Name: Fare modelleri Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojiler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Keşfedin fare modellerinde Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojileri çalışma yöntemlerini. Bu teknik, gastroenteroloji ve mikrobiyoloji alanında iltihaplanma ve kanser üzerine önemli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Bayan A. De Paoli ve Bayan Georgie Wray-McCann teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar tesislerinin kullanımı ve Monash Histoloji Platform, anatomi bölümü ve gelişim biyolojisi, Monash Üniversitesi Teknik yardım kabul edersiniz. Laboratuvar Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (NHMRC) RLF (APP1079930, APP1107930) için fon tarafından desteklenir. RLF NHMRC (APP1079904) bir üst düzey araştırma bursu tarafından desteklenmektedir. KD ve MC her ikisi de Monash Lisansüstü Bursları tarafından desteklenir. MC bir uluslararası yüksek lisans burs Tıp Fakültesi, Hemşirelik ve Sağlık Bilimleri, Monash Üniversitesi varken KD doğuştan gelen bağışıklık ve enfeksiyöz hastalıklar, Hudson Enstitüsü tıbbi araştırma, aynı zamanda merkezi tarafından desteklenir. Araştırma, Hudson Enstitüsü tıbbi araştırma Victoria Hükümeti'nın operasyonel altyapı desteği programı tarafından desteklenir.

