Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

Genta Ito; Taisuke Tomita

doi:10.3791/56688

Rab10 fosforilasyon algılama SDS-sayfa bir fosfat bağlayıcı etiketi ile kullanarak LRRK2 etkinliğ...

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Rab10 Phosphorylation Detection by LRRK2 Activity Using SDS-PAGE with a Phosphate-binding Tag

Rab10 fosforilasyon algılama SDS-sayfa bir fosfat bağlayıcı etiketi ile kullanarak LRRK2 etkinliğini tarafından

Full Text

16,199 Views

08:55 min

December 14, 2017

DOI: 10.3791/56688-v

Genta Ito¹, Taisuke Tomita^1,2

¹Laboratory of Brain and Neurological Disorders, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo, ²Laboratory of Neuropathology and Neuroscience, Graduate School of Pharmaceutical Sciences,The University of Tokyo

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu da çalışmanın Rab10 fosforilasyon endojen düzeyleri lösin yönünden zengin tekrar kinaz 2 algılama basit bir yöntem açıklanır.

Bu deneyin genel amacı, fosfat bağlayıcı bir etikete sahip SDS-PAGE kullanarak LRRK2 ile Rab10 fosforilasyonunu tespit etmektir. Bu yöntem, LRRK2'deki hastalık mutasyonlarının Rab10 fosforilasyonunu nasıl etkilediği gibi Parkinson araştırma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, basit bir western blot kullanarak Rab10 fosforilasyonunun stokiyometrisinin kaba bir tahminine sahip olabilmesidir.

Bu protokolün adımlarının çoğu oldukça standarttır ve bu videoya eşlik eden metin protokolü tarafından yeterince ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Burada, size görsel talimatlardan en çok yararlanan adımları göstermek istiyoruz. Metin protokolünde açıklandığı gibi transfekte edilmiş HEK293 hücrelerinin plakalarını hazırlayın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos