Name: Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Keşfedin, farelerde bleomisin kaynaklı akciğer fibrozisinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi kullanan çoklu görüntüleme yöntemini. Bu teknik, hastalık ilerlemesini ve yeni tedavileri invaziv olmayan şekilde izler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Dr Daniela Pompilio ve Roberta Ciccimarra teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Burada açıklanan tüm hayvan deneyleri Chiesi Farmaceutici ve ERASMUS MC hayvan deney protokol numarası altında intramural hayvan refahı Komitesi tarafından kabul edildi: EMC Avrupa Yönergesi 2010/63 UE ile uymak 3349 (138 / 14 / 07) İtalyan D.Lgs 26/2014 ve yeniden düzenlenen "Kılavuzu için bakım ve kullanım of Laboratory Animals"23.
Not: kullanılmadan önce kadın doğuştan C57Bl/6 (7-8 haftalık) fareler en az 7 gün yerel vivaryum koşullarına acclimatized (Oda sıcaklığı: 20-24 ° C; bağıl nem: % 40-70; 12-saat koyu döngüsü), standart kemirgen chow ücretsiz erişimine ve yumuşatılmış su dokunun.
1. boğaza tedavi fare Bleomycin ile
<ol><li>Cihazın içi trakeal korumak12,13,14için hazırlayın.</li>
	<li>Fareler %2.5 oksijen ile karışık ayarlamak bir isoflurane Buharlaştırıcı bağlı anestezik odası koymak. Anestezi derinliği için bir ayak parmağı-çimdik yanıt eksikliği tarafından kontrol. Anestezi etkisi 3-5 dk sonra oluştu.</li>
	<li>Entübasyon platformda imzalat fareyi getirin, onun ön dişler tarafından asılı tel üzerinde yerleştirilir.</li>
	<li>Laringoskop, künt uçlu forseps bir çift ve forseps veya laringoskop'ın uç ağız hafifçe açmak için kullanın.</li>
	<li>Dilini ve Forseps ile kenarda tutun. Trakea açılışı görüntülenir kadar laringoskop blade ağız arkasına doğru koyun ve laringoskop tutmak.</li>
	<li>Diğer elini de PE boru içine üç yollu vana dönen Trakea, sonu bağlı teslim tüp takın. Bleomycin (0,020 µg/fare) 50 µL teslim. Korumak sonra hızlı bir şekilde boğulma önlemek için Trakea tüpü çıkarması. Fareler dik birkaç saniye boyunca basılı tutun.<ol>
<li>Bleomycin intratracheally gün 0 saat yönetmek ve gün 4 (Resim 1) tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Entübasyon platformdan fareyi kaldırın ve 30 dk (tam anesteziden kurtarmak için gerekli zamanı) için fare izlemek.</li>
	<li>FMT ve mikro-CT tarafından fareler akciğerler vivo içinde görüntüleme Çift Kişilik bleomycin korumak, 7, 14 ve 21 gün sonra gerçekleştirin.</li>
</ol>2. Floresans moleküler tomografi tarafından vivo içinde görüntüleme
Not: Önceden, ışık kullanmadan önce 4 ° C'de korunuyorsunuz MMP hassas floresan substrat 680 tuzlu çözüm (% 0,9 Sodyum Klorür) ve store 6 nmol/mL taze stok çözeltisi hazırlamak. 4 ° C'de 6 aya kadar kararlı MMP görüntüleme ajanı hayvana enjekte önce oda sıcaklığına kadar equilibrate sağlar.
<ol><li>
Sonda enjeksiyon
	<ol>
<li>MMP sonda çözüm intravenöz enjeksiyon için donatım hazırlayın. Sıcak su 50 ° c fare kuyruğu ısıtmak için önceden.</li>
		<li>Fare scruff sıkıca kavramak için kuyruk tarafından kabul ve Kafesin kapağını tutunma sağlar. Fareler hayvanın omuz üzerinde tutarak, kuyruk 4 önlemek için kuyruk cilt termal hasar için en fazla 8 s termal yaralanma için bir sıcak su kabı koymak.  Daha kolay görselleştirme ve iğne ekleme için şişme damarları kontrol edin.</li>
		<li>Enjeksiyon işlemi sırasında sabit tutun ve arkadaki özel bir delikten kuyruk çekmek için plastik bir restrainer fareler koyun. İki Kaudal damarlar üstünde ikisinden biri yan-kuyruk bulmak; arter alt kısmında kuyruk değil.</li>
		<li>İğne (26 G) 1 mL şırınga damar içine yerleştirin. İğne doğru şekilde yerleştirilmiş olması durumunda, enjeksiyon kolay olacak ve sonda çözüm gemi akacaktır.</li>
		<li>MMP sonda çözüm 10 mL/kg enjekte.</li>
		<li>İğne atmak. Not: çünkü sondası tarafından etkinleştirilmesi için gereken süreyi en uygun görüntüleme saat 24 h MMP sonda enjeksiyon sonra noktasıdır. Uzunlamasına çalışmalar gerçekleştirilmesi durumunda en iyi yeniden enjeksiyon 7 gün, hangi sağlar aracı tam giriş izni için fare zamanı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
FMT görüntüleme Not: başlamadan önce her zaman kürk kaldırın ve hayvan alanların etrafında, bu durumda saçılma ve doku Absorbans önlemek için göğüs, yansıması için olan.<ol>
<li>Fare anestezi için anestezik odasına koy ve isoflurane kadranını indüksiyon için % 2.5 ve bakım için % 2.</li>
		<li>Veri toplama yazılımı başlatmak ve deneme için veritabanında yeni bir çalışma açın.</li>
		<li>Görüntüleme ile FMT başlamadan önce fare görüntüleme kaset aktarın. FMT görüş alanı en iyi şekilde kullanmak için kaset Imaging ortasında imzalat fareyi getirin. Fareler düz, güvenli ve yavaşça sıkıştırılmış görüntüleme kaset her iki windows karşı tutun. Kaset kolları tarafından yüksekliği ayarlamak ve sonra belgili tanımlık rıhtım istasyon kaydırın.</li>
		<li>Konu tarama penceresinde tıklatın ve canlı görüntüyü görmek için Önizleme ' yi tıklatın.</li>
		<li>Floresans beklenen alanı çevreleyen doku yakalanır tarama bölgesi yeterince büyük çizmek. Toplam 25 tarama noktaları garantiler de dahil olmak üzere akciğer bölge tamamen taranan olacak.</li>
