Name: Bir oyuk/tünel tahlil için algılama hipoksi Drosophila melanogaster larva içinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında hipoksi tespiti için oyuk/tünel tahlil yöntemini. Bu davranışsal analiz, oksijen eksikliği yaşayan genetik mutasyonları belirleyerek solunum fonksiyonlarını araştırmaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Karen M. Qiang George J. Schroepfer Araştırma Ödülü Rice Üniversitesi 2016 alıcı oldu. Fanli Zhou Rice Üniversitesi'nden öğretim bursu alıcı olduğunu. Bloomington Drosophila stok Merkezi, Harvard gezi tesisi hizmetleri Viyana Drosophila Kaynak Merkezi minnetle kabul vardır.

1. larvalar hazırlanması
<ol><li>Tahlil, başlamadan önce iki veya daha fazla gün kadar istenen haçlar deneysel ayarla ve kombinasyonları (en az 20 kadın ve 10 erkek her) yumurta-lay yemeklerinde 13 Wieschaus ve Nusslein-Volhard ama 50 mL polipropilen kullanarak tarafından tanımlandığı gibi kontrol Şişeler ve 6,0 cm tek kullanımlık Petri üzüm agar içeren ve Maya ile bulaşmış yemekleri sadece kullanmadan önce yapıştırın. Sinekler yumurta-lay yemekleri karanlıkta Oda gerekinceye kadar sıcaklıkta tutmak.</li>
	<li>Üzüm agar tarifi – birleştirmek 100 mL donmuş %100 üzüm suyu konsantresi, 350 mL deioinized su, 5 mL buzul asetik ve 13 g D. melanogaster agar bir 1 L cam ölçek. Kadar agar tüm çözülür patlamaları arasında karıştırarak 1-2 dk öbek halinde mikrodalga. Çözüm için bir kaç dakika serin sonra yüzde 10'u (w/v) Nipagen (metil-p-hydroxybenzoate) 10 mL % 95 etanol ekleyin. Mix, sonra pipet 7 mL tek kullanımlık 6,0 cm Petri yemekler, plaka başına izin jel ve 3-4 h. mağaza için oda sıcaklığında 4'te kuru 0C plastik torbalarda.</li>
	<li>Maya hamur tarifi-7 gr kuru maya, 10 mL deiyonize su, tek tip tutarlılık kadar bir spatula ile karıştırın.</li>
	<li>Deneysel oluşturmak ve larva denetlemek için yumurta koleksiyonları zaman aşımına uğradı. Yeni, Maya bulaşmış, üzüm plakaları kullanarak, yumurta oda sıcaklığında 4 h için sabah saatlerinde karanlıkta toplamak. Bu 4 h koleksiyon tabakları kaldırın ve taze plakaları ile değiştirin. Kuluçkaya 4 h koleksiyon tabakları gecede de 25 0C kadar otelde larvalar çoğunu yumurtadan ertesi gün öğleden sonra. Bu ilk biçim larvaların toplamak ve deneme oluşturmak için kullanmak.</li>
</ol>2. tahlil plakaları kurma
<ol><li>Tahlil plakaları hazırlanması. Tahlil tek çalıştırma için beş tahlil plakaları her 10 deneysel larva ve 10 kontrol larvaları beş tabak hazırlamak. 1,5 cm mantar matkap agar merkez bir çekirdek yemek için bir delik oluşturmak her plaka kaldırmak için kullanın. Maya ezmesi (0,8 - 0.9 g) deliğe koy ve yavaşça deliğe doldurma bir Höyük yapmak spatula ile pat.</li>
	<li>Agar plaka hazırlık-16 g D. melanogaster agar bir 2 L cam ölçek ile 700 mL deiyonize su birleştirin ve mikrodalga üzerinden Kaldır 5 dakika süreyle mikrodalga ve undissolved agar çözümü haline getirmek için bir cam çubuk ile karıştırın. % 10 (w/v) Nipagen % 95 etanol, mix, 17.5 mL ekleyin sonra mikrodalga Isıtma 30 s öbek halinde tüm agar tamamen eriyene kadar karıştırarak tarafından takip devam edin. Bir dakika ya da iki için serin, o zaman 15 mL aliquots 10 cm plastik Petri yemekler pipet. Agar jel, kapakları ile kuruyucu ve oda sıcaklığında birkaç saatliğine kuru veya bir gece izin izin. Tabak mühürlü plastik torbalar 18 ° C'de depolayın 1 Not: Nipagen kristalleri yüzeyi fazla dessiccation nedeniyle plakaların oluşumunu önlemek için hazırlık bir kaç gün içinde tabak kullanın. Gerekirse, kristaller birkaç microliters % 95 alkol onları üzerine bırakarak yeniden çözülmüş. Not 2: agar toplu halde farklı jelleşme özelliklere sahip olabilir. Kuru jel levha dokunmak firma ve agar temiz, sağlam çemberi cork matkap gıda delik (yukarı bakın) oluşturmak için kullanılırken kaldırılabilir yeterince esnek olmalıdır.</li>
	<li>Larva tahlil tabak içinde kurma. Plastik microspatula ucu eğri ve "yapışkan" larva çekmek için sağlamak için Maya Yapıştır ipucunda daldırma için mekanik basınç uygulayın. İlk biçim larva kadar ayrı ayrı almak ve agar plaka gıda Höyük yakın koyun. Deneysel her ikisi için 10 larva ve denetim genotip en az beş Çoğalt tabak hazırlamak. Bir kez tam, kap ve her plaka etiket ve oda sıcaklığında karanlık bir alanda tabak (kapak tarafı yukarı) ayarla (bizim laboratuarımızda bu 22 ° C olduğunu).</li>
