Name: Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Öğrenin, akciğer metastaz analizi (PuMA) ile osteosarkom hücrelerinin akciğer dokusundaki büyümesini doğrudan görselleştirin. Bu yöntem, metastatik davranışları üç boyutlu mikroortamda incelemek için kritik bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

PuMA teknik eğitimde sağlanan Dr Arnulfo Mendoza teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, bu çalışma süresince kendi mikroskoplar kullanımını sağlamak için Drs. Chand Khanna, Susan Garfield (ncı/NIH) ve Sam Aparicio (BC Kanser Ajansı) kabul etmek istiyorum. Bu araştırma (kısmen) ulusal sağlık enstitüleri, kanser araştırmaları, Pediatrik Onkoloji şube Merkezi Intramural araştırma programı tarafından desteklenmiştir. M.M.L. ulusal kurumları, sağlık Intramural ziyaret adam Program tarafından (Ödülü 15335) destek verdi ve şu anda bir Joan Parker bursu metastaz araştırma tarafından desteklenmektedir. P.H.S. British Columbia kanser Vakfı tarafından desteklenmektedir.

Hangi görüntüleme veri elde tüm hayvan iletişim kurallarını hayvan bakım ve kullanım Komitesi Ulusal Kanser Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri onayı ile gerçekleştirilmiştir. Tartışılan ve video makalede tasvir tüm hayvan iletişim kuralları British Columbia Üniversitesi hayvan bakımı Komitesi tarafından onaylanmış olması.
1. hazırlanması tümör hücreleri PuMA modeli için malzeme ve enjeksiyon için
Not: Çözümler ve hücre miktarı 1 fare için yeterli olacaktır. Daha fazla fare çalışmada kullandıysanız gerektiği şekilde büyütmek. Ortam için yemek tarifleri, Tablo 1 ve Tablo 2bakın.
<ol><li>Bir Media 5 mL 15 mL konik tüp 37 oC su banyosu içinde önceden ısıtmak.</li>
	<li>Laboratuvar mikrodalga kullanarak % 1.2 düşük erime özel çözümde (steril su) eritin.</li>
	<li>15 mL konik tüpe 5 mL de erimiş özel aktarım ve bir 37 oC su banyosunda sıcak tutun. 37 oC ve akciğer üfleme adım önce sıvı, erimiş özel olduğundan emin olun.</li>
	<li>Hücre kültürü grade 1 X kalem/strep nedense odamızda buz kovası ile takıma PBS önceden sakin 30 mL.</li>
	<li>6-şey plaka bir kuyuda bir jelatin sünger B-medya 1,5 ml önceden ıslatın. Sünger akciğer dilimleri için destek çapa olacaktır.</li>
	<li>İşletim sistemi hücreleri yaklaşık % 70-90 emin olmak Konfluent yordamı gününde. Aşırı birleşmesi veya ortamdır hücreleri genellikle vurguladı ve canlılık bu noktada azalmış beri sarı turuncu olan hücreler kullanmayın. Osteosarkom hücre hatlarında, MNNG ve HOS, 5 x 105 ' te 100 μL hacmi 1 fare kuyruğu damar içine enjekte etmek için kullanılır. Daha fazla fare çalışma için kullanılmışsa buna göre lüks.</li>
	<li>% 0.25 tripsin-EDTA (3 mL T75 şişesi veya 10 cm kültür tabak 2 mL) kullanarak tümör hücreleri hasat. Ne zaman hücre tabağını kaldırın başlıyor, tripsin-EDTA ile komple bir medya etkisiz hale getirin. Hücreleri aşağı spin ve bir kez hücre kültürü sınıf PBS ile durulayın. Pelet PBS 5 mL resuspend.</li>
	<li>Bir hücre sayısı standart yöntemlerle gerçekleştirmek. Daha fazla hücre süspansiyon hücre süspansiyon kaybı sık sık iğne çizmek-up sırasında oluşur ve enjeksiyon girişimleri başarısız oldu çünkü aslında gereken şey daha yapmak en iyisidir.</li>
	<li>Trypan-mavi dışlama tahlil hücrelerin canlılık değerlendirmek için hücre süspansiyon bir örnek üzerinde gerçekleştirin. Yalnızca hücre % 90 canlılığı göster, devam veya daha yüksek.</li>
	<li>100 μL hacmi 5 x 105 hücrelere enjekte. 2 X bu miktarın aşırı hazırlamak için 1 x 106 hücre aşağı döndü ve 0.2 mL HBSS resuspended.</li>
	<li>Hücre süspansiyon enjeksiyon için fareler hazırlarken bir buz kovası yerleştirin.</li>
</ol>2. kuyruk ven enjeksiyon ve akciğer üfleme
Not: Çözümler ve bu bölümdeki hücrelerin miktarı 1 fare için yeterli olacaktır. Daha fazla fare çalışmada kullandıysanız gerektiği şekilde büyütmek. Ekipman, malzeme ve aşağıdaki adımlarda kullanılan cerrahi aletler listesi için Tablo 3 ve Tablo 4bakın.
<ol><li>Dişi fare (yaş 6-8 hafta) 5 min için Isıtma lambası altında damar kuyruğunu gözle görülür daha belirgin hale getirmek için sıcak. Fare K7M2 veya K12 hücreleri için Balb/c fare kullanma; insan MG63.3, MG63, MNNG ve HOS hücreleri için ağır kombine immün yetmezlik fare kullanın.</li>
	<li>Hücre süspansiyon tüpü hafifçe sallayarak düzgün olduğundan emin olun. Dikkatle iğne olmadan 1 mL şırınga içine hücre süspansiyon kadar çizin. Kap bir 27 şırınga iğne ölçmek. İğne eğim iğne üzerindeki birim işaretleri olarak aynı tarafta olduğundan emin olun.</li>
	<li>Restrainer fareyi getirin ve kuyruk bir alkol bezle temizleyin.</li>
