Name: Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-30T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Keşfedin, mantel hücreli lenfoma için fare ksenogreft modeli kurma yöntemini. Hasta kaynaklı hücrelerle tedavi stratejilerini in vivo değerlendirin ve hematoonkolojide kişiselleştirilmiş tedavi yaklaşımları geliştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ligue Genevoise contre le kanser, tarafından desteklenen Fondation Dr Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 ve 2914-02-2012 ve İsviçre Ulusal Bilim Vakfı Hibe 31003A_156760 ve 310030-153456.

İnsan kanı örnekleri yerel etik ve insan deneme Komiteler Cenevre Üniversitesi Hastanesi tarafından onaylanmış yordamlara göre belirleme yapılacağı kullanılmıştır.
Hayvan yordamlar kurumsal Etik Komitesi hayvan bakımı Cenevre, İsviçre ve Kanton veteriner Office uygun olarak gerçekleştirilen (yetki numarası: GE/26/15).
1. birincil periferik kan mononükleer hücreler (PBMCs) yoğunluk Gradient ayırma tarafından hazırlanması
Not: 3-5 mL periferik kan MCL ile lösemik aşamasında sunulması hastalardan elde edildi. Tanı tanı ölçütlerini standart Akış Sitometresi (CD5 +, CD23−, CD200 +, monoklonal B hücre nüfus) göre kurulan ve daha sonra kromozom translocation t(11;14) varlığı ve siklin D1 overexpression tarafından onaylandı. Her durumda, için monoklonal B hücreleri oluşturmaktadır > toplam B hücre nüfusun % 90. Kalan hücreleri esas olarak monosit ve bazı T hücreleri vardı.
<ol><li>MCL kan örneği (1:1) 5 mL 5 mL Roswell Park Memorial Enstitüsü orta 1640 (RPMI) (şekil 1A) ile sulandırmak.</li>
	<li>Yoğunluk gradient medya (Malzemeler tablo) ayrıntılı karıştırma sağlamak için kullanmadan önce birkaç kez tersine çevirin.</li>
	<li>Bir pipet aspiratör kullanarak bir 15 mL santrifüj tüpüne 5 mL yoğunluk gradient medya ekleyin.</li>
	<li>Hafifçe sulandırılmış kan örneği (kan yoğunluk gradient medya oranı olmalıdır 2:1, örneğin, 10 mL 5 mL yoğunluk gradient medya için kan) bir aspiratör kullanarak 15 mL santrifüj tüpü yoğunluk gradient medyada üzerinde katman. Bakım değil karıştırmak için iki katman (1B rakam, C) alınmalıdır.</li>
	<li>400 x g oda sıcaklığında 40 min için de örnek devre dışı santrifüj frenler ile santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Steril bir Pasteur pipet kullanarak yavaşça Orta tabaka ((şekil 1 d, E) bir okla işaretli beyazımsı, ince halka) Aspire mononükleer hücreler içeren ve temiz bir tüpün içine aktarabilirsiniz.</li>
	<li>Çamaşır mononükleer hücre<ol>
<li>Transfer edilen hücre süspansiyon hacmi tahmin etmek ve eklemek steril 1 fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 sığır serum albumin (BSA) ile x 3 cilt.</li>
		<li>Süspansiyon tarafından pipetting yukarı ve aşağı birkaç kez karıştırın.</li>
		<li>400-500 x g 10-15 dakika oda sıcaklığında, süspansiyon santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Hücre Pelet elde edilir ve yıkama adım tekrar süpernatant atmak.</li>
		<li>Süpernatant kaldırmak ve istediğiniz ses, örneğin, PBS 1 veya 2 mL hücrelerde resuspend.</li>
		<li>Bir otomatik hücre sayaç ya da el ile bir hemasitometre (Neubauer odası) kullanarak hücreleri saydırmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. B hücreleri B hücre negatif seçim tarafından zenginlik
<ol><li>PBS hücrelerde son konsantrasyonu 50 x 106 hücre/ml seyreltik.</li>
	<li>Hücreleri yuvarlak alt polistren tüp 5 mL aktarın. Antikor kokteyl 100 µL B hücre zenginleştirme Seti'nden hücre süspansiyon için 2 mL ekleyin ve karışımı yavaşça (Şekil 2-1yukarı ve aşağı) pipetting tarafından.</li>
