Name: Bir Neural ağ tabanlı kimlik gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 4 s
Description: Öğrenin fare oositlerinde gelişimsel yetkinliği değerlendirmek için zaman atlamalı görüntüleme ve sinir ağı analizi kullanan invaziv olmayan yöntemi. Bu tekik üreme tıbbında gebelik başarısını artırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser tarafından destek sayesinde mümkün yapıldı: Pavia Üniversitesi FRG 2016; Parma Üniversitesi FIL 2014, 2016; ve bu çalışma taşımak için gerekli plasticware temini için Kinesis. Dr. Shane Windsor (Mühendislik Fakültesi, University of Bristol, İngiltere) Cell_PIV yazılım sağlamak için teşekkür ederiz.

Tüm yordamları hayvanları içeren kurumsal hayvan bakım ve kullanım ve Pavia Üniversitesi, etik Komiteler tarafından kabul edildi. Hayvanlar 22 ° C, % 60'ı hava nemi ve 12:12 saat ışık/karanlık döngüsünü koşullar altında muhafaza.
1. yumurtalık yalıtım
<ol><li>İntraperitoneally 2 dört onbir haftalık CD1 dişi fareler 10 U folikül uyarıcı hormon bir steril 1 mL insülin şırınga ile enjekte.</li>
	<li>46-48 h bekleyin.</li>
	<li>Fare tartmak ve 50 mg/kg Zoletil (Tiletamina ve Zolazepan cloridrate) bir kas içi enjeksiyon ile anestezi. Servikal çıkığı tarafından ötenazi.</li>
	<li>Diseksiyon forseps bir çift kullanarak karın duvarı kaplayan deri kavramak. Cilt ve vücut duvar makas çifti ile kesmek ve belgili tanımlık kesme Forseps ile çekerek açın.</li>
	<li>Bir çift cımbız kullanarak, cesaret bir yana, rahim boynuzları kesin olarak belirlemek ve onların ekstremite, yumurtalık yerelleştirmek taşıyın.</li>
	<li>Yavaşça saatçi forseps kullanarak yumurtalık tutun ve onun bağ rahim kesmek için makas kullanın. Diğer yumurtalık ile yineleyin.</li>
	<li>Toplanan yumurtalık içine önceden 37 ° c, % 5 CO2 havada sıcak M2 yalıtım orta 1 mL içeren 35-mm hücre kültür Petri kabına aktarın.</li>
	<li>Yağ ve bir stereomicroscope altında iyi makas kullanarak ovidukt kaldırın.</li>
</ol>2. izolasyon Cumulus oosit kompleksleri
<ol><li>Antral kümülüs oosit kompleksleri (COCs) pasif serbest kadar steril cımbız ve 1 G steril insülin iğne kullanarak yumurtalık yüzey delik.</li>
	<li>Üçten fazla katmanları bir ağız kontrollü el çekti Pasteur micropipette (çapı 200 µm) kullanarak kümülüs hücreleri ile COCs toplamak ve taze M2 orta 300 µL damla aktarabilirsiniz.</li>
	<li>Bir el çekti Pasteur micropipette (çapı 80 µm) kullanarak yumurta çevreleyen kümülüs hücreleri yavaşça girip kaç saniye pipetting tarafından kaldırmak,</li>
	<li>Kümülüs hücreleri tamamen ortadan kalkar kadar tekrar tekrar yumurta M2 orta 20 µL damla--dan başka bir, aktarabilirsiniz.</li>
</ol>3. Kromatin organizasyon tabanlı oosit sınıflandırma
<ol><li>Höchst 33342 boyama çözüm 0,05 µg/mL olarak 5 mg/mL 1 x PBS içinde seyreltilmiş bir anne çözümden M2 orta başlayarak nihai bir konsantrasyon, hazır olun.</li>
	<li>3.5 µL çözüm bir 35 mm Petri kabına kapak altındaki boyama Höchst mikro damlacıkları yerleştirin.</li>
	<li>Her tek yumurta bırakma boyama bir Höchst aktarmak, Önceden ısıtılmış (37 ° C) ısıtma yüzeyi üzerine tabak yerleştirin ve ışık Fuar önlemek için karanlık bir kapak ile kapak.</li>
	<li>Kuluçka oda sıcaklığında 10 dakika sonra yumurtalar için en fazla 1-2 s ile floresan mikroskop altında UV ışık (330-385 nm), 10 X büyütme, gözlemlemek.</li>
	<li>Höchst pozitif Kromatin çekirdekçik çevreleyen bir yüzük varsa yumurta çevrili çekirdekçik (SN) (şekil 1A), sınıflandırmak.</li>
	<li>Yumurta onların çekirdekçik Höchst pozitif Kromatin tarafından çevrili değil ve gösterir (şekil 1B) çekirdeği heterochromatic noktalar dağıtmak değil çevrili çekirdekçik (NSN), sınıflandırmak.</li>
</ol>4. sinirsel ağ tabanlı oosit sınıflandırma
