Name: Monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ECME)-üç boyutlu sistem tabanlı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Keşfedin üç boyutlu ortak kültür yöntemiyle meme kanser hücreleri ve monositler arasındaki iletişimi. Bu teknik, tümör mikroçevresindeki immün hücre etkileşimlerini incelemek için uygun maliyetli bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser CONACyT FONSEC SSA/IMSS/ISSSTE Proje No 233061 Ezequiel M. Fuentes-Pananá için ve Fondo de Apoyo a la Investigación, hastane Infantil de México Federico Gómez (proje numarası HIM-2014-053) tarafından desteklenmiştir. Espinoza-Sánchez NA Programa de Doctorado tr Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autonoma de México (UNAM) ve alınan bursu 231663 CONACYT gelen doktora öğrencisidir. E-S NA, da Meksika Enstitüsü sosyal güvenlik (IMSS) tarafından sağlanan mali destek kabul.

<ol><li>Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+understanding+tumor+hierarchy+and+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: understanding tumor hierarchy and heterogeneity.</a> Medicine (Baltimore). 95 (1), Suppl 1 2-7 (2016).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tumor+microenvironment+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Role of tumor microenvironment in tumorigenesis.</a> J Cancer. 8 (5), 761-773 (2017).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nat Med. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li>
<li>Sica, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization+in+tumour+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization in tumour progression.</a> Semin Cancer Biol. 18 (5), 349-355 (2008).</li>
<li>Mantovani, A., Marchesi, F., Malesci, A., Laghi, L., Allavena, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-associated+macrophages+as+treatment+targets+in+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumour-associated macrophages as treatment targets in oncology.</a> Nat Rev Clin Oncol. , (2017).</li>
<li>Petersen, O. W., Ronnov-Jessen, L., Howlett, A. R., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (19), 9064-9068 (1992).</li>
<li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF-10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> Methods. 30 (3), 256-268 (2003).</li>
<li>Debnath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+apoptosis+in+creating+and+maintaining+luminal+space+within+normal+and+oncogene-expressing+mammary+acini%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The role of apoptosis in creating and maintaining luminal space within normal and oncogene-expressing mammary acini.</a> Cell. 111 (1), 29-40 (2002).</li>
<li>Muthuswamy, S. K., Li, D., Lelievre, S., Bissell, M. J., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11533657">ErbB2, but not ErbB1, reinitiates proliferation and induces luminal repopulation in epithelial acini.</a> Nat Cell Biol. 3 (9), 785-792 (2001).</li>
<li>Sameni, M., Dosescu, J., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+imaging+of+proteolysis%3A+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol Imaging. 2 (3), 159-175 (2003).</li>
<li>Sameni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAME+models+for+4D+live-cell+imaging+of+tumor%3A+microenvironment+interactions+that+impact+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">MAME models for 4D live-cell imaging of tumor: microenvironment interactions that impact malignant progression.</a> J Vis Exp. (60), (2012).</li>
<li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+protease+activity+in+living+cells%3A+from+two+dimensions+to+four+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr Protoc Cell Biol. 4, Chapter 4 Unit 4 20(2008).</li>
<li>Chimal-Ramirez, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MMP1%2C+MMP9%2C+and+COX2+expressions+in+promonocytes+are+induced+by+breast+cancer+cells+and+correlate+with+collagen+degradation%2C+transformation-like+morphological+changes+in+MCF-10A+acini%2C+and+tumor+aggressiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">MMP1, MMP9, and COX2 expressions in promonocytes are induced by breast cancer cells and correlate with collagen degradation, transformation-like morphological changes in MCF-10A acini, and tumor aggressiveness.</a> Biomed Res Int. 2013, 279505(2013).</li>
<li>Espinoza-Sanchez, N. A., Chimal-Ramirez, G. K., Mantilla, A., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta%2C+IL-8%2C+and+Matrix+Metalloproteinases-1%2C+-2%2C+and+-10+Are+Enriched+upon+Monocyte-Breast+Cancer+Cell+Cocultivation+in+a+Matrigel-Based+Three-Dimensional+System%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-1beta, IL-8, and Matrix Metalloproteinases-1, -2, and -10 Are Enriched upon Monocyte-Breast Cancer Cell Cocultivation in a Matrigel-Based Three-Dimensional System.</a> Front Immunol. 8, 205(2017).</li>