	<li>Hücreleri, oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
	<li>Kısaca girdap manyetik parçacıklar için 30 B hücre zenginleştirme Seti'nde sağlanan s (Şekil 2-2). Manyetik parçacıkların 150 µL 2 mL örnek ekleyin.</li>
	<li>Örnek oda sıcaklığında başka bir 5 min için kuluçkaya.</li>
	<li>Numune hacmi 2.5 mL 1 x PBS % 2 fetal buzağı serum (FCS) ve 1 mM ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) içeren getir. Tüp mıknatıs yerleştirin ve başka bir 3-5 dk (Şekil 2-3) için tüp kuluçkaya.</li>
	<li>Mıknatıs tüp yerinde ve bir sürekli hareket ile almak, böylece zenginleştirilmiş hücre süspansiyon (Şekil 2-4) taze bir tüpte toplanır tüp dikkatle boşaltmak. Bir otomatik hücre sayaç ya da el ile B hücrelerinin toplam verim elde etmek için bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Not: Genellikle, verim ~ 105 B hücre/mL normal B hücreleri ve 5-50 x 106 hücre/mL MCL için için olur.</li>
	<li>B hücre zenginleştirme saflığı teyit<ol>
<li>Al ~ 50.000 hücreleri ve anti-CD19/CD20 antikorları içeren hücreleri kuluçkaya (1:20 seyreltme) ve anti-CD45 antikor birleştiğinde için farklı fluorochromes (1:10 seyreltme) için 15-30 dakika oda sıcaklığında.</li>
		<li>1 mL 1 x PBS + % 1 BSA ile yıkayın, 400-500 x g 5 min için de hücreleri santrifüj kapasitesi ve PBS ~ 200 µL hücrelerde resuspend.</li>
		<li>Akış Sitometresi tarafından hücre örnekleri almak ve B hücreleri saflık için analiz. Saflık olduğunu çoğunlukla > 90 oranında bu yöntem (şekil 3).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Xenograft fare modeli geliştirilmesi
<ol><li>~ 40-60 x 1 x PBS (fare enjekte etmek için gerekli miktar) 150-200 µL 106 hücrelerde askıya alma.</li>
	<li>Hücre süspansiyon 150 µL intravenöz enjekte (IV) 6-7 hafta eski immünyetmezligi NOD scid gama (NSG) fareler (şekil 4A) Cinsiyeti ne olursa olsun her kuyruk ven içine.</li>
	<li>Fareler ~ 10 hafta boyunca insan Lenfoma geliştirmeye olanak sağlar. Not: Birincil insan Lenfoma hücreleri insan Lenfoma hücre hatları (~ 3 hafta) karşılaştırıldığında tümör geliştirmek çok daha uzun sürer.</li>
	<li>Hayvanlar kilo kaybı gibi ölümcül hastalık belirtileri göstermek başlattığınızda, fırfır yakalı saç, azalmış aktivite, hind felç, vb, kurban fareler tarafından CO2 boğulma kalp kalp delik tarafından kan elde etmek için takip.</li>
	<li>Toplamak farklı organları gibi kemik iliği, dalak ve karaciğer fareler anatomi ve tümör engraftment analiz için kurban anda kalpten kan çizerek periferik kan toplamak (şekil 4B -F).</li>
</ol>4. chimerism analiz farklı organlarda Engrafted tümör hücresi
<ol><li>Farklı organları topladıktan sonra bunları tek hücre süspansiyonlar 1 amonyum klorür potasyum arabellek x 200 µL kullanmak için kan ve kemik iliği, dalak için 500 µL ve karaciğer için 2 mL kırmızı kan hücresi (RBC) lizis takip oluşturmak için mekanik bozulma tarafından işlenmesi .</li>
	<li>Say ve insan B hücre belirli antikor, Yani, anti-CD19, anti CD20 ve anti-CD45 kullanarak hücreleri leke. Not: NSG fareler B hücreleri eksikliği ve bu nedenle analiz için hücreleri insan belirli B hücre işaretleri ile lekeli.</li>
	<li>B hücreleri (CD19, CD20 +, CD45 +) çoğunluğuna göre Akış Sitometresi tarafından her organ dan türetilmiş hücre analiz.</li>
	<li>Engrafted tümör hücreleri farklı organlarda enjekte MCL fareler adım 4.3 (şekil 4 g) belirtildiği gibi geçişli hücreleri temel alan türetilmiş ölçmek. Not: Malzeme tablo Ayrıntılar için bkz.</li>
</ol>