	<li>Bir kuyruk ven enjeksiyon gerçekleştirmek ve hücre süspansiyon 100 μL enjekte için devam edin. 5 dk sonra enjeksiyon, fareyi bir CO2 odaya yerleştirin ve ötenazi standart işletim prosedürü (anahat kurumsal hayvan bakımı Komitesi tarafından) başlayıp. Yordamı nefes borusu zarar verir bu yana servikal çıkığı ötenazi aracı olarak kullanılmamalıdır.</li>
	<li>Bir kez fare ötenazi, laminar akış hood hazırlanması için özel/bir-media çözüm ile fare akciğerin üfleme başlar. Laminar akış başlık içinde steril pad ile bir çalışma alanı oluşturun. Bu yastık sterilize cihazlar, IV kateter, IV uzantısı küme ve yerçekimi perfüzyon aygıtlar ( tamamlayıcı şekil 1bakınız) yerleştirir.</li>
	<li>Fareyi sırt recumbancy getirin. Steril küçük makas ile göğüs boşluğu ortaya çıkarmak için sternum dikkatle incelemek. Özel/bir-media çözümünü akciğer insufflate için kullanılan bu yana akciğer ponksiyon değil için dikkat ediniz.</li>
	<li>Her iki tarafta göğüs giriş geçmiş zaman göğüs kemiği anatomi, Trakea incelemek. Trakea uzak çevresindeki yumuşak doku dissekan tarafından maruz.</li>
	<li>Nefes borusu 20 gauge IV kateter ile cannulate. Gevşek cannulated Trakea etrafında steril akorduna dikiş kullanarak bir cerrahi düğüm.</li>
	<li>Bir IV uzantısı catheterized Trakea yerçekimi perfüzyon aparatı 10 mL şırınga ayarlanabilen iliştirin.</li>
	<li>Önceden ısıtılmış 37 oC özel (5 mL) ve bir-media (5 mL) 1:1 karışım içine birleştirmek. Sıvı özel/bir-media çözüm yerçekimi perfüzyon cihazın 10 mL şırınga dökün. Önce üfleme özel/bir-media çözüm ile akciğer uzantısı küme tüm uzunluğu özel/bir-media, böylece yanlışlıkla üfleme hava ile akciğer örneklerinin inkâr ile hazır olun.</li>
	<li>Özel/bir-media çözüm akciğer akciğer tam insufflated dolduramazsınız.</li>
	<li>Akciğer tam olarak insufflated bir zamanlar kanül çıkarın ve nefes borusu ile agarase/bir-media çözüme kaçağı önlemek için cerrahi düğüm sıkıca bağla.</li>
	<li>Göğüs boşluğu üzerinden (Trakea, kalp ve akciğer) Yiğitlik dışarı incelemek için devam edin. Değil delik için dikkat çekmek veya akciğer yüzeyine zarar verebilir.</li>
	<li>Yer (belirli hiçbir yönde) yiğitlik PBS önceden soğutulmuş 30 ml 1 X kalem/strep ile desteklenmiş ve 20 dk kuvvetlendirmek özel/bir-media sağlar.</li>
	<li>İyi makas ve şekil 1A' gösterildiği gibi akciğer (3 x 1.5 mm) küçük parçalar koparıp cımbız kullanarak. Küçük akciğer dilimleri kolayca 2.5 X amacı istimal yansıması. Genellikle 4-10 dilim grubu başına deneysel koşul birden çok dilim kesebilir. Not: her deney grubu için B-medyada önceden ıslatılmış bir 2 x 2 cm jelatin sünger içeren akciğer dilimleri ayrı bir kuyuya (6-şey plaka) yerleştirin. Medya iyi ücret miktarı 1,5 mL olmalıdır. Medya her 2-3 gün değiştirin. İlaç araştırmaları için medya/uyuşturucu değişen belirlenen kullanıcı sıklığıdır.</li>
</ol>3. Widefield floresan görüntüleme akciğer dilimleri ve analiz
Not: widefield floresan için (3 x 1.5 x 1 mm) akciğer Bölüm 1 Resim 2.5 X amacı istimal sığabilmesi için görüntüleme, daha küçük dilimler kesilir.
Resim alma widefield floresan mikroskop Tarih:
<ol><li>Akciğer dilimleri genellikle 0, 3, 7 ve 14 gün sonrası enjeksiyon görüntüsü. Biyolojik kabine steril ortamda dikkatle akciğer dilimleri aktarım jelatin sünger bir steril 35 mm cam alt çanak yuvarlak. Akciğer dilim üzerinden aşırı sıvı kapalı olarak fazla sıvı bir ayna olarak hareket ve tümör hücreleri Floresan ışık yansıtacak kurulamak için dikkat ediniz.</li>
	<li>Şekil 1A' tasvir benzer bir şekilde akciğer dilimleri düzenleyin. Her sütun farklı bir deneysel durumu temsil eder. Çapraz-akciğerleri cımbız ile kirletmek değil kendine iyi bak. % 70 etanol ile durulayın ve akciğer dilimleri başka bir deney grubu üzerinden tutmadan önce kurumasını bekleyin.</li>
	<li>Görüntüleme parametrelerini optimize etmek (yani. kazanç, ofset, pozlama zaman, binning) arka plan Akciğer doku (tedavi edilmezse araç) denetiminde ve floresan tümör hücreleri arasında en iyi kontrast sağlayan grup. Kontrol grubundan aynı parametreler deneysel grupları görüntü için kullanın. TIFF görüntü formatında kaydedebilirsiniz.</li>
	<li>Bir ölçek başvurusu için aynı amacı bir mikrometre dijital bir resim çekmek.</li>
	<li>Akciğer auto-floresan zaman içerisinde değişen beri görüntü parametreleri denetim akciğerlere görüntüleme her oturum ayarlanması gerekir. Bir oturum için görüntüleme parametreleri mutlaka sonraki görüntüleme oturumlar için en uygun olmayabilir.</li>
</ol>Görüntü analizi: Not: Aşağıdaki görüntü işleme adımlarını ImageJ 1,51 h yazılım paketi 17ile yapılır.
<ol><li>Bir görüntü dosyası ImageJ (şekil 3A) açın.</li>
	<li>Arka plan çıkarmak: işlem > arka plan çıkarmak > Rolling ball RADIUS (50 piksel başlamasıyla), "Işık arka plan" (şekil 3B) işaretini kaldırın.</li>
	<li>Resim 8-bit biçimine dönüştürme: Görüntü > türü > 8 - bit (şekil 3 c).</li>
