Name: Bir roman In Vitro canlı görüntüleme Astrocyte tahlil-aracılı fagositoz kullanarak pH göstergesi Birleşik Synaptosomes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-05T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Öğrenin astrositlerin fagositoz kapasitesini ölçmek için canlı görüntüleme yöntemini. pH göstergeli sinaptosomlar kullanılarak gerçek zamanlı içerme ve parçalanma kinetiği analiz edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Yeon-Joo Jung onun deneysel destek için synaptosome arınma ve Jungjoo Park sırasında synaptosomes PS pozlama ile yansımaları için teşekkür ederiz. Buna ek olarak, tüm üyelerinde Chung'ın laboratuvar yararlı tartışma için teşekkür ederiz. Bu eser Kore (NMG) hibe Kore hükümeti (MSIP) (NMK-2016M3C7A1905391 ve NATO Mukabele Gücü-2016R1C1B3006969) tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir (W. S. C).

<ol><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+Assemble+Thalamocortical+Synapses+by+Bridging+NRX1alpha+and+NL1+via+Hevin%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Astrocytes Assemble Thalamocortical Synapses by Bridging NRX1alpha and NL1 via Hevin.</a> Cell. 164 (1-2), 183-196 (2016).</li>
<li>Allen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+glypicans+4+and+6+promote+formation+of+excitatory+synapses+via+GluA1+AMPA+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Astrocyte glypicans 4 and 6 promote formation of excitatory synapses via GluA1 AMPA receptors.</a> Nature. 486 (7403), 410-414 (2012).</li>
<li>Xu, J., Xiao, N., Xia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombospondin+1+accelerates+synaptogenesis+in+hippocampal+neurons+through+neuroligin+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Thrombospondin 1 accelerates synaptogenesis in hippocampal neurons through neuroligin 1.</a> Nat Neurosci. 13 (1), 22-24 (2010).</li>
<li>Chung, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+mediate+synapse+elimination+through+MEGF10+and+MERTK+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Astrocytes mediate synapse elimination through MEGF10 and MERTK pathways.</a> Nature. 504 (7480), 394-400 (2013).</li>
<li>Schafer, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+sculpt+postnatal+neural+circuits+in+an+activity+and+complement-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia sculpt postnatal neural circuits in an activity and complement-dependent manner.</a> Neuron. 74 (4), 691-705 (2012).</li>
<li>Ma, Z., Stork, T., Bergles, D. E., Freeman, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromodulators+signal+through+astrocytes+to+alter+neural+circuit+activity+and+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuromodulators signal through astrocytes to alter neural circuit activity and behaviour.</a> Nature. 539 (7629), 428-432 (2016).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Iram, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Megf10+Is+a+Receptor+for+C1Q+That+Mediates+Clearance+of+Apoptotic+Cells+by+Astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Megf10 Is a Receptor for C1Q That Mediates Clearance of Apoptotic Cells by Astrocytes.</a> J Neurosci. 36 (19), 5185-5192 (2016).</li>
<li>Tasdemir-Yilmaz, O. E., Freeman, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+engage+unique+molecular+programs+to+engulf+pruned+neuronal+debris+from+distinct+subsets+of+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Astrocytes engage unique molecular programs to engulf pruned neuronal debris from distinct subsets of neurons.</a> Genes Dev. 28 (1), 20-33 (2014).</li>