<ol><li>Dört hazırlamak %5 ısı inaktive fetal sığır serum, 2 mM L-glutamin, 5 mM taurin, 100 U/mL penisilin, 75 µg/mL streptomisin ve 23.5 µg/µL sodyum pyruvate 35-mm cam içine ile takıma α-MEM orta 2 µL damlacıkları Petri kabına alt ve onlarla kapak Önceden ısıtılmış (37 ° C) ve orta buharlaşma önlemek için önceden dengelenmiş madeni yağ. Not: canlı bir hücre-tarama sistemi kullanılıyorsa, damla belirli bir mesafede 7 x 7 mm çizilmiş bir kılavuz bir kılavuz olarak kullanarak kalmasını sağlayın.</li>
	<li>Transfer 3 - 4 yumurta her damla için.</li>
	<li>Hızlandırılmış kayıt yazılımı ile donatılmış bir canlı hücre-tarama sistemi cam alt Petri kabına yerleştirin ( Tablo malzemelerigörmek, gözlem oosit olgunlaşma dengeli sıcaklık (37 ° C) ve CO2 olan bir ortamda sağlayan) konsantrasyonu (% 5).</li>
	<li>Hızlandırılmış kayıt yazılımı açın. Ekranda sol taraftaki oosit ve sağ taraftaki tüm ayar düğmeleri canlı bir atış ile bir pencere görüntülenir.</li>
	<li>Ekran Merkezi'nde konumlandırmak için oosit Merkezi'ni seçin. Odağı ayarlayın.</li>
	<li>Ph düğmesini seçin ve DIA lamba 192 ayarlayın; pozlama süresi için 1/125 s; kazanmak için 1,99; ve 1600 x1200 Çözünürlük .</li>
	<li>FL2 seçin ve DIA lamba 5olarak ayarlayın; pozlama süresi için 3 s; kazanmak için 2.37; ve 1600 x1200 Çözünürlük .</li>
	<li>Kültür damla içindeki yumurta konumunu kaydetmek için Yenigelin düğmesini seçin. Kültür damla içinde her yumurta için aynı yordamı yineleyin.</li>
	<li>Zaman seçin ve satın alma döngüsü 8 dk ve 15h Toplam süre ayarlayın.</li>
	<li>Kayıt döngüsü başlatmak için hızlandırılmış Başlat ' ı seçin.</li>
	<li>MATLAB yazılımını açın ve yazmak >>cell_piv; ve PIV aracınıseçin.</li>
	<li>Kaydedilmiş filmi içeren klasörü seçin ve tüm görüntü sırası yüklemek için .jpeg dosyalarını seçin. Her yumurta için faiz (ROI) bölgenin alanı aracını seçintıklatarak seçin.</li>
	<li>İşlem PIV Dosya menüsünden seçin. Görüntüleyicisi aracı düğmesini seçin. Not: Program hız vektörel çizimler içinde yatırım Getirisi hesaplar ve otomatik olarak bir .mat dosyası olarak kaydedilmiş bir veri dosyası oluşturur.</li>
	<li>.Mat dosyayı açmak için seçin. Düğmesini seçin ROI aracını seçin ve oosit anahattı çevresinde bir daire çizin. Dosya menüsünde Kaydet'i tıklatın. Not: Bu bölgedeki vektörel çizimler, şimdi görüntülenir ve ortalama büyüklükte veri grafik penceresinde bu yeni yatırım Getirisi için güncelleştirildi.</li>
	<li>Açık bütün zaman atlama kare toplanan ortalama büyüklükte veri ile kare dizisinin satırları üzerinde ve sütunlar, bir elektronik tabloya analiz her tek yumurta kaydetti.</li>
	<li>NSN ve SN yumurta verileri 10 alt grupları düzenlemek.</li>
	<li>Besleme-ileri yapay sinir ağı yinelemeli olarak eğitmek için 9 alt grupları kullanın (FANN) ve kör test etmek için 1 alt grubu.<ol>
<li>Başka bir yineleyin 9 kez, kör test örnek (10 kat çapraz doğrulama) değiştirme.</li>
	</ol>
</li>
	<li>MATLAB açın, ana özel komut dosyası çalıştırma ve talebi üzerine, eğitim veri (train.txt), (genellikle, üzerinden analiz edilecek eğitim ve hızlandırılmış aralığı için kullanılan NSN ve SN yumurta sayısı ile dosya adını Ekle # 112-113 Çerçeve çerçeve 1-2).</li>
	<li>Eğitim gerçekleştirmek için girmek tuşuna basın.</li>
	<li>Sınama verileri (test.txt) ile dosya adını ekleyin.</li>
	<li>Vektör test_outputs_cyt MATLAB çalışma alanında açın. Not: Bir pencere, ilk satırda, gerçek pozitif (TP veya gerçek NSN) ve yanlış pozitif (FP veya yanlış NSN) NSN ve SN yumurtalar için sırasıyla elde etmek için olasılık gösterilen ekranda görünür; Bunun yerine, ikinci sıra, yanlış negatif (FN veya yanlış SN) ve yumurta, NSN ve SN için doğru negatifleri (TN veya gerçek SN) sırasıyla elde etmek için olasılık.</li>
	<li>Formülünü kullanın: (TP+TN)/(TP+FP+FN+TN), yüzde ifade edilen FANN doğruluk hesaplamak için.</li>
</ol>