<li>Li, Y., Wang, L., Pappan, L., Galliher-Beckley, A., Shi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta+promotes+stemness+and+invasiveness+of+colon+cancer+cells+through+Zeb1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">IL-1beta promotes stemness and invasiveness of colon cancer cells through Zeb1 activation.</a> Mol Cancer. 11, 87(2012).</li>
<li>Gallagher, S., Winston, S. E., Fuller, S. A., Hurrell, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoblotting+and+immunodetection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunoblotting and immunodetection.</a> Curr Protoc Mol Biol. 10, Chapter 10 Unit 10 18(2008).</li>
<li>Troeberg, L., Nagase, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zymography+of+metalloproteinases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Zymography of metalloproteinases.</a> Curr Protoc Protein Sci. 21, Chapter 21 Unit 21 15(2004).</li>
<li>Arevalo-Romero, H., Meza, I., Vallejo-Flores, G., Fuentes-Panana, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+CagA+and+IL-1beta+Promote+the+Epithelial-to-Mesenchymal+Transition+in+a+Nontransformed+Epithelial+Cell+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori CagA and IL-1beta Promote the Epithelial-to-Mesenchymal Transition in a Nontransformed Epithelial Cell Model.</a> Gastroenterol Res Pract. 2016, 4969163(2016).</li>
<li>Reed, J. R., Leon, R. P., Hall, M. K., Schwertfeger, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta+and+fibroblast+growth+factor+receptor+1+cooperate+to+induce+cyclooxygenase-2+during+early+mammary+tumourigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta and fibroblast growth factor receptor 1 cooperate to induce cyclooxygenase-2 during early mammary tumourigenesis.</a> Breast Cancer Res. 11 (2), 21(2009).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+%28EGF%29+and+interleukin+%28IL%29-1beta+synergistically+promote+ERK1%2F2-mediated+invasive+breast+ductal+cancer+cell+migration+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor (EGF) and interleukin (IL)-1beta synergistically promote ERK1/2-mediated invasive breast ductal cancer cell migration and invasion.</a> Mol Cancer. 11, 79(2012).</li>
<li>Grande, S. M., Bannish, G., Fuentes-Panana, E. M., Katz, E., Monroe, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonic+B-cell+and+viral+ITAM+signaling%3A+context+is+everything%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Tonic B-cell and viral ITAM signaling: context is everything.</a> Immunol Rev. 218, 214-234 (2007).</li>
<li>Benton, G., Arnaoutova, I., George, J., Kleinman, H. K., Koblinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel%3A+from+discovery+and+ECM+mimicry+to+assays+and+models+for+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrigel: from discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research.</a> Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).</li>
<li>Worthington, P., Pochan, D. J., Langhans, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+Hydrogels+-+Versatile+Matrices+for+3D+Cell+Culture+in+Cancer+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Peptide Hydrogels - Versatile Matrices for 3D Cell Culture in Cancer Medicine.</a> Front Oncol. 5, 92(2015).</li>
<li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).</li>
<li>Schlaermann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+human+gastric+primary+cell+culture+system+for+modelling+Helicobacter+pylori+infection+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">A novel human gastric primary cell culture system for modelling Helicobacter pylori infection in vitro.</a> Gut. 65 (2), 202-213 (2016).</li>
<li>Pompaiah, M., Bartfeld, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+Organoids%3A+An+Emerging+Model+System+to+Study+Helicobacter+pylori+Pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gastric Organoids: An Emerging Model System to Study Helicobacter pylori Pathogenesis.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 400, 149-168 (2017).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Takasato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directing+human+embryonic+stem+cell+differentiation+towards+a+renal+lineage+generates+a+self-organizing+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Directing human embryonic stem cell differentiation towards a renal lineage generates a self-organizing kidney.</a> Nat Cell Biol. 16 (1), 118-126 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar onlar herhangi bir çıkar çatışması yok bildirin.