	<li>Birimleri piksel olarak ayarlayın: Görüntü > Enter "Piksel" 1 "Piksel genişliği", "Piksel Yükseklik", "Voxel derinlik" uzunluğu birimi girin. Sonraki görüntülere uygulamak için "Global" onay kutusunu işaretleyin.</li>
	<li>Çokgen seçim aracını kullanarak, tüm akciğer dilim Şeklin anahattını ve toplam akciğer dilim alanının (piksel2) belirlemek. Bu değer yüzde tümör yükünü akciğerin hesaplamak için kullanılır.</li>
	<li>Eşik görüntü: Görüntü > ayar > eşik > "Varsayılan" ve "siyah-beyaz" vurgulamak > tümör hücrelerinin çoğunluğu doğru bir şekilde vurgulanmış şekilde eşik görüntü kaydırıcıyı kullanmak. "Uygula" tuşuna basarak bir siyah beyaz görüntü burada akciğer tüm siyah ve beyaz floresan lezyonlardir sonuçlanır (şekil 3D). İkinci kez "Uygula" tuşuna basarak tüm floresan yapıları şimdi siyah şekilleri (şekil 3E) nerede görüntü ters çevirmek.</li>
	<li>Miktar sayısını ve lezyonlar şeklinde: Analiz > ölçümleri ayarla > kontrol "Alan". Tüm diğer kutuların. Parçacıklar analiz > boyutu (piksel2): 0-Infinity ImageJ Numaralandırılacak şekiller aralığını temsil eder. Ampirik olarak gün 0 araç görüntüleri tek tümör hücresinde sayılan en küçük lezyon belirlemek. Bu tek tümör hücre alanının kalan görüntüler veri kümesi için alt sınır kullanın. Bu raporda sunulan çalışma için 11 piksel2 alt sınır ayarlanır. Video örnekte sunulan iş için 24 piksel2 alt sınır ayarlanır. "Döngü" aralığı 0-1 olarak bırakın. "Show" ayarlanabilir "Hiçbir şey". Alternatif olarak, "Göster" ve "Ana hatlarıyla" Seçili, tüm özetlenen şekillerin çizimi oluşturulur. "Göstermek-den sonuçlanmak" ayrı bir pencere açılır ölçümlerin denetleyin. İsteğe bağlı olarak, "yöneticisine Ekle" kutusunu kontrol sahip ilerisi için kaydedilebilir bir yatırım Getirisi Yöneticisi için sayısal şekiller kurtaracak. Tamam bastıktan sonra tüm numaralandırılmış şekillerin ve alan ölçüleri (şekil 3F) içeren bir "Sonuçlar" pencere açılır.</li>
	<li>Kopyalayabilir ve veri "Sonuçlar" penceresinden bir elektronik tabloya yapıştırabilirsiniz. O belirli akciğer dilim için metastatik lezyonlar tüm alanlarında özetlemek için Excel'de topla matematiksel işlevini kullanın. Akciğer dilim yüzde akciğer tümör yükünü değerlendirmek için metastatik lezyonlar alanlara göre akciğer dilim toplam yüzölçümü toplamı bölün. Bu parametre de açıklanan alan kesir (birA) denir Underwood 18tarafından daha fazla. Akciğer tümör yükünü metastatik lezyon alanları/toplam akciğer dilim alanının toplamı =</li>
	<li>Akciğer tümör yükünü kontrol grubu ve gruplar kalan akciğer bölümlere kalanında hesaplayın. Ortalama akciğer tümör yükünü grubu başına 0, 3, 7 ve 14 gün içinde arsa. Yüksek ve düşük metastatik insan OS hücre ilerici zaman noktalarda PuMA modelindeki büyüyen temsilcisi widefield floresan resimler (şekil 4A) gösterilir. Kat değiştirme (0 gün normalize) yüzde metastatik tümör yükünü zaman içinde gösterilen bir çizgi grafiği (şekil 4B) gösterilir.</li>
</ol>4. confocal floresan görüntüleme PuMA modeli
Not: yansıması daha fazla ROIs için izin vermek için kesilmiş büyük akciğer dilimler (tam transvers kesitler, 1-2 mm kalınlığında) dışında confocal görüntüleme için doku işleme önceki bölümde buna benzer.
Akciğer parankimi ile DAR4M, etiketleme:
<ol><li>Akciğer dilim içinde 10 μμM DAR4M (HBSS) olarak 37 ° C'de 45 dk için bırakın DAR4M hücreleri içinde reaktif azot türleri akciğer Etiketler.</li>
	<li>Taze HBSS akciğer dilimlerle, kuluçka 45 dk sonra yıkayın.</li>
	<li>Akciğer dilim bir 35 mm cam alt yuvarlak çanak ve confocal mikroskop görüntüsünde yerleştirin.</li>
	<li>Şekil 5 ' te gösterilen örnek görüntüler için görüntü parametreleri Tablo 5' te listelenen.</li>
	<li>İlgi bir bölge için bir Z-yığını elde etmek. Önerilen Z dilim kalınlığı Nyquist örnekleme için kullanın. Yeşil flüoresan OS hücreleri DAR4M etiketli akciğer dokusunda gösterilen bir 3B yığın temsilcisi bir film film 1 ve tamamlayıcı film 1sağlanır.</li>
</ol>Şekil 5' te gösterilen örnek confocal görüntülerde görüntüleme oturumu terminal. Boyuna görüntüleme gerekiyorsa, yaşam için daha az duyarlilik olduğundan 2-Foton veya çoklu foton donanımlı confocal LSM mikroskop görüntüleme için kullanımı tavsiye edilir doku19,20. Mito-RFP ifade MG63 hücrelerde PuMA modeli görüntüleme:
<ol><li>PuMA iletişim kuralı olarak anahat içinde adım 1 ve 2 MG63 hücreleri mito-RFP yapı ifade kullanarak gerçekleştirin.</li>
	<li>Akciğer dilim bir 35 mm cam alt yuvarlak çanak ve confocal mikroskop görüntüsünde yerleştirin.</li>
	<li>Şekil 6 ' da gösterilen örnek görüntüler için görüntü parametreleri Tablo 6' da listelenir. Film 2 ve tamamlayıcı film 2yeşil flüoresan OS hücreleri floresan mitokondri sağlanan kırmızı ile gösterilen bir 3B yığın temsilcisi bir film.</li>
</ol>