<ol><li>Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+chemokines%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human chemokines: an update.</a> Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).</li>
<li>Baggiolini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+and+leukocyte+traffic%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemokines and leukocyte traffic.</a> Nature. 392, 565-568 (1998).</li>
<li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJaneway%2C+CA+%22Immunobiology%3A+The+Immune+System+in+Health+and+Disease%22">Immunobiology: The Immune System in Health and Disease</a>. , 5th edition, (2001).</li>
<li>De Silva, N. S., Klein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+B+cells+in+germinal+centres%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of B cells in germinal centres.</a> Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).</li>
<li>Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+and+peripheral+blood+involvement+in+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Haematol%22%5BJournal%5D)">Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma.</a> Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).</li>
<li>Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mantle+cell+lymphoma%3A+diagnostic+criteria%2C+clinical+aspects+and+therapeutic+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems.</a> Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).</li>
<li>Herrmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+overall+survival+in+advanced+stage+mantle+cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma.</a> J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).</li>
<li>Martin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensive+treatment+strategies+may+not+provide+superior+outcomes+in+mantle+cell+lymphoma%3A+overall+survival+exceeding+7+years+with+standard+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies.</a> Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).</li>
<li>Iyengar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+human+primary+mantle+cell+lymphoma+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice.</a> Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).</li>
<li>Klco, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+heterogeneity+of+genetically+defined+subclones+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia.</a> Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).</li>
<li>Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tumor+xenografts+as+predictive+preclinical+models+for+anticancer+drug+activity+in+humans%3A+better+than+commonly+perceived-but+they+can+be+improved%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved.</a> Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).</li>
<li>Johnson, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+drug+activity+in+NCI+preclinical+in+vitro+and+in+vivo+models+and+early+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials.</a> Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).</li>
<li>Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+drug+response+in+patients+and+in+the+clonogenic+assay+with+solid+human+tumour+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts.</a> Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).</li>
<li>Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27256571">Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma.</a> J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Klinik çalışmalar gelişmiş bir gelişme aşamasında olan, ancak ilaç keşfi için kullanılan ilaçlar için mümkündür. Hayvan insan hücre xenotransplantation alıcılarına erken sahne ilaçları test amacıyla geliştirmek için çabalarını uzun takip edilmiştir. Burada insan greft reddi önler ve MCL gibi insan hastalıkları için bir model oluşturabilir bir hayvan modeli mevcut. Bu şu anda insan tümör engraftment ve tümör büyüme mekanizmaları incelemek için bir sanat devlet xenograft modelidir. Burada NSG fareler, en bağışıklık eksik f...