		<li>Bir kez yatırım Getirisi çizilir, ilk imar Kuyruğa Ekle ' yi tıklatın ve fareyi görüntü tarama ' yı tıklatarak. Emin olun doğru lazer, 680 nm seçilidir.</li>
		<li>Resim alma tamamlandığında, fare onun kafes yerleştirin. Tam anesteziden kurtarır emin olun.</li>
		<li>Floresans analizi penceresinde yatırım Getirisi aracını kullanarak analiz yazılımı picomoles ölçmek ve yatırım Getirisi 700-800 mm3 akciğer yöresinin sinyal üzerinde etrafında azaltır. Karaciğer sinyal dışlamak için dikkatli olun. Onları boyutunda benzer ve her hayvan görüntü içindeki konumlarını ayarlamak için diğer konularda yatırım Getirisi kopyalayın.</li>
		<li>Görüntüleri jpg dosyaları olarak dışa aktarma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. mikro-CT tarafından Vivo içinde görüntüleme
Dikkat: başlamadan önce her zaman tüm metal takılar ve x-ışınları saçılma önlemek için görüntüleme alanını yakınındaki metal nesneleri kaldırın.
Not: Radyasyon kaynaklı akciğer fibrozis akciğer hasarı24radyasyon sırasında ortak bir bulgu indüklenmektedir. Ne mikro-CT endeksleri türetilmiş ne de Histolojik bulgular akciğer fibrozis ile ilişkili serum fizyolojik tedavi kontrol farelerde mevcut dört mikro-CT oturumları görüntüleme, x-ışını doz mikro-CT sırasında hayvanlara teslim gösteren tabi gün 21 muayene bulguları etkiler için yeterli değildi.
<ol><li>Mikro-CT yeşil güç düğmesine basarak kapatmak ve x-ışını kaynağı ısıtmak için yazılımı başlatmak. Küçük delik ve hayvan yatak Imaging fareler için kullanın.</li>
	<li>Yeni veritabanı için yeni bir tıklatarak veritabanını oluşturmak ve yapı tarayıcı fare deneyinde sayısını temel alan veya önceden oluşturulmuş bir veri kaydetmek için Varolan bir veritabanına bağlanırken ' ı tıklatın.</li>
	<li>Tarama başlamadan önce satın alma parametrelerini yazılım denetimi penceresinde seçin: x-ışını tüpü gerilim, 90 kV; CT X-ray tüp akım, 160 µA; X-ışını tüpü geçerli, 80 µA canlı; FOV, 36 mm; Hiçbir gating tekniği; Teknik, yüksek çözünürlükte tarama 4 dak.</li>
	<li>Fareler % 3 isoflurane inhalasyon tarafından anestezi ve anestezi sürekli bir tedarik sağlayan bir burun konisi ile delik eklenen yatağın üstüne koyun. Belgili tanımlık paws maruz göğüs izin vermek için yatakta bantlı farelerin hareketsiz.</li>
	<li>Enstrüman kapı slayt ve Live Mode yakalama düğmesine basarak fare pozisyon gerçek zamanlı olarak görmek için açmak. Hayvan yatak doğrudan CT araç üzerinde yer alan düğmelerini kullanarak göğüs görüş alanı (FOV) ile hizalamak için taşıyın. Fare üzerinde tarama Merkez; Eğer değilse CT araç üzerinde bulunan sol ve sağ okları olan pozisyonunu ayarlayýn.</li>
	<li>En iyi yatak pozisyonu 90 ° ve ayarla' yı tıklatarak işaretleyerek gantry döndürerek onaylayın. Görüntü bölgesine tamamen FOV içinde olduğundan emin olun.</li>
	<li>Perdeleme herhangi bir tekniği uygulamak ve tarama CT Scan düğmesine tıklayarak başlatın. Evet bu x-ışını kaynağı açılır olduğunu bildiren iletisi için'i tıklatın. Not: röntgen yanar sonra araç üzerine portakal lamba vurgulanır ve kayar kapı operatör güvenliği için açmak imkansız olacaktır. Tarama işlemi bittiğinde, transaxial, koronal ve yeniden sagittal dilim gösteren 2D Viewer yazılımının yeni bir pencere görünür.</li>
	<li>Görüntü kalitesi kontrol ve hareketleri nedeniyle anestezi düşük düzeyde görüntüleri bulanık değil emin olun. Gerekirse, tarama tekrarlamak.</li>
	<li>Hayvanlar kafesin içine yerleştirin ve tam anesteziden kurtarmak emin olun.</li>
</ol>4. Bronchoalveolar lavaj
<ol><li>Kurban ve % 3 isoflurane hayvanlarla abdominal aorta kanama tarafından anestezi.</li>
	<li>Makas göğüs kafesi ve boyun ortaya çıkarmak için kullanın. Sonra Trakea ortaya çıkarmak ve 1 mL şırınga iğne olmadan bağlı 21'lik lavaj tüp ile gerçekleştirilecek BAL yordam izin vermek için küçük bir insizyon attım olun. Nefes borusu kesmemeye dikkat edin.</li>
	<li>BAL gerçekleştirmek için bir iğne olmadan 1 mL şırınga 0.6 mL steril çözeltisi ile doldurun [10 x Hank'in dengeli tuz solüsyonu (HBSS); 100 mM ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA); 1 mM 4-(2-hydroxy-ethyl)-1-piperazineethansulphonic asit (HEPES); distile su].</li>
	<li>Nefes borusu içinde belgili tanımlık kesme lavaj tüp takın ve yavaş yavaş enjekte ve çözüm 3 kez, en iyi toplama BALF daha sonraki analiz için izin vermek için üçüncü para çekme üzerinde duraklatma çekmek.</li>
</ol>5. Histoloji ve Histomorfometri
<ol><li>Ortaya çıkarmak ve onları nefes borusu aracılığıyla bir kanül ile % 10 formalin tarafsız tamponlanmış 0.6 mL ile nazik infüzyon tarafından şişirme akciğerler, çıkarın ve örnekleri için 24 saat oda sıcaklığında saklayın.</li>
	<li>Alkol Çözümleri (1 h için % 60 etanol, 1 h, % 90 etanol için 1 h, 2 h için % 95 etanol etanol % 70 ve % 100 etanol için 2 h) konsantrasyonları artan farklı pasajlar ile örnekleri kurutmak bir otomatik doku işlemci kullanarak.</li>
	<li>Numuneler Ksilen onları yarı saydam yapmak 2 h için yerleştirin. Su kaybı sonunda parafin 3 h için 60 ° C'de örneklerinde sızmak ve otomatik işlemcide katıştırabilirsiniz.</li>