<ol><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clin Cancer Res. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perspective%3A+The+right+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Perspective: The right trials.</a> Nature. 485 (7400), S58-S59 (2012).</li>
<li>Mendoza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+metastasis+biology+and+therapy+in+real+time+in+the+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung.</a> J Clin Invest. 120 (8), 2979-2988 (2010).</li>
<li>Hong, S. H., Ren, L., Mendoza, A., Eleswarapu, A., Khanna, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+resistance+and+PKC+signaling%3A+distinguishing+features+of+high+and+low+metastatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Apoptosis resistance and PKC signaling: distinguishing features of high and low metastatic cells.</a> Neoplasia. 14 (3), 249-258 (2012).</li>
<li>Lizardo, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+Glucose-Regulated+Protein+78+in+Metastatic+Cancer+Cells+Is+Necessary+for+Lung+Metastasis+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Upregulation of Glucose-Regulated Protein 78 in Metastatic Cancer Cells Is Necessary for Lung Metastasis Progression.</a> Neoplasia. 18 (11), 699-710 (2016).</li>
<li>Pouliot, N., Pearson, H. B., Burrows, A. Investigating Metastasis Using In Vitro Platforms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPouliot%2C+N+%22Metastatic+Cancer%3A+Clinical+and+Biological+Perspectives%22">Metastatic Cancer: Clinical and Biological Perspectives</a>. , Landes Bioscience. Austin, Texas. (2012).</li>
<li>Cameron, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+progression+of+metastasis+in+lung%3A+cell+survival%2C+dormancy%2C+and+location+dependence+of+metastatic+inefficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Temporal progression of metastasis in lung: cell survival, dormancy, and location dependence of metastatic inefficiency.</a> Cancer Res. 60 (9), 2541-2546 (2000).</li>
<li>Morrow, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR+inhibition+mitigates+enhanced+mRNA+translation+associated+with+the+metastatic+phenotype+of+osteosarcoma+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">mTOR inhibition mitigates enhanced mRNA translation associated with the metastatic phenotype of osteosarcoma cells in vivo.</a> Clinical Cancer Research. , (2016).</li>
<li>Varghese, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+videomicroscopy+reveals+differential+effects+of+the+vascular-targeting+agent+ZD6126+and+the+anti-angiogenic+agent+ZD6474+on+vascular+function+in+a+liver+metastasis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">In vivo videomicroscopy reveals differential effects of the vascular-targeting agent ZD6126 and the anti-angiogenic agent ZD6474 on vascular function in a liver metastasis model.</a> Angiogenesis. 7 (2), 157-164 (2004).</li>
<li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="https://pdfs.semanticscholar.org/7085/128aafb639e92c1df8f0212bfe53757e9cbd.pdf">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26 (3), 513-523 (2005).</li>
<li>Welch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+considerations+for+studying+cancer+metastasis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Technical considerations for studying cancer metastasis in vivo.</a> Clin Exp Metastasis. 15 (3), 272-306 (1997).</li>
<li>Somasekharan, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YB-1+regulates+stress+granule+formation+and+tumor+progression+by+translationally+activating+G3BP1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">YB-1 regulates stress granule formation and tumor progression by translationally activating G3BP1.</a> J Cell Biol. 208 (7), 913-929 (2015).</li>
<li>El-Naggar, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+Activation+of+HIF1alpha+by+YB-1+Promotes+Sarcoma+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Translational Activation of HIF1alpha by YB-1 Promotes Sarcoma Metastasis.</a> Cancer Cell. 27 (5), 682-697 (2015).</li>
<li>MacDonald, I. C., Groom, A. C., Chambers, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+spread+and+micrometastasis+development%3A+quantitative+approaches+for+in+vivo+models%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Cancer spread and micrometastasis development: quantitative approaches for in vivo models.</a> Bioessays. 24 (10), 885-893 (2002).</li>
<li>Entenberg, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+permanent+window+for+the+murine+lung+enables+high-resolution+imaging+of+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A permanent window for the murine lung enables high-resolution imaging of cancer metastasis.</a> Nat Methods. 15 (1), 73-80 (2018).</li>
<li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+cancer+cell+extravasation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of cancer cell extravasation in vivo.</a> Nat Protoc. 11 (5), 937-948 (2016).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Underwood, E. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aUnderwood%2C+EE+%22Quantitative+stereology%22">Quantitative stereology</a>. , Addison-Wesley Pub. Co. (1970).</li>
<li>Tanaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+imaging+of+cancer+metastasis+using+multiphoton+microscopy%3A+a+short+review%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo optical imaging of cancer metastasis using multiphoton microscopy: a short review.</a> Am J Transl Res. 6 (3), 179-187 (2014).</li>
<li>Prouty, A. M., Wu, J., Lin, D. T., Camacho, P., Lechleiter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+laser+scanning+microscopy+as+a+tool+for+Xenopus+oocyte+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiphoton laser scanning microscopy as a tool for Xenopus oocyte research.</a> Methods Mol Biol. 322, 87-101 (2006).</li>
<li>Bijgaart, R. J., Kong, N., Maynard, C., Plaks, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+Live+Imaging+of+Lung+Metastasis+and+Their+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ex vivo Live Imaging of Lung Metastasis and Their Microenvironment.</a> J Vis Exp. (108), e53741(2016).</li>
<li>Guha, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+retrograde+signaling+induces+epithelial-mesenchymal+transition+and+generates+breast+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial retrograde signaling induces epithelial-mesenchymal transition and generates breast cancer stem cells.</a> Oncogene. 33 (45), 5238-5250 (2014).</li>
<li>Ren, L., Morrow, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((+Positively+selected+enhancer+elements+endow+osteosarcoma+cells+with+metastatic+competence%5BTitle%5D)+AND+%22.+Nat+Med%22%5BJournal%5D)"> Positively selected enhancer elements endow osteosarcoma cells with metastatic competence.</a> . Nat Med. , (2018).</li>
<li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((+Metabolomics+uncovers+a+link+between+inositol+metabolism+and+osteosarcoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22+Oncotarget%22%5BJournal%5D)"> Metabolomics uncovers a link between inositol metabolism and osteosarcoma metastasis.</a> Oncotarget. 8 (24), 38541-38553 (2017).</li>
<li>Ren, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+metastatic+phenotype+of+a+panel+of+established+osteosarcoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Characterization of the metastatic phenotype of a panel of established osteosarcoma cells.</a> Oncotarget. 6 (30), 29469-29481 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Aşağıdaki teknik makale akciğer kolonizasyon OS eğitim PuMA modeli pratik bazı yönlerini açıklar. Nerede araştırmacılar ekstra dikkat protokolündeki bazı önemli adımlar şunlardır:
a) nefes borusu cannulation. Nefes borusu çevresindeki kas ve bağ dokusu diseksiyon sırasında kolayca zarar görebilir. Buna ek olarak, iğne kateterin kolayca nefes borusu itti olabilir. Nasıl iğne eğimi Trakea kanül eklerken girdiği için dikkat edin.
b) Delme veya akciğer yüzeyine zarar. A...