</ol>3. izleme tahlil plakaları
<ol><li>Tabak günlük diseksiyon mikroskop altında incelemek ve larvaları yemek üzerine veya dışarı agar yüzeyinde kaydedin. Görünür herhangi bir ölü ya da ölmekte olan larvalar unutmayın. Ne zaman ve larva üçüncü INSTAR ilerlerken agar terkedilemeyen tünel görüldüğünde, unutmayın. Pupa oluşmaya başlar ve pupa anormallikleri Not Not tarihleri. Bütün larva öldü veya pupated kadar günlük gözlemler devam edin.</li>
	<li>Pupa plaka iğne ve üzüm bir tabak transfer alay bir bent ile dikkatli bir şekilde çıkarın. İstenirse, Pupa kaç eclose yetişkin olarak belirlemek için izleme devam.</li>
</ol>4. hazırlama tahlil görüntüleme için tabaklar
<ol><li>Dikkatle kaldırmak ve tüm Maya gıda her plaka Merkezi kuyudan.</li>
	<li>Yavaşça her plaka musluk suyu ile sel ve dikkatle izlenen agar yüzeye enkaz kapalı ovmak için yumuşak bir sanatçının boya fırçası kullanın. Su birkaç kez değiştirmek ve her plaka tamamen temiz olana yumuşak fırça devam edin. Tabak deiyonize su ile son durulama vermek, onları kap ve oda sıcaklığında kuru gecede bırakın. Not: Agar tünel gıda höyüğün en yoğun (bkz. Şekil 2). Sonuç olarak, gıda deliğin kenarında genellikle ilk 1.5 cm çapında genişletilir. Buna ek olarak, bu bölgedeki amele agar kırılganlık küçük parçalar halinde temizlik sırasında delik çevresi kayıp olmak tünel agar neden olabilir. Jel agar konsantrasyonu artan bu sorunları ile yardımcı olabilir ama düzeltmeleri görüntü J Nefelometri adımları (aşağıya bakın) sırasında mümkündür.</li>
</ol>5. Nefelometri tünel
<ol><li>Tabakları görüntü. Siyah bir arka plan karşı tüneller içinde agar parlak beyaz satırlar halinde göster için alınan her plaka görüntüsünü hazırlamak. Not: Biz DNA jelleri bu adım için görüntü için yaygın olarak kullanılan bir sistem kullanın (bkz. tablo malzemeleri ve Kimyasalları). Görüntüleme sistemleri gibi digital fotoğraf makinesi ya da cep telefonu kamera TIFF dosyalarını üretme yeteneğine sahip alternatif uygun görüntüler üretmek için ayarlanmış olabilir.</li>
	<li>Larva tünel quantitate için kamu malı programı NIH görüntü J kullanın. Http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html programı indirin. Program hakkında daha fazla bilgi için http://imagej.nih.gov/ij/docs/intro.html gidin. Not: Diğer görüntüleme sistemleri tünel quantitate için kullanılabilir. NIH görüntü J. için aşağıdaki talimatları uygulayın</li>
	<li>Tünel bir tabak bir TIFF dosyası görüntü açtıktan sonra tüm agar yüzeyini temsil eden, ancak plastik plaka kenarına bitkileri Nefelometri için bir alan tanımlamak için Oval aracını kullanın.</li>
	<li>Siyah çizgiler olarak gösterilen tünelleri ile plaka, ters bir görüntü üretmek için Otomatik eşik uygulanır. Agar yerine tünelleri hasar temsil herhangi bir siyah alanlar beyaza Boya Fırçası araçları ve Renk Seçici'yi kullanın.</li>
	<li>Analiz aşağı açılır menüsünün altında küme ölçek seçin | Ölçek kaldırmak için tıklatın ve alan ve Eşik sınırı( analiz) altında da ölçüleri ayarlayın camda kontrol edin.</li>
	<li>CTRL tuşu + siyah alanı (tünel) piksel cinsinden göster için M tuşuna basın.</li>
	<li>Kopyala ve Yapıştır piksel değeri her plaka için kantitatif analiz izin vereceği bir elektronik tablo programına (Excel gibi) bu.</li>
	<li>Merkez delik genellikle yoğun bu bölgede tünel nedeniyle genişletilir. Eksik tünel quantitate için "eşik için Limit" işaretini kaldırın ve orta delik tanımlamak için Değnek aracını kullanın. CTRL tuşu + bu alan piksel değerini elde etmek için M tuşuna basın. Bu değer 1.5 cm delik piksel değerini çıkarın ve fark 5.6. adımda elde tünel değerine ekleyin.</li>
	<li>Bir kaç tabak için orta delik untunneled agar deliğe bitişik bölge içerir tünel agar bir parçası eksik olabilir. Ne zaman bu tabaklar kullanmak için orta delik quantitating tünel bölgesi tanımlamak veya sigara tünel alan Nefelometri çıkartmak için eksik bölge boyunca siyah bir çubuk eklemek için Araçlar fırça renk seçici ve boya. 1 Not: Deneysel larva herhangi bir tünel gerçekleştirirseniz, bu Nefelometri ortalama değerleri setleri ve denetim istatistiksel karşılaştırılması ve deneysel değerleri tünel hesaplanması izin verir.</li>
</ol>