<li>Jones, R. S., Minogue, A. M., Connor, T. J., Lynch, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta-induced+astrocytic+phagocytosis+is+mediated+by+CD36%2C+CD47+and+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta-induced astrocytic phagocytosis is mediated by CD36, CD47 and RAGE.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 8 (1), 301-311 (2013).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+lipid+sensing+sustains+the+microglial+response+in+an+Alzheimer%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TREM2 lipid sensing sustains the microglial response in an Alzheimer's disease model.</a> Cell. 160 (6), 1061-1071 (2015).</li>
<li>Sekar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schizophrenia+risk+from+complex+variation+of+complement+component+4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Schizophrenia risk from complex variation of complement component 4.</a> Nature. 530 (7589), 177-183 (2016).</li>
<li>Hong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+and+microglia+mediate+early+synapse+loss+in+Alzheimer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complement and microglia mediate early synapse loss in Alzheimer mouse models.</a> Science. 352 (6286), 712-716 (2016).</li>
<li>Chung, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+allele-dependent+role+for+APOE+in+controlling+the+rate+of+synapse+pruning+by+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Novel allele-dependent role for APOE in controlling the rate of synapse pruning by astrocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (36), 10186-10191 (2016).</li>
<li>Purice, M. D., Speese, S. D., Logan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+glial+clearance+of+degenerating+axons+in+aged+Drosophila+is+due+to+reduced+PI3K%2FDraper+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Delayed glial clearance of degenerating axons in aged Drosophila is due to reduced PI3K/Draper activity.</a> Nat Commun. 7, 12871(2016).</li>
<li>Loov, C., Mitchell, C. H., Simonsson, M., Erlandsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+degradation+in+phagocytic+astrocytes+can+be+enhanced+by+lysosomal+acidification%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Slow degradation in phagocytic astrocytes can be enhanced by lysosomal acidification.</a> Glia. , (2015).</li>
<li>Xiao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+astrocytic+lysosome+biogenesis+facilitates+Abeta+clearance+and+attenuates+amyloid+plaque+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhancing astrocytic lysosome biogenesis facilitates Abeta clearance and attenuates amyloid plaque pathogenesis.</a> J Neurosci. 34 (29), 9607-9620 (2014).</li>
<li>Lu, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+degeneration+induces+glial+responses+through+Draper-TRAF4-JNK+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Axon degeneration induces glial responses through Draper-TRAF4-JNK signalling.</a> Nat Commun. 8, 14355(2017).</li>
<li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3 (11), 1718-1728 (2008).</li>
<li>Stigliani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia+re-sealed+particles+freshly+prepared+from+adult+rat+brain+are+competent+for+exocytotic+release+of+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Glia re-sealed particles freshly prepared from adult rat brain are competent for exocytotic release of glutamate.</a> J Neurochem. 96 (3), 656-668 (2006).</li>
<li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptome+database+for+astrocytes%2C+neurons%2C+and+oligodendrocytes%3A+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J Neurosci. 28 (1), 264-278 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu makalede, biz yöntemleri arıtılmış gliyal hücreler ve pH göstergesi Birleşik synaptosomes kullanarak uzun vadeli bir canlı görüntüleme vitro fagositoz tahlil için mevcut. Biz microglia ile karşılaştırıldığında göstermek astrocytes synaptosomes fagositoz sırasında farklı engulfment ve yıkımı kapasitesine sahip. Buna ek olarak, bizim veri köprüleme moleküllerin GAS6, proteinler ve MEGE8 içeren astrocyte salgıladığı faktörler, verimli PS-bağımlı fagositoz beyinde gliyal hücreler için gerekli olduğunu göstermekte...