<ol><li>Goh, K. L., Chan, W. K., Shiota, S., Yamaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection+and+public+health+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Helicobacter%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications.</a> Helicobacter. 16, Suppl 1. 1-9 (2011).</li>
<li>Montecucco, C., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Living+dangerously%3A+how+Helicobacter+pylori+survives+in+the+human+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Living dangerously: how Helicobacter pylori survives in the human stomach.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2 (6), 457-466 (2001).</li>
<li>Akopyants, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyses+of+the+cag+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 28 (1), 37-53 (1998).</li>
<li>Censini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cag%2C+a+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori%2C+encodes+type+I-specific+and+disease-associated+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (25), 14648-14653 (1996).</li>
<li>Peek, R. M., Fiske, C., Wilson, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+innate+immunity+in+Helicobacter+pylori-induced+gastric+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Role of innate immunity in Helicobacter pylori-induced gastric malignancy.</a> Physiological Reviews. 90 (3), 831-858 (2010).</li>
<li>O'Rourke, J. L., Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Helicobacter+pylori+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+and+Infection%22%5BJournal%5D)">Animal models of Helicobacter pylori infection and disease.</a> Microbes and Infection. 5 (8), 741-748 (2003).</li>
<li>Sakagami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophic+gastric+changes+in+both+Helicobacter+felis+and+Helicobacter+pylori+infected+mice+are+host+dependent+and+separate+from+antral+gastritis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Atrophic gastric changes in both Helicobacter felis and Helicobacter pylori infected mice are host dependent and separate from antral gastritis.</a> Gut. 39 (5), 639-648 (1996).</li>
<li>Correa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+and+gastric+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 19, S37-S43 (1995).</li>
<li>Enno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALToma-like+lesions+in+the+murine+gastric+mucosa+after+long-term+infection+with+Helicobacter+felis.+A+mouse+model+of+Helicobacter+pylori-induced+gastric+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">MALToma-like lesions in the murine gastric mucosa after long-term infection with Helicobacter felis. A mouse model of Helicobacter pylori-induced gastric lymphoma.</a> The American Journal of Pathology. 147 (1), 217-222 (1995).</li>
<li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+mouse+model+of+Helicobacter+pylori+infection%3A+introducing+the+Sydney+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A standardized mouse model of Helicobacter pylori infection: introducing the Sydney strain.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1386-1397 (1997).</li>
<li>Crabtree, J. E., Ferrero, R. L., Kusters, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+colonizing+Helicobacter+pylori+strain+SS1+may+lack+a+functional+cag+pathogenicity+island%5BTitle%5D)+AND+%22Helicobacter%22%5BJournal%5D)">The mouse colonizing Helicobacter pylori strain SS1 may lack a functional cag pathogenicity island.</a> Helicobacter. 7 (2), 139-140 (2002).</li>
<li>Israel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+strain-specific+differences+in+genetic+content%2C+identified+by+microarray%2C+influence+host+inflammatory+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori strain-specific differences in genetic content, identified by microarray, influence host inflammatory responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 107 (5), 611-620 (2001).</li>
<li>Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori-induced+gastritis+in+the+domestic+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori-induced gastritis in the domestic cat.</a> Infection and Immunity. 63 (7), 2674-2681 (1995).</li>
<li>Lee, A., Hazell, S. L., O'Rourke, J., Kouprach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+spiral-shaped+bacterium+from+the+cat+stomach%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Isolation of a spiral-shaped bacterium from the cat stomach.</a> Infection and Immunity. 56 (11), 2843-2850 (1988).</li>
<li>Ferrero, R. L., Wilson, J. E., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+Helicobacter-induced+gastric+cancer%3A+use+of+cocarcinogens%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of Helicobacter-induced gastric cancer: use of cocarcinogens.</a> Methods in Molecular Biology. 921, 157-173 (2012).</li>
<li>Ferrero, R. L., Thiberge, J. M., Huerre, M., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+of+specific-pathogen-free+mice+to+chronic+Helicobacter+pylori+%28strain+SS1%29+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Immune responses of specific-pathogen-free mice to chronic Helicobacter pylori (strain SS1) infection.</a> Infection and Immunity. 66 (4), 1349-1355 (1998).</li>
<li>Blanchard, T. G., Nedrud, J. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18770594">Laboratory maintenance of Helicobacter species.</a> Current Protocols in Microbiology. , Chapter 8, Unit8B 1 (2012).</li>
