Name: Hızlandırılmış, etiket içermeyen, nicel faz uyuyan ve aktif insan kanser hücrelerinin çalışma görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Öğrenin, insan osteosarkoma hücrelerinin anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan fenotiplerini nicel faz görüntüleme ile karakterize etme yöntemini. Bu entegre teknik, hücre morfolojisi, proliferasyon ve hareketlilik analizlerini birleştirerek kanser ilerlemesine dair kapsamlı bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar meme kanseri Araştırma Vakfı ve gelişmiş tıbbi araştırma Vakfı desteğiyle minnetle kabul etmiş oluyorsunuz.

Tüm yöntem tanımlamak burada Boston Çocuk Hastanesi kurumsal Biyogüvenlik Kurulu tarafından onaylanmıştır.
1. hücre hazırlık
<ol><li>
KHOS-bir çözülme ve -N hücreleri
	<ol>
<li>Kültür orta, Yani, ısınmak Dulbecco'nın kartal orta % 10 (vol/vol) fetal buzağı serum (FBS) ve % 1 (vol/vol) penisilin/streptomisin ile desteklenmiş değiştiren.</li>
		<li>Kriyojenik şişeleri hücrelerinin sıvı azot tankından al, şişeleri dibinde bir 37 ° C su banyoda sıcak su içine sokmak ve çözülme sürecini hızlandırmak için kriyojenik şişeleri yavaşça salla. Kriyojenik şişeleri ağzını su kirlenmesini önlemek için iletişim kurmanızı tut. En kısa zamanda hücreleri çözdürülen, kriyojenik şişeyi % 70 etanol çözüm püskürtme ve şişe silinerek sterilize.</li>
		<li>Laminar akış hood, hemen hücre süspansiyon kriyojenik şişe dan Aspire edin ve yavaşça 10 mL sıcak kültür (1.1.1 içinde açıklanan) ortamda askıya alma. Hücre süspansiyonlar, yaklaşık 200 x g için 5-7 dk santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Hücre Pelet 10 mL sıcak kültür orta ile resuspend ve bir T75 şişesi aktarın. Yavaşça birkaç kez pipet eşit bir 10 mL damlalıklı kullanarak hücreleri askıya alma.</li>
		<li>%5 (vol/vol) CO2 ve oksijen atmosferi ile 37 ° C kuluçka makinesi içine şişeye koyun. Hücreleri en az 12 h eklemek izin verir.</li>
		<li>Yaklaşık 3-7 gün öncesine kadar % 80-100 birleşmesi için hücreleri kuluçkaya. Kültür orta 2-3 günde değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
KHOS-A bölme ve -N hücreleri
	<ol>
<li>Kültür medya balonun kaldırın.</li>
		<li>5 mL steril PBS hücrelerle yıkayın (1 x) kalsiyum ve magnezyum sigara yapışık hücreleri veya kesir kaldırmak için olmadan.</li>
		<li>1 mL % 0.05 tripsin-EDTA çözüm balonun ekleyin ve kısa bir süre şişeye tripsin-EDTA eşit dağınık emin olmak için girdap.</li>
		<li>2-3 dk 37 ° C kuluçka veya 3-5 dk oda sıcaklığında şişeye kuluçkaya. Hücreleri yukarı yuvarlamak ve müstakil emin olmak için yaklaşık 400 x büyütme, mikroskop altında hücreleri denetleyin.</li>
		<li>Sonra hücreleri ayrılır, 10 mL kültür orta ekleyin ve hafifçe yukarı ve aşağı birkaç kez hücre toplamları 10 mL damlalıklı kullanarak bir tek hücre süspansiyon içine bölmek için orta pipette.</li>
		<li>Bir hücre sayaç kullanarak hücreleri saymak. 2 × 106 hücre yoğunluğu veya bir oranı 1:4 yeni T75 şişeler içine hücre süspansiyon tohum.</li>
		<li>Hücreleri QPI deneme için tohum önce 80-%100 izdiham için büyümeye izin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
KHOS-A tohum ve QPI için -N hücreleri
	<ol>
<li>Tohum KHOS-A ve 6-şey plakaları, 50.000-300,000 hücreler/iyi ile 5 mL kültürü olan bir hücre sayaç sayım sonra Orta yoğunluk -N hücrelerde. Not: Tohum yoğunluğu için hücre proliferasyon hızı ve görüntüleme dönemini bağlıdır < % 100 izdiham edinme görüntüleme sırasında.</li>
		<li>Hücreler için ek izin vermek en az 12 h kuluçkaya.</li>
		<li>Taze medya ile orta QPI gerçekleştirmeden önce değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. QPI edinme
<ol><li>
Kapak kurmak slip
	<ol>
<li>Birkaç kez çalıştıran deiyonize su ile durulama tarafından kapak notu temiz ve 15 dk. kapak notu kuru steril laminar akış hood koymak için daldırma tarafından % 75 etanol çözüm ile sterilize.</li>
		<li>Dikkatlice kapak notu açık kabarcıklar önlemek için bir 6-şey plaka üzerine koyun. Alt kapak fişinin kültür medya (en az 5 mL/de) dalmış emin olun.</li>
		<li>Plaka (37 ° C, % 5 CO2ve oksijen atmosfer) en az 15 dakikadır equilibrate kuluçka makinesi yerleştirin. Sis ile ilgili kapak formu oluşturur, steril pamuklu çubukla temiz silmek için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücreler mikroskopla görüntüleme
	<ol>
<li>Kendi kendine kalibrasyon pozlama süresi, desen kontrast ve hologram gürültü de dahil olmak üzere sistem başlatmak için yazılımını açın. (Yeşil veya sarı aralığında gösterilmiştir) değerleri kabul edilebilir olduğundan emin olun.</li>
		<li>6-şey plaka Sahne Alanı'na QPI mikroskop yer.</li>
		<li>"Canlı yakalamak"'ı tıklatın ve "El ile" seçeneğini "Yazılım odakta." Kaba "Mikroskop ayarı" iş uzaktan ayarlayarak hücreleri faz görüntülerini odaklanmak özetliyor hücrelerin faz görüntüler elde etmek için. Değiştirmek için "Otomatik" "Yazılım odak."</li>
		<li>"Yeni bir deneme"'ı tıklatın Yeni bir deneme oluşturmak için. Sayısal altlığında fareyi veya ok tuşlarını kullanarak görüntü Alım pozisyonları yelpazesi ile başlayın. "Hatırla" her seçimden sonra'ı tıklatın. Normalde 3-5 konumları her örnek için seçilir.</li>
		<li>Görüntüleme aralığı ve zaman dilimi "Timelapse" bölümünde ayarlayın. Not: kanser hücrelerinin açıkça izlemek için aralıkları 5 dk. 48 saat süre kasanın QPI analiz olarak ayarlanmış olan daha kısa olması gerekir.</li>
		<li>Hangi automatically odak ve görüntüleri ayarı zaman noktalarda "Yakalama" tıklayarak deneme başlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. veri analizi
<ol><li>
Hücre Morfoloji analizi
	<ol>
<li>"Hücreleri tanımlamak." tıklayın Böylece arka plan gürültü de ayrılmış hücre alanları "İçin arka plan eşik" sayısal ayarını ayarlayın. "Nesne boyutu" ayarı numarasını ayarlamak her hücre bir çekirdeğe sahiptir emin olmak için. Bunlar son alan ve hacim ölçüleri etkileyebilir gibi karşılaştırılması gereken örnekleri için tutarlı parametreleri korumak. El ile hücre kesimleri "El ile değişiklik," kullanarak gerekirse değiştirin.</li>