Epitel hücreleri bir 3D kayma uyum içinde büyümek ve ECM proteinler ile onların etkileşim doku homeostazı için çok önemli. Monolayers (2D) yetiştirilen hücrelerde tabanlı birçok kanser çalışmaları ve onlar tümör oluşumu ve ilerleme birçok açıdan anlamak için kritik olmasına rağmen monolayers için hücrelerdeyse, ECM dayatır özellikleri özetlemek değil Örnek: sınırlayıcı yayılması, yapışma bağımlı hücre hayatta kalma, apikal demiri polarite, ECM remodeling, hücre farklılaşması, vb Önemlisi, sadece tümör hücreleri ...

Tümör biyolojisi önceden tahmin ettiğimden çok daha karmaşık. Montaj kanıt tümör hücreleri daha fazla sadece bir kontrolsüz Proliferasyona hücrelerinin daha toplu gösterir; Bunun yerine, farklı neoplastik hücreler yüksek organizasyon ve hiyerarşi içinde tümör1görüntüleme farklı işlevleri yerine görünmektedir. Tümör hücreleri dönüştürülmüş olmayan hücreleri ile samimi iletişim de bulunmaktadır: makrofajlar, fibroblastlar, lenfositler, adipositler, endotel hücreleri, diğer hücreler arasında tüm iskele proteinler ve ECM teşkil polisakkaritler daldırılır. Çok sayıda doğrudan ve dolaylı etkileşimleri dönüştürülmüş ve sigara dönüştürülmüş hücreler arasında ve hastalık sonucu2,3üzerinde güçlü bir etkisi giderek artan ECM ile kurulur. BrC belirli olması durumunda, bu TAMs TAMs tümör gelişiminde önemli bir rol oynamaya metastaz ve4 hastalık Rekürrens riski artan bulunmuştur ki göz önünde bulundurarak, BrC hücrelerle iletişim incelemek özellikle önemlidir ,5.
İçi tumoral etkileşimleri ve onların olası sonuçlarını çözümlemek için yeni 3D vitro yaklaşımlar temel alınarak çok daha karmaşık bir microenvironment sağlamak ECM özleri kullanımı geliştirilmiştir tümör biyolojisi, karşılaştırma için gerçeğe daha yakın hangi hücrelerin büyümesine geleneksel monolayer hücre kültürleri için plastik bağlı. Petersen ve Bissell6 nonmalignant ilk modeli sağlanan ve malign meme epitel hücreleri kültürlenir laminin zengini bir membran üzerinde ve nonmalignant insan ayırımcılık 3D organotypic yapılarını açıklamak için ilk idi meme Malign karşılıklarından epitel hücreleri. On yıl sonra model Debnath, Muthuswamy, geliştirilen ve Brugge7,8,9 sağlanan glandüler acini, malign transformasyon sırasında tehlikeye biyolojik yollar aydınlatmak için değerli bir araç gibi büyük acini oluşumu nedeniyle kontrolsüz çoğalması, Engelli hücre polarizasyon kanıtı ve acini Lümen sonucu olarak anoikis, hücre direnç kaybı olarak sıkı kavşak proteinlerin delocalization olarak programlanmış hücre ölümü bir tür içinde oluşur Onlar çevreleyen ECM ayırdığınızda anchorage bağımlı hücreleri. Sameni, Jedeszko ve Sloane modellerinin invasiveness, tümör habis10,11,12başka bir önemli özelliği olan NBD'ye çok görüntüleme proteolitik aktivite hücreler tarafından üzerinde odaklanmıştır. Protein matrisler farklı floresan söndürülür protein yüzeyler ile karışık bu modeller itimat (DQ-jelatin, DQ-kollajen ı ve DQ-kollajen IV), hangi floresan sinyallerini kollajen proteolitik bozulması işaret etmektedir. 3D modelleri Ayrıca kök hücre özellikleri her iki sigara dönüştürdü ve tümör hücreleri, hangi hücreye toplamları, ayrıca olarak adlandırdığı pulcuklarının incelemek için kullanılır, süspansiyon veya ECM gibi proteinler hücre farklılaşması, asimetrik mekanizmaları için sorguya kültürlü olabilir hücre bölünmesi, hücre hücre bağlılık ve hücre hareketliliği13,14. İstila deneyleri sırasında invaziv işlem15chemoattractants hizmet molekülleri tanımlaması ve tümör içsel saldırganlık test izin. Genel olarak, 3D modeller daha yakından normal ve oncogenic doku morfogenez yansıtmak vitro hücre kültürü uygun fiyatlı bir çeşitlendirilmesi temsil eder.
Biz-si olmak ressam anılan modelleri7,10,11, temel 3D cep ortak kültür sistemi her iki insan ticari BrC hücre hatları bilinen agresif potansiyeli (luminal ve triple negatif türleri) ve ilköğretim kullanarak BrC hastalardan explanted hücreleri. Biz ilk geliştirilen bir model saldırgan olmayan (MCF-7) veya agresif (MDA-MB-231) BrC hücreleri U937 monosit bir hücre dışı matriks özü (ECME) ile işbirliği kültürlü neredeydin-tabanlı doğrudan hücre-hücre etkileşimleri izin 3D sistemi. Bu ortak kültürler nasıl etkiledi bu iki hücre soy arasındaki iletişimi genler kanseri saldırgan davranış ile ilgili bir dizi transkripsiyon belirlemek için kullanılmıştır. Bu bir artan üretim ürünlerinden birini, prostaglandin E2 (PGE2), iltihap kanser ilerleme rolü vurgulanacak bir bulgu olan çakıştı Siklooksijenaz-2 (COX-2) transkript önemli bir artış gözlenmiştir. MMP, artan transkripsiyon da bu agresif MDA-MB-231 hücre U937 monosit DQ-kollajen IV içeren kültürde ile birlikte kültürlü ne zaman daha fazla kolajen proteolizis ile korelasyon gözlendi. Belirtmek gerekirse eş kültürlerimiz hücre-hücre etkileşim mekanizmaları kollajen yıkımı için gerekli olan varsayım desteklememektedir. Daha doğrusu iki hücre soy arasındaki iletişimi tarafından salgılanan moleküller aracılı önerdi. Ayrıca, bu ortak kültür deneyleri hasat supernatants glandüler acini sigara dönüştürülmüş MCF-10A hücreleri13tarafından kurulan dağınık çözünür faktörler içeriyordu. Agresif bulundu ve salgılanan birincil BrC hücreleri monosit kemotaktik molekülleri MCP-1, GM-CSF ve RANTES düzeyde yüksek. Böylece, bir 3D kültür hücreleri hücre-hücre etkileşimleri önlemek için hücre kültür ekler ayrı kaldık sıraladı. Bu kültürler BrC hücreleri ve monosit arasında dolaylı iletişim adresine kullanılmıştır. Bu deneyleri, saldırgan olmayan ve agresif ticari BrC hücre hatları ve birincil BrC hücreleri ve üç çeşit insan monosit: ticari U937 ve THP-1 hücreleri ve birincil monosit (PMs) sağlıklı bağış (tüm periferik kandan izole monosit etkin olmayan bir durumda kullanılmıştır) kullanılmıştır. İnflamatuar sitokinlerin IL-1β ve Il-8 artan konsantrasyonları ortak kültür zenginleştirilmiş tespit edildi. Benzer şekilde, bu MMP-1, MMP-2 ve MMP-10 de BrC hücreleri-monosit ortak kültürler ve güçlendiren önceki bulgular14böylece arttı bulundu. Bu makale, birincil BrC hücreleri yalıtım ve 3D kültürlerde test noktası noktası iş akışı temsilcisi sonuçları ile birlikte sunulur. Bu eser belirli yönleri ile tümör biyolojisi sorgulamaya vitro 3D hücre sistemleri sağlar büyük potansiyeli iyi bir örnek teşkil eder.