Beyinde telaşlı olmayan hücrelere başvuruda bulunan, gliyal hücreler merkezi sinir sistemi (MSS) büyük hücre tipinde vardır. Daha önce gliyal hücreler esas olarak nöronal hayatta kalma ve Bazal sinaptik özellikleri korumak pasif rol oynarlar sadece destekleyen hücreler olarak kabul edildi. Ancak, kanıt ortaya çıkan gliyal hücreler Nörobiyoloji synapse oluşumu1,2,3 ve synapse arabuluculuk beyin homeostazı korumak gibi çeşitli yönleriyle daha aktif rol oynarlar ortaya koymuştur Eleme4,5ve modülasyonlu sinaptik plastisite6,7. MSS gliyal hücreler astrocytes, microglia ve oligodendrocytes içerir. Bu hücreler, astrocytes ve microglia arasında sinapslarda4,5, apoptotik hücreler8, sinirsel enkaz9ve patojenik proteinler, amiloid beta gibi içine çeken fagositik oynamamızgerektiğini gösterilmiştir plaklar10,11. Gelişmekte olan beyin astrocytes dorsal yanal geniculate çekirdek (dLGN) ile MERTK ve MEGF10 bağımlı fagositoz4sinapslarda ortadan kaldırmak. Benzer şekilde, microglia da C1q kaplı sinapslarda ile klasik Kompleman art arda5gelişim dönemleri sırasında ortadan. İlginçtir, ekranlarda synapse budama bulunan çeşitli nörolojik bozukluklar başlatanlar biri olabilir sürülmüştür. Örneğin, tamamlayıcı bileşenindeki 4 mutasyonlar (C4), Kompleman aracılı synapse budama microglia tarafından artırır, güçlü insanlar12şizofreni yaygınlığı ile ilişkili olan gösterilmiştir. Son bir kağıt da klasik Kompleman yolu hyperactivated reklam başlatma aşamasında olduğunu ve bu hastalığı13erken synapse kaybına neden olmaktadır göstermiştir.
Microglia-aracılı fagositoz ile karşılaştırıldığında, astrocyte-aracılı fagositoz başlama ve ilerleme çeşitli nörolojik bozukluk olup katkıda bulunur o kadar net değildir. Ancak, son bir kağıt astrocytes tarafından normal synapse budama hızını değiştiren faktörler beyin homeostazı bozabilir ve reklam duyarlılık ve patoloji14' e katkıda öneriyor. Synapse budama astrocytes tarafından oranı güçlü güçlü artırılması oranı ve reklam (ApoE4) için bir risk alleli hızını önemli ölçüde azaltmayı ApoE İzomerler tarafından reklam (ApoE2) için koruyucu bir gen ile kontrol edilir. Ayrıca, ApoE4 ifade transgenik fareler denetim veya ApoE2 fareler14daha fazla sinaptik C1q birikmiş. Bu astrocyte-aracılı fagositoz erken engelliler bu verileri göstermektedir reklam beyin mikroglial Kompleman aracılı fagositoz, sinaptik bozulma sürüş etkinleştirir senescent C1q kaplı sinapslarda/sinaptik enkaz birikimi neden . Astrocytes ApoE4 taşıyıcıları olarak Engelli fagositik kapasite Ayrıca reklam etkilenen beynindeki beta amiloid plaklar kontrolsüz birikimi için katkıda bulunabilir.
Buna ek olarak, gliyal yaşlı Drosophila beyin hücrelerinde fagositik kapasitelerini Draper, sinapslarda phagocytosing için astrocytes kullanan Megf10 homolog azalmış çeviri nedeniyle kaybeder gösterilmiştir. Draper düzeyleri geri kurtarıldı verimli bir şekilde bu yaşlanma indüklenen gösteren benzer ölçüde bu kadar genç beyin, yaşlı beyindeki hasarlı aksonal enkaz temizlenmiş gliyal hücreler fagositik kapasite değişiklikler fagositik kapasite astrocytes beyin homeostazı15kesintileri için katkıda bulunabilir.
Bu yeni bulgulara dayanarak, astrocytes fagositik kapasite oransal önlemek ve çeşitli sinir hastalıkları tedavi için çekici bir tedavi stratejisi olabilir. Bu bağlamda, asidik nano tanecikleri16 ile organellerin asitleştirme inducing ve transkripsiyon faktörü EB (TFEB), hangi-ebilmek arttırmak overexpressing astrocytes, örneğin, fagositik kapasite geliştirmek için çeşitli girişimler olmuştur lysosome Biyogenez17. Bu girişimlerine rağmen nasıl astrocytes ve mikroglial hücreleri fagositik onların Kinetik farklı ve olup olmadığını biz azaltmak veya artırmak çeşitli hastalıklarında fagositik kapasitelerini hala belli değil.