	<li>5 µm kalınlığında seri bölümler döner microtome kullanarak elde edilir.</li>
	<li>Deparaffinize ve slaytlar etanol azalan sınıflarda rehydrate ve bir otomatik doku işlemci kullanarak Masson'ın Trichrome ile leke.</li>
	<li>El ile tarama bir slayt tarayıcı kullanarak 20 X büyütme oranında akciğer dilimleri odaklanmak ve 451 nm/piksel çözünürlük ile görüntüleme yazılımı kullanarak tüm akciğer bölümlerinin dijital çekim.</li>
	<li>Morfolojik fibrotik akciğer hasarı yarı nicel ve nicel parametreleri ile aşağıdaki gibi değerlendirmek:<ol>
<li>Ashcroft puanı belirlemek. Yarı kantitatif akciğer bölümleri Ashcroft10 Hübner vd tarafından değiştirilmiş tarafından tanımlanan ölçeğine göre sınıf morfolojik değişiklikler 25 kullanım sistem 0-8 puan akciğer bölümlerdeki tüm parankimi değerlendirmek için.</li>
		<li>Kollajen içeriği belirleyin. Mikroskop görüntü analiz yazılımı tarafından fibrozis10,25 derecesini ölçmek. Rastgele her slayt başına 10 X büyütme, üç ROIs seçin. Renk eşiği ayarlarını standardizasyon tarafından kollajen yeşil lekeli alan olarak algılar.</li>
		<li>Alveoler hava alanı belirleyin. Alveoler hava alanı fibrozis10,25dolaylı bir parametresi olarak ölçmek. Hava alanı içinde beyaz bir eşik kullanarak ROIs bulmak belgili tanımlık aynı yazılım ve fibrozis kesir için uygulanan ROIs aracılığıyla.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21727191">Integrating mechanisms of pulmonary fibrosis.</a> J. Exp. Med. 208 (7), 1339-1350 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Ramalingam, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+fibrosis%3A+therapeutic+translation+for+fibrotic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of fibrosis: therapeutic translation for fibrotic disease.</a> Nat. Med. 18 (7), 1028-1040 (2012).</li>
<li>Moore, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+fibrotic+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Animal models of fibrotic lung disease.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+nintedanib+on+the+microvascular+architecture+in+a+lung+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Effects of nintedanib on the microvascular architecture in a lung fibrosis model.</a> Angiogenesis. , (2017).</li>
<li>Moore, B. B., Hogaboam, C. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17993587">Murine models of pulmonary fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), 152-160 (2008).</li>
<li>Organ, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+segmental+challenge+model+for+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">A novel segmental challenge model for bleomycin-induced pulmonary fibrosis in sheep.</a> Exp Lung Res. 41 (3), 115-134 (2015).</li>
<li>Organ, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+correlations+in+a+large+animal+model+of+bleomycin-induced+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">Structural and functional correlations in a large animal model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis.</a> BMC Pulm Med. 15, 81(2015).</li>
<li>Shen, B., Du, L., Sanchez, C., Edwards, D. J., Chen, M., Murrell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+characterization+of+the+bleomycin+biosynthetic+gene+cluster+from+Streptomyces+verticillus+ATCC15003%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nat+Prod%22%5BJournal%5D)">Cloning and characterization of the bleomycin biosynthetic gene cluster from Streptomyces verticillus ATCC15003.</a> J Nat Prod. 65 (3), 422-431 (2002).</li>
<li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Delivery+of+Bleomycin%3A+A+Comprehensive+Anticancer+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cancer+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Targeted Delivery of Bleomycin: A Comprehensive Anticancer Review.</a> Curr Cancer Drug Targets. 16 (6), 509-521 (2016).</li>
<li>Ashcroft, T., Simpson, J. M., Timbrell, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+method+of+estimating+severity+of+pulmonary+fibrosis+on+a+numerical+scale%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Simple method of estimating severity of pulmonary fibrosis on a numerical scale.</a> J Clin Pathol. 41 (4), 467-470 (1988).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+the+lung+inflammatory+response+to+Pseudomonas+aeruginosa+and+its+modulation+by+azithromycin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of the lung inflammatory response to Pseudomonas aeruginosa and its modulation by azithromycin.</a> J Transl Med. 13, 251(2015).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+monitoring+of+lung+inflammation+in+CFTR-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo monitoring of lung inflammation in CFTR-deficient mice.</a> J Transl Med. 14 (1), 226(2016).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+transiently+transgenized+mice+with+a+bovine+interleukin+8+%28CXCL8%29+promoter%2Fluciferase+reporter+construct%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of transiently transgenized mice with a bovine interleukin 8 (CXCL8) promoter/luciferase reporter construct.</a> PloS one. 7 (6), 39716(2012).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enlightened+Mannhemia+haemolytica+lung+inflammation+in+bovinized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res%22%5BJournal%5D)">Enlightened Mannhemia haemolytica lung inflammation in bovinized mice.</a> Vet Res. 45, 8(2014).</li>