		<li>Hücreleri çözümlemek için yazılımda "verileri çözümlemek" işlevini kullanın. Yeni bir veri analizi "Yeni analiz." tıklayarak başlatın Seçilen görüntüler hücre alanı (µm2), optik kalınlık (µm) ve cilt (µm3) için tek tek her hücre de dahil olmak üzere "Kaynak çerçeveler" sekmesini ve hücre morfolojisi parametreleri içine sürükleyin. Dağılım çizim veya çubuk grafik modu ve ihracat verileri tablo veya şekiller olarak seçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücre çoğalması analizi
	<ol>
<li>Farklı zaman makas-in ilgi (örneğin, ilk, 12 h, 24 h, 36 h ve 48 h) için en az 5 resim seçin. Yazılım tarafından sağlanan kayıt hücre sayıları.</li>
		<li>Katlama zaman tahmin etmek için hücre sayıları ile ilk sayılar normalize sonra arsa ve üstel büyüme eğrileri ile uygun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücre hareket analizi
	<ol>
<li>Yazılım "hücreleri izleme" işlevini kullanın. "Yeni analiz"'ı tıklatın Yeni veri analizi başlatmak için. Sürükle serisi için belirlenen zaman dilimi (örneğin, 4 h 24 h kuluçka sonra) "Kaynak çerçeveler" sekmesini içine görüntülerin rastgele 10-30 hücreleri "Hücre Ekle" seçim modu altında hücreleri tıklatarak seçin. Kenarları ve bu görüş alanı dışında hücreleri hariç.</li>
		<li>Görüntüleri dizi izlemede dikkatlice kontrol edin. Sistem bir hücreye mefhumunu kaybeder veya yanlış hücre izler olay bu, el ile izleme hücre hücreleri tanımlamak için "tanımlamak" veya "yer değiştirme" seçeneğinin tıklatılması tarafından hücre konumu değiştirmek için "Select" modunda ayarlayın.</li>
		<li>Hücre yörüngeler "Arsa hareketi" gül arsa veya arsa "Arsa özellikleri sayfasında" hareketliliği hız (µm/h), motilite (µm), geçiş (µm) ve geçiş telaş gibi diğer hareket etme parametreler için seçin. Veri tabloları veya rakamlar olarak verin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer%2C+vascular%2C+rheumatoid+and+other+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease.</a> Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).</li>
<li>Hanahan, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+emerging+mechanisms+of+the+angiogenic+switch+during+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis.</a> Cell. 86 (3), 353-364 (1996).</li>
<li>Harper, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+tumor+angiogenesis%3A+mechanisms+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22EXS%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of tumor angiogenesis: mechanisms and therapeutic implications.</a> EXS. (96), 223-268 (2006).</li>
<li>Naumov, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+human+tumor+dormancy%3A+an+angiogenic+switch+from+the+nonangiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">A model of human tumor dormancy: an angiogenic switch from the nonangiogenic phenotype.</a> Journal of the National Cancer Institute. 98 (5), 316-325 (2006).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinase-2+is+required+for+the+switch+to+the+angiogenic+phenotype+in+a+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinase-2 is required for the switch to the angiogenic phenotype in a tumor model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (8), 3884-3889 (2000).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+switch+of+dormant+tumors+to+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptional switch of dormant tumors to fast-growing angiogenic phenotype.</a> Cancer Research. 69 (3), 836-844 (2009).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signature+for+angiogenic+and+nonangiogenic+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gene expression signature for angiogenic and nonangiogenic non-small-cell lung cancer.</a> Oncogene. 24 (7), 1212-1219 (2005).</li>
<li>Harper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+vascular+endothelial+growth+factor+expression+by+the+zinc+finger+transcription+factor+ZNF24%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Repression of vascular endothelial growth factor expression by the zinc finger transcription factor ZNF24.</a> Cancer Research. 67 (18), 8736-8741 (2007).</li>
<li>Jia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+repression+of+VEGF+by+ZNF24%3A+mechanistic+studies+and+vascular+consequences+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Transcriptional repression of VEGF by ZNF24: mechanistic studies and vascular consequences in vivo.</a> Blood. 121 (4), 707-715 (2013).</li>
<li>Jia, D., Huang, L., Bischoff, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endogenous+zinc+finger+transcription+factor%2C+ZNF24%2C+modulates+the+angiogenic+potential+of+human+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The endogenous zinc finger transcription factor, ZNF24, modulates the angiogenic potential of human microvascular endothelial cells.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 29 (4), 1371-1382 (2015).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+dormancy+of+human+liposarcoma+is+associated+with+impaired+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Prolonged dormancy of human liposarcoma is associated with impaired tumor angiogenesis.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 20 (7), 947-949 (2006).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+micro+RNAs+governing+the+switch+of+dormant+tumors+to+the+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Consensus micro RNAs governing the switch of dormant tumors to the fast-growing angiogenic phenotype.</a> PloS One. 7 (8), e44001(2012).</li>