<ol><li>Patrizio, P., Fragouli, E., Bianchi, V., Borini, A., Wells, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+methods+for+selection+of+the+ideal+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Molecular methods for selection of the ideal oocyte.</a> Reprod. Biomed. Online. 15 (3), 346-353 (2007).</li>
<li>Rienzi, L., Vajta, G., Ubaldi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictive+value+of+oocyte+morphology+in+human+IVF%3A+a+systematic+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Human.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Predictive value of oocyte morphology in human IVF: a systematic review of the literature.</a> Human. Reprod. Update. 17 (1), 34-35 (2011).</li>
<li>Tan, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+configurations+in+the+germinal+vesicle+of+mammalian+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Chromatin configurations in the germinal vesicle of mammalian oocytes.</a> Mol. Hum. Reprod. 15 (1), 1-9 (2009).</li>
<li>Vigone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+based+identification+of+mouse+cumulus+cell+markers+that+predict+the+developmental+competence+of+their+enclosed+antral+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptome based identification of mouse cumulus cell markers that predict the developmental competence of their enclosed antral oocytes.</a> BMC Genomics. 14, 380(2013).</li>
<li>Bui, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+movement+profiles+of+mouse+surrounding+nucleolus+and+not-surrounding+nucleolus+antral+oocytes+during+meiotic+resumption%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic movement profiles of mouse surrounding nucleolus and not-surrounding nucleolus antral oocytes during meiotic resumption.</a> Mol. Reprod. Dev. 84 (5), 356-362 (2017).</li>
<li>Zuccotti, M., Piccinelli, A., Giorgi Rossi, P., Garagna, S., Redi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+organization+during+mouse+oocyte+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Chromatin organization during mouse oocyte growth.</a> Mol. Reprod. Dev. 41 (4), 479-485 (1995).</li>
<li>Zuccotti, M., Garagna, S., Merico, V., Monti, M., Redi, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+organisation+and+nuclear+architecture+in+growing+mouse+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Chromatin organisation and nuclear architecture in growing mouse oocytes.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 234 (1-2), 11-17 (2005).</li>
<li>Zuccotti, M., Merico, V., Cecconi, S., Redi, C. A., Garagna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+does+it+take+to+make+a+developmentally+competent+mammalian+egg%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">What does it take to make a developmentally competent mammalian egg?</a> Hum. Reprod. Update. 17 (4), 525-540 (2011).</li>
<li>Inoue, A., Nakajima, R., Nagata, M., Aoki, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+the+oocyte+nucleus+and+cytoplasm+to+the+determination+of+meiotic+and+developmental+competence+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Contribution of the oocyte nucleus and cytoplasm to the determination of meiotic and developmental competence in mice.</a> Hum. Reprod. 23 (6), 1377-1384 (2008).</li>
<li>Ajduk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhythmic+actomyosin-driven+contractions+induced+by+sperm+entry+predict+mammalian+embryo+viability%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Rhythmic actomyosin-driven contractions induced by sperm entry predict mammalian embryo viability.</a> Nat. Commun. 2, 417(2011).</li>
<li>Swann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipase+C-%CE%B6-induced+Ca2%2B+oscillations+cause+coincident+cytoplasmic+movements+in+human+oocytes+that+failed+to+fertilize+after+intracytoplasmic+sperm+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Phospholipase C-ζ-induced Ca2+ oscillations cause coincident cytoplasmic movements in human oocytes that failed to fertilize after intracytoplasmic sperm injection.</a> Fertil. Steril. 97 (3), 742-747 (2012).</li>
<li>Thakur, A., Mishra, V., Jain, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feed+forward+artificial+neural+network%3A+tool+for+early+detection+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Feed forward artificial neural network: tool for early detection of ovarian cancer.</a> Sci. Pharm. 79 (3), 493-505 (2011).</li>
<li>Laudani, A., Lozito, G. M., Riganti Fulginei, F., Salvini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+Training+Efficiency+and+Computational+Costs+of+a+Feed+Forward+Neural+Network%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Comput.+Intell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On Training Efficiency and Computational Costs of a Feed Forward Neural Network: A Review.</a> Comput. Intell. Neurosci. 2015, 818243(2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bir fare yumurta yanı sıra bu diğer türler ile bu iletişim kuralı yaparken dikkat çekmek birkaç kritik adım vardır. Arkadaşı kümülüs ayrılması Tetikleyicileri hücreleri gibi bir zamanlar onların köklerinin yumurtalar hemen kayıt damla aktarılması gerektiğini GV MII geçişin başlangıcını. Olası bir değişiklik mevcut iletişim kuralına COCs yalıtımı için kullanılan M2 orta 3-İzobütil-1-methylxanthine (IBMX) ek olabilir. IBMX hemen GV MII geçiş tetikleyen engeller ve yumurtalar tamamen deneysel grup bir senkronizasyon sağlar....