<li>Kim, J. S., Chang, J. H., Chung, S. I., Yum, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+the+host+genetic+background+on+immune+responses+to+Helicobacter+pylori+infection+and+therapeutic+vaccine+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunology+and+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Importance of the host genetic background on immune responses to Helicobacter pylori infection and therapeutic vaccine efficacy.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 31 (1), 41-46 (2001).</li>
<li>Nedrud, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+genetic+influence+on+the+innate+inflammatory+response+to+helicobacter+infection+of+the+gastric+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Lack of genetic influence on the innate inflammatory response to helicobacter infection of the gastric mucosa.</a> Frontiers in Immunology. 3, 181(2012).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+felis+eradication+restores+normal+architecture+and+inhibits+gastric+cancer+progression+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice.</a> Gastroenterology. 128 (7), 1937-1952 (2005).</li>
<li>Ferrero, R. L., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning%2C+expression+and+sequencing+of+Helicobacter+felis+urease+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cloning, expression and sequencing of Helicobacter felis urease genes.</a> Molecular Microbiology. 9 (2), 323-333 (1993).</li>
<li>Stevenson, T. H., Castillo, A., Lucia, L. M., Acuff, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+Helicobacter+pylori+in+various+liquid+and+plating+media%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Growth of Helicobacter pylori in various liquid and plating media.</a> Letters in Applied Microbiology. 30 (3), 192-196 (2000).</li>
<li>Uotani, T., Graham, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+Helicobacter+pylori+using+the+rapid+urease+test%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of Helicobacter pylori using the rapid urease test.</a> Annals of Translational Medicine. 3 (1), 9(2015).</li>
<li>Riley, L. K., Franklin, C. L., Hook, R. R., Besch-Williford, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+helicobacters+by+PCR+and+restriction+enzyme+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Identification of murine helicobacters by PCR and restriction enzyme analyses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 34 (4), 942-946 (1996).</li>
<li>Chaouche-Drider, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+commensal+Helicobacter+sp.+of+the+rodent+intestinal+flora+activates+TLR2+and+NOD1+responses+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A commensal Helicobacter sp. of the rodent intestinal flora activates TLR2 and NOD1 responses in epithelial cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5396(2009).</li>
<li>Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+bilis%3A+bacterial+provocateur+orchestrates+host+immune+responses+to+commensal+flora+in+a+model+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Helicobacter bilis: bacterial provocateur orchestrates host immune responses to commensal flora in a model of inflammatory bowel disease.</a> Gut. 56 (7), 898-900 (2007).</li>
<li>McGee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+enhances+Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+and+LL-37%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Cholesterol enhances Helicobacter pylori resistance to antibiotics and LL-37.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (6), 2897-2904 (2011).</li>
<li>Viala, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+responds+to+peptidoglycan+delivered+by+the+Helicobacter+pylori+cag+pathogenicity+island%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Nod1 responds to peptidoglycan delivered by the Helicobacter pylori cag pathogenicity island.</a> Nature Immunology. 5 (11), 1166-1174 (2004).</li>
<li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+and+specific+PCR+method+to+detect+Helicobacter+felis+in+a+conventional+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Vaccine+Immunology%22%5BJournal%5D)">A sensitive and specific PCR method to detect Helicobacter felis in a conventional mouse model.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 3 (1), 73-78 (1996).</li>
<li>Ng, G., Every, A., McGuckin, M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+Helicobacter+felis+colonization+in+male+129%2FSv+mice+fails+to+suppress+gastritis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Increased Helicobacter felis colonization in male 129/Sv mice fails to suppress gastritis.</a> Gut Microbes. 2 (6), 358-360 (2011).</li>
<li>Ferrero, R. L., Ave, P., Radcliff, F. J., Labigne, A., Huerre, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outbred+mice+with+long-term+Helicobacter+felis+infection+develop+both+gastric+lymphoid+tissue+and+glandular+hyperplastic+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Outbred mice with long-term Helicobacter felis infection develop both gastric lymphoid tissue and glandular hyperplastic lesions.</a> The Journal of Pathology. 191 (3), 333-340 (2000).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu iletişim kuralı bir vivo içinde fare modeli Helicobacter enfeksiyon için açıklar. Yordam kritik adımlar şunlardır: 1) canlı ve hareketli bakteri; içeren Helicobacter inocula hazırlanması 2) için fareyi intragastric sonda ile besleme yoluyla bakteri uygun sayıda teslim; 3) koloni sayımı ve/veya PCR bakteriyel enfeksiyon tespiti; ve 4) işleme histopatoloji içinde değerlendirilmesi etkinleştirmek için mide dokuların enfekte mideleri. Değişiklikler, sorun giderme ve teknik konuları için başka ön...