<li>Satchi-Fainaro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+glioblastoma+cells+generating+dormant+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of glioblastoma cells generating dormant tumors.</a> PloS One. 7 (9), e44395(2012).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+changes+induced+by+the+tumor+dormancy-associated+microRNA-190%5BTitle%5D)+AND+%22Transcription%22%5BJournal%5D)">Transcriptional changes induced by the tumor dormancy-associated microRNA-190.</a> Transcription. 4 (4), 177-191 (2013).</li>
<li>Gao, D., Nolan, D. J., Mellick, A. S., Bambino, K., McDonnell, K., Mittal, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+control+the+angiogenic+switch+in+mouse+lung+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis.</a> Science. 319 (5860), New York, N.Y. 195-198 (2008).</li>
<li>Folkman, J., Watson, K., Ingber, D., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+angiogenesis+during+the+transition+from+hyperplasia+to+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Induction of angiogenesis during the transition from hyperplasia to neoplasia.</a> Nature. 339 (6219), 58-61 (1989).</li>
<li>Popescu, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPopescu%2C+G+%22Quantitative+phase+imaging+of+cells+and+tissues%22">Quantitative phase imaging of cells and tissues</a>. , McGraw-Hill: New York. (2011).</li>
<li>Lee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Phase+Imaging+Techniques+for+the+Study+of+Cell+Pathophysiology%3A+From+Principles+to+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">Quantitative Phase Imaging Techniques for the Study of Cell Pathophysiology: From Principles to Applications.</a> Sensors. 13 (4), 4170-4191 (2013).</li>
<li>Mir, M., Bhaduri, B., Wang, R., Zhu, R., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Phase+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Optics%22%5BJournal%5D)">Quantitative Phase Imaging.</a> Progress in Optics. 57, 133-217 (2012).</li>
<li>Marrison, J., Räty, L., Marriott, P., O'Toole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ptychography--a+label+free%2C+high-contrast+imaging+technique+for+live+cells+using+quantitative+phase+information%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Ptychography--a label free, high-contrast imaging technique for live cells using quantitative phase information.</a> Scientific Reports. 3, 2369(2013).</li>
<li>Falck Miniotis, M., Mukwaya, A., Gjörloff Wingren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+holographic+microscopy+for+non-invasive+monitoring+of+cell+cycle+arrest+in+L929+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Digital holographic microscopy for non-invasive monitoring of cell cycle arrest in L929 cells.</a> PloS One. 9 (9), e106546(2014).</li>
<li>Popescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+cell+mass+and+growth+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22AJP%3A+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of cell mass and growth dynamics.</a> AJP: Cell Physiology. 295 (2), C538-C544 (2008).</li>
<li>Guo, P., Huang, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dormant+and+active+human+cancer+cells+by+quantitative+phase+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry.+Part+A%3A+The+Journal+of+the+International+Society+for+Advancement+of+Cytometry%22%5BJournal%5D)">Characterization of dormant and active human cancer cells by quantitative phase imaging.</a> Cytometry. Part A: The Journal of the International Society for Advancement of Cytometry. 91 (5), 424-432 (2017).</li>
<li>Mir, M., Bergamaschi, A., Katzenellenbogen, B. S., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+quantitative+imaging+for+monitoring+single+cancer+cell+growth+kinetics+and+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive quantitative imaging for monitoring single cancer cell growth kinetics and drug response.</a> PloS One. 9 (2), e89000(2014).</li>
<li>Mir, M., Tangella, K., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+testing+at+the+single+cell+level+using+quantitative+phase+and+amplitude+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Blood testing at the single cell level using quantitative phase and amplitude microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 2 (12), 3259-3266 (2011).</li>
<li>Park, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+red+blood+cell+mechanics+during+morphological+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Measurement of red blood cell mechanics during morphological changes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (15), 6731-6736 (2010).</li>
<li>Pham, H. V., Bhaduri, B., Tangella, K., Best-Popescu, C., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real+time+blood+testing+using+quantitative+phase+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Real time blood testing using quantitative phase imaging.</a> PloS One. 8 (2), e55676(2013).</li>
<li>Sridharan, S., Macias, V., Tangella, K., Kajdacsy-Balla, A., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+prostate+cancer+recurrence+using+quantitative+phase+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Prediction of prostate cancer recurrence using quantitative phase imaging.</a> Scientific Reports. 5, 9976(2015).</li>
<li>Park, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+cell+surface+area+and+deformability+of+individual+human+red+blood+cells+over+blood+storage+using+quantitative+phase+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Measuring cell surface area and deformability of individual human red blood cells over blood storage using quantitative phase imaging.</a> Scientific Reports. 6, 34257(2016).</li>
<li>Bishitz, Y., Gabai, H., Girshovitz, P., Shaked, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical-mechanical+signatures+of+cancer+cells+based+on+fluctuation+profiles+measured+by+interferometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Optical-mechanical signatures of cancer cells based on fluctuation profiles measured by interferometry.</a> Journal of Biophotonics. 7 (8), 624-630 (2014).</li>
</ol>