<ol><li>O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+responses+to+oxygen+deprivation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Conserved responses to oxygen deprivation.</a> J. Clin. Invest. 107 (6), 671-673 (2001).</li>
<li>Lavista-Llanos, S., et al. <a target="_blank" href="http://mcb.asm.org/content/22/19/6842.full">Control of the hypoxic response in D. melanogaster by the basic helix-loop-helix pas protein Similar.</a> Mol. Cell. Biol. 22 (19), 6842-6853 (2002).</li>
<li>Reiling, J. H., Hafen, E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC534649/">The hypoxia-induced paralogs Scylla and Charybdis inhibit growth by down-regulating S6K activity upstream of Tsc in D. melanogaster.</a> Genes Dev. 18 (23), 2879-2892 (2004).</li>
<li>Gorr, T. A., Gassmann, M., Wappner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+and+responding+to+hypoxia+via+Hif+in+model+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sensing and responding to hypoxia via Hif in model invertebrates.</a> J. Insect Physiol. 52 (4), 349-364 (2006).</li>
<li>Romero, N. M., Dekanty, A., Wappner, P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17998052">Cellular and developmental adaptations to hypoxia: A D. melanogaster perspective.</a> Meth. Enzymol. 435, 123-144 (2007).</li>
<li>Dijkers, P. F., O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+a+hypoxia-induced%2C+nitric+oxide-mediated+signaling+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.Cell%22%5BJournal%5D)">Dissection of a hypoxia-induced, nitric oxide-mediated signaling cascade.</a> Mol. Biol.Cell. 20 (18), 4083-4090 (2009).</li>
<li>Zhou, F., Qiang, K. M., Beckingham, K. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4975476/">Failure to burrow and tunnel reveals roles for jim lovell in the growth and endoreplication of the D. melanogaster larval tracheae.</a> PLOS ONE. 11, e0160233(2016).</li>
<li>Wingrove, J. A., O'Farrell, P. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2754235/">Nitric oxide contributes to behavioral, cellular, and developmental responses to low oxygen in D. melanogaster.</a> Cell. 98 (1), 105-114 (1999).</li>
<li>Zhang, L., Ward, R. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19818339">Uninflatable encodes a novel ectodermal apical surface protein required for tracheal inflation in D. melanogaster.</a> Dev. Biol. 336 (2), 201-212 (2009).</li>
<li>Langlais, K. K., Stewart, J. A., Morton, D. B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15159437">Preliminary characterization of two atypical soluble guanylyl cyclases in the central and peripheral nervous system of D. melanogaster melanogaster.</a> J. Expt. Biol. 207 (13), 2323-2338 (2004).</li>
<li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3127060/">Behavioral responses to hypoxia and hyperoxia in D. melanogaster larvae.</a> Fly. 5 (2), 119-125 (2011).</li>
<li>Brand, A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li>
<li>Wieschaus, E., Nusslein-Volhard, C. Looking at embryos. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWieschaus%2C+E+%22Drosophila%3A+a+practical+approach%22">Drosophila: a practical approach</a>. Roberts, D. B. , IRL Press. Oxford and Washington DC. 199-227 (1986).</li>
<li>Callier, V., Shingleton, A. W., Brent, C. S., Ghosh, S. M., Kim, J., Harrison, J. F. <a target="_blank" href="http://jeb.biologists.org/content/216/23/4334">The role of reduced oxygen in the developmental physiology of growth and metamorphosis initiation in D. melanogaster.</a> J. Expt. Biol. 216 (23), 4334-4340 (2013).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23382692">Hif- and non-Hif-regulated hypoxic responses require the estrogen-related receptor in D. melanogaster.</a> PLoS genetics. 9 (1), e1003230(2013).</li>
<li>Grifoni, D., Sallazzo, M., Fontana, E., Froldi, F., Pession, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+strategies+of+oxygen+supply+in+Drosophila+malignancies+identify+tracheogenesis+as+a+novel+cancer+hallmark%5BTitle%5D)+AND+%22Scient.+Rep%22%5BJournal%5D)">Multiple strategies of oxygen supply in Drosophila malignancies identify tracheogenesis as a novel cancer hallmark.</a> Scient. Rep. 5 (9061), (2015).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Biz burada doku hipoksi D. melanogaster larva algılamak için tasarlanmış basit bir tahlil sundu. Tanı azalma gıda höyükler larva Gençliği ve geç larva hayatta tünel terkedilemeyen yokluğu içine burrowing üzerinde temel alır. Larva kalabalık bir besin kaynağı uzak erken geçiş neden olabilir ve bu nedenle önemli bir özelliği, tahlil larva az sayıda varlığında büyük bir aşırı gıda denetlesinler. Ağar kaplamalar içine mantar ilacı metil-p hidroksil benzoat (Nipagen) dahil de küf gelişimi sırasında tahlil önlemek için önemlidir.
Ağar kaplamalar tahlil değişkenlik bir kaynağı olabilir bulmak. Genellikle, aynı genotip, ebeveynlerin farklı toplu işlemleri veya larva, farklı koleksiyon larvaları davranışlarını tahlil nispeten sınırlı değişim gösterir. Buna ek olarak, Ağar kaplamalar veya farklı günlerde yapılan agar farklı toplu işlemleri ile tünel farklılıklar yol açabilir. Bir hükmü bu nedenle bu denetimi ve deneysel larva tüm Ağar kaplamalar aynı toplu iş hazırlık üzerinden kullanarak test edilmelidir. Agar farklı üreticilerin veya aynı üretim üzerinden bile sevk irsaliyelerini jelleşme güçlerini değişebilir ve bu yüzden yukarı doğru %2.2 burada en iyi bir jel elde etmek için kullanılan ayarla agar konsantrasyon gerekli olabilir. Biz vahşi türü larva kolayca % 3 agar jelleri yuva bulduk.
Bu tahlil değerini göstermek için biz larva bastırılmış fonksiyonu ile potansiyel doku hipoksi araştırmak için kullanılmış uninflatable tracheae. içinde Cihazla ilgili izlenimlerimizi trakeal ifade bu gen kaybı hipoksi üretebilir hipotez için güçlü destek sağlamak: btl-Gal4 > UAS -UIF RNAi larvalar yiyecek ve terkedilemeyen sırasında tünel olmaması içine yuva için hata gösterdi Üçüncü biçim. Diğer genotip bizim önceki çalışmalarda, biz gıda burrowing hipoksi indüklenen kayb terkedilemeyen tünel kaybı ve btltam değil gözlenen-Gal4 > UAS -UIF RNAi larvaları okudum burada benzer şekilde davrandım. Bu testin başarısız tünel bileşeni bu nedenle hipoksi en güçlü bilgi vermez.
Her ne kadar btl-Gal4 > UIf RNAi larva davranış özellikleri hipoksi, kesmek(ue) tanı gösterdi-Gal4 > UAS -UIF RNAi değil bu anormallikler sergi. Btl ve kesme(ue) sürücüleri farklı aşamalarında ve larva tracheae içinde farklı desenler ifade Gal4. Btl-Gal4 sürücü embriyo gelişimi başlayarak ve larva hayatı boyunca devam eden trakeal sistem boyunca ifade edilir. Buna karşılık, Gal4 ifade kesmek(ue)-Gal4 sürücü sadece embriyonik hayatın sonunda tracheae morfogenetik sonra başlar ve dorsal gövdeleri, büyük boyuna gemilerin aşırı arka bölümlerine sınırlı olmalıdır trakeal sistemi. Bu Gal4 hattı ile UIF nakavt değil bu nedenle azaltmak UIF ifade yeterince erken ya da genel olarak yeterli hipoksi davranışları tetiklemek için gerekli bazı eşik düzeyini üretmek için ölçülen bu tahlil.
Bir önceki çalışma üçüncü INSTAR larva düşük (% 10) oksijen düzeylerine maruz azalmış büyüme göstermek buldum ve pupariation 14başlangıcı gecikmiş. Btl-Gal4 > RNAi burada okudu UAS - larvaUIF üçüncü INSTAR ilerledi ama onların büyüme ve pupation oranları üzerindeki etkileri daha belirgin olduğunu: denetimleri altında çok az yağ dokusu ile önemli ölçüde daha küçük olduklarını epidermis (şekil 3) ve yalnızca küçük bir kısmını (~ %10) pupariation çalıştı. Bu farklılıklar btlöneririz-Gal4 > UAS -UIF RNAi larva deneyimli hipoksi, daha büyük bir ölçüde UIF nakavt tracheae içinde bütün larva yaşamları mevcut olduğu için veya daha fazla üretilen çünkü şiddetli oksijen yoksunluğu üçüncü biçim içinde. Nasıl tracheae bir UIF işlev kaybı oksijen taşıma engel olabilir bu noktada belirsizdir. Btltracheae-Gal4 > UAS -UIF RNAi larva kütikül (şekil 3), bir gösterge yer alan hava ve sıvı giriş işlevi uzlaşma noktası zarar görmüş değil aracılığıyla kolayca görünür. Bu nedenle UIF fonksiyon kaybı tarafından oluşturulan trakeal hasarın hipoksi ama tünel engeller oldukça bazı diğer kusur temin etmez resmen mümkündür. Daha önce okudu genotip için başarısızlık tünel için geç üçüncü INSTAR larva 15' te karaciğer mRNA7düzeyleri, kurallı göstergesi Glikoliz ve hipoksi ile ilişkili olduğunu belirledi. Böylece, teyidi için btlhipoksi-Gal4 > UAS -UIF RNAi larva (ve gelecekte muayene larva Bu testin kullanın) karaciğer mRNA düzeyleri veya ölçmek için piyasada bulunan bir göstergesi kullanımı değerlendirmek için RT-PCR yer alacağı Hücre içi oksijen düzeyleri (örneğin bkz: 16).