<li>Tassali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MR+imaging%2C+targeting+and+characterization+of+pulmonary+fibrosis+using+intra-tracheal+administration+of+gadolinium-based+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">MR imaging, targeting and characterization of pulmonary fibrosis using intra-tracheal administration of gadolinium-based nanoparticles.</a> Contrast Media Mol Imaging. 11 (5), 396-404 (2016).</li>
<li>Ma, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+asthmatic+inflammation+using+hybrid+fluorescence+molecular+tomography-x-ray+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Assessment of asthmatic inflammation using hybrid fluorescence molecular tomography-x-ray computed tomography.</a> J Biomed Opt. 21 (1), 15009(2016).</li>
<li>Van de Velde, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+micro-CT+provides+biomarkers+of+lung+disease+that+can+be+used+to+assess+the+effect+of+therapy+in+preclinical+mouse+models%2C+and+reveal+compensatory+changes+in+lung+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Longitudinal micro-CT provides biomarkers of lung disease that can be used to assess the effect of therapy in preclinical mouse models, and reveal compensatory changes in lung volume.</a> Dis Model Mech. 9 (1), 91-98 (2016).</li>
<li>Stellari, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterologous+Matrix+Metalloproteinase+Gene+Promoter+Activity+Allows+In+Vivo+Real-time+Imaging+of+Bleomycin-Induced+Lung+Fibrosis+in+Transiently+Transgenized+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Heterologous Matrix Metalloproteinase Gene Promoter Activity Allows In Vivo Real-time Imaging of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Transiently Transgenized Mice.</a> Front Immunol. 8, 199(2017).</li>
<li>Hellbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+dark-field+radiography+facilitates+the+diagnosis+of+pulmonary+fibrosis+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">X-ray dark-field radiography facilitates the diagnosis of pulmonary fibrosis in a mouse model.</a> Sci Rep. 7 (1), 340(2017).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+imaging+of+experimental+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive imaging of experimental lung fibrosis.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 53 (1), 8-13 (2015).</li>
<li>Ruscitti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+assessment+of+bleomycin-induced+lung+fibrosis+by+Micro-CT+correlates+with+histological+evaluation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Multidiscip+Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Longitudinal assessment of bleomycin-induced lung fibrosis by Micro-CT correlates with histological evaluation in mice.</a> Multidiscip Respir Med. 12, 8(2017).</li>
<li>Stellari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+inflammation+and+airway+remodeling+by+fluorescence+molecular+tomography+in+a+chronic+asthma+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring inflammation and airway remodeling by fluorescence molecular tomography in a chronic asthma model.</a> J Transl Med. 13, 336(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%2C+8th+ed%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th ed</a>. , National Research Council. Washington DC. (2011).</li>
<li>Meganck, J. A., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dosimetry+in+Micro-computed+Tomography%3A+a+Review+of+the+Measurement+Methods%2C+Impacts%2C+and+Characterization+of+the+Quantum+GX+Imaging+System%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Dosimetry in Micro-computed Tomography: a Review of the Measurement Methods, Impacts, and Characterization of the Quantum GX Imaging System.</a> Mol Imaging Biol. , (2016).</li>
<li>Hubner, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+quantification+of+pulmonary+fibrosis+in+histological+samples%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples).</a> BioTechniques. 44 (4), 507-514 (2008).</li>
<li>King, T. E., Pardo, A., Selman, M. <a target="_blank" href="http://www.soneco.com.ar/images/diapositivas/fibrosis_pulmonar_idiopatica.pdf">Idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Lancet. 378 (9807), 1949-1961 (2011).</li>
<li>De Langhe, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+lung+fibrosis+and+emphysema+in+mice+using+automated+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Quantification of lung fibrosis and emphysema in mice using automated micro-computed tomography.</a> PloS one. 7 (8), 43123(2012).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