Bu yazıda, biz astrocytes fagositik kapasite gerçek zamanlı olarak algılamak için bir roman vitro tahlil mevcut. Verileri farklı Kinetik engulfment ve yıkımı astrocytes ve microglia göster. Salgılanan faktörlerden yola çıkarak astrocytes içeren astrocyte şartına orta (ACM), astrocytes ve microglia etkili fagositoz için esastır. Ayrıca, Megf10, astrocytes ve homolog Ced-1 ve Draper, fagositik reseptör çalış önemli roller astrocyte-aracılı fagositoz8,18.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Sinapttozom saflaştırma</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE sağlık yaşam bilimleri</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Başlangıç Bradford Protein Test Kiti 2</td><td>BIO-RAD</td><td>5000202</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>pH indikatörü konjugasyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>LPS çözeltisi</td><td></td><td></td>DMSO100</tr><tr><td>pHrodo kırmızısı, süksinimidil ester</td><td>Molecula probları</td><td>P36600</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>İmmünopanning</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10X Earle' s dengeli tuz çözeltisi (EBSS)</td> <td>Sigma</td><td>E7510</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Bovogen</td><td>BSA025</td><td></td></tr><tr><td>Deoksirebonukaz 1 (DNase)</td> <td>Worthington</td><td>Is002007</td><td></td></tr> <tr><td>(DMEM)</td> <td>Gibco</td><td>11960-044</td><td></td></tr> <tr><td>(dPBS)</td> <td>Welgene</td><td>LB001-02</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td> <td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Griffonia Simplicifolia Lektin(BSL-1)</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>L-1100</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgG + IgM (H + L)</td> <td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-005-044</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgM (&mu; -zincir)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-005-020</td><td></td></tr><tr><td>Heparin bağlayıcı epidermal büyüme faktörü</td><td>Sigma</td><td>E4643</td><td></td></tr><tr><td>İnsan HepaCAM antikoru</td><td>R& D sistemleri</td><td>MAB4108</td><td></td></tr><tr><td>İntegrin beta 5 monoklonal antikor (KN52)</td> <td>eBioscience</td><td>14-0497-82</td><td></td></tr><tr><td>L-sistein</td><td>Sigma</td><td>C7880</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamat</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>N-asetil-L-site (NAC)</td> <td>Sigma</td><td>A8199</td><td></td></tr><tr><td>Nörobazal medya</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>O4 hibridoma süpernatant(fare IgM)</td><td>Bansal ve ark.23</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>Is003126</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Pluristrainer 20 & mu; m</td><td>PluriSelect</td><td>43-50020-03</td><td></td></tr><tr><td>Poli-D-lizin</td><td>Sigma</td><td>P6407</td><td></td></tr><tr><td>Progesteron</td><td>Sigma</td><td>P8783</td><td></td></tr><tr><td>Putresin dihidroklorür</td><td>Sigma</td><td>P5780</td><td></td></tr><tr><td>Saflaştırılmış sıçan anti-fare CD45</td><td>BD Pharmingen</td><td>550539</td><td></td></tr><tr><td>Saflaştırılmış fare sıçan önleyici CD45</td><td>BD Pharmingen</td><td>554875</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum selenit</td><td>Sigma</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Transferrin</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Sigma</td><td>T9935</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin inhibitörü</td><td>Worthington</td><td>LS003086</td><td></td></tr><tr><td>Ultra berrak tüp (Tüp, İnce Duvar, Ultra Berrak)</td><td>Beckman Coulter</td><td>344059</td><td></td></tr><tr><td>Collect IP-ACM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr>Omega Membranlı <td>PALL</td><td>MAP010C37</td><td></td>Advance <td>Santrifüj Cihazları (30k)</td>PALL</tr><tr><td>Omega Membranlı Macrosep Advance Santrifüj Cihazları (30k)</td><td>PALL</td><td>MAP030C37</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Fagositoz canlı görüntüleme testi</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Juli aşaması</td><td>NanoEntek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Time Series Analyzer V3 eklentileri</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/time-series.html</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir roman in vitro canlı görüntüleme astrocyte tahlil-aracılı fagositoz kullanarak ph göstergesi birleşik synaptosomes