Kadın kısırlığı kadınlar giderek artan sayıda etkiler bir patoloji olduğunu. Dünya Sağlık Örgütü göre çiftlerin % 20 civarında infertil kadın infertilite nedeniyle % 40 ile. Buna ek olarak, kanser tedavisi gören kadınların üçte biri (300.000/yıl ve 30.000/yıl ABD yada İtalya, sırasıyla) erken yumurtalık yetmezliği geliştirmek.
Kanser hastalarında infertilite önlemek için bir strateji yalıtım ve dondurma vitro olgunlaşma (IVM) tarafından takip Onkolojik tedavi öncesi yumurtalık köklerinin GV yumurta MII sahneye (GV MII geçiş) olmuştur. Non-invaziv işaretleri oosit gelişimsel yetki durumu gübreleme ve gelişim süreçleri ve genel gebelik başarı1,2artıracak.
Supravital fluorochrome Höchst 33342, ile boyama sonra gözlenen onların Kromatin yapılandırmasına göre memeli köklerin yumurtalar bir çevrili çekirdekçik (SN) veya değil çevrili çekirdekçik (NSN)3olarak sınıflandırılır. Onların farklı Kromatin organizasyon yanı sıra yumurta bu iki tür pek çok morfolojik ve fonksiyonel farklılıklar3,4,5,6,7,8 görüntülemek. ,9onların segregasyonun ve gelişimsel yeterlilik dahil olmak üzere,. Yumurtalıktan izole ve olgunlaştı vitro, her ikisi de yumurta eriþiminden MII sahne yazın ve sonra sperm tohumlama, 2-hücre Sahne Alanı'na geliştirmek, ama sadece bu SN Kromatin kuruluş ile dönem9' a gelişebilir. İyi olmamakla birlikte yetkili vs beceriksiz yumurta seçmek için bir sınıflama yöntemi, en büyük dezavantajı fluorochrome kendisi ve her şeyden önce onun algılama için kullanılan UV ışık hücreleri üzerinde olabilir mutajenik etkisi olduğunu.
Tüm bu nedenlerden dolayı aynı yüksek sınıflandırma doğruluğu korurken Höchst kullanımı yerine olabilir SN veya NSN Kromatin uyum ile ilişkili diğer non-invaziv işaretçileri için aradık. Sitoplazmik hareket hızları (CMVs) hızlandırılmış gözlem bir özellik olarak hücre durumu farklı çıkmaktadır. Örneğin, son yıllarda yapılan çalışmalarda zamanda gübreleme ve fare ve insan zigotları kapasitesi tam Preimplantasyon ve tam dönemlik geliştirme10,11CMVs arasındaki ilişkiyi kaydedilen gösterdi.
Bu daha önceki çalışmalar üzerinde bağlı olarak, biz burada gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta5,6,7,8tanınması için bir platform tanımlamak. Platform üzerinde üç ana adım dayanmaktadır: 1) antral folikül izole yumurta ilk olarak çevrili çekirdekçik (SN) ya da değil-çevrili çekirdekçik (NSN); onların Kromatin yapılandırmasına ya göre sınıflandırılır 2) her tek yumurta GV MII geçişi sırasında meydana gelen CMVs hızlandırılmış görüntülerini alınır ve analiz partikül imaj velosimetri (PIV); ve 3) PIV ile elde edilen veriler ile bir besleme ileri yapay sinir ağı (FANN) kör sınıflandırma12,13analiz edilir. Fareyi test ve diğer memeli türler için (Örneğin, sığır, maymun ve insanlar) kullanılan mevcut hazır yapmak için tasarlanmış yordam en kritik adımları ayrıntılarını ver.