Lenfositler doğası gereği immün gözetim içinde önemli bir rol oynamaktadır ve lenfosit kaçakçılığı antijen belirli bağışıklık1,2montaj kritik bir adımdır. Bu işlem geçiş saf T lenfositlerin kan akışına timus ve soydaş antijenleri buluştuğu orada ikincil lenfoid organlara, lenf düğümleri, Peyer's yamalar veya dalak, dahil olmak üzere içerir. B lenfositler kemik iliğinde ayırt etmek ve saf hücreler olarak ikincil lenfoid organlara3köklerinin geçirilir. Bazı bu B hücrelerinin antijen ile onların reseptör bağlamak ve belirli T hücreleri tarafından aktif hale gelir. Yayılması ve bu B hücrelerinin farklılaşma folikül manto bölgeye sigara-harekete geçirmek, naif B hücreleri iter. Aktif hücre sonra vücut devriye veya kemik iliği4' e göç plazma hücreleri salgılayan immünglobulin içine Olgun Hücreler içine bellek B ayırt edebilir.
Naif B lenfositler manto bölgedeki tümör dönüştürdüğünüzde MCL oluşur. Bu Lenfoma hücreleri lenfoid organlar microenvironment içinde bulunan ve belirli T lenfosit kontrol bağımsız olarak çoğalırlar. Ancak, yoğunluğu belirli bir aşamada onlar bu niş kaçış ve diğer organlarda nişler için arama kan recirculate. Adezyon molekülleri karmaşıklığı ve karışıklık kemokinler ve onların reseptörleri, göz önüne alındığında bu hücresel kaçakçılığı vivo içinde mekanizmasının kötü anlaşılmaktadır ve bu nedenle terapi engellemektedir. Roman yöntemleri etkili Lenfoma B hücreleri yeni microenvironments ulaşmasını önlemek için bu geçiş süreci engellemek için gereklidir.
MCL B hücre maligniteler tedavisi en zor biridir. MCL neoplastik bir fenotip biyolojik özellikleri benzersiz edinimi ile karakterize bir multistep çağlayan sonucu gelişmedir. Tanı zaman çoğu hasta (% 70) Dissemine hastalık ile çoğu durumda dalak, kemik iliği ve/veya gastrointestinal sistem5,6Ekstranodal tutulum sergilenmesi ile zaten var. Tedavi edilen hastalarda, konvansiyonel kemoterapi yüksek remisyon oranları kısa vadeli7,8indükler olsa bile bir kaç yıl içinde dayanıklı tümör tarafından nüks yaygındır. MCL yayılması ve onun temel Biyoloji anlamak yardımcı olabilir yeni bir hastalık modeli mevcut burada: hastaların birincil tümör hücreleri kökenli insan MCL xenograft fare modeli kurduk. Biz bu model MCL yayılması karşı tedavi stratejileri geliştirmek ve muhtemelen en iyi tanı ve Relaps hastaların tedavisi için yeni klinik Perspektifler sağlar yardımcı olacağını umuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Mononükleer hücrelerin ayrılması için</td> <td>Ficoll-paque media</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02</td></tr><tr><td>RPMI Medium 1640</td><td>Gibco-Life teknolojileri</td><td>61870-010</td><td>kan örneğinin seyreltilmesi için</td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>hücrelerin yıkanması</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini (BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A8412</td><td>İzolasyon sırasında hücrelerin yıkanmasında kullanılan% 1 BSA ile PBS'nin hazırlanması için</td></tr><tr><td>CD19-APC700</td><td>Beckman Coulter</td><td>B49212</td><td>insan pan-B hücre işaretleyicisi</td></tr><tr><td>CD20-APC</td><td>Beckman Coulter</td><td>A21693</td><td>insan pan-B hücre işaretleyicisi</td></tr><tr><td>CD20-ECD</td><td>Beckman Coulter</td><td>IM3607</td><td>insan pan-B hücre işaretleyicisi</td></tr><tr><td>CD5-PC 5.5</td><td>Beckman Coulter</td><td>PN A70203</td><td>insan T hücresi işaretleyicisi</td></tr><tr><td>CD23-PE</td><td>Pharmingen</td><td>555711</td><td>MCL'de tipik olarak bulunmayan hücre yüzey proteini</td></tr><tr><td>CD45 KO Beckman</td><td>Coulter</td><td>B36294</td><td>Pan-lökosit belirteci</td></tr><tr><td>CD200-PE</td><td>Pharmingen</td><td>552475</td> MCL NOD scid gama (NSG) <td>farelerinde tipik olarak bulunmayan hücre yüzey proteini</td></tr><tr><td></td><td>Charles River Laboratories</td><td>5557</td>, <td>bu çalışmada</td></tr> <tr><td>MCL ksenogreftleri geliştirmek için kullanılmıştırKolay sep İnsan B hücresi zenginleştirme kiti</td> Farelere enjekte edilmek <td>üzere saf hücreler elde etmek için B hücrelerini zenginleştirmek için kullanılan</td>kök <td>hücre teknolojileri</td><td>19054</td></tr><tr><td>FACS:</td><td>Beckman Coulter</td><td>Navios</td>, <td>MCL örneğini karakterize etmek ve MCL aşılaması için organları incelemek için kullanılır</td></tr>: <tr><td>1X amonyum klorür, potasyum tamponu</td><td></td><td></td>, <td>kırmızı kan lizis tamponu (NH4Cl, 8,024 mg/l; KHCO3 1.001 mg / l; EDTA. Na2 ve orta nokta; 2H2O 3.722 mg/l )</td></tr></tbody></table>