Hiçbir çıkar çatışmaları ilan etti.

Bu çalışmada, kantitatif anjiogenik ve sigara anjiogenik fenotipleri insan osteosarkom hücreleri ayırdetmek için QPI kullanarak bir vitro, non-invaziv ve etiket içermeyen yöntemi açıklanmaktadır. Birden çok hücresel parametre aynı anda hücre alan, hücre kalınlığı, hücre hacmi, nükleer silahların yayılmasına karşı oranı, zaman, geçiş telaş, hareketliliği hız, geçiş ve hareketliliği iki katına da dahil olmak üzere bu entegre, yüksek üretilen iş yöntemine göre analiz edilmiştir.
Hücre mo...

Bir gelişme ve ilerleme bir solid tümör erken denetim noktaları anjiogenik fenotip, kanser damgasını edinimi biridir. Bu ilerleme biyokimyasal ve moleküler işlemleri1,2,3çeşitli içerir. Çalışmada tümör ilerleme anahtar bu adımda, teknik bir sorun sürekli olarak ve kantitatif karakterize ve tarafsız bir şekilde canlı kanser hücrelerinin anjiogenik ve sigara anjiogenik fenotipleri birbirinden ayırmak için Araçlar olmaması. Örneğin, Hücre proliferasyonu/geçiş4,5deneyleri, aletleri ve pahalı reaktifler anjiogenik ve sigara anjiogenik hücre hücresel davranışları genellikle araştırmak için kullanılan geleneksel deneyleri gerektirir, 6,7,8,9,10,11,12,13,14 veya tamamlayıcı vivo içinde değerlendirme4,5,6,8,15,16gibi önemli uzmanlık ve yoğun gerektiren emek ve zaman tüketimi.
Son zamanlarda, nicel faz (QPI) görüntüleme hücre morfolojisi ve davranış parametreleri17,18,19, çeşitli hızlandırılmış ve etiketleme-Alerjik değerlendirmesini sağlayan yeni bir teknik olarak ortaya çıkmıştır 20 , 21 , 22. ışık geçer bir optik nesnesi aracılığıyla ve dönüştürülmüş optik kalınlık ve ses düzeyi ile bir hologram yeniden yapılandırır sonra geleneksel optik mikroskobu QPI faz kayması piksel piksel varyasyonları böylece doğrudan etkinleştirme quantifies analiz canlı hücreleri ve aşağıdaki özellikler: (1) kantitatif görüntüleme, (2) non-invaziv ve hızlandırılmış görüntüleme, görüntü (3) etiket-Alerjik ve (4) aynı anda çok parametreli görüntüleme. Bu özellikler QPI değerlendirmek ve hücresel düzeyde patolojik süreçleri anlamak için güçlü bir araç sağlar.
Bir son çalışmada, biz QPI kantitatif karakterize ve anjiogenik arasında ayırt etmek için kullanılan KHOS-A ve anjiogenik KHOS-N fenotipleri insan osteosarkom hücreleri hücre morfolojisi, analizlerini birleştirerek sistematik ve nicel bir şekilde nükleer silahların yayılmasına karşı ve motilite23. Görüntü analiz yazılımı, bir panel kullanarak hücre morfolojik ve davranış parametreleri kantitatif anjiogenik ve sigara anjiogenik insan osteosarkom hücreleri arasında karşılaştırıldı ve bu ikisi arasında beş karakteristik farklılıkları tespit edilmiştir fenotipleri. Bu yeni yaklaşımın biyolojik ilgili hücresel özellikleri çeşitli değerlendirmek için tümleşik ve nicel bir platform sağlar.