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

Astrocytes beyin büyük hücre türü ve sinapslarda ve kan damarları doğrudan bağlantı kurun. Ne kadar büyük bağışıklık hücreleri ve sadece fagositler beyin mikroglial hücreleri olarak, son yıllarda yapılan çalışmalarda astrocytes da gelişimsel synapse eleme ve gümrükleme gibi çeşitli fagositik süreçlerde katılmak göstermiştir Alzheimer hastalığı (Ah) içinde beta amiloid plaklar. Bu bulgular rağmen astrocyte engulfment verimliliğini ve yıkımı hedeflerinin microglia ile karşılaştırıldığında belirsizdir. Çoğunlukla astrocyte ve microglia aracılı fagositoz Kinetik kolayca karşılaştırılabilir bir tahlil sistemi olmaması nedeniyle bilgi bu olmaması. Bu hedefe ulaşmak için saf astrocytes ve microglia fagositik kapasitesini değerlendirmek için uzun vadeli bir canlı görüntüleme vitro fagositoz tahlil geliştirdik. Bu tahlil, engulfment ve yıkımı gerçek zamanlı algılama gibi organellerin asidik organelleri parlak kırmızı Floresans çıkaran pH göstergesi Birleşik synaptosomes, kullanarak mümkündür. Bizim roman tahlil fagositoz canlı görüntüleme ile basit ve etkili olarak algılanmasını sağlar. Buna ek olarak, bu vitro fagositoz tahlil bir tarama platform olarak kimyasallar ve artırabilir veya astrocytes fagositik kapasite inhibe bileşikler tanımlamak için kullanılabilir. Sinaptik budama arıza ve patojenik protein birikimine ruhsal bozukluklar veya nörodejeneratif hastalıklar neden gösterilmiştir gibi kimyasallar ve gliyal hücreler fagositik kapasite modüle bileşikler çeşitli tedavisinde yararlı olmalıdır nörolojik bozukluklar.

Bu vitro fagositoz assay olarak uzun vadeli canlı görüntüleme, biz üzerinden % 23 degrade çözüm ve % 10 degrade çözüm arasında degrade çözümde ayrı kaldık ultrasantrifüj () tarafından Yetişkin fare beyin homogenates synaptosomes kullanılan Şekil 3). Hazırlık sonra telkin onların işlevini kaybetti ve PS reseptörleri astrocytes ve microglia tarafından tanınan PS onların dış membran (şekil 4), synaptosomes maruz. Astrocytes...

Bu iletişim kuralı bir vitro canlı görüntüleme fagositoz tahlil astrocytes fagositik kapasitesini ölçmek için sunar. Arıtılmış sıçan astrocytes ve microglia pH göstergesi Birleşik synaptosomes ile birlikte kullanılır. Bu yöntem gerçek zamanlı engulfment ve yıkımı Kinetik algılayabilir ve astrocyte fagositoz oransal faktörleri tanımlamak için uygun tarama platformu sağlar.

Bir roman In Vitro canlı görüntüleme Astrocyte tahlil-aracılı fagositoz kullanarak pH göstergesi Birleşik Synaptosomes

Astrocytes are the major cell type in the brain and directly contact synapses and blood vessels. Although microglial cells have been considered the major ...