Pediatrik hastalarda metastatik osteosarkom (OS) için geliştirilmiş sonuçları hala kritik karşılanmamış klinik ihtiyaç 1kalır. Bu yeni tatlı hedefli tedaviler geliştirmenin önemi vurgular. Hedef tümör hücre çoğalması metastatik hastalık ve böylece roman stratejileri tedavisinde etkili olduğu kanıtlanmış değil geleneksel chemotherapeutics metastatik işlemi 2hedeflemesi gerekir. Geçerli makalenin ex vivo akciğer metastazı modeli, yeni keşfetmek yararlı bir araç sağlayan Mendoza ve iş arkadaşları3tarafından geliştirilen pulmoner metastaz tahlil (PuMA) nispeten yeni bir tür pratik yönlerini ele almaktadır. Moleküler sürücüleri akciğer metastazı ilerleme OS 4,5. Devam etmeden önce ancak, kısaca metastaz çeşitli geçerli modeller dokunmak ihtiyatlı olur ve deneyleri nasıl PuMA modeli geleneksel vitro birkaç avantaj sunar.
Metastaz çalışırdım en deneysel modeller belirli bir adımı veya metastatik art arda birkaç adımını özetlemek vitro ve in vivo sistemleri oluşturmaktadır. Bu adımlar içerir: 1) tümör hücreleri birincil tümör, 2) intravasation uzak içine Yakındaki gemiler (kan veya lenf) ve dolaşım içinde transit geçiş 3) tutukla ikincil site, 4) ekstravazasyonu ve hayatta kalma ikincil alanında 5) oluşumu micrometastases ve 6) büyüme içine bozukluklarına Metastazlari (şekil 1). Metastaz vitro modelleri 2-boyutlu (2D) geçiş içerebilir ve hangi içinde gözden 3 boyutlu (3D) Matrigel işgali deneyleri, başka bir yerde 6detay. Vivo modellerinde, iki yaygın olarak kullanılan model sistemleri içerir: 1) spontan metastaz modeli nerede bir tümör hücreleri orthotopically kendiliğinden metastatik hücreleri tutuyor yerel bir tümör oluşturmak için belirli doku türü enjekte olmasıdır uzak sitelere; 2) deneysel metastaz modeli nerede tümör hücrelerinin damar akıntıya karşı hedef organ enjekte edilmiş olur. Örneğin, bir kuyruk ven enjeksiyon tümör hücreleri sonuçları geliştirme akciğer Metastazlari5,7,8. Diğer deneysel metastaz modelleri dalak ya da karaciğer metastaz9,10gelişiminde sonuçları Mezenterik ven içine tümör hücrelerinin enjeksiyon içerir. Bu vivo içinde modellerin pratik hususlar Welch 11tarafından ayrıntılı olarak ele alınmıştır. Metastaz Pediatrik sarkomları içinde çalışmak için kullanılan başka bir vivo içinde modeli yerel tümör oluşumu ve spontan metastaz için akciğerler 12,13sonuçları böbrek böbrek subkapsüler tümör implantasyon modelidir. Teknik açıdan daha zorlu bir tekniği gibi intravital videomicroscopy can doğrudan görselleştirmek, buna metastatik kanser hücreleri ve metastatik bir site microvasculature gerçek zamanlı, Hofstede (yani. akciğer veya karaciğer)14 MacDonald tarafından açıklandığı gibi ve Entenberg15veya kanser hücre ekstravazasyonu chorioallantoic zarda Kim 16tarafından tanımlandığı gibi.
PuMA modelin bir ex vivo, Akciğer doku explant, kapalı kültür sistemi olduğunu nerede floresan tümör hücrelerinin büyümesini boyuna Floresans mikroskobu ile bir ay boyunca görülebilir ( şekil 2Abakınız). Bu model akciğer kolonizasyon (Adım 3-5) metastatik cascade başlangıç evresinde beyannamedir. Geleneksel vitro modelleri PuMA modelinin büyük bazı avantajları vardır: 1) içinde boyuna metastatik kanser hücre büyüme akciğer microenvironment özelliklerinin çoğu korur bir 3D microenvironment ölçmek için bir fırsat sağlar vivo 3; 2) puMA nakavt aday gen veya uyuşturucu tedavi Anti-metastatik etkinlik 3D akciğer microenvironment bağlamında olup olmadığını değerlendirmek araştırmacı sağlar; 3) Floresans mikroskobu platformlar (2B rakam) widefield Floresans mikroskobu ya da confocal mikroskobu lazer tarama birçok türde ile esnek PuMA modelidir, şekil 2C & Diçinde her örnekler gösterilir, anılan sıraya göre. Bu makalede PuMA modeli gelişmiş yeşil flüoresan protein (eGFP) metastatik büyüme üzerine boyuna görüntüleme verileri elde etmek için nasıl kullanılacağı ele alınacak-ifade, insan yüksek ve düşük metastatik osteosarkom hücreleri (MNNG ve HOS hücreleri, sırasıyla) kullanarak düşük-büyütme widefield floresan. Akciğer parankimi etiketleri floresan boya ve mitokondri içinde OS etiketleri genetik muhabir PuMA model confocal mikroskobu lazer tarama kullanarak hücreleri kırmızı-floresan protein Imaging örnekler de ele alınmıştır.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Tablo 2</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>güçlü<A-ortam, B-ortam ve tam ortam için güçlü><güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MNNG-HOS</td><td>ATCC</td><td>CRL-1547</td><td>yüksek metastatik OS hücre hattı</td></tr><tr><td>HOS</td><td>ATCC</td><td>CRL-1543</td><td>zayıf metastatik OS hücre hattı</td></tr><tr><td>MG63.3</td><td>Amy LeBlanc Laboratuvarı (NCI)</td><td>N/A</td><td>yüksek metastatik OS hücre hattı</td></tr><tr><td>MG63</td><td>ATCC</td><td>CRL-1427</td><td>zayıf metastatik OS hücre hattı</td></tr><tr><td>10X M199 ortamı</td><td>Thermofisher</td><td>11825015</td><td>A-ortamı ve B-ortamı için temel ortam</td></tr><tr><td>Damıtılmış Su (sterilize)</td><td>Thermofisher</td><td>15230-147</td><td>A-ortamının bileşeni & B-media</td></tr><tr><td>%7,5 sodyum bikarbonat çözeltisi</td><td>Thermofisher</td><td>25080094</td><td>A-media & B-media</td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>Sigma-Alrich</td><td>H6909</td><td>A-media'nın Bileşeni & B-media</td></tr><tr><td>Retinol asetat-suda çözünür</td><td>Sigma-Alrich</td><td>R0635-5MG</td><td>A-media & B-media</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin 10X konsantre (10000 U / ml) çözelti</td><td>Thermofisher</td><td>15140122</td><td>A-media bileşeni & B-medya, eksiksiz medya.