IPF tedavi etmek için yeni ilaçların geliştirilmesi üzerinde odaklanan birçok araştırma grupları rağmen şu anda sadece iki hasta için kullanılabilir. Bir acil tıbbi gerek çünkü daha etkili tedaviler7 bulmak sadece akciğer transplantationis 4-5 yıl26yaşama uzatmak mümkün. Translasyonel tıp ve yeni ilaçların geliştirilmesi için gerekli ön koşul IPF ve Girişimsel hangi çalışmalar başarı klinikte akıllı özellikler taklit eden bir hayvan modeli durumu olduğunu. Ancak, varolan Pu...

İdiyopatik Pulmoner Fibrozis (IPF) ne yazık ki sık sık tanı1dört yıl içinde ölümcül akciğer fonksiyonları progresif azalma ile kronik akciğer hastalığı var. Hücre dışı matriks ifade ve fibroblast proliferasyonu IPF en önemli özellikleri vardır, ama Patogenez henüz tam olarak anlaşılamamıştır. Birden fazla döngüleri akciğer yaralanmalara yol açar değişiklik Mezenkimal hücre döngüsü yayılması, abartılı birikimi fibroblastlar ve myofibroblasts, alveoler epitel hücreleri imha neden en desteklenen hipotezdir ve artan matris üretim. Arabulucu gibi matriks metalloproteinazların (MMPs) dysregulated fibrozis gelişiminde insan IPF veya hayvan modellerinde bleomycin kaynaklı bulunmuştur Bu süreçlerle ilgili. Kontrolsüz MMP üretim anormal yara onarım1,2taklit eden bir dengesiz kollajen birikimi için akciğer interstitium ve alveoler alanı içinde açar.
İlaç bulma ve geliştirme için ana engellerden biri insan Patogenez ve hastalık fenotip taklit erişilebilir fare modelleri olduğunu. Farklı ajanlar akciğer fibrozis hayvan modellerinde ikna etmek için kullanılmıştır: ışınlama zararı, yönetim asbest ve silis, yönetim fibrinogenic sitokinler ve bleomycin3,4; Ancak bleomycin en kullanılan fare, rats, eskiden şiling şimdi pigs, hamster, adatavşanı5 veya büyük hayvanlar (insan dışı primatlar, atlar, köpekler ve ruminants)6,7. Bleomycin antibiyotik bakteri Streptomyces verticillus8 tarafından yapılan ve bir anti-kanser ajanı9olarak kullanılır. Pulmoner Fibrozis uyuşturucunun ve bu nedenle ortak bir yan etkisi, Pulmoner Fibrozis ikna etmek için deneysel hayvan modellerinde kullanılır.
Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis modellerinde, 14-21 gün sonra bleomycin yönetim fibrotik lezyonlar ortaya çikmaktadir. Sunulan çalışma, biz yeni farelerde akciğer fibrozis Çift Kişilik bleomycin boğaza korumak tarafından ikna etmek için kullanılan protokol. Bleomycin fare modeli yeni ilaçlar üzerinde kurulan fibrotik lezyonlar değerlendirilmesi gerektiğinden çok zaman alıcıdır ve anti-fibrotik etkileri anti-inflamatuar etkileri ayırt etmek için test edilmiştir.
Kollajen içeriği, morfometrik ve histolojik analiz biyokimyasal belirlenmesi, post mortem analizi, aynı hayvan hastalık patogenezinde takip imkanı sınırlayan dayalı. Her ne kadar bu parametreler fibrozis değerlendirilmesi için altın standart olarak kabul edildi, onlar değil fibrotik doku bozulması zamansal veya mekansal dağılımı sağlamak ve hastalık ilerleme süreci araştırmak için bir yol engel. 10
Son zamanlarda, non-invaziv görüntüleme teknolojileri hava yolu monitör yenileme, inflamasyon ve fare modelleri ilerlemesinde fibrozis uygulanmış olan: manyetik rezonans görüntüleme (MRG), mikro Bilgisayarlı Tomografi (mikro-CT), Floresans moleküler Tomografi (FMT) ve kollarındaki (BLI)11,12,13,14,15,16,17,18,19 ,20,21. Boyuna farklı noktalarda zaman-bir bleomycin meydan sonra22FMT ve mikro-CT akciğer fibrozis ilerleme izlemek için bir non-invaziv görüntüleme yaklaşım öneriyorum.
Birçok yollar kuruluş ve fibrozis geliştirilmesi dahil olan ve pek bilinir. Bu işlemler sadece daha derin bir anlayış kliniğe transfer olabilir daha fazla uyuşturucu hedeflerine çevirmek olabilir. Boyuna Floresans moleküler tomografi akciğer parenkima değişiklikleri algılama için mikro-BT ile birleştiğinde tarafından MMP etkinleştirme izleme olanağı gelecekte tedavi klinik yanıt erişmek için kullanılan.