Helicobacter pylori enfeksiyonu oranları gelişmekte olan ülkelerde % 801sırasına göre olduğu tahmin ile dünya çapında spiral şeklinde, gram-negatif, insan mide patojen mevcut tüm nüfus var. Her ne kadar çoğu H. pylori-enfekte bireylerin asemptomatik, biraz daha ağır hastalıkları, peptik ülser mide kanseri2' ye kadar geliştirmek. H. pylori-ilişkili kanserler geniş oluşumu ekstra nodal lenfoid doku mide, mide adenokarsinom sonuçlanan veya mukoza ilişkili lenfoid veya malign degisimler epitel hücreleri (GECs) tarafından karakterize doku (MALT) Lenfoma, anılan sıraya göre. H. pylori mide çeşitli virülans faktörleri ve mekanizmaları, bağlılık, büyüme ve metabolizma bu niş içinde kolaylaştırmak varlığı nedeniyle sert ekolojik niş içinde hayatta kalmak için son derece uyarlanmıştır. Özellikle, öldürücü soy-in H. pylori 40 kb cag patojenitesi Adası (cagPAI) yaklaşık 30 genler bir tip 4 salgı sistemi (T4SS)3,4 üretimi için gerekli kodlar sahip . cag PAI-pozitif H. pylori suşları karıştığı gastrik adenokarsinom5temel bir habercisi konak, kronik inflamasyon yüksek düzeyde indüksiyon ile ilişkilidir.
İn vivo hayvan modelleri, özellikle fareler, araştırmacılar host, H. pylori enfeksiyonu ve hastalık sonucu6bakteriyel ve çevresel faktörlere göreli katkılarıyla araştırmak için izin vererek son derece bilgilendirici olmuştur. Çalışmalar daha önce gösterdi bu uzun H. pylori enfeksiyonu C57BL/6 genetik arka plan sonuçlarını geliştirme kronik gastrit ve bezi farelerin atrofi, H. pylori enfeksiyonu7her iki işaretlerinden. Ayrıca, enfeksiyon ile ilgili kedi/köpek bakteriyel türler, H. felis, MALT oluşumu benzer patoloji ve insan MALT lenfoma8,9' da görüldüğü gibi hastalık ilerlemesi ile farelerde ikna etmek için gösterilmiştir. En sık kullanılan H. pylori izole fare kolonizasyon çalışmaları olduğunu "Sydney zorlanma 1" hangi cagPAI+ ama işlevsel olmayan bir T4SS vardır (SS1) zorlanma10, (T4SS−)11. H. pylori yaygın olarak kullanılan diğer suşları dahil B128 7,13 (cagPAI+/T4SS+) (cagPAI-/T4SS−)1312 ve X47-2AL. H. felis enfeksiyonları, zorlanma CS1 için ("kedi sarmal 1", cagPAI-/T4SS−) olduğunu genellikle kullanılan14.
Burada, Helicobacter inocula vivo içinde enfeksiyon için yordamı farelerin intragastric sonda ile besleme için hem de histopatolojik değişikliklerin incelenmesi için dokuların işleme yöntemleri hazırlanması açıklayan bir protokol sağlar mide. Özellikle, bu makalede bakteriyel kolonizasyon görselleştirmek ve MALT oluşumu, virüslü fareleri gastrik mukoza dahil histopatolojik değişiklikleri değerlendirmek için kullanılan histolojik yöntemleri ele alınacak. Burada açıklanan yöntemlerden bazıları diğer gut patojenleri S. gibi çalışmanın adapte olabilir Typhimurium veya C. rodentium.