Moleküler genetik araçlar D. melanogaster içinde kullanılabilir Gelişmiş dizi örümceklerle korunmuş biyolojik süreçlerin çalışma için değerli bir organizma olun. Oksijen durumu anahtar moleküler yanıt evrim arasında korunmuş kanıtlanmıştır ve D. melanogaster önceki çalışmalarda bu yolları 1,2sinyal evrensel bileşenleri anlayışlar üretilip, 3,4,5,6.
D. melanogaster larva işlevinde duyusal nöron anatomi amaçlı bir çalışmanın bir parçası olarak, biz doku hipoksi normal oksijen düzeyleri 7tarafından etkinleştirilmesi ortaya çıktı iki davranışsal yanıt tespit. Bunlardan biri, maması, yuva hatası son derece düşük oksijen düzeyleri Wingrove ve O'Farrell 8tarafından bildirilen yanıt ilgilidir. İkinci davranış yumuşak bir terkedilemeyen faz, göçebe geç üçüncü biçim sırasında tünel için hata daha önce olarak hipoksi ile ilgili tespit edilmedi değil. Vahşi türü göçebe larva düşük oksijen düzeylerine maruz kalmaları da 7, tünel terkedilemeyen engeller böylece kurulması hem bu davranışlar hipoksi kaynaklanan - ya doku hasarı veya düşük oksijen alımını düzeyleri tarafından indüklenen belirledi. Burada hemen larva tarama sonra gözlemleri ile başlayan bu iki hipoksi indüklenen davranışlar, quantitate için geliştirdiğimiz bir tahlil açıklayın.
Erken larva evresinde hipoksik yanıt daha önce muayene değil ve bu nedenle bir çözümlemesini larva hayatı boyunca bizim tahlil, değerli bir bileşenidir. Hipoksi-yavaş geliştirme, zavallı büyüme ve Lokomotor tembellik-belirgin belirtileri çoğu larva fenotipleri birçok mutasyon tarafından üretilen ile çakışıyor. Ama biz sadece üçüncü INSTAR larva hipoksi ile 7tünel için tam bir başarısızlık gösterir bulduk. Bu yüzden, biz bile larva daha büyüme ve hareket açısından bizim hipoksik larva uzlaşma, hipoksik larva asla 7tünel, ancak hala bazı tünel, gerçekleştirilen belirlenir. Başka bir değerli Bu testin böylece hipoksi başka stres veya metabolik bozukluk karşı pleiotropic fenotipleri belirli bir dizi kaynak olduğunda oluşturmak için bir yol sağlayan öğedir. Testin gücümüzü, burada tarif biz larva yanıt azaltılmış trakeal ifade ile karakterize içinde kullanımı uninflatable, larva Havayolları 9' fonksiyonları bir gen.
Bu tahlil zavallı büyüme ve halsiz davranışı içerir larva fenotipleri karakterize uğraşan araştırmacılar için değerli olacağını öngörmektedir. Sonuç olarak, dağıtım, kullanımı veya yanıt için etkisi yeni genlerin vücuda oksijen belirlenmiştir. Ayrıca, bu tahlil Protokolü eleme bir mutant birleşmeyle hipoksi üretmek mutasyonlar belirlenmesi için doğrudan bir yol sağlar. Bu tahlil de burada açıklanan hipoksi indüklenen doğuştan gelen davranışlarını ortaya çıkarır devre analiz değerli olacaktır. Bu tür sinir ağı analizi çok geçerli araştırma bir odak noktasıdır ve D. melanogaster larva basit sinir sistemi otomatik davranışları dissekan için değerli bir sistemdir. Duyusal nöronlar larva oksijen algı dahil zaten, hipoksi indüklenen yanıtları 10,11tam devre tanımlama yolunda ilk adım sağlayan tespit edilmiştir. Bizim tahlil GAL4-UAS sistem12 ile seçici sinirsel nakavt ile birlikte daha da operasyona neural ağ bileşenleri için açık bir yol kullanmaktır.