<table><tbody><tr><td>FMT 2500 Floresan Tomografi Sistemi</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>Deneysel Oluşturucu</td><td></td></tr><tr><td>MMPsense 680</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>NEV10126</td><td>Işıktan koruyun, probu 4 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>TrueQuant yazılımı</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dişi akraba C57BL/6</td><td>San Pietro NatisoneHorst, Hollanda (UD),&nbsp;</td><td></td><td>Kullanımdan önce, hayvanlar en az 5 gün boyunca yerel vivaryum koşullarına alıştırıldı</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>ESTEVE spa</td><td>571329.8</td><td>Solumayın</td></tr><tr><td>Otomatik hücre sayacı</td><td>Dasit XT 1800J</td><td>Deneysel Oluşturucu</td><td></td></tr><tr><td>Tuzlu Su Çözeltisi, %0.9 Sodyum Klorür (NaCl)</td><td>Eurospital</td><td>15A2807</td><td></td></tr><tr><td>Quantum FX Micro-CT tarayıcı&nbsp;</td><td>Perkin Elmer A.Ş.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptomyces Verticillus'tan bleomisin sülfat&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>&nbsp; B2434&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik doku İşlemcisi&nbsp;</td><td>ATP700 Histo-Line Laboratuvarları</td><td>ATP700&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gömme sistemi&nbsp;</td><td>EG 1160 Leica Biosystems</td><td>EG 1160</td><td></td></tr><tr><td>Döner mikrotom ve nbsp;</td><td>Slee Cut 6062</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dijital slayt tarayıcı&nbsp;</td><td>NanoZoomer S60, Hamamatsu Photonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-AR görüntü analiz yazılımı&nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masson' s Trikrom Boyama</td><td>Histo-Line Laboratuvarları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%10 nötr tamponlu formalin</td><td>Sigma</td><td>HT5012-1CS</td><td></td></tr><tr><td>Penn-yüzyıl modeli DP-4M Kuru güç şişirici</td><td>Penn-century</td><td>DPM-EXT</td><td></td></tr><tr><td>PE190 mikro tıbbi boru</td><td>2biyolojik aletler snc</td><td>BB31695-PE / 8</td><td></td></tr><tr><td>İğnesiz şırınga 5 mL</td><td>Terumo</td><td>SS*05SE1</td><td>Pistonun levhalarını makasla kesin</td></tr><tr><td>Hamilton 0.10 mL (model 1710)</td><td>Gaz geçirmez</td><td>81022</td><td></td></tr><tr><td>Discofix 3 Musluk</td><td>Braun</td><td>4095111</td><td></td></tr><tr><td>İğneli şırınga 1 mL</td><td>Pic solüsyonu</td><td>3,071,260,300,320</td><td>İğnesiz kullanım</td></tr><tr><td>Plastik besleme tüpleri 18 ga x 50 mm</td><td>2biyolojik aletler snc</td><td>FTP-18-50</td><td>Ucu eğik olarak kesin&nbsp;</td></tr></tbody></table>