<table><tbody><tr><td>Folligon</td><td>Intervet</td><td>A201A02</td><td>Hormonal tedavi</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2261</td><td>Oosit heterokromatin boyama için</td></tr><tr><td>Hücre kültürü Petri kabı 35 mm x 10 mm&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>430165</td><td>COC izolasyonu için</td></tr><tr><td>EmbryoMax M2 Ortamı (1X), Sıvı, fenol kırmızısı ile</td><td>Merck-Millipore</td><td>MR-015-D</td><td>COC izolasyonu için</td></tr><tr><td>MEM Alpha ortamı (1X) + Glutamax&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4526</td><td>Oosit in vitro olgunlaşma için</td></tr><tr><td>Hücre kültürü Petri kabı 35 mm cam tabanlı&nbsp;</td><td>WillCo&nbsp;</td><td>GWSt-3522</td><td>Görüntüleme deneyleri için</td></tr><tr><td>BioStation IM-LM&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>MFA91001</td><td>Canlı hücre tarama sistemi&nbsp;</td></tr><tr><td>Pasteur pipeti</td><td>Delchimica Scientific Züccaciye</td><td>6709230</td><td>Folikül manipülasyonu için</td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8410</td><td>Kontaminasyonu ve orta buharlaşmayı önlemek için</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td></td><td>15070063 Orta kontaminasyonu önlemek için&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ML16141079</td><td>Makyaj ve alfa için; MEM orta&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Glutamin&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25030</td><td>Makyaj & MEM orta&nbsp;</td></tr><tr><td>Taurine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625</td><td>Makyaj ve alfa için; MEM orta&nbsp;</td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini (BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A3310</td><td>Makyaj ve alfa için; MEM ortamı</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; P4562</td><td>Makyaj ve alfa için; MEM media</td></tr><tr><td>Zoletil (Tiletamina ve Zolazepan cloridrate)</td><td>Virbac Srl</td><td>QN01AX9</td><td>Fareler için anestezi</td></tr><tr><td>Cell_PIV yazılımı&nbsp;</td><td>Nazikçe Dr. Shane Windsor, Bristol Üniversitesi, İngiltere&</td><td>nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;-</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;-</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Matematik Çalışmaları, Natick, MA&nbsp;</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;-</td><td>Çok paradigmalı sayısal hesaplama için</td></tr></tbody></table>

bir neural ağ tabanlı kimlik gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta

A Neural Network-Based Identification of Developmentally Competent or Incompetent Mouse Fully-Grown Oocytes

