kolorektal Kanser Hücrelerinin Deri Altı Enjeksiyonu

Tümör ilerlemesini ve metastazı değerlendirmek için yeşil floresan protein eksprese eden pankreas kanseri hücrelerini (PANC-1 GFP) Ortotopik olarak Balb-c Ola Hsd-Fox1nu farelerinin pankreasına implante etmek için bir prosedür burada sunulmaktadır.

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Öğrenin, segmental adeno-cre enfeksiyonu ile genetik olarak modifiye edilmiş farelerde kolorektal kanser modeli kurmayı. Yüksek çözünürlüklü kolonoskopi ile tümörleri izleyin ve kanser biyolojisini çalışın.

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Daha fazla video keşfet