yaklaşım imaging multimodal bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-ct ve floresan moleküler tomografi dayalı

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

İdiyopatik Pulmoner Fibrozis (IPF) akciğer fonksiyon ve solunum yetmezliği nedeniyle sonraki ölüm önemli bozulma nedenleri akciğer mimari, ilerici ve geri dönüşü olmayan imha ile karakterize bir ölümcül akciğer hastalığıdır.
Deneysel hayvan modelleri IPF patogenezinde bleomycin idare tarafından indüklenen. Bu çalışmada, bir çift boğaza bleomycin korumak tarafından indüklenen bir IPF benzer fare modeli araştırıyoruz. Standart histolojik Değerlendirmeler akciğer fibrozis çalışmak için kullanılan invaziv terminal işlemlerdir. Bu eser amacı akciğer fibrozis floresan moleküler tomografi (FMT) ve mikro-CT gibi noninvaziv görüntüleme teknikleri izlemektir Bu iki teknoloji Histoloji bulguları ile doğrulanmış gerçek zamanlı izleme non-invaziv IPF hastalık şiddeti ve ilerleme için devrimci bir fonksiyonel yaklaşım temsil edebilir. Farklı yaklaşımlar füzyonu nerede patolojik bir durumda oluşan moleküler olaylar ile FMT görülebilir ve sonraki anatomik değişiklikler mikro-CT tarafından izlenebilir IPF hastalığı anlamak için bir adım daha ileri temsil eder.

Akciğer fibrozis lezyonların spontan çözünürlük üç hafta sonra tek bleomycin yönetim ve ılımlı yapısal değişiklikler sınırları bu modelin vurgulamak görülmektedir. Sadece koruyucu tedavi klinik pratikte17temsil etmiyor dar terapötik pencere nedeniyle gerçekleştirilebilir.
Burada, Çift Kişilik bleomycin boğaza korumak bizim protokolünden uzun süreli akciğer fibrozis fareler18de geli...