Kısırlık klinikler beceriksiz yumurta gelişim yetkili vs böylece genel gebelik sonucu artırmak non-invaziv yordamları kullanarak seçmek için yeteneğinden yararlanırlar. Biz son zamanlarda geliştirilen sitoplazmik hareketleri analiz tarafından takip metafaz II sahneye germinal vezikül (GV)--dan onların vitro olgunlaşma sırasında fare yumurtalar, mikroskobik canlı gözlem dayalı bir sınıflama yöntemi hızlandırılmış bu dönemde meydana gelen. Burada, bu yordamın ayrıntılı protokolleri mevcut. Yumurtalar köklerin antral folikül izole ve 37 ° C ve % 5 CO2hızlandırılmış analiz için donatılmış bir mikroskop içinde 15 h için kültürlü. Resimler 8 dk aralıklarla alınır. Görüntüleri hesaplar, her yumurta için sitoplazmik hareket hızları (CMVs) kültür süresince meydana gelen profil partikül imaj velosimetri (PIV) yöntemi kullanılarak analiz edilir. Son olarak, her tek yumurta CMVs gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz %91.03 bir hassasiyetle olmak bir gamet olasılığını öngörür bir matematiksel sınıflandırma aracı (Feed-ileri yapay sinir ağı, FANN), üzerinden beslenir. Bu iletişim kuralı için fare, kurmak, şimdi insanlar da dahil olmak üzere diğer türlerin yumurta üzerinde test olabilir.

Şekil 2 bir temsilcisi gelişimsel olarak yetkili ve beceriksiz oosit sırasıyla (GV) başında ve sonundaki (MII) IVM yordamı gösterir. Köklerin fare yumurta IVM 15 h kültür sırasında oluşur. Hızlandırılmış gözlem mayoz ilerleme kaydeder ve GVBD ve Ekstrüzyon ilk kutup vücudun da dahil olmak üzere önemli segregasyonun olayları algılar.
Analiz ve daha--dan iki - yüz beceriksiz yumurta gelişim yetkili <e...

Burada, non-invaziv oosit gelişimsel yetkinlik metafaz II sahneye germinal vezikül--dan onların vitro olgunlaşma sırasında gerçekleştirilen değerlendirilmesi için bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem zaman hata görüntüleme partikül imaj velosimetri (PIV) ve neural ağ analizleri ile birleştirir.

Bir Neural ağ tabanlı kimlik gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta

Infertility clinics would benefit from the ability to select developmentally competent vs. incompetent oocytes using non-invasive procedures, thus ...

Bu prosedürün genel amacı, non-invaziv bir alet kullanılarak arka taraf geliştirme kapasitesine sahip oksisitlerin tanımlanmasıdır. Bu yöntemin temel avantajı, in vitro olgunlaşma sırasında meydana gelen oosit hareketlerini basitçe gözlemleyerek dişi gamet gelişim potansiyelinin değerlendirilebilmesidir. Bu teknik, sinir ağı tabanlı bir analiz olan parçacık görüntü hızı ölçümü ile birleştirilmiş hızlandırılmış görüntülemeye dayanmaktadır.Burada, germinal vezikalden metafaz iki aşamaya geçiş sırasında fare oositlerinin, gelişimsel yeterlilikleri veya yetersizlikleri ile önemli ölçüde ilişkili olan söz konusu plazmik hareketlerin farklı bir profilini gösterdiğini göstermek için atılan adımları açıklayacağız. Dünya Sağlık Örgütü'ne göre, kısırlık çiftlerin yaklaşık yüzde 20'sini etkileyen bir patolojidir ve ayrıca kanser tedavisi gören kadınların üçte biri erken yumurtalık yetmezliği riski altındadır. Bu, sırasıyla ABD veya İtalya gibi ülkelerde yaklaşık 300.000 veya 30.000 kadına karşılık geliyor.Oosit gelişimsel yeterliliğinin belirlenmesi için non-invaziv prosedürlerin tasarımı, gebelik sonuçlarının genel başarısını artırmaya yardımcı olacaktır. Burada, sığır veya insanlar gibi diğ

a-neural-network-based-identification-developmentally-competent-or

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Oosit mayotik olgunlaşması sırasında kromozom segregasyon hataları nedeniyle anöploidi yatkındır. Anöploid yumurta, kısırlık, düşüklere veya gelişimsel bozukluklar, Down sendromu gibi neden olabilir. Burada, yumurta ve mayotik olgunlaşma incelemek ve Ploidi değerlendirmek için yöntemler seçim malzemeleri tanıtmak için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Oosit Mikroenjeksiyon, olgunlaşması ve ploidi Değerlendirmesi

Burada Nükleolar organizasyon dayalı fare antral oosit karakterizasyonu için bir protokol mevcut.