<table><tbody><tr><td>< güçlü > Bakteriyolojik reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Oksoid Kan Agar Tabanı No.2</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CM0271B</td><td>Sterilizasyondan önce deinonize suda çözün</td></tr><tr><td>Premium Defibrine At kanı</td><td>Avustralya Etik Biyolojikleri</td><td>PDHB100</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Beyin Kalp İnfüzyon Suyu</td><td>BD Bioscience</td><td>237500</td><td>Sterilizasyondan önce deinonize suda çözün</td></tr><tr><td>CampyGen gaz paketleri</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>CN0035A/CN0025A</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>histolojik reaktifler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>formalin, nötr tamponlu, %10</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Mutlak alkol, %100 denatüre</td><td>ChemSupply</td><td>AL048-20LP</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol (2-propanol)</td><td>Merck</td><td>100995</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen (kükürtsüz)</td><td>ChemSupply</td><td>XT003-20L</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Amber Scientific</td><td>MH-1L</td><td>Kullanmadan önce filtreleyin</td></tr><tr><td>Eozin, Sulu Leke</td><td>Amber Scientific</td><td>EOCA-1L</td><td>Kullanmadan önce filtreleyin</td></tr><tr><td>Wright-Giemsa Stain, modifiye</td><td>Sigma Aldrich</td><td>WG80-2.5L</td><td>Kullanmadan önce seyreltin (%20 Giemsa, %80 deiyonize su)</td></tr><tr><td>Histolene</td><td>Grale Scientific</td><td>11031/5</td><td></td></tr><tr><td>DPX montaj ortamı</td><td>VWR</td><td>1.00579.0500</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Moleküler biyoloji reaktifleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA BR Test Kiti</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q32850</td><td></td></tr><tr><td>Oligonükleotidler</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Bu çalışmada kullanılan ureB primerlerinin tavlama sıcaklığı 61 °C'dir; C</td></tr><tr><td>GoTaq Flexi DNA Polimeraz</td><td>Promega</td><td>M8291</td><td>Kiti, 10x PCR tamponu ve Magnezyum Klorür</td></tr><tr><td>dNTP'leri</td> içerir <td>Bioline</td><td>BIO-39028</td><td>Kullanmadan önce steril nükleaz içermeyen suda 10 mM'ye seyreltin</td></tr><tr><td>Moleküler Sınıf Agaroz</td><td>Bioline</td><td>BIO-41025</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Hidrojen Karbonat</td><td>Univar (Ajax İnce Kimyasallar)</td> <td>A475-500G</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Sülfat Heptahidrat</td><td>Kimyasal Tedarik</td><td>MA048-500G</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Antibiyotikler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vankomisin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V2002-1G</td><td>Deiyonize suda çözün</td></tr><tr><td>Polimiksin B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4932-5MU</td><td>Deiyonize suda çözün</td></tr><tr><td>Trimetoprim (&ge; % 98 HPLC)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>T7883</td><td>% 100 (mutlak) Etanol</td></tr><tr><td>Amfoterisin</td><td>Amresco (Astral Scientific)</td> <td>E437-100MG</td><td>Deiyonize suda çözün</td></tr><tr><td> Bacillus licheniformis</td> <td>Sigma</td><td>Aldrich B0125</td><td>Deiyonize suda çözün</td></tr><tr><td>Naladixic asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N8878</td><td>Deiyonize suda çözün</td></tr><tr><td>< güçlü > Diğer reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Metoksifluran (Pentrhox)</td><td>Tıbbi Gelişmeler Uluslararası</td><td>Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Parafin Mumu</td><td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman ve plastik eşya</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxoid Anaerobik Kavanozlar</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>HP0011/HP0031</td><td></td></tr><tr><td>COPAN Pasteur Pipetler Interpath</td><td>Hizmetleri</td><td>200CS01</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5810R santrifüj Bakteri peletlerini</td><td></td><td></td><td>2.200 rpm'de 4 &°C'de 10 dakika santrifüjleyerek toplayın; C</td></tr><tr><td>23 g hassas kayma iğnesi</td><td>BD Bioscience</td><td>301805</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td>Bemis, VWR</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Portex ince delikli polietilen boru</td><td>Smiths Medical</td><td>800/100/200</td><td></td></tr><tr><td>Plastik besleme kateterleri</td><td>Instech&nbsp; Laboratuvarlar</td><td>FTP20-30</td><td></td></tr><tr><td>1 mL tüberkülin luer slip tek kullanımlık şırıngalar</td><td>BD Bioscience</td><td>302100</td><td></td></tr><tr><td>1.2 - 2 mL tüpler için Eppendorf mikrohavan tokmağı</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z317314</td><td>Mide homojenizasyonu için kullanılan otoklavlanabilir polipropilen tokmaklar</td></tr><tr><td>GentleMACs Dissosiator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>Fare mide dokusu için önceden ayarlanmış bir gentleMACS Programları kullanın</td></tr><tr><td>M Tüpler (turuncu kapak)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>30-093-236</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Florometre</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Steril plastik halka</td><td>LabServ</td><td>LBSLP7202</td><td></td></tr><tr><td>Soğuk Plaka, Leica EG1160 Gömme Sistemi</td><td>Leica Biosystems</td><td>Uygulanamaz</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Taban Kalıp Sistemi, Taban Kalıbı 38 x 25 x 6</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4124</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek III Uni-Casette Sistemi</td><td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>Microtome, Leica RM2235</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Şarjlı SuperFrost Plus cam slaytlar</td><td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr></tbody></table>