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

İPF benzeri bir fare modeli üzerinde yapılan bu çalışmanın genel amacı, akciğer fibrozunu FMT ve mikro-BT gibi non-invaziv görüntüleme teknikleriyle uzunlamasına izlemektir. Bu yöntem, akciğer fibrozunda meydana gelen bu spesifik moleküler olaylarla ilgili olarak hangi sırayı ilerletebilir. Bu tekniğin temel avantajı, spesifik moleküler olayların anatomik değişikliklerinin noninvaziv olarak izlenebilmesidir.Bu teknolojilerin uygulamaları İPF patolojisinin tedavisine kadar uzanır, çünkü FMT ve mikro-BT'nin füzyonu, hastalığın ilerlemesini inceleme ve yeni tedavi değerlendirmesini temsil eder. Anestezi uygulanmış bir fareyi entübasyon platformuna yerleştirerek ve tel üzerine yerleştirilmiş kesici dişlerinden asarak başlayın. Laringoskopu açın, ardından bir çift künt uçlu forseps alın ve ağzı yavaşça açın.Laringoskop bıçağını, trakeanın açıklığı görülene kadar ağzın arkasına doğru yerleştirin. PE tüpünün ucuna bağlı dağıtım tüpünü trakeaya yerleştirmek için diğer elinizi kullanın. 50 mikrolitre bleomisin vermek için üç vanayı döndürün.Kurulumdan sonra, boğulmayı önlemek için tüpü trakeadan hızlı bir şekilde çıkarın. Fareleri birkaç saniye dik tutun. Prob enjeksiyonu için fareyi kuyruğ

a-multimodal-imaging-approach-based-on-micro-ct-fluorescence

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kemik metastazı deneysel bir fare modeli lusiferaz meme tümör hücreleri ifade intrakardiyak teslim edildikten sonra kurulmuştur. Biyoparlaklık ve mikro BT görüntüleme ile tümör gelişimi ve osteolitik lezyon sonuçlandı boyuna takip edildi.

Biyoparlaklık ve Micro CT Görüntüleme Tümör Metastazlari ve osteolitik Lezyonlar İzleme

Diffüz floresans tomografi preklinik için yüksek boyunca nispeten düşük maliyetli ve potansiyel bir yaklaşım...

Kanser BİYOMARKÖRLERİN Yerelleştirme Küçük Hayvanlarda Bilgisayarlı Tomografi eşliğinde Zaman alanı Diffüz Floresans Tomografi

Floresan aracılı tomografi (FMT) ile mikro bilgisayarlı tomografiyi (μBT) birleştiren hibrit görüntüleme için bir protokol tarif ediyoruz. Füzyon ve rekonstrüksiyondan sonra, floresan dağılımının kantitatif ölçümlerini çıkarmak için etkileşimli organ segmentasyonu gerçekleştiriyoruz.

Hibrid uCT-FMT görüntüleme ve görüntü analizi

Mikro bilgisayarlı tomografi kullanarak bir adenokarsinom fare modelinin akciğerlerinde tümör nodülü gelişiminin saptanması için bir yöntem ve bunun zaman içinde ve tedaviye yanıt olarak nodül boyutundaki değişiklikleri izlemek için kullanımını açıklıyoruz. Değerlendirmenin doğruluğu son nokta histolojik kantizasyonu ile doğrulandı.

Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Bleomycin ile fareler Airways önceden Merkezi Klima Orthotopic akciğer kanseri hücre Engraftment verimliliğini artırır

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Burada, C57BL yılında bleomisin endotrakeal enjeksiyonu ile akciğer yaralanması indüksiyonu sonrasında tüm göbek kordonundan elde edilen intravenöz infeksiyon insan mezenkimal stromal hücrelerin Antifibrotik aktivitesini araştırmak için etkili bir yöntem sunuyoruz. /6 fare. Bu protokol, diğer terapinin preklinik testine kolayca uzatılabilir.

Bleomisin endotrakeal enjeksiyon tarafından fare akciğer hasarı indüksiyon

Burada, lezyon tarafında intratrakeal damlatma yoluyla tek taraflı bleomisin ile indüklenen pulmoner fibrozis modelinde ventilasyon bölgelerini ölçmek için mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) kullanan bir protokol sunuyoruz.

Preklinik Modellerde Pulmoner Fibrozisin Gelişmiş Değerlendirmesi için Mikro-BT Kullanılarak Tek Taraflı Akciğer Hacmi Analizi

Bu protokol, pulmoner fibrozisin bleomisin murin modelinde kullanılmak üzere orofaringeal aspirasyon tekniğini göstermektedir.

Pulmoner fibrozisin murin modelinde bleomisinin orofaringeal uygulaması

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Keşfedin, farelerde bleomisin kaynaklı akciğer fibrozisinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi kullanan çoklu görüntüleme yöntemini. Bu teknik, hastalık ilerlemesini ve yeni tedavileri invaziv olmayan şekilde izler.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı (Video) | JoVE Journal

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Daha fazla video keşfet