<table><tbody><tr><td>T75 şişesi</td><td>Corning, NY, ABD</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plakalar&nbsp;</td><td>Corning, NY, Amerika Birleşik Devletleri</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifiye Eagle medium (DMEM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific, MA, ABD</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS) &nbsp;</td><td>Atlanta Biologicals, GA, ABD</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, ABD</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td> <td>Thermo Fisher Scientific, MA, ABD</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Z1 Coulter sayacı</td><td>Beckman Coulter, IN, ABD</td><td>Z1 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HoloMonitor M4</td><td>Fazlı Holografik Görüntüleme Phi AB, Lund, İsveç</td><td>M4</td><td>Mikroskop</td></tr><tr><td>Hololid</td><td>Faz Holografik Görüntüleme Phi AB, Lund, İsveç</td><td>PHI 8020</td><td></td></tr><tr><td>HStudioM4</td><td>Faz Holografik Görüntüleme Phi AB, Lund, İsveç</td><td>HStudioM4</td><td>Yazılımı</td></tr></tbody></table>

hızlandırılmış, etiket içermeyen, nicel faz uyuyan ve aktif insan kanser hücrelerinin çalışma görüntüleme

A Time-lapse, Label-free, Quantitative Phase Imaging Study of Dormant and Active Human Cancer Cells

Anjiogenik fenotip edinimi tümör uyuşukluk kaçış temel bir bileşenidir. Birkaç klasik vitro deneyleri (örneğin, nükleer silahların yayılmasına karşı göç ve diğerleri) ve in vivo modelleri araştırmak ve anjiogenik ve sigara anjiogenik hücre fenotipleri karakterize geliştirilmiştir, bu yöntemler zaman olmakla birlikte yoğun emek ve genellikle pahalı reaktifler ve aletleri yanı sıra önemli uzmanlık gerektirir. Son çalışmada, hızlandırılmış ve etiketleme-Alerjik karakterizasyonu anjiogenik ve sigara anjiogenik insan osteosarkom KHOS hücre yapmak için bir roman nicel faz (QPI) tekniği Imaging kullanılan. Bir panel hücre morfolojisi, yayılması ve hareketliliği, gibi hücresel parametrelerinin kantitatif ölçüldü ve QPI kullanılarak analiz. Bu roman ve kantitatif yaklaşım sürekli ve non-invaziv basit ve entegre bir şekilde ilgili hücresel süreçler, davranışları ve kanser hücrelerinin özellikleri ve diğer hücre tipleri çalışmaya fırsat sağlamaktadır. Bu rapor hücre hazırlık, QPI toplama ve veri analizi de dahil olmak üzere bizim deneysel protokolünü açıklar.

Şekil 1 bir tipik hücre morfolojisi karakterizasyonu gösteriyor. Görüntüleri hologramları (şekil 1A-B) ve 2D görüntüleri (şekil 1 c-D) sunulmaktadır. Optik hücre kalınlıkları (Kırılma indisi ve optik yol uzunluğu hesaplanır) satırı profil veya tüm cep telefonu ölçüm ile sayılabilir. Dağılım alanı ve kalınlık KHOS-a çizer ve tüm cep telefonu için ölçülen KHOS-N hücrel...

Uyuyan ve aktif kanser hücre fenotipleri nicel faz Imaging'i kullanma ile karakterize. Hücre çoğalması, geçiş ve Morfoloji deneyleri entegre ve basit bir yöntem ile analiz edildi.

Hızlandırılmış, etiket içermeyen, nicel faz uyuyan ve aktif insan kanser hücrelerinin çalışma görüntüleme

The acquisition of the angiogenic phenotype is an essential component of the escape from tumor dormancy. Although several classic in vitro assays (e.g., ...