fare modelleri helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojiler

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Helicobacter pylori dünya nüfusunun yarısı var ve önemli bir morbidite ve mortalite insanlarda nedenidir bir mide patojeni var. Birkaç fare modelleri gastrik Helicobacter enfeksiyonunun sayede H. pylori bakteri mide insan ana kolonize ve hastalığa neden moleküler ve hücresel mekanizmaları incelemek için geliştirilmiştir. Burada, biz protokollere tarif: 1) intragastric sonda ile besleme; yoluyla farelerin vivo içinde enfeksiyon Bakteriyel süspansiyonlar hazırlamak 2) polimeraz zincir tepkimesi (PCR) ve uygun hesap tarafından fare gastrik dokularda bakteriyel kolonizasyon düzeylerini belirlemek; ve 3) patolojik değişiklikler, Histoloji tarafından değerlendirmek. Kurmak Helicobacter farelerde enfeksiyon için belirli patojen-Alerjik (SPF) hayvanlar ilk fare kolonileşmesi suşları ya Helicobacter pylori , süspansiyonlar (≥105 koloni oluşturan birimler, CFUs içeren) ile aşılanmış veya hayvanlardan, diğer mide Helicobacter spp. gibi Helicobacter felis. Uygun zaman-puan sonrası enfeksiyon mideleri varlığına ve sagittally iki eşit doku parçaları, her test ve vücut bölgelerinde oluşan disseke. Diğer histolojik işleme tabi tutulur iken bu parçaları birini daha sonra uygun sayma ya da DNA ekstraksiyon, için kullanılır. Bakteriyel kolonizasyon ve midede histopatolojik değişiklikleri düzenli olarak Warthin yıldızlı, Giemsa veya Haematoxylin ve eozin (H & E) lekeleri, uygun ile lekeli gastrik doku bölümlerde değerlendirildi. Ek immünolojik değerlendirmeler de immünhistokimya veya fare gastrik doku bölümlerinde ayirt tarafından üstlenilen. Aşağıda açıklanan protokoller gastrik patolojiler bu insan ile ilgili H. pylori benzeyen farelerde değerlendirilmesi etkinleştirmek için özel olarak tasarlanmış hastalıklar, iltihap, bezi atrofi ve lenfoid folikül oluşumu gibi. İnoculum hazırlanması ve intragastric sonda ile besleme iletişim kuralları da fare, Salmonella Typhimurium veya Sitrobacter rodentiumgibi kolonize diğer enterik insan patojenleri patogenezinde çalışmaya adapte olabilir.