tümör engraftment insan mantle hücreli lenfoma, xenograft fare modeli

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

B lenfositler anahtar oyuncular bağışıklık hücre dolaşım ve onlar çoğunlukla ev sahipliği ve lenfoid organlarda bulunan. Normal B hücreleri yalnızca T lenfositler tarafından uyardığında çoğalırlar, oncogenic B hücreleri hayatta kalmak ve özerk olarak tanımlanmamış organ niş genişletin. Mantle hücreli Lenfoma (MCL) bir tür B hücresi, hastalarin medyan sağkalım oranı 4-5 yıl nerede hastalıktır. Bu etkili mekanizmalar tarafından posta ve bu hücrelerin engraftment hayatta kalma artırmak için engellenen ihtiyacı ve uzun ömürlü hastalar için çağırır. Bu nedenle, izleme mekanizması içinde vivo engelleyerek MCL tedavi etkinliğinin çalışmaya xenograft fare modeli geliştirmek için çaba son derece önemlidir. Erken sahne uyuşturucu test etmek için insan hücre xenotransplantation hayvan alıcılarına gelişimi uzun takip, ilgili preklinik fare modelleri ekran yeni terapötik ajanlar için çok önemli olduğu gibi. Bu hayvan modeli insan greft reddi önlemek ve insan hastalıkları için bir model kurmak için geliştirilen ve hastalık ilerleme farklı Lenfoma türlerinden çalışmaya ve preklinik için aday ilaçların test gerçekleştirmek için son derece yararlı bir araç olabilir hematolojik maligniteler, MCL gibi. Çalışma ve MCL için yeni tedavi yaklaşımları geliştirmek için mükemmel bir kaynak olarak görev yapacak bir xenograft fare modeli kurduk.

El yazması bir xenograft fare modeli engraftment MCL hücre için başarılı gelişimi için en iyi duruma getirilmiş bir protokolünü açıklar. Hazırlık nüfusun bir saf hücre (Bu durumda MCL hücreleri), başarılı MCL xenografts geliştirmek için çok önemlidir. Şekil 1 MCL hastanın kan mononükleer hücre izolasyon için partiye hazırlık adımları yoğunluk gradient ayırma tarafından temsil eder. Mononükleer hücreler daha da saf hücre nüfus fareler içine xenograft enjeksiyo...

Mantle hücreli Lenfoma (MCL) bir B hücre bozukluğu tedavi etmek zordur ve eşit bir xenograft fare modeli eğitim ve tedavi geliştirmek için birincil MCL kurmak zordur. Burada, onun temel Biyoloji anlamak farelerde MCL xenografts başarılı kurulması açıklayın.