<table><tbody><tr><td><güçlü>REAKTİFler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Susuz maya&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dondurulmuş üzüm suyu konsantresi</td><td>Welch's</td><td></td><td>&nbsp; Çoğu büyük süpermarkette bulunur</td></tr><tr><td>Buzul asetik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320099</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila agar</td><td>Apex Bioresearch Products</td><td>66-103</td><td></td></tr><tr><td>Metil-para-hidroksibenzoat</td><td>Apex Bioresearch Products</td><td>20-658</td><td></td></tr><tr><td>EQUIPMENT</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml polipropilen beherler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6.0 cm tek kullanımlık Petri kapları</td><td>Falcon</td><td>08757100B</td><td></td></tr><tr><td>10 cm tek kullanımlık plastik Petri kapları</td><td>E+K Scientific</td><td>EK-24104</td><td></td></tr><tr><td>Plastik mikrospatulalar</td><td>Corning Incorporated</td><td>3012</td><td></td></tr><tr><td>Bükülmüş alay iğnesi</td><td>Nasco</td><td>S08848MH</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td>10-30X ile herhangi bir mikroskop Büyütme</td></tr></tbody></table>

bir oyuk/tünel tahlil için algılama hipoksi drosophila melanogaster larva içinde

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

Oksijen yetmezliği hayvanlarda düşük atmosferik oksijen düzeyleri maruz veya oksijen dağılımı ile müdahale iç doku hasarına neden olabilir. Oksijen algılamalı nöronların anormal davranış hipoksi gibi davranış varlığında normal oksijen seviyesi neden mümkündür. D. melanogasteriçinde büyüme ve halsiz davranış inhibisyonu larva evreleri sırasında düşük oksijen düzeyleri geliştirme sonuçlanır. Ancak, oksijen açığı kurulan bu belirtileri önemli ölçüde büyüme, stres yanıt veya hareket düzenleyen birçok mutasyon fenotipleri ile çakışıyor. Sonuç olarak, orada şu anda hiçbir tahlil i) hücresel hipoksiyadan bir mutasyon veya II) hipoksi gibi davranış ne zaman anormal nöronal davranış tarafından indüklenen tarafından indüklenen tanımlamak kullanılabilir.
Biz son zamanlarda normal oksijen düzeyleri hipoksi dahili algılama yanıt olarak oluşan D. melanogaster larva iki farklı davranışları belirledik. İlk olarak, her aşamasında bu tür larva gıda kez uzak straying bir besin kaynağı, içine burrowing kaçının. Larva hipoksik ise ikinci olarak, yumuşak bir terkedilemeyen tünel, normalde göçebe üçüncü INSTAR aşamasında oluştuğu tamamen kaldırıldı. Burada açıklanan tahlil algılamak ve bu davranışları quantitate için tasarlanmıştır ve bu nedenle hipoksi indüklenen düşük dış oksijen yerine iç hasar tarafından tespit etmek için bir yol sağlamak için. Tahlil plakaları bir agar terkedilemeyen ve Maya hamur merkezi bir fiş ile hayvanlar larva ömrü boyunca desteklemek için kullanılır. Üçüncü ilk biçim devam ederken pozisyonları ve larvalar durumunu günlük izlenir. Göçebe aşamasında agar terkedilemeyen tünel ölçüde NIH ImageJ kullanarak pupation sonra quantitated. Tahlil ne zaman hipoksi bir mutant bir fenotip bileşenidir belirlemede değerli olacak ve böylece eylem söz konusu genin olası siteleri içgörü sağlamak.