Bu iletişim kuralı ile H. pylori ya da H. felis intragastric enfeksiyon fare fare modelleri (Şekil 1) elde etmek için bir oral gavaj tekniği açıklar. Ötenazi, mideleri kaldırılır, tartılır ve test, vücut ve glandüler gastrik dokuları (Şekil 2) bölgelerinde oluşan 2 eşit yarıya bölünmüş. Glandüler olmayan bölge herhangi bir analizleri gerçekleştirmeden önce kaldırılır.
Hayvanların başarılı kolonizasyon genellikle uygu...

Fareler enfeksiyon ve gastrointestinal mikroorganizmalar tarafından neden olduğu hastalıklar çalışmaya bir çok değerli vivo içinde modeli temsil. Burada, bakteriyel kolonizasyon ve Helicobacter pylorifare modelleri histopatolojik değişiklikleri incelemek için kullanılan yöntemleri tarif-hastalığı ile ilgili.

Fare modelleri Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojiler

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Bu yöntem mikrobiyota üyelerinin etkisi hakkında gastroenteroloji alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, özellikle cins Helicobacter olanlar, inflamasyon ve kanser. Bu tekniğin en büyük avantajı, helicobacter enfeksiyonunun incelenmesine ve fizyolojik koşullar altında mide üzerindeki etkisine olanak sağlamasıdır. Bu tekniğin sonuçları, Helicobacter enfeksiyonunun önlenmesi veya ortadan kaldırılması veya antibiyotikler, ilaçlar veya aşılar da dahil olmak üzere sonuçları için tedavilerin geliştirilmesine yönelikdir.Bu yöntemler Helicobacter enfeksiyonunun patogenezine özgü bir içgörü sağlar. Ancak, tekniklerin birkaç diğer gastrointestinal patojenlerin çalışmaya adapte edilebilir. Genel olarak, bu yönteme yeni bireyler farelerde enfeksiyon kurma yeteneğine sahip bir bakteriyel inoculum hazırlanması ile mücadele edecek.Helicobacter izole lerinin, yoğun bir alt kültürden in vitro geçirmiş olmayan fare kolonileştirme suşları olarak bilinmesi zorunludur. Buna ek olarak, bu suşlar için in vitro alt kültürlerin sayısı kaydedilmelidir. 15 mililitrelik polistiren tüplere bakteriyel süspansiyonlar ekleyin ve her kültürden 10 ila 20 mikrolitrelik damlacıkları tek tek cam mikroskop slaytlarına aktarmak için plastik bir döngü kullanın.Daha sonra, faz kontrastlı mikroskopi altında bakterilerin canlılığını ve hareketliliğini 100 kat daha fazla büyütmede değerlendirin. Bakterilerin çoğunluğu basilşeklinde ise sadece H.pylori inocula kullanın. H.felis inocula öncelikle sarmal şekilli bakteriler içermelidir.Ve inocula'yı tek kullanımlık, tek kullanımlık, mililitreşileşlere yükleyin. Her şırıngayı 23 kalibrelik bir iğneyle donatın ve her iğneye tek kullanımlık polietilen kateter takmak için plastik parafin film kullanın. Daha sonra, altı ila sekiz haftalık spesifik patojensiz ve Helicobacter içermeyen fareyi boyun ve kuyruğun ensesine elle dizginler ve açık çenenin ortasına bir kateter yerleştirin.Kateteri yemek borusuna doğru bir kateterde yönlendirin, farenin boynunu uzatarak yemek borusundan mideye ve trakeadan uzaklaşın, kateterin çoğu veya tamamı artık görünmez olana ve bir direnç hissedilene kadar. Sonra, en iyi kolonizasyon ve hastalık patolojisi sağlamak için beşinci bakterilere en az bir kez 10 teslim. Deneyin sonunda, mide eksizyonu için karın boşluğu açmak için ince, kavisli makas kullanın.Büyük eğrilik boyunca mide kesin ve yavaşça herhangi bir artık gıda kaldırmak için yıkama başına taze PBS bir 50 mililitrelik tüp iki kez organ yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, ıslak ağırlığı kaydetmek için bir katranlı, altı santimetre, plastik Petri çanak içine doku yerleştirin. Midedüzleştirme sonra, antrum oluşan iki eşit doku parçaları halinde sagittally örnek ikiye bölün, vücut, ve non-glandüler forestomach bölgeleri.Non-glandüler bölge çıkarın ve planlanan downstream analizi için uygun çözüm doku parçası depolamadan önce her midenin yarısı tartMak. Mide dokusunun diğer yarısını %10 formalin içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe ekleyin ve 10 saniye sonra tüplerin üst taraflarına dokuları düzleştirmek. Dokular tüp duvarlarına yapıştırılmış hale geldiğinde, en az 24 saat boyunca formalin örnekleri yeniden batırın.Midede enfeksiyon sonrası canlı H.pylori sayısını saymak için, BHI'de depolanan mide örneklerini homojenize eder ve ortaya çıkan gastrik homojenlerin taze, steril et suyunda seri seyreltmeler gerçekleştirir. Önceden kurutulmuş at kanı agar, veya HBA, plakalar üç veya dört segmente ek antibiyotikler ile takviye bölmek ve Miles ve Misra tekniğinin bir adaptasyon kullanarak, her agar plaka bir segment üzerine her mide homojen seyreltme 10 ila 100 mikrolitre ekleyin. Steril, plastik döngüler ile homojenleri yayın ve plakaların kurumasını bekleyin.Daha sonra, su petri çanak ve bir gaz paketi içeren anaerobe gaz kavanoz ters bir pozisyonda plakaları yerleştirin. Sonra, kavanozları 37 derecede 4-7 gün kuluçkaya yatırın. Koloniler gözlemlenebildiği zaman, 10 ila 100 izole koloni içeren segmentleri sayısal.Ötenaziden sonra mide hayvanlardan hasat edilir ve tartılır. Non-glandüler bölge kaldırılır, ve mide antrum ve vücut oluşan iki eşit yarıya ayrılır. Başarılı kolonizasyon genellikle hba plakaları üzerine çizgili gastrik homojenatlardan bireysel kolonilerin canlı sayma ve sonraki numaralandırma gerçekleştirerek doğrulanır.Fare mide mikrobiyotası veya çok sayıda H.pylori kolonisinden gelen kirletici bakterilerin varlığının H.pylori CPU'ların numaralandırılmasını zorlaştırabileceğini unutmayın. Alternatif olarak, PCR H.felis ve H.pylori ureB genlerinin 325-baz çifti bölgeye yönelik özel doğrulanmış astarlar kullanarak enfeksiyonu doğrulamak için kullanılabilir. Bu temsili deneyde, yabani tip C57 Black-6 fareler, H.felis enfeksiyonu sonrası altı ay hiperplazi ve bez atrofisi de dahil olmak üzere orta derecede inflamasyon belirtileri ve submukozanın hücresel infiltrasyonu gösterdi.Daha şiddetli inflamasyon nakavt farelerde aynı anda gözlenir, lenfoid foliküllerin ek varlığı hücresel infiltratlar yakın gözlenen ile. H.felis bakterileri de enfekte fare mide dokusunun Giemsa lekeli bölümlerinde görselleştirilmiş olabilir. Bu prosedürü takiben, Helicobacter enfeksiyonu sırasında indüklenen konak yanıtlarının türleri hakkında ek soruları yanıtlamak için kantitatif PCR, immünohistokimya veya immünoresans gibi diğer yöntemler de uygulanabilmektedir.Bu teknik, gelişiminden sonra mikrobiyoloji ve gastroenteroloji alanında araştırmacıların Helicobacter pylori'nin mide hastalığındaki nedensel rolünü keşfetmelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, helicobacter türleri ile farelere nasıl tekrar bulaştıracağınız ve enfeksiyonla ilişkili patolojiyi nasıl inceleyeceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu protokolde kullanılan Helicobacter suşlarının bulaşıcı olduğunu unutmayın ve bu nedenle bu bakterilerle çalışırken her zaman standart biyogüvenlik prosedürleri izlenmelidir.

mouse-models-of-helicobacter-infection-and-gastric-pathologies

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, bir fare modelinde intragastrik gavaj tekniği ile Helicobacter pylori enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Bakteriyel süspansiyon, ağızdan mideye yerleştirilen bir kateter yoluyla uygulanır. Aşılanmış bakteriler midede kolonize olur ve konakçı-patojen etkileşimini incelemek için kullanılabilecek bir enfeksiyon oluşturur.