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Bu yöntemin genel amacı, bu hastalık için tedavi stratejileri geliştirmek amacıyla bir mantle hücreli lenfoma zenograft fare modeli oluşturmaktır. Bu yöntem, farklı tedavi stratejilerinin terapötik sonuçları gibi hemato-onkoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, ilaçların insan lenfoma hücreleri üzerindeki etkisini in vivo olarak incelememize olanak tanımasıdır.Bu tekniğin etkileri, bu modelin kullanılmasıyla hasta kaynaklı hücreler üzerinde terapi etkisini incelemenin sadece mümkün değil, aynı zamanda kolay olması nedeniyle mantle hücreli lenfoma tedavisine kadar uzanmaktadır. Bu yöntem, mantle hücreli lenfomanın terapötik yönleri hakkında içgörü sağlayabilmenin yanı sıra, farklı lenfoma türlerini incelemek için de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, hasta kaynaklı zenograftların elde edilmesinin zor olması nedeniyle güçlük çekebilirler.Bu yöntem fikri ilk ortaya çıktığında, B hücresi migrasyonunu in vivo olarak ve bazı tedavilerin bu süreç üzerindeki etkilerini incelemek istiyorduk. 12 ml mantel hücreli lenfoma kan örneğini, eşit hacimdeki RPMI 1640 Medium ile seyreltin. Ardından, yoğunluk gradyanı medyumunu kullanmadan önce birkaç kez ters çevirerek karıştırın.50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne 15 mililitre yoğunluk gradyanı medyumu aspire edin. Bir aspiratör yardımıyla, iki katmanı birbirine karıştırmadan, seyreltilmiş kan örneğini yoğunluk gradyanı medyumunun üzerine dikkatli ve nazik bir şekilde ekleyin. Ardından, frenleri kapatın ve kan örneğini oda sıcaklığında 40 dakika boyunca 400g hızında santrifüjleyin.Orta tabakadaki mononükleer kan hücrelerini aspire etmek için steril bir pasteur pipeti kullanın ve temiz bir tüpe aktarın. Mononükleer hücreleri yıkamak için, tahmini hücre süspansiyonu hacminin üç katı kadar %1 fetal sığır serumu içeren steril tek güçte Fosfat Tamponlu Salin ekleyin. Uygun karışım sağlamak için hücre süspansiyonunu birkaç kez pipetleyin.Ardından, örneği oda sıcaklığında 10-15 dakika boyunca 400-500g'de santrifüjleyin. Santrifüj işleminin ardından süpernatantı atın ve hücre peletini %1 sığır serum albümini içeren tek katı konsantrasyonda Fosfat Tamponlu Salin ile yıkayın. Örneği santrifüjleyin.Ardından, süpernatanı uzaklaştırın ve hücreleri bir veya iki mililitre Fosfat Tamponlu Salin içinde yeniden süspande edin. Sonra, otomatik bir hücre sayıcı kullanarak hücre sayısını belirleyin. Hücreleri Fosfat Tamponlu Salin ile seyreltin, ardından hücreleri beş mililitrelik bir polistiren tüpe pipetleyin ve hücre süspansiyonuna 100 µL antikor kokteyli ekleyin.Uygun şekilde karıştırmak için hücre süspansiyonunu birkaç kez nazikçe pipetleyin. Ardından hücreleri laminar kabin içerisinde oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Bu sırada, B hücresi zenginleştirme kitindeki manyetik partikülleri 30 saniye boyunca vorteksleyin.Ardından, iki mililitre hücre süspansiyonuna 150 µL manyetik partikül ekleyin. Hücre-manyetik partikül karışımını oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin. Örnek hacmini 2,5 ml'ye ayarlayın, ardından tüpü mıknatısa yerleştirin ve üç ila beş dakika daha inkübe edin.İnkübasyon sonrası, tek bir sürekli hareketle, mıknatısa tutunmuş hücre süspansiyonunu tüpten yeni bir tüpe boşaltın. Ardından, otomatik bir hücre sayıcı kullanarak süspansiyondaki toplam B hücresi verimini sayın. Zenginleştirilmiş B hücrelerinin saflığını doğrulamak için, yaklaşık 50.000 hücreyi farklı florokromlarla eşleşmiş anti-CD19, CD20 ve anti-CD45 antikorları ile oda sıcaklığında 15-30 dakika boyunca inkübe edin.Ardından, hücreleri bir mililitre tek katlı Fosfat Tamponlu Salin ve %1 sığır serum albümini ile yıkayın. Hücreleri oda sıcaklığında beş dakika boyunca 400-500g hızda santrifüjleyin. Santrifüj işleminden sonra, süpernatantı atın ve peleti 200 mikrolitre Fosfat Tamponlu Salin içinde yeniden süspande edin.B hücrelerinin saflığını, bu yöntemle genellikle %90'ın üzerinde olan akış sitometrisi kullanarak analiz edin. Hücreleri 150 µL tek katımlı Fosfat Tamponlu Salin içinde süspande edin. Ardından, cinsiyetten bağımsız olarak altı ila yedi haftalık farelerin kuyruk venine hücre süspansiyonunu intravenr olarak enjekte edin.Başarılı bir engraftman sağlamak için, hastadan alınan kandan izole edilen lenfoma hücrelerinin farenin kuyruk venine intravenöz olarak enjekte edilmesi kritik önem taşır. Fareler bir karbondioksit odasında sakrifiye edildikten sonra farklı organları toplayın. Ardından, tek hücre süspansiyonu oluşturmak için organları bir şırınga pistonunun arkasıyla 70 micron filtre üzerinde mekanik parçalamaya tabi tutun.Kan hariç tüm örnekleri 400 ve 500g arasında beş dakika boyunca santrifüj edin ve süpernatantı atın. Kan, kemik iliği, dalak ve karaciğer hücrelerini liz etmek için tek katlı Amonyum-Klorür-Potasyum tamponu kullanın. Flow sitometreye geçmeden önce, farelerden izole edilen organlardan elde edilen hücrelerin tek hücre süspansiyonu elde etmek amacıyla filtrelenmesi, cihazın tıkanmasını önlemek için önemlidir.Hücreleri boyamak için anti-CD19, CD20 ve CD45 gibi B hücrelerine özgü antikorlar kullanın. Akış sitometrisi kullanımı, her bir organdan türetilen B hücrelerinin CD19 pozitif, CD20 pozitif ve CD45 pozitif antikorlara sahip olduğunu göstermiştir. Kapılan (gated) hücrelere dayanarak, mantle hücreli lenfoma enjekte edilen farelerden elde edilen organa özgü ve nakledilmiş tümör hücrelerini nicelendirin.Bu çalışmada, manto hücreli lenfomada zenginleştirme öncesi ve sonrası B hücrelerinin saflığını incelemek için akış sitometrisi gerçekleştirilmiştir. Mononükleer manto hücreli lenfoma karakterize etmek için CD45, CD19, CD5, CD200, CD20 Kappa ve Lambda gibi B hücresine özgü belirteçler kullanılmıştır. Akış sitometrik analiz; CD45, CD19, CD20 ve CD5 için pozitif boyanma gösteren hücreleri ortaya koymaktadır.Ve bunlar karakterizasyon için seçilir. CD23 ve CD200 için boyanmayan hücreler de seçilir. Organa özgü engraftman derecesi, organların akış sitometrisi ile daha ileriye götürülüp ardından B hücreleri açısından analiz edilmesiyle incelenir.Burada, dalak, kemik iliği ve karaciğer gibi organlar kullanılarak iki hastadan elde edilen engraftman paterninin karşılaştırmalı bir gösterimi sunulmuştur. Uzmanlaşıldığında, bu teknik üç hafta içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedür uygulanırken, ksenogreftler için kullanılan PBK'ların zenginleştirilmesinin ve farelerin tüylerde kabarma, kambur duruş, arka bacak felci ve kilo kaybı gibi hayati hastalık belirtileri açısından düzenli olarak kontrol edilmesinin önemli olduğunu unutmamak gerekir.Bu prosedürün ardından, ksenogreftler diğer lenfoma türlerine de uygulanabilir; örneğin, kişiselleştirilmiş tıp uygulamaları gerçekleştirilebilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, hemato-onkoloji alanındaki diğer araştırmacıların, immunodeficient nod scid farelerde hastalardan türetilmiş manto hücreli lenfomanın nasıl kurulacağına dair yöntemleri keşfetmesine yol açabilir. Bu videoyu izledikten sonra, tedavi stratejilerini anlamak amacıyla, hastadan türetilmiş PBK'ların nasıl saflaştırılacağı ve bunların immunodeficient farelerde ksenogreft olarak nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız.Lütfen, primer insan kan örnekleriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürleri gerçekleştirirken eldiven giymek gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