Bu deneyin genel amacı, insan osteosarkom hücrelerinin anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan fenotiplerini, hücre morfolojisi, proliferasyonu ve motilite analizlerini birleştiren sistematik bir şekilde kantitatif olarak karakterize etmektir. Bu yöntem, insan kanserinin oluşumu ve ilerlemesi ile ilgili temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Özellikle, tümör dormansisinden kaçış ve endojenik anahtar.Bu tekniğin temel avantajı, çok hücreli parametrelerin bu entegre, yüksek yayılımlı yöntemle aynı anda analiz edilebilmesidir. Bu, hücre alanı, hücre kalınlığı, hücre hacmi, çoğalma hızı, iki katına çıkma süresi, hareketlilik hızı, göç ve hareketliliği içerir. Başlamak için, kültür ortamını bir su banyosunda 37 santigrat dereceye kadar ısıtın.Daha sonra anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan insan osteosarkom hücrelerinin kriyojenik şişelerini sıvı nitrojen tankından çıkarın. Şişelerin altını 37 santigrat derece su banyosuna daldırın ve çözülme işlemini hızlandırmak için kriyojenik şişeleri hafifçe sallayın. Hücreler çözülür çözülmez, şişeye% 70 etanol püskürtün ve sterilize etmek için şişeyi silin.Daha sonra hücre süspansiyonunu flakondan hemen aspire edin ve 10 mililitre ısıtılmış kültür ortamında yavaşça süspanse edin. Daha sonra, hücreleri pelet yapmak için hücre süspansiyonlarını beş dakika santrifüjleyin. Kaputun içine geri dönün, süpernatanı çıkarın ve hücre peletini 10 mililitre ısıtılmış kültür ortamı ile yeniden askıya alın.Ardından hücre süspansiyonunu bir T75 şişesine aktarın. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için hücre süspansiyonunu birkaç kez nazikçe pipetleyin. Şişeyi bir inkübatöre yerleştirin ve hücrelerin en az 12 saat bağlanmasına izin verin.Kültür ortamını her iki ila üç günde bir değiştirin. Hücreler yüzde 80 ila 100 birleşmeye ulaştığında, kültür ortamını şişeden çıkarın ve hücreleri kalsiyum ve magnezyum içermeyen beş mililitre steril PBS ile yıkayın. Daha sonra şişeye bir mililitre %0.25 tripson EDTA çözeltisi ekleyin ve şişeyi kısaca döndürün.Şişeyi iki ila üç dakika inkübe edin ve ardından hücrelerin yuvarlandığından ve ayrıldığından emin olmak için hücreleri mikroskop altında kontrol edin. Hücreler ayrıldıktan sonra, 10 mililitre kültür ortamı eklemek için bir pipet kullanın ve kalan hücre agregalarını parçalamak için ortamı birkaç kez hafifçe yukarı ve aşağı pipetleyin. Hücreleri saydıktan sonra, iki milyonunu yeni bir T75 şişesine tohumlayın.Şişeyi bir inkübatöre yerleştirin ve kantitatif faz görüntüleme deneyi için hücreleri tohumlamadan önce hücreleri yüzde 80 ila 100 arasında bir birleşim noktasına kadar büyütün. Tripson sindirimi ve tohum anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan insan osteosarkom hücrelerini, kuyucuk başına 50.000 ila 300.000 hücre yoğunluğunda altı oyuklu plakada hasat edin. Hücreleri toplam beş mililitre kültür ortamı ile örtün.Ardından, hücrelerin yapışması için zaman tanımak için plakaları en az 12 saat inkübe edin. Görüntülemeden önce ortamı yeni ortamla değiştirin. Bir kapak kızağını akan deiyonize su ile birkaç kez durulayarak temizleyin.Daha sonra 15 dakika boyunca% 75 etanol çözeltisine batırın. Sterilize edilmiş örtü kızağını kuruması için laminer bir akış başlığına yerleştirin. Daha sonra, belirgin kabarcıklardan kaçınarak kapak kızağını dikkatlice altı kuyulu bir plakaya yerleştirin.En az 15 dakika dengelemek için plakayı inkübatöre yerleştirin. Plakanın kapağında buğu oluşursa, görüntülemeden önce silerek temizlemek için steril bir pamuklu çubuk kullanın. Kantitatif faz görüntüleme yazılımını açın ve sistemi başlatın.Pozlama süresi, desen kontrastı ve hologram gürültüsünün kendi kendine kalibrasyonunda değerlerin kabul edilebilir olduğundan emin olun. Daha sonra, altı kuyulu plakayı kantitatif faz görüntü mikroskobunun sahnesine yerleştirin. Yazılıma geri dönün, canlı yakalamaya tıklayın.Ardından yazılım odak menüsüne gidin ve manuel'i seçin. Ardından, mikroskop ayar menüsüne gidin ve faz görüntülerindeki hücrelerin ana hatlarını elde etmek için çalışma mesafesini ayarlayarak hücrelerin faz görüntülerini kabaca odaklayın. İşiniz bittiğinde, yazılım odak menüsüne geri dönün ve odak ayarını otomatik olarak değiştirin.