<table><tbody><tr><td>U937</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>CRL-1593.2</td><td>Monositik hücre hattı/histiyositik lenfoma&nbsp;</td></tr><tr><td>THP-1</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>TIB-202</td><td>Monositik hücre hattı / akut monositik lösemi ve nbsp;</td></tr><tr><td>MCF-10A</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>CRL-10317</td><td>Dönüştürülmemiş meme hücresi hattı</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>HTB-22</td><td>Meme Kanseri Hücre hattı</td></tr><tr><td>T47D</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>HTB-133</td><td>Meme Kanseri Hücre hattı</td></tr><tr><td>HS578T</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>HTB-126</td><td>Meme Kanseri Hücre hattı</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu ATCC&nbsp;</td><td>HTB-26</td><td>Meme Kanseri Hücre hattı</td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Yüksek Glikoz &nbsp;</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>11964-092</td><td>4.5 g/L glikoz</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>11039-021</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik/Antimikotik</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>15240-062</td><td>100 U/mL penisilin, 100 & mikro; g / mL streptomisin ve 0.25 & mikro; g/mL Fungizone</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>GIBCO BRL Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>At serumu&nbsp;</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>16050114</td><td></td></tr><tr><td>%0.05 Tripsin-EDTA 1X</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>25300-062</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X (Fosfat Tamponlu Tuzlu Tuzlu</td><td>GIBCO BRL Yaşam Teknolojileri</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>Epidermal Büyüme Faktörü (EGF)</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15 (1.00mg)</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>I1882-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>H088-5G</td><td></td></tr><tr><td>Kolera toksini Vibrio cholerae</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>C8052-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel ve nbsp;</td><td>Corning Inc</td><td>356237</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) fare sarkomu, hücre dışı matris özütü, -20 ° C'de saklayın; 4 ° C'de kullanılana kadar C; C</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>PeproTech</td><td>300-03</td><td></td></tr>, <tr><td>MCP-1</td>, <td>PeproTech</td><td>300-04</td><td></td></tr>, <tr><td>RANTES</td><td>PeproTech</td><td>300-06</td><td></td></tr>, <tr><td>IL-8</td>, <td>PeproTech</td><td>200-08</td><td></td></tr>, <tr><td>IL-1 ve beta;</td><td>PeproTech</td><td>200-01B</td><td></td></tr><tr><td>Kristalviyole Hycel</td><td>M&eacute; xico</td><td>541</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Transwell geçirgen destekler (ekler)</td> <td>Corning Inc</td><td>3422</td><td>6,5 mm çap, 8 ve mikro; M gözenek boyutu/24 oyuklu plakalar&nbsp;</td></tr><tr><td>Transwell geçirgen destekler (ekler)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>140620</td><td>6,5 mm çap, 0,4 & M gözenek boyutu/24 oyuklu plakalar&nbsp;</td></tr><tr><td>Monosit İzolasyon Kiti II İnsan&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-153</td><td></td></tr><tr><td>LS Sütunları</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Sitokin / Kemokin Manyetik Boncuk Panel Kiti 96 Kuyulu Plaka Testi</td><td>EMD Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td></td></tr><tr><td>Magpix, xPonent yazılımı ile (lazer tabanlı floresan analitik test cihazları)</td><td>Luminex Corporation</td><td>40-072</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Tek kapaklı hazneli sürgü (8 kuyu)</td> <td>Nalge Nunc International</td><td>177402</td><td></td></tr><tr><td>Cam alt mikro kuyu 35mm petri ve nbsp; bulaşıklar</td><td>MatTek Corp.</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr></tbody></table>

monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ecme)-üç boyutlu sistem tabanlı

Analyzing the Communication Between Monocytes and Primary Breast Cancer Cells in an Extracellular Matrix Extract (ECME)-based Three-dimensional System

Hücre dışı Matriks (ECM) gömülü, normal ve neoplastik epitel hücreleri hematopoetik ve sigara hematopoetik hücreler ile böylece büyük ölçüde etkileyen normal doku homeostazı ve hastalık sonucu yakından iletişim kurmak. Meme Kanserinde tümör ilişkili makrofajlar (TAMs) hastalık ilerlemesi, metastaz ve yineleme kritik bir rol oynamaktadır; Bu nedenle, monosit chemoattraction tümör microenvironment ve tümör hücreleri ile onların etkileşim mekanizmaları anlama hastalık kontrol etmek önemlidir. Burada, insan meme kanseri (BrC) hücreleri ve insan monosit üç boyutlu (3D) ortak kültür sistemi ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. BrC hücreler üretilen düzenlenmiş etkinleştirme üzerinde Bazal düzeyi yüksek, normal T hücreli ifade ve (RANTES) salgılanan, monosit chemoattractant protein-1 (MCP-1) ve granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (G-CSF), monosit ile ortak kültür iken Pro-inflamatuar sitokinlerin İnterlökin (Il) -1 beta (IL-1β) ve Il-8 matriks metalloproteinazların (MMP) -1, MMP-2 ve MMP-10 ile birlikte zenginleştirilmiş. Bu tümör stroma microenvironment direnci anoikis MCF-10A 3D acini benzeri yapıları, monosit chemoattraction ve agresif BrC hücreleri işgali için terfi. Burada sunulan protokollerini Intra-tümör iletişim çalışmaya uygun fiyatlı alternatif sunmak ve tümör biyolojisi tümör için ilgili belirli özellikleri sorgulamaya vitro 3D hücre sistemleri sağlar büyük potansiyel bir örnektir saldırganlık.

