Kısmi safra kanalı ligasyonu fare: kontrollü manken yerelleştirilmiş obstrüktif Histiositoz olgusu
28 Mart 2018
Burada, karaciğer hasarı ve rejenerasyon Rodents cerrahi bir model olarak kısmi safra kanalı ligasyonu mevcut.
Bu cerrahi müdahalenin genel amacı, lokalize obstrüktif kolestazın etkilerini gözlemlemektir. Bu yöntem, karaciğer rejenerasyon mekanizmalarının nasıl tanımlanacağı ile ilgili hepatoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, aynı hayvan içinde bağlanmış deney lobu ile bağlanmamış kontrol lobu arasında anlamlı karşılaştırmalar yapılabilmesidir.
Bugünkü prosedürü gösteren, nakil cerrahisi laboratuvarından bir doktora sonrası olan Dr.Toshimasa Nakao olacak. Anestezi uygulanmış sekiz ila 12 haftalık bir C57 siyah 6 farede ayak parmağını çimdiklemeye yanıt verilmediğini doğruladıktan sonra, karın bölgesini saç kesme makinesiyle tıraş edin ve hayvanı cerrahi mikroskop altına yerleştirin. Uzuvları masaya sabitleyin ve cerrahi alanı 0,3 ila 0,5 mililitre povidon-iyot ve% 70 etanol ile sırayla dezenfekte etmek için steril bezler kullanın.
Ardından, ksifoidden pubise orta hat kesisi yapın ve karın boşluğunu açmak için bir mikro ekartör kullanın. Ksifoidi farenin kafasına doğru geri çekmek için sivrisinek forseps kullanın ve forseps ve ksifoidi bu pozisyonda tutmak için yumuşak kil kullanın. Karın boşluğunu bir ila iki mililitre sterilize edilmiş 37 santigrat derece PBS ile nemlendirin ve ince bağırsağı farenin kafasına doğru nazikçe hareket ettirmek için ıslak pamuklu çubuklar kullanın.
Dokuya zarar vermemek için ince bağırsak ile retroperiton arasındaki bağları kesin ve ince ve kalın bağırsakları ıslak, dokunmamış bir gazlı bezle sarın. Bağırsak dokusunu karın boşluğunun kaudal tarafına yerleştirin ve hepatik hilum ve hepatoduodenal ligamenti ortaya çıkarmak için tüm karaciğeri ksifoid'e doğru nazikçe geri çekmek için küçük, ıslak, dokunmamış bir gazlı bez sünger kullanın. Portal venin ventral tarafındaki ortak safra kanalı olan hepatik hilumu ve hepatik hilustaki ana safra birleştiği yere drene olan sol ve sağ hepatik safra kanallarını bulun.
10-0 naylon sütür ve bir dikiş iğnesinin künt tarafını kullanarak, sol hepatik safra kanalı lobunu bağlayın. Dikiş yerleştirildiğinde, ince ve kalın bağırsakları anatomik konumlarına geri getirin ve bağırsak torsiyonu veya karın içi kanama olmadığını doğrulayın. Daha sonra sivrisinek forsepslerini çıkarın, kas ve cilt katmanlarını sürekli 4-0 Vicryl sütürlerle ayrı ayrı kapatın ve fareyi tam iyileşme olana kadar izlemeli bir ısı lambasının altına yerleştirin.
Çözünmeyen karaciğer protein agregasyonu için parsiyel safra kanalı bağlanmış fareler ve transgenik safra kanalı bağlı fareler arasındaki serum karaciğer biyokimyalarının karşılaştırılması, kısmi safra kanalı bağlı farelerde minimal karaciğer hasarı veya kolestaz ve tam safra kanalı bağlı transgenik hayvanlarda ciddi yaralanma ve enzim birikimini ortaya koymaktadır. Kısmi safra kanalı ligasyonuna maruz kalan fareler zamanla loba özgü obstrüktif kolestaz geliştirdiğinden, bağlanmış lob, normal koyu kırmızımsı kahverengi rengini koruyan bağlanmamış loblara kıyasla ameliyattan 14 gün sonra biraz daha soluk renkte görünür. Bağlanmış lob ayrıca, ligasyona bağlı lokalize kolestaza yanıt olarak bağlanmamış loblara kıyasla safra kanalı proliferasyonunda ve fibrozda bir artış gösterir.
Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde uygulanırsa 10 ila 12 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü takiben, soy izleme gibi diğer yöntemler, karaciğer hasarı ve rejenerasyon bölgelerine kök hücre barındırma ile ilgili ek soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, lokal ve sistemik etkileri belirlemek için kısmi safra kanalı ligasyonu kullanarak nasıl anlamlı karşılaştırmalar yapacağınızı iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, kemirgenlerde karaciğer hasarı ve rejenerasyonunu incelemek için cerrahi bir model olarak parsiyel safra kanalı ligasyonunu sunmaktadır. Bu yöntem, lokalize obstrüktif kolestazın ve bunun karaciğer mekanizmaları üzerindeki etkilerinin gözlemlenmesine olanak tanır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Hepatoloji
- Karaciğer rejenerasyonu
- Cerrahi modeller
Arka Plan
- Karaciğer hasarını ve rejenerasyonunu anlamak hepatolojide kritik öneme sahiptir.
- Lokalize obstrüktif kolestaz, karaciğer mekanizmaları hakkında içgörüler sağlayabilir.
- Aynı hayvan üzerinde yapılan karşılaştırmalı çalışmalar, sonuçların güvenilirliğini artırır.
- Bu model, özellikle karaciğer iyileşme dinamiklerinin incelenmesi için kullanışlıdır.
Çalışmanın Amacı
- Kısmi safra kanalı ligasyonunun karaciğer hasarı üzerindeki etkilerini gözlemlemek.
- Karaciğer rejenerasyonunda yer alan mekanizmaları belirlemek.
- Gelecekteki hepatolojik çalışmalar için güvenilir bir cerrahi model oluşturmak.
Kullanılan Yöntemler
- Prosedür için anestezi uygulanmış C57 black 6 farelerin kullanımı.
- Cerrahi işlem öncesinde abdominal bölgenin tıraş edilmesi ve dezenfekte edilmesi.
- Stabilite sağlamak amacıyla uzuvların cerrahi masaya sabitlenmesi.
- Hassasiyet için cerrahinin bir cerrahi mikroskop altında gerçekleştirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Cerrahi modelin uygulanabilirliği kanıtlanmıştır.
- Ligatür uygulanmış ve uygulanmamış karaciğer loblarını karşılaştırmak için bir yöntem oluşturulmuştur.
- Karaciğerin rejenerasyon süreçlerine dair bilgiler sağlanmıştır.
- Karaciğer hasarı mekanizmaları üzerine yapılacak daha ileri araştırmalara olanak sağlanmıştır.
Sonuçlar
- Kısmi safra kanalı ligasyonu, karaciğer hasarını incelemek için değerli bir modeldir.
- Bu teknik, aynı organizma içerisinde kontrollü karşılaştırmalar yapılmasına olanak tanır.
- Gelecekteki çalışmalar, karaciğer rejenerasyonunu daha detaylı araştırmak için bu model üzerinden ilerleyebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Endüstriyel Uygunluğu
Kısmi safra kanalı ligasyonu (pBDL), aynı hayvan içindeki ligasyonlu ve ligasyonsuz karaciğer loblarının doğrudan karşılaştırılmasına olanak tanıyarak, lokalize obstrüktif kolestaz çalışmalarında kontrollü bir model sunar. Bu dahili kontrol tasarımı, değişkenliği azaltır, hayvan kullanımını düşürür ve hepatoloji hedef doğrulamasında mekanistik risk azaltma sürecini destekler. Bu yaklaşım, safra birikimine ve fibrozis yollarına verilen loba özgü yanıtları izole ederek öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Lokalize karaciğer hasarı ve rejenerasyon yolaklarıyla ilgili terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Özdeş genetik ve çevresel arka planlar dahilinde kolestaza karşı lob spesifik yanıtların karşılaştırılmasıyla biyolojik risk azaltmayı destekler.