Şimdi yeni deneye tıklayın. Fareyi veya sayısal tuş takımındaki ok tuşlarını kullanarak görüntü alma konumlarını seçmeye başlayın. Her seçimden sonra hatırla'yı tıklayın.Konumların tümü seçildikten sonra, hızlandırılmış çekim bölümüne gidin ve görüntüleme aralıklarını beş dakikadan kısa olacak ve toplam süre 48 saat olacak şekilde ayarlayın. Yakala'yı tıklayarak denemeyi başlatın. Bu, her aralık zaman noktasında seçilen konumlarda görüntüleri otomatik olarak odaklayacak ve alacaktır.Görüntü alımını takiben, önce hücreleri tanımla'ya tıklayarak hücrelerin morfolojisini analiz edin. Arka plan eşiğinin sayısal ayarını, hücre alanları arka plan gürültüsünden iyi bir şekilde ayrılacak şekilde ayarlayın. Ardından, her hücrenin yalnızca bir çekirdeğe sahip olduğundan emin olmak için nesne boyutu için ayar numarasını ayarlayın.El ile değişiklikleri kullanarak, bu gereksinime uymayan hücre segmentlerini el ile değiştirin. Ardından, hücreleri analiz etmek için yazılımdaki verileri analiz et işlevini kullanın. Yeni analiz'e tıklayarak yeni bir veri analizi başlatın.Seçili görüntüleri kaynak çerçeveler sekmesine sürükleyin ve her bir hücre için hücre alanı, optik kalınlık ve hacim dahil olmak üzere hücre morfolojisi parametrelerini kaydedin. İşiniz bittiğinde, dağılım grafiğini veya histogram modunu seçin ve verileri tablo veya şekil olarak dışa aktarın. 12 saat arayla en az beş görüntü seçin ve yazılım tarafından sağlanan hücre numaralarını kaydedin.İlk hücre numaralarıyla normalleştirerek ve ardından hücre numaralarını çizerek hücrelerin çoğalma oranını tahmin edin. Son olarak, üstel bir büyüme eğrisi kullanarak veri noktalarını sığdırarak iki katına çıkma süresini tahmin edin. Hücre hareketini analiz etmek için yazılımdaki hücreleri izle işlevini kullanın.Yeni bir veri analizi başlatmak için yeni analize tıklayarak başlayın. Ardından, ilgilendiğiniz dönemden bir dizi görüntüyü kaynak çerçeveler sekmesine sürükleyin. Ardından, hücre ekle seçim modunda, üzerlerine tıklayarak rastgele 10 ila 30 hücre seçin.Görüntü serisindeki izlemeyi gözden geçirdiğinizden emin olun. Sistemin bir hücrenin izini kaybetmesi veya yanlış hücreyi izlemesi durumunda, hücreleri tanımlamak için tanımla'ya tıklayarak veya seçim moduna gidip bir hücrenin konumunu değiştirmek için konumu değiştir'e tıklayarak izleme hücresini manuel olarak ayarlayın. Bitirdiğinizde, hareketi çizmeye gidin ve hücre yörüngelerinin satır grafiğini seçin veya hareketlilik hızı, hareketlilik, göç ve göç doğrudanlığı gibi hareketle ilgili diğer parametreler için çizim özelliklerine ve çizime gidin.Verileri tablo veya şekil olarak dışa aktarın. Bu protokolde kantitatif faz görüntüleri holograf olarak sunulmaktadır. Burada gösterilen hücreler, anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan insan osteosarkom hücreleri için tipik hücre morfolojisini göstermektedir.Hücre kalınlığı, kırılma indisi ve optik yol uzunluğu ile hesaplanır ve burada bir dağılım grafiği olarak gösterilir. İki farklı hücre feno tipi, farklı dağılım kalıpları sergiledi ve anjiyojenik hücrelerin, anjiyojenik olmayan hücrelerden daha küçük hücre alanlarına ve daha büyük bir hücre kalınlığına sahip olduğunu gösterdi. İki hücre tipinin hücre proliferasyon hızı, bölümlere ayrılmış ve iki gün boyunca yayılan bu gibi 2D görüntülerden hesaplanabilir.Bu spesifik hücre tipleri için önemli bir fark bulunamamıştır. Hücrelerin hücre hareket özelliklerini belirlemek için, tek tek hücrelerin seçilmesi ve zaman içinde izlenmesi gerekir. Burada izlenen hücreler farklı renklerle özetlenmiştir.Her bir hücre, dört saat boyunca, burada açıklanan toplam yol yörüngeleri ile izlendi, burada sıfır, sıfır noktası başlangıç konumlarıdır ve son konumları renkli nokta ile gösterilir. Bu videoyu izledikten sonra, hücre morfolojik ve davranış parametrelerinin bir panelini kantitatif olarak karşılaştırmak için kantitatif faz görüntülemenin nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız. Bu durumda, anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan hücre fenotipleri arasında.Bu gelişmeden sonra bu teknik, kanser araştırmaları alanındaki araştırmacıların tümör uyku halinden kaçışı ve bu süreçte anjiyojenisin rolünü keşfetmelerinin yolunu açtı. Sürekli ve etiketleme yapmayan bir platformda. İnsan hücre hatlarıyla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman kişisel koruyucu ekipman giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