Bu tahlil değerini bir gösteri biz larva genin Engelli fonksiyonu ile potansiyel hipoksi araştırmak için kullandık uninflatable (UIF) tracheae içinde. UIF larva trakeal hücrelerinin apikal yüzeye kuvvetle ifade büyük bir transmembran protein kodlar. UIF mutantlar doku hipoksi nedeniyle trakeal arıza 9gösterebilir anormal davranışlar gösteren önceden kaydedilmiştir. Özellikle Gal4-UAS sistemini kullanarak larva soluk borusu ifadede UIF bastırılır. İki Gal4 çizgiler kullanılmıştır: i) nefes nefese (btl)-Gal4, şiddetle kendi embriyonik geliştirme ve II başlangıcından itibaren tracheae olarak ifade edilir) (ue) kesmek-ifadesi bir bölgede küçük arka başlar Gal4 embriyogenez sonunda ana dorsal gövde tracheae ve güçlü ifade larva hayat 7tüm bu bölgede devam ediyor. Bir UAS -UIF RNAi satır Viyana Drosophila araştırma Merkezi'nden (VDRC ID #1050) elde edildi.
İletişim kuralı yukarıda açıklandığı gibi beş yeni taranmış ilk biçim larva her dört Haç için aşağıdaki gibi tuzağa düşürüldük plakaları çoğaltmak.
Deneme 1 1) kontrol 1 - kesme(ue)-Gal4 x Canton-S (+) 2) deneysel 1 - kesme(ue)-Gal4 x UAS-UIF RNAi
Deneme 2 3) denetim 2 - btl-Gal4 x Canton-S (+) 4) deneysel 2 - btl-Gal4 x UAS-UIF RNAi
Kesme(ue) davranışını-Gal4 &gt; UAS -UIF RNAi larva deney 1 karşılaştırılabilir kontrol kesmek(ue) için-Gal4 &gt; + hayvan tavşan çukuru, tünel ve pupation, (Resim 1 için hayatta kalma açısından ve Şekil 2). Buna ek olarak, aşağı düzenleyen UIF ifade erken geliştirme (deney 2) içinde tüm trakeal sistemden boyunca belirgin farklı tepkiler üretti. Btl-Gal4 &gt; UAS -UIF RNAi larva görüntülenen doku hipoksi-her iki davranış belirtileri azaltılmış gıda tavşan çukuru ve larva ileride (Resim 1 ve Şekil 2 Tünel terkedilemeyen toplam yokluğunda ). Deneysel larvaları da belirgin bir şekilde daha küçük, daha ince ve daha denetimlerden (şekil 3) daha halsiz ve tahlil süresince yüksek ölüm oranı gösterdi. Yukarıda da açıklandığı gibi düşük büyüme, tembellik ve organizma ölüm larva hipoksi belirtileri bilinir. Buna ek olarak, denetim larva pupated sonra deneysel larva pupation girişimi başarısız oldu ve kaldı çoğu gibi üçüncü larvalar uzun biçim. Bazı larva pupating (şekil 1A) sonunda ölmek önce 15 günden fazla hayatta. Deneysel larva birkaç YavruIar istedim ama her durumda bu canlı yetişkin oluşturmadı anormal pupa kuruldu.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig1.jpg"> Şekil 1. Nefelometri gıda tavşan çukuru ve larva gelişme. (A) dört genotip gıda Höyük dışında canlı larvaları yüzdesi burada okudu. Ortalama her genotip için kullanılan beş tahlil plakaları için gösterilir. 3 gün sonra yumurtadan, btl~ p tarafından-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi larva edildi gıda dışında hiçbir larvaları yemek dışında veya diğer üç genotip için agar yüzeyinde tespit edildi ise. Btl-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi larva ölmek yavaş yavaş bunların gün hayatta arasında 4-20, ~ 15 gün sonra tarama. X ekseni boyunca siyah oku burada ve (B) hangi üç genotip bütün larva pupated gün gösterir. (B) ölü larvaları yemek için dört genotip dışında görünür yüzdesi. Ortalama her genotip için beş tahlil plakaları için gösterilir. Ölü btl-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi larva birikir çoğu ölüyor ile zaman içinde gıda dışında. Tüm pupation için hayatta diğer genotip (C) yüzde hayatta kalması için pupation dört genotip için okudu. Ortalama her genotip için beş tahlil plakaları için gösterilir. Btlnormal hiçbir pupa-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi genotip üretildi. Hata çubukları şekil boyunca SEM'ler temsil eder. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57131/57131fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig2.jpg"> Şekil 2. Nefelometri larva tünel. (A) tüm dört genotip için tahlil tabak örnekleri sonra Nefelometri tünel için hazırlık okudu. Not için btltünel olmaması-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi larvaları. Tahlil plakaları 10 cm Petri tabaklara. (B) tünel Nefelometri görüntü J dört genotip için türetilmiş. Piksel değerlerini her genotip için beş tahlil plakaları için ortalama. Hiçbir tünel için btlgözlendi-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi larvaları. Hata çubukları SEM'ler =. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57131/57131fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57131/57131fig3.jpg"> Şekil 3. Btlkarşılaştırılması-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi ve btl-Gal4 &gt; + larva Btliçin benzer yaş (gün 6 çıkım sonra) larvaları-Gal4 &gt; UAS UIF RNAi (A) ve btl-Gal4 &gt; + (B) genotip. Kırmızı oklar dorsal gövde tracheae gelin. Her iki larva aynı büyütme oranında yansıması. Ölçek çubuğu 0.5 mm. = <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57131/57131fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Hipoksi normal atmosferik oksijen düzeyleri altında karşılaşan Drosophila melanogaster larva tanımlamak için basit bir tahlil protokolünü açıklar. Bu iletişim kuralı tembellik veya yavaş büyüme gibi örtüşen fenotipleri göstermek başka mutantlar dan ayırt edici olmak hipoksik larva sağlar.