Nucleolar Kromatin Teşkilatı dayanarak Fare Antral OOSİT İzolasyonu ve Karakterizasyonu

İnsan hastalığı ile ilişkili genetik varyantların ele haline başladığınızda, sistemler ile tanımlanan bu değişik biyolojik önemi hızla değerlendirileceği geliştirmeye giderek önem kazanmaktadır. Bu iletişim kuralı insan gen işlevi kadın mayoz sırasında ben fare yumurta kullanarak değerlendirilmesi yöntemlerini açıklar.

Mayoz sırasında insan gen işlevini değerlendirmek için fare yumurta kullanarak ben

Yumurtalık dokusu kültürler folikül gelişim, yumurtlama ve folikül atrezi modelleri olarak kullanılabilir ve düzenleyici mekanizmaları dinamik yumurtalık işlemleri gösterir.

Mouse ovarium olayları görselleştirmek için yumurtalık doku kültürü

Burada, sabit fare yumurtalık dokularının doğru folikül sayımı için iki farklı tekniği açıklıyor, karşılaştırıyor ve karşılaştırıyoruz.

Yetişkin Fare Yumurtalıklarında Doğru Folikül Numaralandırması

Burada, tam montajlı immünoboyama, çoklu foton mikroskobu ve 3D görselleştirme ve analiz kullanarak kantitatif ve kalitatif analizler için tüm yumurtalıkları görüntülemek için optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, toksikoloji, klinik teşhis ve yumurtalık fonksiyonunun genomik tahlilleri için geçerli olan yüksek verimli, güvenilir ve tekrarlanabilir işlemeyi kapsar.

Farede Gelişmekte Olan Yumurtalık Rezervinin Kantitatif 3D Analizi için Tüm Yumurtalık İmmünofloresansı, Temizleme ve Multifoton Mikroskobu

Kromozom ayrışmasında hata, oositlerde yaygın bir özelliktir. Bu nedenle, iş mili montaj kontrol noktasının incelenmesi, sağlıklı yumurta üretmek için gereken mekanizmalar hakkında önemli ipuçları verir. Mevcut protokol, fare oositlerinde iş mili montaj kontrol noktası bütünlüğünü değerlendirmek için üç tamamlayıcı tahlil tanımlamaktadır.

Fare Oositlerinde İş Mili Montaj Kontrol Noktası Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Sinapslardaki mayotik hatalar ve rekombinasyon, memeli oositlerinde yaygındır. Bu süreçlerde yer alan proteinlerin titiz analizi, oogenezin nasıl ve neden sıklıkla yanlış gittiğini anlamak için çok önemlidir. Burada sunulan teknikler, farelerde oosit kalitesini değerlendirmek için rekombinasyon ve sinapsların kapsamlı bir şekilde izlenmesine izin verir.

Sinapsis ve Rekombinasyonun Değerlendirilmesi için Fare Oositlerinden Mayotik Kromozom Yayılımlarının Hazırlanması

Bu protokol, fare oositlerinin in vitro olgunlaşması, in vitro döllenme ve ardından blastosist evresine kadar embriyo kültürü prosedürlerini açıklar.

Fare Oositleri In Vitro Olgunlaşma, Döllenme ve Preimplantasyon Embriyolarının Kültürü

Bu protokol, serum içermeyen tek katmanlı bir yöntem kullanarak embriyonik kök hücrelerden nöral progenitörler üretme yöntemini ayrıntılı olarak açıklar. Bu progenitörler, olgun nöral hücre tiplerini türetmek veya nöral spesifikasyon sürecini incelemek için kullanılabilir ve bileşik tarama için çok kuyulu format ölçeklendirmesine uygundur.

Serum serbest Tek tabakalı Kültüründe Fare Embriyonik Kök Hücre Sinir Farklılaşma

Öğrenin fare oositlerinde gelişimsel yetkinliği değerlendirmek için zaman atlamalı görüntüleme ve sinir ağı analizi kullanan invaziv olmayan yöntemi. Bu tekik üreme tıbbında gebelik başarısını artırmaya yardımcı olur.

Bir Neural ağ tabanlı kimlik gelişimsel olarak yetkili veya yetersiz fare köklerin yumurta

Daha fazla video keşfet