Bu deneyin genel amacı, pH indikatörü konjuge sinaptozomların fagositozunun in vitro canlı görüntülenmesi yoluyla astrositler ve mikroglia gibi glial hücrelerin gerçek zamanlı yutulma ve bozunma kinetiğini tespit etmektir. Bu yöntem, sağlıklı ve hastalıklı beyinlerde glial hücre fagositozunun nasıl düzenlendiği gibi sinirbilim alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, in vitro kültürlenmiş hücrelerin canlı görüntülenmesi yoluyla glial hücrelerin gerçek zamanlı fagositik kinetiğini etkin bir şekilde izleyebilmemiz ve analiz edebilmemizdir.Bu yöntem aynı zamanda glial hücrelerin yutulma ve bozunma kapasitesini düzenleyen faktörleri ve bileşikleri taramak için de kullanılabilir. Çözülmüş sinaptozom örneklerini 21.092 G ve dört santigrat derecede üç ila dört dakika santrifüjleyerek başlayın. Süpernatanları aspire ettikten sonra, peletleri tüp başına 200 mikrolitre 0.1 molar sodyum karbonat içinde yeniden süspanse edin ve iyice karıştırıldıktan sonra her numuneye iki mikrolitre pH indikatörü ekleyin.Hafif bir girdaptan sonra, çözeltileri alüminyum folyo kapaklarla ışıktan koruyun ve numuneleri oda sıcaklığında iki saat boyunca hafif çalkala

a-novel-vitro-live-imaging-assay-astrocyte-mediated-phagocytosis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokol, ayrışmış nöronal kültür ve immünsitokimya kullanarak beyin bölümlerinde de sinaps sayısını ölçmek için nasıl ayrıntıları. Kompartman-spesifik antikorların kullanarak, presinaptik terminalleri yanı sıra postsinaptik uzmanlık siteleri etiket. Biz bu belirteçler tarafından oluşturulan sinyaller arasındaki sinaps ko noktaları olarak tanımlar.

Sinapslar miktarının: Synapse Numarası ölçmek için bir İmmünositokimya tabanlı Testi

Bu videoda, indüklenmiş pluripotent kök hücreler kullanarak nöroblastom için mikroglial fagositoz testini gerçekleştiriyoruz. Test, nörodejeneratif hastalıklarda mikroglial fonksiyonun bozulmasını değerlendirmeye yardımcı olur.

Mikroglial Fagositoz Testi: iPSC Makrofajları Kullanılarak Nöroblastom Hücreleri için Mikroglial Fagositoz Modeli Oluşturmak İçin İn Vitro Test

Bu videoda, saflaştırılmış astrositlerin fagositik kapasitesini canlı görüntüleme testi ile in vitro olarak değerlendiriyoruz. Test, astrositlerin fagositik kapasitesini artırabilen veya inhibe edebilen kimyasal bileşikleri tanımlamak için etkili bir tarama platformu görevi görür.

İn Vitro Fagositoz Testi: Gerçek Zamanlı Astrosit Aracılı Sinaptozom Fagositozunu İncelemek İçin Canlı Görüntüleme Tabanlı Bir Yöntem

Kaynak: Funes, S., et. al., İnsan Mikroglia Benzeri Hücreler: İnsan Sinaptozomları Kullanılarak İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden ve İn Vitro Canlı Hücre Fagositoz Testinden Farklılaşma. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, pH'a duyarlı floresan boya etiketli sinaptozomlar kullanarak mikroglia benzeri hücrelerin fagositik kapasitesini incelemek için bir testi göstermektedir.

İnsan Sinaptozomları Kullanılarak Mikroglia Benzeri Hücrelerin Canlı Hücre Fagositoz Testi

Burada astrositik G-protein bağlı reseptörlerin plastisite çalışma için nöronlarda homeostatik plastisite indüklemek için kullanılan protokol bir uyarlama tarif eder. En son astrositik grubu çocuk farelerde I mGluR'leri değişiklikleri incelemek için kullanılan yöntem, in situ ve in vivo olarak erişkin farelerden dokuda çeşitli astrositik GPCRs ölçekleme ölçülmesi ve astrositik reseptörlerinin duyarlılığının daha iyi takdir elde etmek için uygulanabilir nöronal aktivite değişikliklere.