- Öngörücü Değer: Safra kanalı proliferasyonu ve fibrozis üzerindeki sistemik ve lokalize ilaç etkilerini ayırt ederek portföy önceliklendirmesini kolaylaştırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Lob spesifik biyokimyasal okumalar kullanarak, sonraki analiz standardizasyonu için valide edilmiş hastalıklara özgü sistemler hazırlar.
- Operasyonel Değer: Dahili kontroller aracılığıyla tekrarlanabilirliği artırır, ayrı sham gruplarına olan ihtiyacı azaltır ve hayvanlar arası değişkenliği minimize eder.
- Ölçeklenebilirlik: Kolestatik bağlamlarda ilaç mekanizmalarını ve hücre göçünü araştıran preklinik modellerde platformun yeniden kullanımını destekler.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Loba özgü safra kanalı proliferasyonu ve fibrozisi ile insan obstrüktif kolestazını modelleyerek hastalıkla ilgili sistemlerle uyum sağlar.
- Translasyonel Süreklilik: Ligasyon sonrası soy takibi ve kök hücre homing çalışmalarına olanak tanıyarak keşif sürecini preklinik doğrulamaya bağlar.
- Risk Ayarlı İlerleme: Biriken safra bileşenlerine karşı lokalize ve sistemik biyobelirteç yanıtlarını nicelleştirerek go/no-go kararlarını destekler.
İş Akışı ve Boru Hattı Entegrasyonu
pBDL, hedef doğrulamadan preklinik araştırmalara kadar olan keşif sürecine, özellikle karaciğer hasarı mekanizmalarını ve rejeneratif yanıtları inceleyen hepatoloji odaklı programlar için uygundur.
- Keşif Biyolojisi: Kolestazın yerel etkilerini izole etmek için ligasyon uygulanmış ve uygulanmamış lobların karşılaştırılmasına olanak tanıyarak hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Serum karaciğer biyokimyası ve safra kanalı proliferasyonundaki histolojik değişiklikler gibi ölçülebilir çıktılara sahip, analize hazır biyolojik sistemler sunar.
- Analitik: Deneysel koşulları karşılaştırmak için enzim seviyeleri, lob renklenmesi ve fibrozis skorları dahil olmak üzere nicel bağımlı değişken ölçümleri sağlar.
- Translasyonel Araştırma: Hasar bölgelerine kök hücre katılımını incelemek için soy takibi (lineage tracing) gibi cerrahi sonrası analizleri destekleyerek preklinik süreklilikle bağlantı kurar.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Lokalize karaciğer hastalığı modellerinde ilaç etkilerini ve hücresel mekanizmaları incelemek için yeniden kullanılabilir bir cerrahi platform görevi görür.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Loblar arası dahili karşılaştırmalar yoluyla mekanistik belirsizliği azaltarak öngörü güvenini artırır.
- Operasyonel Değer: Hayvan içi kontroller aracılığıyla hayvanlar arası değişkenliği ortadan kaldırarak standardizasyonu ve tekrarlanabilirliği iyileştirir.
- Stratejik Değer: Tam safra kanalı ligasyonu modellerine kıyasla hayvan kayıplarını ve masrafları azaltarak sermaye verimliliğini artırır.
- Portföy Etkisi: Lokalize ilaç toksisitesini sistemik karaciğer etkilerinden ayırarak risk ayarlı önceliklendirmeyi mümkün kılar.
Uygulama Hususları
- Sol hepatik safra kanalının hassas ligasyonu için mikrocerrahi uzmanlığı ve cerrahi mikroskoplara erişim gerektirir.
- 10-0 naylon sütürler, mosquito pensler ve steril alan bakım araçlarını içeren enstrümantasyona bağlıdır.
- Postoperatif izleme ve serum biyokimyası örnekleme prosedürlerinin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Modelin diğer fare suşlarına genişletilmesi veya farklı lobların incelenmesi durumunda adaptasyon hususlarını içerir.
- Lob spesifik obstrüksiyonun, ilgili insan durumunu modellemek için yeterli olduğu çalışmalarla sınırlıdır.