a-time-lapse-label-free-quantitative-phase-imaging-study-dormant

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu video, 3D kantitatif faz görüntüleme yoluyla lenfosit morfolojisi ve biyokimyasının etiketsiz tanımlamasını gösterir. Bu teknik, lenfositlerin kapsamlı bir analizine, etiketleme prosedürlerine gerek kalmadan iç yapılarının ve özelliklerinin ortaya çıkarılmasına olanak tanır.

Lenfosit Alt Tiplerini Karakterize Etmek için Üç Boyutlu Kantitatif Faz Görüntüleme

Kaynak: Parker, J. J., et al. Tümör Hücre Göçü ve Anti-İnvaziv İlaçların Hastaya Özgü Etkilerinin İncelenmesi için Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültür Modeli. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, konfokal mikroskopi ile yeşil floresan proteini (GFP) eksprese eden glioblastoma doku dilimlerinin görüntülenmesini göstermektedir. Tümör hücresi hareketini ve yönünü izlemek için tutarlı aralıklarla yüksek çözünürlüklü görüntüler yakalanır.

Glioblastoma Dokusunda Tümör Hücresi Migrasyonunun Hızlandırılmış Taramalı Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Görüntülenmesi

Time-lapse görüntüleme özgü davranışsal parametreler ve farklı genetik lezyonlar arasında bir korelasyon olup olmadığını belirlemek için meme kanseri riskinin genetik fare modelleri türetilmiştir birincil preneoplastic meme epitel hücrelerinin davranışlarını değerlendirmek için kullanılır.

Birincil Preneoplastic Meme Epitel Hücrelerinin Time-lapse görüntüleme Meme Kanseri Genetik Fare Modelleri türetilen

Burada, anti-kanser terapötiklerine yanıt olarak tek hücreleri uzunlamasına izlemek için uzun süreli hızlandırılmış mikroskopi yöntemini açıklıyoruz.

Looking Glass sayesinde: Time-lapse Mikroskopi ve Tek Hücre Boyuna izleme Anti-kanser Therapeutics Eğitim için

Bu protokol, tek bir hücre çözünürlükte in vivo olarak, gerçek zamanlı olarak çok-etkileşimlerin uzatılmış zaman atlamalı görüntüleme gerçekleştirmek için multiphoton mikroskobu kullanımını tarif eder.

Tümör mikroçevresinde Gerçek zamanlı Multisellüler Dynamics Genişletilmiş Time-lapse intravital Görüntüleme

Canlı hücre görüntüleme bilgi hazinesi tek hücreler veya tüm nüfus üzerinde ulaşılamaz olan sabit hücre tek başına Imaging tarafından sağlar. Burada, hücre kader kararlar tedavi Anti-Mitotik uyuşturucu Paklitaksel ile aşağıdaki değerlendirmek için canlı hücre görüntüleme iletişim kuralları açıklanır.

Uzun vadeli canlı hücre kader Paklitaksel karşılık olarak değerlendirmek için Imaging hücreli

Bu çalışmada kanser hücrelerine karşı makrofaj fagositik aktivite, özellikle 4T1 fare meme karsinom hücreleri görüntülendi. Canlı hücre kokültür modeli floresan ve diferansiyel girişim kontrast mikroskobu kombinasyonu kullanılarak oluşturulmuş ve gözlenmiştir. Bu değerlendirme, çok noktalı hızlandırılmış video geliştirmek için görüntüleme yazılımı kullanılarak görüntülendi.

Eş-Kültürlerde M1 Makrofaj-4T1 Fare Mammary Karsinom Hücrelerinde Fagositik Aktivitenin Zaman Atlamalı 2D Görüntülemesi

Burada, hücre ölümü indüksiyonunu takiben aşılanmış yaprakları sürekli görüntüleyerek programlanmış hücre ölümü başlatma oranını incelemek için bir protokol sunuyoruz.

Dijital Mikroskop Kullanarak Hücre Ölümü Başlangıcının İncelenmesi

Burada, 0 keratinositlerin soylarını manuel olarak izlemek için kullanılabilecek ve hücre bölünmesi kaderi ve hücre döngüsü süresi dahil olmak üzere proliferasyon ölçümlerinin toplanmasına izin veren canlı hücre görüntüleme analizi için bir yöntem sunuyoruz.

Epidermal Keratinosit Proliferasyon Kinetiğini İncelemek için Zaman Atlamalı Fotoğrafçılık ile Canlı Hücre Görüntüleme

Bu protokol, canlı insan meme kanseri hücrelerinin etiketsiz, non-invaziv fenotiplemesi için Raman spektroskopisi ve tomografik faz mikroskobunu birleştiren multimodal bir yaklaşım sunar. Hızlı, kantitatif morfo-kimyasal analiz için kullanıcı dostu, insan yanlılığı içermeyen bir analiz hattı içerir ve kanser araştırmaları ve hücre biyolojisindeki uygulamalarla ayrıntılı moleküler ve yapısal bilgiler sağlar.

Canlı Etiketsiz Meme Kanseri Hücrelerinin Fenotiplemesini Geliştirmek için Multimodal Bir Görüntüleme Çerçevesi

Öğrenin, insan osteosarkoma hücrelerinin anjiyojenik ve anjiyojenik olmayan fenotiplerini nicel faz görüntüleme ile karakterize etme yöntemini. Bu entegre teknik, hücre morfolojisi, proliferasyon ve hareketlilik analizlerini birleştirerek kanser ilerlemesine dair kapsamlı bilgiler sunar.

Hızlandırılmış, etiket içermeyen, nicel faz uyuyan ve aktif insan kanser hücrelerinin çalışma görüntüleme

Daha fazla video keşfet