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

Mikroglia hücre dışı bir ortamda malzemenin fagosite veya yutmak için yüksek bir kapasitesi olan merkezi sinir sistemi (CNS) içinde yerleşik bağışıklık hücreleri bulunmaktadır. Burada, sinaptik bileşenlerin mikroglia aracılı yutulmasına görselleştirme ve ölçmek için, genel olarak, uygun ve güvenilir olup, kantitatif analiz tarif edilmektedir.

Bir yutulma Deneyi: CNS Fagositler ve nöronlar arasındaki etkileşimi değerlendirmek için bir protokol

doku homeostazında ve yetersiz fagositik fonksiyonunun korunması patolojisinde dahil olmuştur için mikrogliyal fagositoz kritiktir. Ancak, in vivo mikroglia fonksiyonunu değerlendirmede teknik olarak zordur. Biz tam izleme ve fizyolojik bir ortamda mikroglia fagositik potansiyelini ölçülmesi için basit ama güçlü bir teknik geliştirdiler.

Retina Mikroglial Fagositik Fonksiyonu değerlendirilmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt; A Akış Sitometri bazlı analiz kullamlarak

Burada, organellerin hücre içi naklini ve murine astrositlerinde plazma membran proteinlerinin ticaretini görselleştirmek için in vitro canlı görüntüleme yöntemini açıklıyoruz. Bu protokol aynı zamanda kargo taşımacılığı güzergahları ve kinetik belirlemek için bir görüntü analizi metodolojisi sunar.

Astrositlerde Organeller ve Diğer Kargoların Hücre İçi Taşınmasının Görselleştirilmesi ve Analizi

Nörodejeneratif hastalıklar düzensiz mikroglia fonksiyonları ile ilişkilidir. Bu makalede, iPSC-makrofajlar tarafından nöroblastom hücrelerinin fagositozunun in vitro bir tahlili özetlenen bir makale verilmiştir. Nicel mikroskopi okumaları hem canlı hücre zaman atlamalı görüntüleme hem de sabit hücreli yüksek içerikli görüntüleme için açıklanmıştır.

İPSC-Makrofajlar tarafından Ölü Nöroblastom Hücrelerinin Fagositozu için İn vitro Nicel Görüntüleme Tahlili

Bu protokol, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (iPSC'ler) in vitro deney için mikroglia benzeri hücrelere farklılaşma sürecini açıklar. Ayrıca, canlı hücre görüntüleme sistemlerini kullanarak in vitro fagositoz testleri için bir substrat olarak kullanılabilecek iPSC kaynaklı alt motor nöronlardan insan sinaptozomları üretmek için ayrıntılı bir prosedür de sunuyoruz.

İnsan Mikroglia Benzeri Hücreler: İnsan Sinaptozomları Kullanılarak İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden ve In Vitro Canlı Hücre Fagositoz Analizinden Farklılaşma

Burada, akış sitometrisi kullanarak vGLUT1 pozitif sinapsların ve pHRodo Red etiketli ham sinaptozomların mikroglial yutulmasını ölçmek için iki protokol sunuyoruz.

Akış Sitometrisi Kullanılarak Sinaptik Materyalin Mikroglial Yutulmasının Miktar Tayini

Öğrenin astrositlerin fagositoz kapasitesini ölçmek için canlı görüntüleme yöntemini. pH göstergeli sinaptosomlar kullanılarak gerçek zamanlı içerme ve parçalanma kinetiği analiz edilir.

Bir roman In Vitro canlı görüntüleme Astrocyte tahlil-aracılı fagositoz kullanarak pH göstergesi Birleşik Synaptosomes

Daha fazla video keşfet