Morfolojik analiz 3D kültürlerde BrC hücre:
Düşük ve yüksek yoğunlukları, 3D kültürlerde büyüyen birincil BrC hücre morfolojisi 5 gün içinde incelenmiştir. İlk 48 saat boyunca hücreleri ECME için uygun ve düşük yoğunluklu korumak. Zaman bu noktada, bu açıkça hücreleri uzun bir iğ benzeri şekli, bazı iki veya daha fazla uzun sitoplazmik projeksiyonlar ile ve belirgin hücre-hücre kişiler belli etmeden mevcut takdi...

Burada, doğrudan/dolaylı ilişkileri monosit ve kollajen bozulması, bağışıklık hücre işe alım, hücre gibi sonuçlar ile çalışma olarak birincil meme kanser hücrelerinin de Morfoloji çözümlenecek bir üç boyutlu kültür yöntemi açıklamak işgali ve promosyon inflamasyon kanserle ilgili.

Monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ECME)-üç boyutlu sistem tabanlı

Embedded in the extracellular matrix (ECM), normal and neoplastic epithelial cells intimately communicate with hematopoietic and non-hematopoietic cells, ...

Bu protokolün genel amacı, üç boyutlu bir ko-kültür sisteminde primer meme kanseri hücreleri ve monositler arasındaki doğrudan ve dolaylı iletişimi incelemektir. Bu yöntem, meme kanseri alanının enflamatuar mikro ortamında, bağışıklık hücrelerinin nasıl yeniden derecelendirildiği ve aktive edildiği, bu hücrelerin tümör enflamatuar mikro çevresini sürdürmeye nasıl yardımcı olduğu ve bu mikro çevrenin tümör hücresi istilasını nasıl kolaylaştırdığı gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tümör içi iletişimi incelemek için uygun fiyatlı bir alternatif sunması ve tümör biyolojisinin spesifik özelliklerini sorgulamak için in vitro, 3 boyutlu hücre sistemlerinin potansiyelini göstermesidir.Özellikle tümör saldırganlığı ile ilgili olanlar. Başlamak için, yüzde 10 FBS ve yüzde 1 antibiyotik antimikotik ile desteklenmiş 10 mililitre RPMI1640 ortamında 10 ila altıncı U937 ve THP1 monositlerini iki kez yetiştirin. Ayrıca takviye edilmiş DMEMF12 ortamında taze PM'ler yetiştirin.Hücreleri 37 santigrat derecede nemlendirilmiş yüzde beş karbondioksit ortamında inkübe edin. Plaka, karşılık gelen ortamlarının oyuğu başına bir mililitrede dört kez 10 ila beş

analyzing-communication-between-monocytes-primary-breast-cancer-cells

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Biz onların mikroçevresindeki meme tümör hücreleri ve diğer hücreler arasındaki etkileşimleri gerçek zamanlı olarak canlı hücre görüntüleme için 3D kokültürü modeli geliştirdik bir invaziv fenotip darbe ilerlemesi. Bu modeller invaziv karıştığı parakrin kaynaklı proteolitik, kemokin / sitokin ve kinaz yolları hedefleyen ilaçlar için klinik öncesi ekranlar olarak hizmet verebilir.

Tümör 4D Canlı hücre Görüntüleme için MAME Modeller: Mikroçevre etkileşimler olduğunu Etki Malign İlerlemesi

Basit bir metodu ile ilişkili epitel hücreleri üzerindeki doku fibroblastlann etkileri analiz etmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, üç boyutlu bir doku kültürü kombinasyonu 3D izole sonra hücrelerin analizi kolaylaştırabilir. Tekniği tümör hücreleri üzerindeki tümör-stroma etkileri ile ilişkili sistematik çalışma izin veren, habis potansiyeli değişen hücreleri için de geçerlidir.