Bir oyuk/tünel tahlil için algılama hipoksi Drosophila melanogaster larva içinde

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

Bu testin genel amacı, normal oksijen seviyelerinde olmasına rağmen doku hipoksisinden muzdarip drosophila larvalarını tanımlamaktır. Drosophila'da larvaların yavaş, zayıf büyümesine ve bazı larvaların halsizliğine neden olan birçok mutasyon vardır. Bu tahlil, bu larva sınıfı içinde, doku hipoksisinden muzdarip olanları tanımlar.Sonuç olarak, bu tahlil, çeşitli fizyolojik süreçler yoluyla dokularda oksijen eksikliğine neden olan daha fazla mutasyonun tanımlanmasına yardımcı olacaktır. Bu tahlil fikri, hasarlı hava yolları veya trakea ile larvaların iki garip davranış gösterdiği gözleminden ortaya çıktı. Bu anormal davranışlar, erken larva yaşamı sırasında yiyeceğe girememe ve gezinme aşamasında daha yumuşak bir alt tabakaya tünel açmamadır.Metin protokolünde açıklandığı gibi yumurtlama kaplarında kontrol ve deneysel genetik çaprazlamaları ayarlayın. Zamanlanmış yumurta toplamaya başlamadan önce sinekleri en az iki gün karanlıkta tutun. Zamanlanmış yumurta toplama için, yetişkinleri günün erken saatlerinde taze bir maya ezmesi ile süslenmiş yeni üzüm agar plakalarına aktarın ve yetişkinlerin dört saat boyunca tabaklara yumurta bırakmasına izin verin.Dört saat sonra yetişkinleri taze üzüm agar plakalarına aktarın. Daha sonra, dört saatlik toplama plakalarını gece boyunca 25 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi öğleden sonra, larvaların çoğu yumurtadan çıkmış olacak.Her deney grubu için en az 50 deney grubu olmasını planlayın. Tahlilin tek bir çalışması için, deney grubu başına en az beş tahlil plakası hazırlayın. Isıtarak 16 gram sinek agar ve 700 mililitre deiyonize su ekleyin.% 95 etanolde 17.5 mililitre Nipagen hazırlayın. Agar çözeltisini neredeyse tamamen eriyene kadar ısıtın. Daha sonra agar çözeltisine Nipagen çözeltisi ekleyin ve agar tamamen eriyene kadar ısıtın.Agar çözeltisini kısa bir süre soğutun, ardından 15 mililitre agar çözeltisi ile 10 santimetre plaka yükleyin. Agar jelleştikten sonra, plakaların kapaklarını kapatın ve birkaç saat veya gece boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın. Kürlenmiş agar dokunulduğunda sağlam olmalı ve parçalar kesildiğinde parçalanmaya karşı direnç göstermelidir.Agar sertleştikten sonra, her plakadaki agar jelinde merkezi bir delik açmak için 1,5 santimetrelik bir mantar levha kullanın. Daha sonra delikleri taze maya ezmesi ile düzgünce doldurun. Larvaları tahlil plakasına aktarmak için basit bir alet yapın.Plastik bir mikrospatulanın ucuna bir eğri bükün ve ucu larvalara yapışması için maya macununa batırın. Şimdi ilk instar larvalarını tek tek toplayın ve onları yiyecek höyüğüne yakın agar tabağına yerleştirin. Her deney grubu için, her biri 10 larva içeren en az beş tabak hazırlayın.Test replikasyonları arasında tekrarlanabilirliği sağlamak için, her bir test plakasına sadece 10 larva yerleştirilmesi çok önemlidir. Mikrospatula ucuyla her larva verdiğinizde bir ve yalnızca bir larva aktarıldığını belirlemek için tahlil plakasını dikkatlice kontrol ettiğinizden emin olun. Bir tabak yüklendikten sonra etiketleyin, üzerini örtün, ardından kapak tarafı yukarı bakacak şekilde oda sıcaklığında karanlıkta koyun.Tüm larvalar ölene veya yavrulanana kadar her plakayı günlük olarak inceleyin. İşte tahlilin ikinci gününden sekizinci gününe kadar vahşi tip bir suş için plaka örnekleri. İkinci günde, larvalar yiyeceğe gömülür ve tünel açılmaz.Tünel açma üçüncü günde başlar ve larvalar dolaşmayı bırakıp tünellerinde pupa olduklarından beşinci ve sekizinci günler arasında maksimuma ulaşır. Pupaları bükülmüş bir alay iğnesi ile dikkatlice bir üzüm tabağına aktarın ve istenirse kaç tane pupa içerdiğini sayın. Pupa oluşumunu not edin ve pupaları anormallikler açısından değerlendirin.Tahlil plakası içindeki tünelleri görüntülemek için, önce tüm maya yiyeceklerini her bir plakanın merkezi kuyusundan dikkatlice çıkarın ve atın. Daha sonra her bir plakayı nazikçe musluk suyuyla doldurun ve agar yüzeyine izlenen kalıntıları dikkatlice ovalamak için yumuşak bir boya fırçası kullanın. Bazı agar parçaları, tünel açmanın en yoğun olduğu yerlerde parçalanabilir.Bu daha sonra düzeltilebilir. Suyu birkaç kez değiştirmeye devam edin ve plaka tamamen temizlenene kadar kalıntıları nazikçe fırçalayın. Ardından plakayı deiyonize su ile son bir durulama yapın, üzerini örtün ve gece boyunca oda sıcaklığında kurumaya bırakın.Agar jelinin parçalarını koparmamak veya zarar vermemek için agar plakalarını temizlemek için yumuşak bir su akışı ve hafif bir fırça darbesi kullanmak önemlidir. Ertesi gün, tünelleri parlak beyaz çizgiler olarak göstermek için siyah bir arka plan kullanarak plakanın bir tiff dosya görüntüsünü hazırlayın. Jel dokümantasyon sistemleri bu adım için iyi çalışır.Ardından, Oval aracıyla Görüntü J'yi kullanarak görüntüdeki tünellemeyi ölçün, agar jelini petri plakasının plastik kenarına kadar, ancak dahil olmamak üzere tanımlayın. Ardından, tünellerin siyah çizgiler olarak görünmesi için plakanın ters görüntüsünü elde etmek için otomatik bir eşik uygulayın. Tünel içermeyen koyu alanları düzeltmek için, bu bölgeleri beyazlatmak üzere Renk seçici ve Boya Fırçası araçlarını kullanın.Ardından, Analiz açılır menüsünün altında Ölçeği ayarla'yı seçin ve ölçeği kaldırmak için tıklayın. Ardından Analiz Et altındaki Ölçümleri ayarla penceresine gidin ve Alan ve Eşik sınırı'nı işaretleyin. Şimdi, görüntüdeki siyah alanın tünellenmiş alanı temsil eden piksel biriminde bir ölçümünü almak için M tuşuyla Kontrol tuşuna basın.Merkezi deliğin etrafındaki agar erozyonu nedeniyle kaybedilen tüneli ölçmek için Eşik sınırının işaretini kaldırın. Merkezi deliği tanımlamak için Değnek aracını kullanın ve değerini piksel cinsinden ölçmek için Control artı M'ye basın. Bu değerden 1,5 santimetre çapındaki bir deliğin piksel değerini çıkarın.Toplam tünelleme pikseli değerini vermek için farkı daha önce elde edilen piksel değerine ekleyin. Eksik agarın merkezi tünel açma halkasının ötesine uzandığı plakalar için, kantitasyonun merkezi bölge dışındaki alanları içermesini önlemek için ek bir adım gereklidir. Ölçülen alanı sınırlamak için gösterildiği gibi siyah bir çubuk eklemek için Renk seçici ve Boya Fırçası araçlarını kullanın.Tarif edilen test, trachae'de şişirilemeyen genin bozulmuş fonksiyonu olan larvalarda potansiyel hipoksiyi araştırmak için kullanıldı. Gen, Gal4 UAS aracılığıyla RNAi'yi baskıladı. İki Gal4 hattı kullanıldı.Nefes Kesmeyen Gal4, tüm trakeal sistemdeki tüm gelişimi ifade eder. Veya larva yaşamı boyunca küçük bir trakeal bölümde güçlü bir şekilde ifade eden cut(ue)Gal4. Kontrol larvaları Gal4 hatlarından birini içeriyordu, ancak şişirilemez RNAi yoktu.Şişirilmeyen RNAi kullanan cut(ue)Gal4'e sahip larvalar, hem büyüme hem de davranış açısından gelişim boyunca kontrollerden ayırt edilemezdi. Bununla birlikte, blt-Gal4 ile traka boyunca şişirilemeyen RNAi'nin güçlü bir şekilde bastırılması, besleme aşamasında yuva açılmamasına ve yüksek bir ölüm oranına neden oldu. Bu larvalar ayrıca gezinme aşamasında tam bir tünel yokluğu gösterdi.Ayrıca, nefes kesen Gal4 deneysel larvaları, kontrollerden daha küçük, daha ince ve daha halsizdi ve diğer tüm gruplar pupa olduktan çok sonra larva olarak kaldı. Bu videoyu izledikten sonra, drosophila larvalarının yiyecek höyüklerine ne ölçüde girdiklerini veya yumuşak bir alt tabakaya tünel açtıklarını izleyerek doku hipoksisi için nasıl test edileceğini iyi anlamalısınız. Tünellemenin tamamen olmaması, doku hipoksisinin güçlü bir göstergesidir.