</td></tr><tr><td>Sığır insülin çözeltisi (10mg / ml)</td> <td>Sigma-Alrich</td><td>I0516-5ML</td><td>A-media bileşeni & B-media</td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikozlu</td><td>Thermofisher</td><td>11965092</td><td>Komple Ortamın Temel Ortamı</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td> <td>Thermofisher</td><td>25030081</td><td>Komple Ortamın Bileşeni</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Thermofisher</td><td>16000044</td><td>Komple Ortam</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Bileşeni s Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td>Hücre kültüründe kullanılır.</td></tr><tr><td>Hank' s Tamponlu Tuzlar Çözeltisi, kalsiyum yok, magnezyum yok, fenol yok kırmızı</td><td>Thermofisher</td><td>14175095</td><td>Enjeksiyondan önce hücre peletini yeniden süspanse etmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (% 0.25), fenol kırmızısı</td><td>Thermofisher</td><td>25200114</td><td>Hücre kültüründe kullanılır.</td></tr><tr><td>DAR4M</td><td>Enzo</td><td>ALX-620-069-M001</td><td>Akciğer parankimini etiketlemek için kullanılır.</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Table 3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PuMA için malzemeler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zeiss 710 Konfokal LSM</td><td>Zeiss</td><td>N/A Dik</td><td>LSM konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>Zeiss 780 Konfokal LSM</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>Ters LSM konfokal mikroskop</td></tr><tr><td>SCID fareler</td><td>Charles River</td><td>N/A</td><td>NOD. CB17-Prkdcscid/NcrCrl, kadın, yaş 6-8 hafta</td></tr><tr><td>GelFoam</td><td>Harvard Aparatı</td><td>59-9863</td><td>Akciğer dokusu kesitleri için destek olarak kullanılır.</td></tr><tr><td>SeaPlaque Agarose</td><td>Lonza</td><td>50100</td><td>Akciğerin insüflasyonu sırasında kullanılır.</td></tr><tr><td>27 gauge iğneli 1 ml şırınga</td><td>Fisherscientific</td><td>14-826-87</td><td>Kuyruk damarı enjeksiyonu için kullanılır.</td></tr><tr><td>10 ml şırınga</td><td>BD</td><td>309604</td><td>Akciğerin insüflasyonu için kullanılır.</td></tr><tr><td>20 gauge</td><td>kateter Terumo</td><td>SR-OX2032CA</td><td>Akciğerin insüflasyonu sırasında kullanılır.</td></tr><tr><td>Abbott IV uzatma seti (30", Steril)</td><td>Medisca</td><td>8342</td><td>Akciğerin insüflasyonu sırasında kullanılır.</td></tr><tr><td>Alkollü bezler</td><td>BD</td><td>326895</td><td>Enjeksiyondan önce kuyruk damarını silmek için</td></tr><tr><td>Steril cerrahi eldivenler</td><td>Fisherscientific</td><td>Boyuta göre değişir</td><td>Fare akciğerlerinin şüpheci bir şekilde ele alınması</td></tr><tr><td>30 cm cetvel</td><td>Zımbalar</td><td></td><td>Akciğerin insüflasyonu için kullanılır.</td></tr><tr><td>Cetvel Pipette.com için destek standı</td><td></td><td>HS29022A</td><td>Akciğerin insüflasyonu için kullanılır.</td></tr><tr><td>35 mm cam tabanlı kültür kabı</td><td>Ibidi</td><td>81158</td><td>Akciğer dilimlerinin görüntülenmesi sırasında kullanılır</td></tr><tr><td>Su Geçirmez Nem Bariyerli Emici Alt Pedler</td><td>VWR</td><td>56617-014</td><td>Biyolojik başlıktaki steril çalışma alanını kaplamak için kullanılır.</td></tr><tr><td>Katgüt Düz Emilebilir Sütür</td><td>Braun</td><td>N/A</td><td>Kanüllü trakeayı bağlamak için kullanılır.</td></tr><tr><td><güçlü > Adı< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td> Tablo 4< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > PuMA için cerrahi aletler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Mikro Diseksiyon Makası 3.5 "Düz Keskin / Keskin</td><td>Roboz</td><td>RS-5910</td><td>Akciğer bölümlerini kesmek için</td></tr><tr><td>4" (10 cm) Uzun Tırtıklı Düz Ekstra Hassas 0.5mm Uç</td><td>Roboz</td><td>RS-5132</td><td>Akciğer bölümlerini manipüle etmek/tutmak için.</td></tr><tr><td>4 inç (10 cm) Uzun Tırtıklı Hafif Eğri 0.8mm Uç</td><td>Roboz</td><td>RS5135</td><td>Akciğer bölümlerini manipüle etmek/tutmak için.</td></tr><tr><td>Başparmak pansuman forsepsleri; Dişli; Hassas; 4.5 "Uzunluk; 1.3 mm Uç Genişliği</td><td>Roboz</td><td>RS-8120</td><td>Genel diseksiyon için.</td></tr><tr><td>Başparmak Pansuman Forseps 4.5" Tırtıklı 2.2 mm Uç Genişliği</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td>Genel diseksiyon için.</td></tr><tr><td>Ekstra İnce Mikro Diseksiyon Makası 3.5" Düz Keskin/Keskin, 20mm bıçak</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td>Genel diseksiyon için.</td></tr><tr><td>Knapp Makas; Düz; Keskin-Künt; 27 mm bıçak uzunluğu; 4" Toplam Uzunluk</td><td>Roboz</td><td>RS-5960</td><td>Genel diseksiyon için.</td></tr></tbody></table>

metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Pulmoner metastaz tahlil (PuMA) bir ex vivo akciğer explant ve araştırmacılar tarafından Floresans mikroskobu osteosarkom (OS) akciğer kolonizasyon Biyoloji çalışmaya izin verir kapalı hücre kültür sistemi olduğunu. Bu makalede Protokolü'nün ayrıntılı bir açıklama ve metastatik büyüme widefield veya confocal floresan mikroskopi platformlar kullanarak bağlı görüntü veri alma örnekleri ele alınmaktadır. PuMA modeli esnekliğini araştırmacılar akciğer microenvironment içinde işletim sistemi hücrelerinin büyümesini sadece eğitim için aynı zamanda zaman içinde Anti-metastatik tedavi etkilerini değerlendirmek için izin verir. Akciğer parankimi ile OS hücre etkileşimlerin görülmemiş, yüksek çözünürlükte görüntüleme için confocal mikroskobu sağlar. Ayrıca, PuMA modeli floresan boyalar veya floresan protein genetik gazetecilere ile birleştirildiğinde, araştırmacılar akciğer microenvironment, hücresel ve hücre altı yapıları, gen fonksiyon ve metastatik OS hücrelerdeki organizatörü etkinlik eğitim görebilirsiniz. PuMA modeli osteosarkom araştırmacılar yeni metastaz Biyoloji keşfetmek ve roman Anti-metastatik, hedeflenen tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için yeni bir araç sağlar.