Farelerde Kontrollü Helicobacter Enfeksiyonu için İntragastrik Gavaj Tekniği

Bu videoda, kolonizasyonunu doğrulamak için enfeksiyon sonrası fare mide dokularındaki Helicobacter pylori yükünü ölçmek için bir protokol açıklıyoruz.

Enfekte Bir Fare Midesinde Helicobacter pylori Yükünün Miktarının Belirlenmesi

Bu videoda, mide patojeni Helicobacter pylori'yi organoidlerin lümenine mikroenjekte ederek bir mide organoid enfeksiyonu modeli oluşturma yöntemi gösterilmektedir. Bu model, mide hücrelerinde enfeksiyona bağlı değişikliklerin incelenmesine yardımcı olur.

Mide Organoidlerinin Patojen Bakterilerle Mikroenjeksiyonu Yoluyla Enfeksiyon Modelinin Oluşturulması

Burada, Cag Tip IV Salgı Sistemi (Cag-T4SS) olarak bilinen onkojenik bakteri organelini görselleştirmek için bir yöntem açıklıyoruz.  Cag-T4SS'nin, değişen demir mevcudiyeti koşullarına yanıt olarak H. pylori'nin yüzeyinde farklı şekilde üretildiğini bulduk.

Yüksek çözünürlüklü elektron mikroskobu Helikobakter pilori Çağ Tip IV Salgı Sistemi Pili

Bu makale, fareler üzerinde gastroözofageal reflü cerrahi prosedürlerini gösterir. Bu modeller, gastroözofageal reflü hastalığının ve potansiyel olarak Barrett’s özofagus ve özofagus adenokarsinomunun mekanizmaları ve tedavisi üzerinde araştırmalar için yararlı araçlardır.

Fare ile Gastroözofageal Reflü Cerrahi Modelleri

Kök hücre türevli kültürler, bulaşıcı hastalıkları modellemek için muazzam bir potansiyel barındırıyor. Burada, yetişkin kök hücrelerden türetilen fare ve insan mide organoidlerinin kültürü anlatılmaktadır. Organoidlere mide patojeni Helicobacter pylori mikroenjekte edilir.

Enfeksiyon Hastalıkları Modeli Olarak Organoids: Helicobacter Pylori ve İnsan Kültür ve kemirgen Mide Organoids ve Mikroenjeksiyon

Burada biz kurmak ve 3 boyutlu (3D) Gastrik organoids insan ve fare türetilen ve yöntemi 3D organoids aktarmak için bir 2-boyutlu monolayer kültür bir protokol tanımlamak. Yenilenme çalışmaları bir roman çizik-yara tahlil olarak Gastrik epitel monolayer kullanımı da açıklanmıştır.

Fare ve insan elde edilen birincil Gastrik epitel Monolayer kültür yenilenme çalışmaları için

Burada, daha önce endoskopik biyopsi ile gastrik düşük dereceli intraepitelyal neoplazi tanısı alan hastaların sistematik bir değerlendirmesini yaptık ve endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) ile lezyonun tam rezeksiyonu ile patolojik tanı aldık ve patolojik tırmanma riskini potansiyel olarak artıran faktörleri analiz ettik.

Gastrik Düşük Dereceli İntraepitelyal Neoplazilerin Patolojik Tırmanışı İçin Risk Tahmin Modelinin Oluşturulması ve Değerlendirilmesi

Bu protokol, fare bağırsağı için geliştirilen "Swiss roll" tekniğinden modifiye edilmiş tüm mide bağışıklık boyama yöntemini açıklar.

Değiştirilmiş İsviçre Roll Tekniği Kullanarak Fare Mide Kası Katmanlarının Geliştirilmiş Mekansal Haritalanması

Bu video transüretral fare idrar yolu enfeksiyonlarına neden ve enfeksiyonların sonucunda dereceye ölçmek için yöntemler gösterecektir.

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Keşfedin fare modellerinde Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojileri çalışma yöntemlerini. Bu teknik, gastroenteroloji ve mikrobiyoloji alanında iltihaplanma ve kanser üzerine önemli bilgiler sunar.

Fare modelleri Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojiler

Daha fazla video keşfet