a-burrowingtunneling-assay-for-detection-hypoxia-drosophila

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Bu video, Drosophila larvalarında oyuk açma ve tünel açma yeteneklerini değerlendirerek hipoksiyi test etmek için bir yöntem göstermektedir. Araştırmacılar bu tekniği kullanarak oksijen yoksunluğu yaşayan larvaları gelişimsel eksikliği olanlardan ayırt edebilirler. Örnek protokol, bu testin kurulumunu gösterir.

Drosophila Oyuk Açma ve Tünel Açma Deneyi: Sinek Larvalarında Doku Hipoksisini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu video, sinek hareketini ölçmek için basit bir yöntemi açıklar ve gerçekleştirilen tırmanma testini gösterir. Sinek tırmanma testi, negatif bir jeotaksi tepkisine dayanan genel bir motor fonksiyon testidir.

Sinek Tırmanma Deneyi: Drosophila melanogaster'de Genel Hareketi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Hypoxia-Induced Climbing Behavior of Drosophila melanogaster

Çok geç evre Drosophila embriyoların embriyonik epidermis hızlı lastik yara cevap analizi için bir in vivo sistemi sağlar ve memeli modelleri tercüme için, yara iyileşmesi çalışmalar ilerlemek için genetik manipülasyon ya da mikro-enjeksiyon kimyasal tedaviler ile kombine edilebilir.

Mikroenjeksiyon Yara Deneyi ve<em&gt; In vivo</em&gt; Epidermal lokalizasyonu Tepki Gazeteciler Yara<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyolar.

Burada, Drosophila larva sürekli termal degrade kullanarak tercih edilen ortam sıcaklığında belirlemek için bir iletişim kuralı mevcut.

Drosophila larva termal tercihlerini belirlemek için bir sıcaklık gradyanı tahlil

Biz oksijen tüketimi ve Drosophila melanogaster larva ve yetişkin Beynindeki hücre dışı asitleştirme ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bir metabolik analyzer adapte ve en iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralı ile kullanılmaktadır. Mikro-doku bağlar bu protokolü kritik bileşenidir ve tasarlanmış ve bunların kullanımı bu analizi için özel olarak yaratılmıştır.

Drosophila melanogaster Larval ve yetişkin beyin metabolik Analizi

Bu protokol, Drosophila'nın embriyodan yetişkine kadar her gelişim aşamasındaki canlılığını değerlendirmek için tasarlanmıştır. Yöntem, farklı genotiplerin veya büyüme koşullarının canlılığını belirlemek ve karşılaştırmak için kullanılabilir.

Drosophila Melanogaster'In Embriyodan Yetişkine Canlılığını Değerlendirmek Için Doğrudan ve Basit Bir Yöntem

Kan-beyin bariyerbütünlüğü sinir sistemi fonksiyonu için çok önemlidir. Drosophila melanogasterolarak, kan-beyin bariyeri geç embriyogenez sırasında glial hücreler tarafından oluşur. Bu protokol, D. melanogaster embriyolarında ve üçüncü instar larvalarında kan-beyin bariyeri oluşumu ve bakımı için taht yöntemlerini açıklamaktadır.

Drosophila melanogaster Kan-beyin Bariyer Bütünlüğü için Tahse

Protokol, geleneksel memeli modellerine bir alternatif olarak lokomotor disfonksiyonun nicelleştirilmesi yoluyla meyve sineğindeki nörotoksisiteyi değerlendirmek için yüksek verimli, uygun maliyetli bir yöntem sunar. Farmasötik bileşiklerin, çevresel ajanların veya genetik modifikasyonların nörotoksik etkilerini hassas, tekrarlanabilir ve etik açıdan uygun bir model kullanarak değerlendirmeyi amaçlar.

Drosophila melanogaster'de Lokomotor Disfonksiyonun Nörotoksisite için Bir Okuma Olarak Davranışsal Analizi

Öğrenin Drosophila melanogaster larvalarında hipoksi tespiti için oyuk/tünel tahlil yöntemini. Bu davranışsal analiz, oksijen eksikliği yaşayan genetik mutasyonları belirleyerek solunum fonksiyonlarını araştırmaya yardımcı olur.

Bir oyuk/tünel tahlil için algılama hipoksi Drosophila melanogaster larva içinde

Daha fazla video keşfet