Düşük-büyütme widefield Floresans mikroskobu
İçin widefield floresan mikroskopi PuMA akciğer dilimleri temsilcisi görüntüler ve miktar veri şekil 2Cve şekil 4A ve Bgösterilir. Yüksek ve düşük metastatik hücre hatları için metastatik eğilimlerini ilerici zaman puan üzerinde görsel olarak görünür. Hiç HOS hücreleri büyümek değil,...

Bu makalede, pulmoner metastaz tahlil (PuMA) Protokolü'nün ayrıntılı bir açıklama sağlamak için hedeftir. Bu model araştırmacılar metastatik osteosarkom (OS) hücre büyümesini widefield floresan veya confocal mikroskop lazer tarama kullanarak akciğer dokusunda çalışmaya izin verir.

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

Bu pulmoner metastaz testinin genel amacı, canlı akciğer dokusunda metastatik osteosarkom hücrelerinin büyümesini doğrudan görselleştirmek ve incelemektir. Bu yöntem, osteosarkom metastazı alanındaki gerçekten önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Metastatik osteosarkom hücrelerinin akciğer mikro ortamında nasıl adapte olduğu, hayatta kaldığı ve çoğaldığı gibi.Bu tekniğin temel avantajı, metastatik osteosarkom hücre büyümesinin ilgili üç boyutlu bir mikro ortamda doğrudan görselleştirilmesine izin vermesidir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, trakeanın kanüle edilmesi ve akciğerin şişirilmesi gibi teknik olarak zorlu adımlar nedeniyle mücadele edeceklerdir. Tümör hücrelerinin kuyruk damarı enjeksiyonu ve fare ötenazisi standart kurumsal yönergelere göre yapılır.Beş dakika sonra, ötenazi yapılmış fareyi laminer akış başlığındaki steril bir ped üzerine dorsal yaslanma pozisyonuna yerleştirin ve akciğerleri delmeden, trakeanın her iki tarafındaki torasik girişi geçecek şekilde sternumu dikkatlice incelemek için küçük, steril bir makas kullanın. Trakeayı çevreleyen tüm kas ve bağ dokusunun diseke edilmesi, başarılı bir kanülasyon için çok önemlidir. Daha sonra, t

practical-considerations-studying-metastatic-lung-colonization

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu makale, insan kanser hücre hatları metastatik potansiyelini belirlemek için kullanılan deneysel bir metastaz testinin prosedürleri açıklamaktadır.

Deneysel metastaz Testi

Bu çalışmada bildirilen yeni protokol kombine farelerde tek hücreli çözünürlükte metastaz seçici algılama...

Kombine tarafından Farelerde Tek Hücre çözünürlükte Akciğer Metastaz Geliştirilmiş Görselleştirme<em&gt; In-situ</emAkciğer Doku ve X-Gal Boyanma&gt; Perfüzyon<em&gt; LacZ</em&gt;-Tagged Tümör Hücreleri

Bu el yazması tümör hücresi birikimi Akciğerlerde tümör metastazı, bir hayvan modeli ölçmek için bir yöntem açıklanır.

Akciğer tümör hücre işe alım tahlil

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Açıklanan yaklaşım, akciğerlerdeki metastaz sayısı ve boyutunun ölçülmesine ek olarak meme kanseri metastazı oluşumunun ve büyümesinin gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlamak için deneysel kuyruk ven metastazı tahlillerini in vivo canlı hayvan görüntülemeile birleştirir.

Kuyruk Ven Metastaz Tahlilleri ve Gerçek Zamanlı Vivo Görüntüleme Kombine Kullanımı Meme Kanseri Metastatik Kolonizasyon ve Yük Akciğerlerde Quantify için

Kanser hücrelerinin intravenöz enjeksiyonu genellikle metastaz araştırmalarında kullanılır, ancak metastatik tümör yükünü analiz etmek zor olabilir. Burada, metastazın kuyruk damarı enjeksiyon modelini gösteriyoruz ve ortaya çıkan metastatik akciğer tümörü yükünü analiz etmek için yeni bir yaklaşım içeriyoruz.

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Kemik metastazı modellerinde metastaz düzgün bir şekilde veya %100 insidansla gelişmez. Doğrudan intraosseöz tümör hücresi enjeksiyonu akciğerin embolizasyonu ile sonuçlanabilir. Primer kemik tümörlerini ve kemik metastazlarını, kemik içine solid tümör grefti implantasyonu kullanılarak modelleyen, tekrarlanabilir engraftman ve büyümeye yol açan tekniğimizi sunuyoruz.

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Burada, metastaz biyolojisinin preklinik araştırılması ve yeni terapötiklerin gelişimi için kullanılabilecek spontan pulmoner metastaz ile osteosarkomun amputasyon prosedürünün ardından singeneik ortotopik implantasyon tanımlanmıştır.

Metastaz Oranını Kontrol Etmek için Amputasyonlu Syngeneic Ortotopik Osteosarkom Sprague Dawley Sıçan Modeli

Bu protokol, ortopik osteosarkom ve pulmoner metastaz lezyonlarını taşıyan fare modelleri oluşturmak için intratibia osteosarkom hücre enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Ortotopik Osteosarkom ve Akciğer Metastazı Fare Modelleri Oluşturmak için İntratibiyal Osteosarkom Hücre Enjeksiyonu

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Bu deneysel protokol, lncRNA'nın koloni oluşturan testlerle birleştirerek lncRNA'nın osteosarkom hücre çoğalması üzerindeki etkisini niceleyen istikrarlı, maliyet etkin ve verimli bir yöntem sunar.

Koloni Oluşumu Testi LncRNA Knockdown Osteosarkom Hücrelerinin Proliferatif Kapasitesini Tespit Ediyor

Öğrenin, akciğer metastaz analizi (PuMA) ile osteosarkom hücrelerinin akciğer dokusundaki büyümesini doğrudan görselleştirin. Bu yöntem, metastatik davranışları üç boyutlu mikroortamda incelemek için kritik bilgiler sunar.

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

Daha fazla video keşfet