tumor-engraftment-xenograft-mouse-model-human-mantle-cell

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Lusiferaz etiketli insan malign periferik sinir kılıfı tümör hücreleri, bağışık yetmezliği olan farelere siyatik sinir grefti için güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Biyoparlaklık görüntüleme, çalışma grupları içine hayvanların rastgele ayrımı için tümör greft ve kriterlere uygun kurulmasını göstermek için kullanımı da tartışılmıştır.

İnsan Takip edilen-Lusiferaz Malign Periferik Sinir Kılıf Tümör Hücreleri Ortotopik Xenografting In vivo</emAday Terapötik Ajanlar> Test

Bu videoda, insanlaştırılmış bir ksenogreft fare modeli oluşturmak için bir test gösterilmektedir. Bağışıklığı baskılanmış bir fareye, bağışıklık hücresinin tükenmesine neden olmak için siklofosfamid enjekte edilir. Bir hidrojel içinde insan periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler) ile karıştırılan hasta kaynaklı tümör hücreleri, deri altından fareye enjekte edilir ve sızan T hücreleri ile bir tümör oluşturur.

İnsan PBMC ile Aşılanmış İnsanlaştırılmış Ksenogreft Fare Modeli Oluşturma Tekniği

Immünyetmezligi farelerde insan tümör ksenogratflardır kanser biyolojisi okumak için değerli araçlardır. Insan hepatoselüler karsinoma hücreleri ya da tümör fragmanlarından deri altı ve intrahepatik ksenograftları oluşturmak için özel protokolleri açıklanmıştır. Alıcı farede hepatektomiden tarafından uyarılan karaciğer rejenerasyon intrahepatik naklini kolaylaştırmak için bir strateji olarak sunulmuştur.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Burada, bir xenogeneic Graft-versus-Host hastalığı (xenoGVHD) modelinde hastalığı teşvik etmek ve puan vermek için bir protokol sunuyoruz. xenoGVHD, insan T hücrelerinin bağışıklık bastırılmasını incelemek için bir in vivo modeli sağlar. Ayrıca, immunobastırma ölçmek için bir araç olarak dijital PCR ile dokularda insan T hücrelerinin nasıl algılanmasını açıklar.

Bir Xenogeneic Murine modelinde Graft-versus-Host hastalığının indüksiyon ve skorlama ve dijital PCR kullanarak fare dokularında ınsan T hücrelerinin ölçümü

Biz bir insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) - çeviriimmün-onkoloji araştırma için insanlaşmış ksenogreft fare modeli dayalı açıklar. Bu protokol, I-O terapi değerlendirmesi için benzer modellerin oluşturulması ve karakterizasyonu için genel bir kılavuz görevi görebılabilir.

Çevirisel İmmüno-onkoloji (I-O) Araştırma için İnsani Periferik Kan Mononükleer Hücre (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Modeli

Geçerli protokol, hasta tarafından türetilen xenograft (PDX) modelleri ve cerrahi mide kanseri örneklerinden primer kanser hücresi hatları oluşturmak için yöntemleri açıklar. Yöntemleri ilaç geliştirme ve kanser Biyoloji araştırma için yararlı bir araç sağlar.

Mide kanseri hasta-türetilen xenograft modelleri ve primer hücre hatları kurulması

Ortotopik insan karaciğeri metastatik uveal melanom ksenogreft fare modelleri, hasta kaynaklı tümör öbek ve kültürlü insan uveal melanom hücre hatları ile iğne enjeksiyon teknikleri ile cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri kullanılarak oluşturulmuştur.

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

Burada, bir fare tümörü modelinde tümöre özgü ve periferi kaynaklı tümör kaynaklı lenfositlerin karakterizasyonu için bir tümör transplantasyon protokolü sunulmaktadır. Alıcı kaynaklı immün hücrelerin akışının akım sitometrisi ile spesifik olarak izlenmesi, antitümör immün yanıtlar sırasında bu hücrelerin fenotipik ve fonksiyonel değişikliklerinin dinamiklerini ortaya koymaktadır.

Farelerde Tümör Sızan CD8 + T Hücrelerinin Dinamiğini Değerlendirmek için Tümör Transplantasyonu

Mevcut protokol, insan derisinin obez olmayan diyabetik (NOD)-scid interlökin-2 gama zinciri reseptörü (NSG) farelere nasıl aşılanacağını açıklamaktadır. Nakil için insan derisinin hazırlanması, nakil için farelerin hazırlanması, bölünmüş kalınlıkta insan derisinin nakli ve nakil sonrası iyileşme prosedürünün ayrıntılı bir açıklaması raporda yer almaktadır.

İnsan Bağışıklık Tepkilerini In Vivo'da Manipüle Etmek için Ksenograft Cilt Modeli

Keşfedin, mantel hücreli lenfoma için fare ksenogreft modeli kurma yöntemini. Hasta kaynaklı hücrelerle tedavi stratejilerini in vivo değerlendirin ve hematoonkolojide kişiselleştirilmiş tedavi yaklaşımları geliştirin.

Tümör Engraftment insan Mantle hücreli lenfoma, Xenograft fare modeli

Daha fazla video keşfet