Üç boyutlu Karışık-hücre Sfero Co-kültürden Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Bu videoda, hücre dışı matris özütü (ECME) tabanlı bir ortamda etkileşimlerini incelemek için meme kanseri hücrelerinin monositlerle 3D ko-kültürü açıklanmaktadır. Bu yöntem, kollajen bozulması, bağışıklık hücresi alımı ve hücre istilası gibi belirli özelliklerin incelenmesine yardımcı olur.

Doğrudan Etkileşim ile 3D Ko-kültür: Etkileşimlerini İncelemek için Kanser Hücrelerini Monositlerle Birlikte Kültürlemek

Standart yöntemlerle olarak hücreler, fizyolojik bir ortam üzerinden alınır ve bir çanak plastik yüzeyi üzerinde büyütülür. Birincil insan kemik iliği hücrelerinin davranışını incelemek için biz hücreler doku yerel mikro yansıtan koşullar altında yetiştirilen bir 3-D kültür sistemi oluşturulur.

İlköğretim İnsan Kemik İliği ve Maligniteleri Eğitim Bir Üç boyutlu Doku Kültürü Modeli

Bu makalede, meme kanseri hücre istilasını ölçmek için üç boyutlu (3D) tahlillerin kullanımı için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özellikle, biz hücreleri istila oluşur membran bütünlüğünün kaybı incelemek için bu tür deneyleri kurmak için gerekli prosedürleri, ölçümlerini ve veri analizi gibi yöntemleri tartışmak.

Üç boyutlu (3D) Modeli Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Kantitasyonu

Oksijen ve besin sağlamak için bir perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanılarak kültürlenebilen 3D meme kanseri vekilleri oluşturmak için bir yöntem gösteriyoruz. Büyümeyi takiben, vekiller sabitlenir ve ilgilenilen parametrelerin değerlendirilmesi için parafine işlenir. Böyle bir parametrenin, hücre yoğunluğunun değerlendirilmesi açıklanmaktadır.

Hazırlama ve Analizler<em&gt; İn Vitro</em&gt; Üç Boyutlu Meme Kanseri Suretler

Tümör mikroçevresini (TME) taklit etmek için geçirgen bir mikro gözenekli membran ekini uyarladık. Model, karışık bir hücre kültüründen oluşur, floresan etiketleme veya hücre sıralama kullanmadan yüksek oranda zenginleştirilmiş bireysel hücre popülasyonlarının basitleştirilmiş üretimine izin verir ve normal veya stres koşulları altında TME içinde hücreler arası iletişimin incelenmesine izin verir.

Tümör mikroçevresinin A Mimik: Hücreler arası İletişim Zenginleştirilmiş hücre popülasyonları oluşturma ve incelenmesi için Basit Bir Yöntem

Burada, hücre dışı Matriks (ECM) ifade ve duktal Morfoloji araştırmak için meme dokuları bütün, olduğu gibi fare yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut. Fare #4 karın bezleri tarafsız tampon formalin içinde sabit kesitli ve ECM proteinler için immünhistokimya kullanarak lekeli 8-10 hafta eski kadın nulliparous fareler, elde.

Sağlam, Bütün fare meme dokuları yalıtım hücre dışı matriks ifade ve bezi Morfoloji analizi için

Burada sunulan yöntemin amacı, mikroortam mikrodiziler (Mema) nasıl imal edilebilir ve kültürlü hücrelerin fenotürü üzerinde basit Kombinatoryal mikroortamlar binlerce etkisini sorgulamak için kullanılan göstermek için.

Kanser hücresel Phenotypes üzerinde Mikroçevresel etki Interrogate için Microdiziler kullanma

Bu protokol, raf malzemeleri ile birincil insan meme dokusu kullanılarak meme kanserini incelemek için bir in vitro mikrofizyolojik sistemin inşasını açıklar.

Mikrofizyolojik Sistem Kullanarak İnsan Meme Dokusunda Meme Kanseri Modellemesi

Keşfedin üç boyutlu ortak kültür yöntemiyle meme kanser hücreleri ve monositler arasındaki iletişimi. Bu teknik, tümör mikroçevresindeki immün hücre etkileşimlerini incelemek için uygun maliyetli bir alternatif sunar.

Monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ECME)-üç boyutlu sistem tabanlı (Video) | JoVE Journal

Monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ECME)-üç boyutlu sistem tabanlı

Daha fazla video keşfet